專利名稱：人胎肝細胞庫的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥品的保存方法，具體說來是人胎肝細胞庫的制備方法。
七十年代初就有人利用胎肝細胞治療再生障礙性貧血，繼后用于治療白血病、急性放射性病等。據(jù)北京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院田庚善報道《肝細胞移植在治療各種肝病中的應用》(《國外醫(yī)學》1988年，第三期，第124-127頁)及上海第二醫(yī)科大學重癥肝炎研究室謝青綜述《重癥肝炎治療新進展-胎肝細胞移植的研究》(《國外醫(yī)學》1988年，第四期，第174-177頁)報導中國目前利用胎肝細胞治療重癥肝炎。然而，胎肝細胞的制備不能超過12小時，需新鮮、立即使用?？墒侨肆魈簛碓礋o定時，病人需要亦不可予計，因此，作為一種治療藥品缺少及時性、連續(xù)性、計劃性及必要檢查，給臨床工作帶來困難，所以迫切需肝細胞的儲存，而目前肝細胞的制備采用機械磨碎法，細胞分散度不好，營養(yǎng)條件差，致使在制備過程中有較多死細胞，細胞團塊也較大、較多，對病人的使用和保存不利。為了解決上述問題，可以采用本發(fā)明。本發(fā)明能提高細胞分散度、提高細胞的營養(yǎng)條件，解決臨床使用及時、連續(xù)和計劃性，并提高了安全性檢查，從而利用本發(fā)明可以建立胎肝細胞庫，能更大限度的挽救病人死亡，延續(xù)人的生命。
本發(fā)明的胎肝細胞庫的制備方法如下(一)對需要中止妊娠16-22周的健康孕婦(體檢、胸透、血常規(guī)及肝功能均正常)采用水囊引產(chǎn)或小刮宮引產(chǎn)(胎兒在宮內(nèi)應存活、無畸形)所得胎兒;(二)血清檢查應HBsAg及抗HBC(一)具體做法是取腹腔或心血分離血清，檢查HBsAg，抗HBC、AFP及必要的其他項目;(三)取出胎肝除去結(jié)締組織及包膜、膽囊;(四)用生理鹽水沖洗;(五)將肝組織剪碎，如剪成2～3mm;(六)加生理鹽水洗去紅血球;(七)加入膠原酶及透明脂酸酶;(八)恒溫(例如37℃)搖床消化，加入營養(yǎng)液每次10～50分鐘，直至消化分散成單細胞;(九)再加入新鮮的營養(yǎng)液反復沉淀，洗去膠原酶制成1081010細胞/ml，取樣進行細胞活性及分散度檢查等>必要時亦可進行其他帶毒情況檢查。具體做法是作無菌培養(yǎng)證明細菌及霉菌存在否，并用小鼠進行急性毒性試驗合格者可凍存;(十)加入助凍液;(十一)放入液氮中保存。
營養(yǎng)液成份血清、胰島素、氫化考的松助凍液成份二甲基亞砜、血清蛋白、營養(yǎng)液
權(quán)利要求
1.一種人胎肝細胞保存方法，其特征是建立人胎肝細胞庫，其步驟如下(1)從中止妊娠16～22周的婦女得到一個胎兒；(2)做血清檢查應HBsAg及抗HBC(一)；(3)取出胎肝除去結(jié)締組織及包膜、膽囊；(4)用生理鹽水沖洗；5)將肝組織剪碎；(6)加生理鹽水洗去紅血球；(7)加入膠原酶及透明脂酸酶；(8)恒溫搖床消化，加入營養(yǎng)液；(9)加入新的營養(yǎng)液洗去膠原酶制成108-1010細胞/ml；(10)放入液氮中保存。
2.按照權(quán)利要求1所述的人胎肝細胞保存方法，其特征在于建立人胎肝細胞庫過程中所使用的營養(yǎng)液成分為血清、胰島素、氫化考的松、綜合培養(yǎng)基。
3.按照權(quán)利要求1所述的人胎肝細胞保存方法，其特征在于建立人胎肝細胞庫過程中所使用的助凍液成分為二甲基亞砜、血清蛋白、營養(yǎng)液。
4.按權(quán)利要求2所述的營養(yǎng)液成分比例為血清∶胰島素∶氫化考的松∶綜合培養(yǎng)基＝10∶1∶1∶88。
5.按權(quán)利要求3所述的助凍液成分比例為二甲基亞砜∶血清蛋白∶營養(yǎng)液＝1∶5∶4。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥品的保存方法，具體說來是人胎肝細胞庫的制備方法。其步驟如下(i)從中止妊娠16～22周的婦女得到一個胎兒；(2)做血清檢查應HBsAg及抗HBC(-)；(3)取出胎肝除去結(jié)締組織及包膜、膽囊；(4)用生理鹽水沖洗；(5)將肝組織剪碎；(6)加生理鹽水洗去紅血球；(7)加入膠原酶及透明脂酸酶；(8)恒溫搖床消化，加入營養(yǎng)液；(9)加入新的營養(yǎng)液洗去膠原酶制成10
文檔編號C12N5/08GK1042179SQ8810714
公開日1990年5月16日 申請日期1988年10月27日 優(yōu)先權(quán)日1988年10月27日
發(fā)明者孫勉 申請人:北京地壇醫(yī)院