專利名稱:加州鱸專用微生物飼料添加劑及制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種加州鱸專用微生物飼料添加劑及制作方法，屬于飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
目前，已公開的專利，公開號(hào)為CN00133695，題為生物飼料添加劑及其制備方法， 其特征在于由篩選綠色乳桿菌、嗜糞乳桿菌純菌、酵母菌、枯草芽孢桿菌經(jīng)一次擴(kuò)大培養(yǎng)、 二次擴(kuò)大培養(yǎng)，用米糠、麥麩吸附液堆積發(fā)酵，烘干而達(dá)到菌種數(shù)量8-10億/克。這種生物飼料添加劑所述的菌種中，綠色乳桿菌、嗜糞乳桿菌純菌并未在國(guó)家農(nóng)業(yè)部規(guī)定允許使用的15種微生物范圍內(nèi)，將不能被允許生產(chǎn)，而且該產(chǎn)品活菌數(shù)低，也并未說(shuō)明其中是否含有其它生理代謝物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種含有微生物多糖、有益菌數(shù)高、并具有多種活性酶及小肽等物質(zhì)的加州鱸專用微生物飼料添加劑及制作方法，在添加飼喂后，可形成動(dòng)物機(jī)體良性生態(tài)環(huán)境，提高加州鱸的非特異性免疫力。
為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種加州鱸專用微生物飼料添加劑， 其特征在于，由植物乳桿菌、啤酒酵母菌分別進(jìn)行液體發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行離心，兩種離出物混合后進(jìn)行固體發(fā)酵；上清液進(jìn)行真空濃縮后，與固體發(fā)酵產(chǎn)物按比例混合，最后經(jīng)干燥粉碎得到成品，
植物乳桿菌采用液體發(fā)酵，其由下述重量百分比的原料配制
植物乳桿菌菌液 8_15%、
培養(yǎng)基84-93% ；
啤酒酵母菌采用液體發(fā)酵，其由下述重量百分比的原料配制
啤酒酵母菌菌液 8_15%、
培養(yǎng)基84-93% ；
離出物采用固體發(fā)酵，其由下述重量百分比的原料配制
植物乳桿菌離出物 10-20%、
啤酒酵母菌離出物 24-40%、
培養(yǎng)基49-65%。
所述的植物乳桿菌培養(yǎng)基由大豆蛋白胨、胰蛋白胨、蛋白胨、牛肉浸膏、葡萄糖、 低聚糖、乳糖、酵母浸出粉、胡蘿卜汁、西紅柿汁、黃豆芽汁組成，其重量百分比為大豆蛋白胨0. 2-1. 0 %、胰蛋白胨0. 4-0. 8 %、蛋白胨0. 4-0. 8 %、牛肉浸膏1. 0-1. 5 %、葡萄糖 0. 8-1. 2%、低聚糖 0. 3-0. 7%、乳糖 0. 3-0. 7%、酵母浸出粉 0. 2-0. 8%、胡蘿卜汁 10-18%、 西紅柿汁10-15 %、黃豆芽汁8-12 %、水48-68 %。
所述的啤酒酵母菌培養(yǎng)基由葡萄糖、尿素、磷酸二氫鉀、酵母膏、硫酸鎂、硫酸鐵、水組成，其重量百分比為葡萄糖3-7%、尿素0. 8-1.2%、磷酸二氫鉀1.5-3%、酵母膏 0. 3-0. 7%、硫酸鎂 1-1. 2%、硫酸鐵0. 05-0. 15%、水 86-93%。
所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基由米糠、麥麩、糖蜜、豆餅粉組成，其重量百分比為米糠 30-50%、麥麩 20-35%、糖蜜 10-18%、豆餅粉 5-10% ；
加州鱸專用微生物飼料添加劑的制作方法，其特征在于，分別對(duì)植物乳桿菌和啤酒酵母菌單獨(dú)培養(yǎng)，培養(yǎng)物離心后其離出物按比例混合后進(jìn)行固體發(fā)酵，對(duì)其離心上清液濃縮，然后按照比例與固體發(fā)酵產(chǎn)物混合，它包括下列步驟
第一步將植物乳桿菌接種于其專用液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35_39°C，培養(yǎng)時(shí)間為16-22小時(shí)；
第二步將啤酒酵母菌接種于其專用液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30 — 34°C， 培養(yǎng)時(shí)間為32-42小時(shí)；
