專利名稱:黑莓色素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黑莓色素的制備方法，屬于生化分離純化技術(shù)領(lǐng)域：
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技術(shù)背景
黑莓是一種懸鉤子屬植物(Rubus sp.)的果實，系近年從國外引進的栽培水果，易繁殖，產(chǎn)量高，熟果呈黑紫色，晶瑩透亮，果汁豐富，營養(yǎng)價值高。黑莓中富含8種必需氨基酸、Y-氨基丁酸、對人體至關(guān)重要的6種礦質(zhì)元素鉀、鈣、鈉、鎂、鋅、鐵以及維生素。其所含的維生素K可促進肝臟合成凝血物質(zhì)，對促進血液凝固有良好作用；維生素E保護細胞和細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的完整，防止某些酶和細胞內(nèi)部成分遭到破壞，延緩衰老；所含的硒能抗氧化、防衰老，提高免疫力，與維生素E共同起拮抗有毒物質(zhì)的保護劑作用；Y-氨基丁酸作為神經(jīng)傳導物質(zhì)，具有促進腦代謝，降壓，降血脂和抗心律失常的作用。此外，黑莓還含有大量花青素，具有抗氧化抗衰老的作用。雖然黑莓的營養(yǎng)價值高，但其成熟期短果實多汁柔嫩， 不易保存和運輸，如果銷路不暢會造成大量霉爛，浪費嚴重。
為了避免黑莓不易保存的缺點，中國專利公告號CN14M938，公告日2003. 11. 12， 名稱為“黑霉果天然黑紅色素及制法”的專利中公開了一種利用現(xiàn)代生物酶技術(shù)制備黑莓果液態(tài)天然食用色素的方法，此方法采用現(xiàn)代生物酶技術(shù)制備液態(tài)黑莓色素，為了利于保存其中添加有防腐劑，而中國專利公開號CN1657569
公開日2005. 08. 24名稱為“黑莓果固態(tài)天然食用色素的制備方法”的專利公開了一種同樣利用現(xiàn)代生物酶技術(shù)制備固態(tài)黑莓色素的方法，上述方法實驗要求高，工藝較復雜。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種通過簡單工藝將大量黑莓果制成液態(tài)或固態(tài)黑莓色素， 解決黑莓成熟期短不易保存和運輸困難的缺點，使成品便于保存，并可以作為保健品原料和食品添加劑，應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域中。
本發(fā)明的目的是通過以下基本技術(shù)方案來實現(xiàn)的采用生化分離純化技術(shù)，可以是醇提法或水提法。其中，醇提法的步驟是
(1)以洗凈破碎后的黑莓為原料；
(2)所述原料中加入重量份為原料0. 5-3倍的食品級乙醇，抽提1-2小時，過濾得到濾液；
(3)將所得濾液用大孔樹脂吸附柱上柱吸附，水洗去雜質(zhì)，再用食品級乙醇洗脫， 得到洗脫液；
(4)將洗脫液減壓蒸餾去乙醇，干燥后得到黑紅色粉末，即黑莓色素。
其中，所述的步驟(2)可以重復進行，合并抽提液，從而使原料更充分得以利用。 原料既可以直接采用黑莓鮮果，也可以采用黑莓鮮果榨汁后的殘留物。此外，在步驟(2)完成之后，可以將濾液減壓蒸餾去乙醇濃縮，直接得到黑莓濃縮液。
水提法的步驟是[0012](1)以洗凈破碎后的黑莓為原料；
(2)在原料中加入重量份為原料0. 5-3倍的水，攪拌抽提1-2小時，過濾得水抽提液；
(3)將水抽提液用大孔樹脂吸附，水洗去雜質(zhì)，用食品級乙醇洗脫，收集洗脫液；
(4)將洗脫液減壓去乙醇后，干燥得到黑紅色粉末，即黑莓色素。其中，步驟(2)也可以重復進行。
以上兩種制備方法中，干燥的方法可以是凍干、噴霧干燥或烘干，大孔樹脂吸附柱宜采用經(jīng)過酸堿處理、裝柱、水平衡后的DlOl型大孔樹脂吸附柱，其用量為原料重量的0. 5 倍為宜。
本發(fā)明的方法簡便易行，適用于大量黑莓果的制備，解決了黑莓成熟期短、不易運輸和保存的問題，通過簡單工藝大量加工黑莓果，制成液體或固體，便于存放，營養(yǎng)價值高， 更可以作為保健品原料和食品添加劑，應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域中。
實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案可以進一步具體表述為(1)工藝過程
a.醇提法
