專利名稱：新型作物增產(chǎn)菌的篩選和生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于作物增產(chǎn)菌的篩選和生產(chǎn)方法，特別是芽孢桿菌的選育及發(fā)酵工藝。
現(xiàn)有的防病增產(chǎn)措施遠(yuǎn)不能適應(yīng)人類社會及人類文明高速發(fā)展進(jìn)步對作物高產(chǎn)的要求，因?yàn)樵鍪┗室约皢渭円揽靠共∑贩N和化學(xué)農(nóng)藥幾大防病增產(chǎn)措施，帶來了環(huán)境污染、品種抗性喪失及高投入、高能耗的弊病。為克服上述弊病，國內(nèi)、外科學(xué)工作者，在利用各種各樣微生物資源方面給予高度關(guān)注。較早的研究有菌肥、拮抗菌的利用，促生菌的利用，但這些研究仍屬于土壤微生物的范疇，沒有報(bào)道說明它與植物體有著緊密的有機(jī)聯(lián)系。
本發(fā)明的發(fā)明人，根據(jù)多年的研究，并綜合前人有關(guān)研究，提出了“植物體自然生態(tài)系”理論，這個(gè)理論對植物體進(jìn)行了新的認(rèn)識、分析和理論總結(jié)，指出植物體并非個(gè)體，而是與其體內(nèi)、體表生活的無數(shù)微生物共同組成的共生復(fù)合體，是一個(gè)自然生態(tài)系。其體內(nèi)體表生活的微生物由于長期進(jìn)化的結(jié)果與植物體形成了相互依存、相互制約的關(guān)系，其中有些微生物對作物的生長發(fā)育、增產(chǎn)、改進(jìn)品質(zhì)有促進(jìn)作用，將它們篩選出來再用到植物體上。由于它們?yōu)樽魑矬w表體內(nèi)菌，因此能與植物體共存亡，只要植物能長就能發(fā)揮作用，這就是“作物增產(chǎn)菌”。
作物增產(chǎn)菌的篩選理論是植物體(如一棵水稻，一株大豆)不是一個(gè)個(gè)體，其體表、體內(nèi)生活著大量的微生物，有特定的微生物群落。發(fā)明人曾經(jīng)從作物根、莖、葉、花、種子、果實(shí)、塊根等器官的不同組織部位，分離篩選出作物增產(chǎn)菌(蠟質(zhì)芽孢桿菌Ba-cillus cereus)(申請?zhí)枮?8106560.9)，這種增產(chǎn)菌優(yōu)于其他菌劑，它有廣泛的適用性，可用于多種作物，可改善作物品質(zhì)，增強(qiáng)抗逆能力，作物增產(chǎn)幅度平均達(dá)10%。
發(fā)明人在進(jìn)一步研究過程中發(fā)現(xiàn)，不同類別的作物體內(nèi)篩選得到的益菌菌株對不同類別的作物增產(chǎn)性有選擇性;同種作物體內(nèi)得到的益菌菌株其增產(chǎn)程度有顯著差異，而高效能菌株的獲得與分離篩選的取材部位和方式直接相關(guān)。
本發(fā)明目的是提供新型作物增產(chǎn)菌的選育和生產(chǎn)方法，這種增產(chǎn)菌可使作物的增產(chǎn)幅度進(jìn)一步提高，抗病害性能好，這些菌種經(jīng)固體發(fā)酵所得成品的含菌量達(dá)100億/克，可降低產(chǎn)品成本。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下方法該方法中包括菌種的選育和固體發(fā)酵工藝，菌種選育有二種(以代號90-B028，90-B048表示)。
(1)從雙子葉植物大豆的主根主莖中分離篩選出地衣芽孢桿菌(Bacillus Licheniformis)(保存于CGMCC)保藏號(No.0154)，在溫室內(nèi)作生物測定(將菌液拌雙子葉植物的種子)，并作拮抗性能測定，篩選出的高效能菌株經(jīng)固體發(fā)酵工藝制得成品(代號90-B028)。