第三步將植物乳桿菌和啤酒酵母菌的培養(yǎng)物分別通過(guò)碟式離心機(jī)進(jìn)行離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為6900r/min;將離心后的上清液按照1 1的比例混合后放入真空濃縮罐，在溫度為55-65°C、真空度為0. 07-0. 09條件下，維持4_6小時(shí)，得到濃縮產(chǎn)物；
第四步將植物乳桿菌和啤酒酵母菌的離心離出物按照比例與固體培養(yǎng)基混合后進(jìn)行固體厭氧發(fā)酵，培養(yǎng)溫度為30-35°C，培養(yǎng)時(shí)間為96-120小時(shí)；
第五步將固體發(fā)酵結(jié)束后的產(chǎn)物按照1 0. 5-0. 7的比例與濃縮產(chǎn)物混合，然后進(jìn)行低溫干燥，在溫度35-40°C下干燥8-10小時(shí)，控制最終水分小于11%，然后經(jīng)粉碎后得到粉末狀成品。
加州鱸專用微生物飼料添加劑含有豐富的微生物多糖、有益菌，并含有多種活性酶及小肽等活性代謝物質(zhì)。在添加飼喂后，可形成動(dòng)物機(jī)體良性生態(tài)環(huán)境，提高加州鱸的非特異性免疫力。
非特異性防御機(jī)制是無(wú)脊椎動(dòng)物的抵抗微生物感染的第一道防線，指機(jī)體組織和體液中的大量細(xì)胞和抗菌的蛋白質(zhì)、醣蛋白、肽類。魚類的抗菌蛋白包括粘液胰島素，金屬離子螯合劑(鐵傳遞蛋白、血漿銅藍(lán)蛋白、金屬硫蛋白)，蛋白酶抑制因子，溶菌酶(溶解酵素、幾丁質(zhì)酶、非特異性細(xì)胞溶素)，補(bǔ)體，外源凝集素。細(xì)菌脂多糖激活的單核巨噬細(xì)胞可產(chǎn)生細(xì)胞因子，它的生物學(xué)活性相當(dāng)廣泛，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其名稱本身的含義，除了具有抗腫瘤作用外，對(duì)免疫反應(yīng)、機(jī)體代謝、炎癥反應(yīng)均具有重要的調(diào)節(jié)和介導(dǎo)作用。免疫細(xì)胞包括噬菌細(xì)胞(嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)及自然殺傷細(xì)胞，這些細(xì)胞與免疫系統(tǒng)中的淋巴細(xì)胞和其它細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞因子相互影響。
非特異性免疫在抵抗微生物感染中所起到的重要作用已越來(lái)越為人們所認(rèn)同，免疫學(xué)家們已意識(shí)到盡管無(wú)脊椎動(dòng)物沒(méi)有類似于脊椎動(dòng)物的特異性免疫系統(tǒng)，但是卻能有效地抵抗微生物感染。
在正常畜禽的腸道中存活著多種細(xì)胞構(gòu)成的菌群，當(dāng)本發(fā)明的加州鱸微生物飼料添加劑中的有益微生物進(jìn)入動(dòng)物腸道后，結(jié)合原有的有益菌，迅速形成優(yōu)勢(shì)微生物菌群，抑制了腸道有害菌的生長(zhǎng)，其中的有益微生物在腸道壁周圍通過(guò)磷壁酸與腸粘膜上皮細(xì)胞緊密結(jié)合，形成菌膜屏障，阻止有害菌的定植；微生物還可代謝產(chǎn)生嗜酸菌素、乳糖菌素、桿菌肽等，抑制大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌在腸道內(nèi)的繁殖、定植和吸附、中和毒性產(chǎn)物，同時(shí)促進(jìn)腸道相關(guān)淋巴組織的高度反應(yīng)能力，使免疫器官發(fā)育增快，免疫系統(tǒng)成熟早、快，T、B淋巴細(xì)胞的數(shù)量增多，使動(dòng)物的體液和細(xì)胞免疫水平提高，增強(qiáng)機(jī)體抗病能力。
多糖類物質(zhì)能提高機(jī)體免疫系統(tǒng)的功能，它不僅能促進(jìn)細(xì)胞免疫及體液免疫功能，還能促進(jìn)免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。產(chǎn)品中多糖的免疫調(diào)節(jié)作用可通過(guò)自由基特別是活性氧介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而實(shí)現(xiàn)。在某些病理狀態(tài)下，若體內(nèi)自由基濃度升高，對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA等生物大分子造成損傷，應(yīng)用外源性生物活性多糖可清除過(guò)多的自由基，使之維持在一個(gè)正常的生理水平。