(i)黑莓果，洗凈破碎，按重量同比例加入95%食用級乙醇(反應(yīng)體系乙醇濃度為50% )，攪拌抽提2小時，400目網(wǎng)過濾收集抽提液，再同比例加入50%食用級乙醇，攪拌抽提1小時，400目網(wǎng)過濾收集濾液，合并兩次濾液，減壓濃縮去乙醇后，濃縮至原料重量的 1/5，得到黑莓濃縮液，測花色素含量；或者在濾液減壓濃縮去乙醇步驟之后加入2倍水后上DlOl大孔樹脂吸附柱(大孔樹脂用量為原料重量的0. 5倍，酸堿處理好裝柱，水平衡)， 樣品上完后，用水充分洗柱去雜質(zhì)，待流出液變澄清后，改用50%食品級乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮去乙醇后，將濃縮液凍干、噴霧干燥或80°C烘干，得到黑莓色素粉末。
(ii)以黑莓榨汁后的殘留物為原料，加50%食品級乙醇抽提，抽提液減壓去乙醇后，用大孔樹脂吸附，水洗去雜質(zhì)，用50%食品級乙醇洗脫，收集洗脫液減壓去乙醇后，將濃縮液凍干、噴霧干燥或80°C烘干，得到黑莓色素粉末。
b.水提法
將黑莓果洗凈破碎，按重量1 2加水攪拌抽提，200目網(wǎng)過濾收集濾液，殘渣再按同比例加水攪拌抽提2小時，200目網(wǎng)過濾收集濾液，合并兩次濾液，上DlOl大孔樹脂吸附柱(大孔樹脂用量為原料的0. 5倍，酸堿處理好裝柱，水平衡)，樣品上完后，用水充分洗去雜質(zhì)，待流出水澄清，改用50%食品級乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮去乙醇后，將濃縮液凍干、噴霧干燥或80°C烘干，得到黑紅色晶狀固體。
(2)測定方法
a.花色素測定其原理是香草醛與花色素結(jié)構(gòu)上間苯三酚的A環(huán)物質(zhì)反應(yīng)，產(chǎn)生紅色，在500nm測定。采用含間苯三酚結(jié)構(gòu)的兒茶素作標準，標準曲線制備是精確取兒茶素標準液(500ug/ml)0. 1ml,0. 2ml,0. 3ml,0. 4ml,0. 5ml、各三份于試管，每管用甲醇補足到 0. 5ml,甲醇0. 5ml作空白，然后每管加4%香草醛3. 0ml，搖勻后。再加濃HCL1. 5ml，室溫放置15min，500nm測定光吸收。黑莓濃縮液可取Iml原樣用50%乙醇稀釋不同倍數(shù)，按標準曲線方法測定，并對比標準曲線，計算每ml中花色素的含量。黑莓固體樣品，應(yīng)精確稱量并用50%乙醇配制lmg/ml的測定樣，按標準曲線方法測定，并對比標準曲線，計算其每mg樣品中花色素含量。[0026]b.寡聚原花色素(OPC)鹽酸-正丁醇的測定利用原花色素在鹽酸正丁醇中加熱生成花色素，在^Onm具有特異光吸收，測定光吸收值，參比標準原花色素標準曲線，可確定原花色素的含量。精確量取配制的原花色素標準液(lmg/ml) 25ul、50ul、IOOul、150ul、 200ul，于帶蓋的玻璃試管中，不足200ul管再用甲醇補足至200ul，另取200ul甲醇作空白對照，各管加2. 8ml HCL-正丁醇試劑，加蓋，置沸水浴加熱30min，冷卻后，550nm測定光吸收，同樣操作可重復三次，求平均值，以原花色素量對550光吸收值作圖，可得標準曲線，以標準品標示量和稱量上的差異，作修正計算。稱取黑莓色素樣品，加甲醇配成1.0mg/ml， 取50ul、100ul、200ul，用甲醇補足至200ul加HCL-正丁醇試劑2. 8ml，加蓋，沸水浴加熱 30min，冷卻后，550nm測定光吸收，樣品測定與標準品測定同時進行，以樣品的光吸收值參比標準曲線計算出樣品的原花色素含量。如果樣品測定值不在標準曲線范圍內(nèi)，重新調(diào)整測樣的取量，重測。
具體實施方式
以下實施例是對本發(fā)明方法的進一步說明，實施例中的數(shù)據(jù)不作為對本發(fā)明范圍的限定。
試劑兒茶素標準品，購于中國藥品生物制品檢定所。
實施例一
將2kg黑莓洗凈破碎，加入2000ml的95%食品級乙醇，攪拌抽提2小時，用400目網(wǎng)過濾，收集濾液1600ml，再加入1500ml的50%食品級乙醇，攪拌抽提1小時，400目網(wǎng)過濾收集濾液1400ml，合并兩次濾液約3000ml后減壓濃縮去乙醇，再濃縮至600ml即為黑莓濃縮液。測定花色素含量為48mg/ml，OPC含量為19. 47mg/ml。
實施例二
將Ikg黑莓洗凈破碎，加入IOOOml的95%食品級乙醇，攪拌抽提2小時，用400 目網(wǎng)過濾，收集濾液約1500ml，再加入750ml的50%食品級乙醇，攪拌抽提1小時，400目網(wǎng)過濾收集濾液740ml，合并兩次濾液約2300ml，減壓濃縮去乙醇后得濾液約1000ml，再加 1600ml水，混勻后，上DlOl大孔樹脂柱，(500ml，0. 2M NaOH處理，水洗至中性，裝柱，水平衡)上樣完成后，用水充分洗柱至流出液澄清，改用60%食用乙醇洗脫，收集紅色的洗脫組份約800ml，減壓蒸去乙醇后，濃縮成約150ml濃縮液，80°C烘干，得黑紅色粉末5. lg，測定 OPC 含量為 439. 48ug/mg。