(2)從單子葉植物(旱稻)的根系伸長區(qū)分離篩選出蠟質(zhì)芽孢桿菌(Bacillus cereus)(保存于CGMCC)，保藏號(No.0155)，在溫室內(nèi)作生物測定(將菌液拌單子葉植物的種子)，并作拮抗性能測定，篩選出的高效能菌株經(jīng)固體發(fā)酵工藝制得成品(代號90-B048)。
90-B028分離方法將采集的不同地區(qū)的大豆根際土樣，在溫室中將土樣加入0.1%的蛋白胨水加富后置入花盆，保濕、保溫18小時(shí)后，播種催芽(表面消毒的種子數(shù)粒)，待真葉出現(xiàn)后采樣分離，一直采樣到盛花期末。選大豆的主根和主莖，剪取5～10cm段，用自來水流水沖洗24小時(shí)，沾取70%酒精，立即在酒精燈上燒去酒精進(jìn)行表面消毒，用鑷子撕去皮層，再用解剖刀將粘在木質(zhì)部的皮刮干凈，使其完全顯露木質(zhì)部，再削成長度0.5～1.0cm的薄片(不要沾上髓)約2～3克，裝入10ml無菌水的試管中，65～75℃恒溫水浴10分鐘，再倒入300ml無菌水中，用組織搗碎機(jī)搗碎約15分鐘。吸10ml清液，用90ml水稀釋，將稀釋液用磁力攪拌器混合約5分鐘，再用三角玻棒沾稀釋液在牛肉蛋白胨平板上涂勻，置30℃恒溫培養(yǎng)24～36小時(shí)進(jìn)行菌落檢查，將不同菌落進(jìn)行平板劃線，反復(fù)三次劃線，純化后轉(zhuǎn)斜面，同時(shí)進(jìn)行涂片，經(jīng)芽孢染色鏡檢是否芽孢桿菌，為芽孢桿菌的進(jìn)行編號待測。
90-B048的分離方法將不同地區(qū)采集的旱稻土樣，放入溫室中花盆內(nèi)，播種浸種的旱稻種子，待出現(xiàn)第四片真葉時(shí)進(jìn)行分離，選水稻苗的新根，用自來水沖洗12小時(shí)以上，再用7%漂白粉表面消毒5分鐘，剪取根伸長區(qū)部位1～2厘米，共5克左右，加入10ml水，用65～75℃恒溫水浴15分鐘，用鑷子將根段夾出，在無菌研缽中研碎，加水100ml左右，再用磁力攪拌器攪拌5分鐘，再梯度稀釋到10-3，用1ml吸管吸1ml稀釋液，加入5個(gè)牛肉蛋白胨平板上，用三角棒涂布均勻，置28～30℃恒溫培養(yǎng)18-36小時(shí)，進(jìn)行菌落檢查，將不同菌落進(jìn)行平板劃線，純化后轉(zhuǎn)斜面，并進(jìn)行芽孢染色鏡檢，是芽孢桿菌的進(jìn)行編號測定。
生物測定將分離物用牛肉蛋白胨液體培養(yǎng)基進(jìn)行搖床培養(yǎng)30小時(shí)左右，計(jì)測含菌量，將菌種數(shù)目用原培養(yǎng)液調(diào)節(jié)到108cfu/ml，作為拌種用菌液，將成活種子加入菌液拌種，使每粒種子接菌106cfu(大豆分離物拌種大豆種子，水稻分離物拌種水稻種子)。將直徑20cm，高20cm塑料盆裝滿菜田土，每四個(gè)花盆“田”字形排列為一個(gè)處理，每7個(gè)菌處理和一個(gè)原增產(chǎn)菌和一個(gè)培養(yǎng)液處理作為對照，共9個(gè)處理為一區(qū)組，隨機(jī)區(qū)組排列，重復(fù)5次，大豆每盆播15粒種子，水稻每盆播20粒種子，蓋土1cm，澆水，除蟲，除草管理約20～30天，以出現(xiàn)四片真葉為標(biāo)志，連根挖出并沖去根上的土壤，甩干后稱單盆鮮重，記錄株數(shù)和每盆重，用互變量分析法比較各處理間的差異顯著性，以顯著增加鮮重的進(jìn)行第二次生物測定。第二次生物測定同前一次，花盆排列改用拉丁方排列，經(jīng)顯著性測定后進(jìn)行第三次測定，仍用拉丁方方式進(jìn)行，經(jīng)三次生物測定均高于營養(yǎng)液對照組和優(yōu)于作物增產(chǎn)菌(申請?zhí)?8106560.9)。