免疫活性多糖對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有抑制作用，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的啟動(dòng)和擴(kuò)展，保護(hù)細(xì)胞膜免受氧化應(yīng)激損傷，從而維持細(xì)胞內(nèi)Ca2+平衡，防止或減少凋亡發(fā)生；其還可增強(qiáng)肝臟中SOD的活性，對(duì)超氧陰離子自由基和羥自由基均有直接清除作用；同時(shí)對(duì)SOD和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力具有增強(qiáng)作用，可提高機(jī)體清除活性氧的能力， 從而避免病理狀態(tài)下活性氧對(duì)機(jī)體的損傷。關(guān)于多糖的抗氧化作用機(jī)制尚無(wú)定論，一種解釋是· OH可奪取多糖碳?xì)滏溕系臍湓咏Y(jié)合成水，而多糖的碳原子上留下單電子可繼續(xù)氧化形成過(guò)氧自由基，后者可進(jìn)一步分解；另一種解釋是多糖環(huán)上的羥基可與產(chǎn)生· OH等所必需的金屬離子絡(luò)合，從而抑制活性氧自由基的生成，這與多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)等有關(guān)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是
1.采用特別的菌種及營(yíng)養(yǎng)組配配方，滿足加州鱸快速生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)，避免因投喂野雜魚造成的營(yíng)養(yǎng)不均衡，餌料系數(shù)高，自然資源浪費(fèi)巨大。
2.具強(qiáng)烈誘食效果，易于加州鱸魚苗的訓(xùn)食，適口性好。
3.提供外源酶且激活內(nèi)源酶的分泌，促進(jìn)動(dòng)物對(duì)飼料的消化吸收，提高飼料轉(zhuǎn)化率，提高生產(chǎn)性能；
4.通過(guò)微生物多糖、抗氧化物質(zhì)等代謝產(chǎn)物和酶的協(xié)同作用，提高動(dòng)物機(jī)體的非特異性免疫力，激活免疫功能，提高加州鱸的抗病能力；
5.使用后，在殘餌和糞便中還含大量有益微生物，既分解了水體中的有機(jī)污染物又改善了水環(huán)境；
6.在加州鱸魚的腸道中形成優(yōu)勢(shì)菌群并抑制有害細(xì)菌，形成良性微生態(tài)環(huán)境，可替代以預(yù)防及促生長(zhǎng)為目的的抗生素使用，生產(chǎn)出綠色、安全的有機(jī)農(nóng)付產(chǎn)品。
具體實(shí)施方案
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明
實(shí)施例一
加州鱸專用微生物飼料添加劑的制作方法
第一步將植物乳桿菌接種于其專用液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其培養(yǎng)基由大豆蛋白胨、 胰蛋白胨、蛋白胨、牛肉浸膏、葡萄糖、低聚糖、乳糖、酵母浸出粉、胡蘿卜汁、西紅柿汁、黃豆芽汁組成，其重量百分比為大豆蛋白胨0.5%、胰蛋白胨0.6%、蛋白胨0.6%、牛肉浸膏 1. 0%、葡萄糖1. 0%、低聚糖0. 5%、乳糖0. 5%、酵母浸出粉0. 6%、胡蘿卜汁12%、西紅柿汁15%、黃豆芽汁10%、水57. 7% ；培養(yǎng)溫度為36°C，培養(yǎng)時(shí)間為16小時(shí)；
第二步將啤酒酵母菌接種于其專用液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其培養(yǎng)基包括葡萄糖、尿素、磷酸二氫鉀、酵母膏、硫酸鎂、硫酸鐵、水，其重量百分比為葡萄糖5%、尿素1.0%、磷酸二氫鉀2%、酵母膏0. 5%、硫酸鎂1%、硫酸鐵0. 1%、水90. 4% ；32°C培養(yǎng)36h ；[0042]第三步將植物乳桿菌和啤酒酵母菌的培養(yǎng)物分別通過(guò)碟式離心機(jī)進(jìn)行離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為6900r/min;將離心后的上清液按照1 1的比例混合后放入真空濃縮罐，在溫度60°C、真空度為0. 08條件下，維持4-6小時(shí)，得到濃縮產(chǎn)物；