實施例三
將Ikg黑莓洗凈，壓榨黑莓汁得650ml黑莓原汁，殘留物MOg，殘留物加60%食品級乙醇抽提三次，250ml/次，每次1小時，400目網(wǎng)過濾收集濾液，合并濾液得約800ml減壓去乙醇后，上DlOl大孔樹脂柱(500ml，5. 5 X 17cm樹脂經(jīng)酸堿處理，水洗至中性)，上樣完畢后，用水充分洗柱至流出液澄清，改用60%食用乙醇洗脫，收集紅色的洗脫液約800ml， 減壓蒸去乙醇后，濃縮成約IOOml濃縮液，80°C烘干，得黑紅色粉末3. 3g。測定OPC含量為 1039.31ug/mg。
實施例四
將Ikg黑莓洗凈，加水2000ml破碎，攪拌抽提2小時，200目網(wǎng)過濾，收集濾液 2500ml，再加水1500ml，攪拌抽提1小時，200目網(wǎng)過濾收集濾液1400ml，合并兩次濾液3900ml。上DlOl大孔樹脂柱(500ml，0. 2M NaOH處理，水洗至中性，裝柱，水平衡)，上樣完成后，用水充分洗柱至流出液澄清，改用60%食用乙醇洗脫，收集紅色的洗脫液約1000ml. 減壓蒸去乙醇后，濃縮成約150ml濃縮液，80°C烘干，得黑紅色粉末2. 5g。測定OPC含量為 440.34ug/mg。
除上述實施例外，本發(fā)明還可以有其他實施方式，如干燥方法是凍干或噴霧干燥等。凡采用等同替換或等效變換形成的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明要求的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種黑莓色素的制備方法，其特征是包括以下步驟A、以洗凈破碎后的黑莓為原料；B、所述原料中加入重量份為原料0.5-3倍的食品級乙醇，抽提1-2小時，過濾得到濾液；C、將所得濾液用大孔樹脂吸附柱上柱吸附，水洗去雜質(zhì)，再用食品級乙醇洗脫，得到洗脫液；D、將洗脫液減壓蒸餾去乙醇，干燥后得到黑紅色粉末，即黑莓色素； 其中，所述步驟B重復一次，合并抽提液后再進行步驟C ；所述步驟B第一次加入95%食用級乙醇，攪拌抽提2小時，重復一次加入50%食用級乙醇，攪拌抽提1小時，過濾采用400目濾網(wǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的黑莓色素的制備方法，其特征是所述大孔樹脂柱用量為原料重量的0. 5倍，經(jīng)酸堿處理后裝柱、水平衡處理。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的黑莓色素的制備方法，其特征是所述的原料是黑莓鮮果或榨汁后的殘留物。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的黑莓色素的制備方法，其特征是所述的干燥方法為凍干、噴霧干燥或烘干之一。
5.一種黑莓色素的制備方法，其特征是包括以下步驟A、以洗凈破碎后的黑莓為原料；B、在原料中加入重量份為原料0.5-3倍的水，攪拌抽提1-2小時，過濾得水抽提液；C、將水抽提液用大孔樹脂吸附，水洗去雜質(zhì)，用食品級乙醇洗脫，收集洗脫液；D、將洗脫液減壓去乙醇后，干燥得到黑紅色粉末，即黑莓色素； 其中，所述步驟B重復一次，合并抽提液后再進行步驟C。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種黑莓色素的制備方法，屬生化分離純化技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明利用生化分離純化技術(shù)，采用醇提法或者水提法將洗凈破碎后的黑莓通過抽提，過濾，濾液減壓去乙醇，直接濃縮成黑莓濃縮液或用大孔樹脂吸附，去雜質(zhì)，乙醇洗脫，收集洗脫液去乙醇后，將液體干燥成粉末的步驟得到黑莓色素。本發(fā)明通過從黑莓果實中提取出黑莓色素，并制成黑莓濃縮液或黑莓色素粉末，有效地解決了黑莓果實多汁成熟期短，不易保存的缺點，保留了黑莓的營養(yǎng)價值，可以用于保健品原料或是食品添加劑。
文檔編號A23L1/275GKCN101278727 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請?zhí)朇N 200810090867
公開日2012年7月4日 申請日期2008年4月1日
發(fā)明者湯國枝, 金以豐, 黃寧, 黃斌 申請人:南京必優(yōu)康生物技術(shù)有限公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan非專利引用 (2),