平板拮抗測定選用四種植物病原菌，分別為立枯絲核菌(Phizoctonia solani)，尖孢鐮刀菌(Fusarium Oxysporum f.sp Vasinfectum)，長蠕孢菌(Hclminthosporium sotivum)長喙殼菌(Ceratocystis fimbriala)，將上述病原菌接種在馬鈴薯、蔗糖、洋菜平板上，兩點(diǎn)放置，相距約4cm，每個(gè)病原作三次重復(fù)，置25°～28℃恒溫箱培養(yǎng)30小時(shí)(長喙殼菌在48小時(shí)后)，再將待測細(xì)菌用接種環(huán)在兩個(gè)菌落間劃一直線，再置入28～30℃溫箱培養(yǎng)24～48小時(shí)后，記錄抑菌情況，出現(xiàn)抑菌帶的再繼續(xù)觀察到48小時(shí)，對可以抑制三種以上病原菌的進(jìn)行下一步測定。
菌種培養(yǎng)、換代、保藏劃線接種于牛肉蛋白胨培養(yǎng)基(5克蛋白胨、3克牛肉汁、15～20克瓊脂，配1000ml水)斜面，4℃(短期)或-10℃(長期)冰箱或冷庫保存，定期轉(zhuǎn)管傳代(劃線法)。
90-B028增產(chǎn)菌的生物學(xué)特性地衣芽孢桿菌(Bacillus Licheniformis)，菌體直桿狀，成鏈，光鏡測量長2.5～3.5μm，寬0.8～1.2μm，革蘭氏陽性，原生質(zhì)內(nèi)無不著色小球，運(yùn)動;牛肉蛋白胨平板培養(yǎng)，菌落圓形，直徑0.1～0.3cm，邊緣整齊，中央凹，邊緣隆起，菌落無光澤，不透明，波折。芽孢橢圓或柱狀，中生或次端生，孢囊不膨大。最高生長溫度45℃，最低15℃，適宜溫度為30～32℃，接觸酶陽性、VP陽性，VP液生長后，PH6.3厭氣生長，PH5.7生長，7%NaCl中生長，碳水化合物不產(chǎn)氣，還原NO+3或NO+2，利用檸檬酸鹽，水解淀粉，適宜碳源為蘋果酸、麥芽糖，適宜氮源為蛋白胨，天冬酰胺、谷氨酸。
90-B048增產(chǎn)菌的生物學(xué)特性蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)，菌體直桿狀，寬1.0μm，長3～5μm，革蘭氏陽性，染色細(xì)胞具有不著色的小球，運(yùn)動，牛肉蛋白胨平板，菌落近圓形，直徑0.4～0.8cm，邊緣不整齊，菌落無光澤，蠟質(zhì)，最高溫度47℃，最低溫度15℃，最適溫度28～32℃，接觸酶陽性，VP陽性，VP液培養(yǎng)后PH為4.5～6.0，厭氧生長，PH5.7生長，碳水化合物，產(chǎn)氣陽性，還原NO+3或NO+2，利用檸檬酸鹽，水解淀粉，適宜碳源為葡萄糖，麥芽糖，適宜氮源為蛋白胨，無機(jī)氮源為NH+4。
固體發(fā)酵工藝(1)菌種將冰箱保存的斜面菌種轉(zhuǎn)移到新鮮斜面進(jìn)行活化，再轉(zhuǎn)入扁瓶中劃線、培養(yǎng)，無雜菌污染時(shí)，加入蛋白胨水刮下菌膜，準(zhǔn)備接種到種子罐。
(2)種子罐發(fā)酵采用高壓蒸汽滅菌，壓力為0.1～0.14MPa，溫度為120℃～126℃滅菌30分鐘，冷卻到45℃以下時(shí)，注射接種扁瓶菌種，在30～32℃溫度和1∶0.8～1.0的通氣量培養(yǎng)到對數(shù)期放入貯液罐。
種子罐培養(yǎng)基配方豆餅粉0.5%～0.6%;魚粉0.4～0.6%;蠶蛹粉0.4～0.6%;葡萄糖0.2～0.4%;花生油或糖油0.25%，其他為水調(diào)節(jié)PH7.5，消毒滅菌保證PH6.8～7.2之間。
(3)固體培養(yǎng)基配料將干燥的草碳粉碎，用風(fēng)選機(jī)篩至160～200目/吋以草碳為基數(shù)，再加入0.1%～0.2%的蛋白胨，0.1%～0.2%的魚粉，加水量為30%～34%。以水量為基數(shù)，水內(nèi)加入H3BO3200～286PPM、MnCl2·H2O 100PPM、ZnSO4220PPM、CuSO480～120PPM、H2MoO420～40PPM、FeSO4112～150PPM、KI 10～28PPM、MgSO4200～350PPM，配成營養(yǎng)液噴霧加入草碳中，并用攪拌機(jī)混合均勻。