第四步將植物乳桿菌和啤酒酵母菌的離心離出物按照比例與固體培養(yǎng)基混合后進(jìn)行固體厭氧發(fā)酵，混合比例為植物乳桿菌離物20%、啤酒酵母菌離出物30%、培養(yǎng)基 50%，離出物固體培養(yǎng)基包括米糠、麥麩、糖蜜、豆餅粉，其重量百分比為米糠45%、麥麩 30%、糖蜜15%、豆餅粉10%，培養(yǎng)溫度為30-35°C培養(yǎng)時(shí)間為96小時(shí)；
第五步將固體發(fā)酵結(jié)束后的產(chǎn)物按照1 0. 6的比例與濃縮產(chǎn)物混合，然后進(jìn)行低溫干燥，干燥溫度為35°C，干燥時(shí)間為8-10小時(shí)，控制最終水分小于11%，然后經(jīng)粉碎后得到粉末狀成品。
實(shí)施例二
加州鱸專用微生物飼料添加劑的制作方法
第一步將植物乳桿菌接種于其專用液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其培養(yǎng)基由大豆蛋白胨、 胰蛋白胨、蛋白胨、牛肉浸膏、葡萄糖、低聚糖、乳糖、酵母浸出粉、胡蘿卜汁、西紅柿汁、黃豆芽汁組成，其重量百分比為大豆蛋白胨0.8%、胰蛋白胨0.4%、蛋白胨0.8%、牛肉浸膏 1.2%、葡萄糖0.8%、低聚糖0.7%、乳糖0.3%、酵母浸出粉0.8%、胡蘿卜汁18%、西紅柿汁10%、黃豆芽汁8%、水58. 2% ；培養(yǎng)溫度為35°C，培養(yǎng)時(shí)間為20小時(shí)；
第二步將啤酒酵母菌接種于其專用液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其培養(yǎng)基包括葡萄糖、尿素、磷酸二氫鉀、酵母膏、硫酸鎂、硫酸鐵、水，其重量百分比為葡萄糖7%、尿素0.8%、磷酸二氫鉀2. 5%、酵母膏0. 7%、硫酸鎂1. 2%、硫酸鐵0. 05%、水87. 8%;培養(yǎng)溫度為30°C， 培養(yǎng)時(shí)間為38小時(shí)；
第三步將植物乳桿菌和啤酒酵母菌的培養(yǎng)物分別通過(guò)碟式離心機(jī)進(jìn)行離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為6900r/min;將離心后的上清液按照1 1的比例混合后放入真空濃縮罐，在溫度60°C、真空度為0. 08條件下，維持時(shí)間4-6小時(shí)，得到濃縮產(chǎn)物；
第四步將植物乳桿菌和啤酒酵母菌的離心離出物按照比例與固體培養(yǎng)基混合后進(jìn)行固體厭氧發(fā)酵，混合比例為植物乳桿菌離物15%、啤酒酵母菌離出物30%、培養(yǎng)基 55%，離出物固體培養(yǎng)基包括米糠、麥麩、糖蜜、豆餅粉，其重量百分比為米糠50%、麥麩 35%、糖蜜10%、豆餅粉5%，發(fā)酵溫度為30-32°C，培養(yǎng)時(shí)間為120小時(shí)；
第五步將固體發(fā)酵結(jié)束后的產(chǎn)物按照1 0.5 — 0.7的比例與濃縮產(chǎn)物混合，然后進(jìn)行低溫干燥，干燥溫度37°C，干燥時(shí)間為8-10小時(shí)，控制最終水分小于11%，然后經(jīng)粉碎后得到粉末狀成品。
本產(chǎn)品可直接在加州鱸飼料中生產(chǎn)或使用過(guò)程中添加使用。
在飼料生產(chǎn)過(guò)程中按照0. 15-0. 2%的比例添加，混合均勻后制粒即可；在養(yǎng)殖池塘直接使用時(shí)，與粘合劑或蛋清混合，與飼料攪拌均勻后投喂。
權(quán)利要求
1.一種加州鱸專用微生物飼料添加劑，其特征在于，由植物乳桿菌、啤酒酵母菌分別進(jìn)行液體發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行離心，兩種離出物混合后進(jìn)行固體發(fā)酵；上清液進(jìn)行真空濃縮后，與固體發(fā)酵產(chǎn)物按比例混合，最后經(jīng)干燥粉碎得到成品，植物乳桿菌采用液體發(fā)酵，其由下述重量百分比的原料配制 植物乳桿菌菌液 8-15%、 培養(yǎng)基84-93%、以上各組分之和為100% ；啤酒酵母菌采用液體發(fā)酵，其由下述重量百分比的原料配制 啤酒酵母菌菌液 8-15%、 培養(yǎng)基84-93%、以上各組分之和為100% ；離出物采用固體發(fā)酵，其由下述重量百分比的原料配制 植物乳桿菌離出物 10-20%、 啤酒酵母菌離出物 24-40%、 培養(yǎng)基49-65% ；所述的植物乳桿菌培養(yǎng)基由大豆蛋白胨、胰蛋白胨、蛋白胨、牛肉浸膏、葡萄糖、低聚糖、乳糖、酵母浸出粉、胡蘿卜汁、西紅柿汁、黃豆芽汁組成，其重量百分比為大豆蛋白胨0. 2-1. 0 %、胰蛋白胨0. 4-0. 8 %、蛋白胨0. 4-0. 8 %、牛肉浸膏1. 0-1. 5 %、葡萄糖 0. 8-1. 2%、低聚糖 0. 3-0. 7%、乳糖 0. 3-0. 7%、酵母浸出粉 0. 2-0. 8%、胡蘿卜汁 10-18%、 西紅柿汁10-15%、黃豆芽汁8-12%、水48-68% ；所述的啤酒酵母菌培養(yǎng)基由葡萄糖、尿素、磷酸二氫鉀、酵母膏、硫酸鎂、硫酸鐵、 水組成，其重量百分比為葡萄糖3-7%、尿素0. 8-1. 2%、磷酸二氫鉀1. 5-3%、酵母膏 0. 3-0. 7%、硫酸鎂 1-1. 2%、硫酸鐵0. 05-0. 15%、水 86-93%, 以上各組分之和為100% ；所述的離出物固體發(fā)酵培養(yǎng)基由米糠、麥麩、糖蜜、豆餅粉組成，其重量百分比為米糠 30-50%、麥麩20-35%、糖蜜10-18%、豆餅粉5-10%，以上各組分之和為100%。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的加州鱸專用微生物飼料添加劑的制作方法，其特征在于，分別對(duì)植物乳桿菌和啤酒酵母菌單獨(dú)培養(yǎng)，培養(yǎng)物離心后其離出物按比例混合后進(jìn)行固體發(fā)酵，對(duì)其離心上清液濃縮，然后按照比例與固體發(fā)酵產(chǎn)物混合，它包括下列步驟第一步將植物乳桿菌接種于其專用液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35-39°C，培養(yǎng)時(shí)間為16-22小時(shí)；第二步將啤酒酵母菌接種于其專用液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時(shí)間為32-42小時(shí)；第三步將植物乳桿菌和啤酒酵母菌的培養(yǎng)物分別通過(guò)碟式離心機(jī)進(jìn)行離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為6900r/min;將離心后的上清液按照1 1的比例混合后放入真空濃縮罐，在溫度為 55-65°C、真空度為0. 07-0. 09條件下，維持4_6小時(shí)，得到濃縮產(chǎn)物；第四步將植物乳桿菌和啤酒酵母菌的離心離出物按照比例與固體培養(yǎng)基混合后進(jìn)行固體厭氧發(fā)酵，培養(yǎng)溫度為30-35°C，培養(yǎng)時(shí)間為96-120小時(shí)；第五步將固體發(fā)酵結(jié)束后的產(chǎn)物按照1 0.5-0. 7的比例與濃縮產(chǎn)物混合，然后進(jìn)行低溫干燥，在溫度35-40°C下干燥8-10小時(shí)，控制最終水分小于11%，然后經(jīng)粉碎后得到粉末狀成品。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種加州鱸專用微生物飼料添加劑及制作方法，其特征在于，由植物乳桿菌、啤酒酵母菌分別進(jìn)行液體發(fā)酵，然后對(duì)其離出物再進(jìn)行第二次固體發(fā)酵，同時(shí)對(duì)上清液進(jìn)行真空濃縮，最后將濃縮物與固體發(fā)酵產(chǎn)物混合、干燥粉碎后得到該飼料添加劑成品。該產(chǎn)品中富含了有益微生物及其發(fā)酵代謝產(chǎn)物，包括了微生物多糖、酶及肽、抗氧化物質(zhì)等。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是采用科學(xué)配方，優(yōu)質(zhì)原料，完全滿足加州鱸快速生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)需求，同時(shí)還可提高加州鱸的非特異性免疫力，改變目前加州鱸養(yǎng)殖中基本上只能投喂活體餌料的情況。
文檔編號(hào)C12N1/14GKCN1989830 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 200510112129
公開日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2005年12月28日
發(fā)明者江瀚, 馬正馳 申請(qǐng)人:上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (5), 非專利引用 (2),