(4)裝袋滅菌將混合均勻的培養(yǎng)料500克裝一聚丙烯塑料袋，裝滅菌車121°～126℃(0.11MPa～0.14MPa)高壓蒸汽滅菌1～2小時(shí)，冷卻到45℃以下接菌。
(5)接菌將滅菌的培養(yǎng)料用傳送帶送入接菌室，用接在菌液貯槽的接菌器，每袋接菌27～33ml，保證每克固體培養(yǎng)基接菌1～1.2×108cfu/克，抖動混合均勻后，折口置30°～32℃培養(yǎng)室固體發(fā)酵，約培養(yǎng)24～36小時(shí)，保證菌劑含芽孢數(shù)超過100×108cfu/克時(shí)，進(jìn)行包裝，得到產(chǎn)品。
產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)(1)含菌量檢驗(yàn)將培養(yǎng)24小時(shí)后的菌劑以代為單位抽樣，隨機(jī)抽樣率為0.5～1.0%，用稀釋法和血球記數(shù)板計(jì)測含菌數(shù)目，用生物統(tǒng)計(jì)法估計(jì)產(chǎn)品最低含菌不少于100×10cfu/克，平均數(shù)為140×108cfu/克時(shí)，為合格。
(3)理化指標(biāo)檢驗(yàn)用烘干法測定含水量不大于38%。
用灼燒法測定灰分(不燃物)不大于55%。
用烘干樣品過分樣篩使低于160目細(xì)度的不超過1%。
包裝破損率不超過0.1%。
封包不合格率為0。
附

圖1為增產(chǎn)菌固體發(fā)酵工藝流程框圖。
圖中， ()/() 箭頭表示主流程，→箭頭表示付流程，
雙線框表示無菌條件。
下面敘述本發(fā)明的發(fā)酵工藝的最佳實(shí)施例(1)生產(chǎn)工藝以草碳為基礎(chǔ)原料，風(fēng)選過篩，加水，加營養(yǎng)液，攪拌，裝袋，滅菌。將菌種活化，扁瓶菌種，種子罐發(fā)酵。固體接菌，混合，培養(yǎng)室培養(yǎng)，質(zhì)檢，封口，封包。
(2)原料及營養(yǎng)液草碳含水量低于8%時(shí)風(fēng)選，細(xì)度200目/吋，加入水分30%，水內(nèi)加入營養(yǎng)成份如下以草碳為基數(shù)加入蛋白胨0.1%、魚粉0.2%。
以加水量為基數(shù)加入H3BO3286 PPM、MnCl2·H2O 100 PPM、ZnSO4220 PPM、CuSO4120 PPM、H2MoO420 PPM、FeSO4150 PPM、KI 10 PPM、MgSO4284 PPM、PH7。
(3)菌種用培養(yǎng)基斜面與扁瓶菌種用牛肉汁3g、蛋白胨5g、瓊脂粉18克，水1000ml，PH＝7。
種子罐配方黃豆餅粉0.5%、魚粉0.4%、蠶蛹粉0.5%、葡萄糖0.3%、糠油0.25%，其他為水，PH值7.5，消毒后，PH7.0左右。
(4)要求及最佳條件
固體接種量為30ml菌液，每克固體接菌1×108cfu/克以上，加入菌液后保證含水量在36%，不超過38%。要求接菌后要使菌種在草碳中分布均勻。
固體菌劑培養(yǎng)溫度為30℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)。
扁瓶菌種培養(yǎng)溫度30℃，菌體粗壯整齊，培養(yǎng)時(shí)間約18小時(shí)。
種子罐培養(yǎng)溫度為30℃，通氣量為1∶1(V∶V)，罐壓0.05MPa，接菌量為發(fā)酵液的1%。
種子質(zhì)量檢查，在接菌6小時(shí)后進(jìn)入對數(shù)期在培養(yǎng)到8～10小時(shí)時(shí)菌體整齊粗壯，含菌量約3億/ml，無雜菌污染，即可停止培養(yǎng)，進(jìn)入貯液罐備用。
成品質(zhì)量檢驗(yàn)菌體數(shù)和芽孢數(shù)檢查采用生物統(tǒng)計(jì)法計(jì)算最低含菌量，少于100×108cfu/克的不合格。同時(shí)進(jìn)行生測法檢驗(yàn)增產(chǎn)菌的效果，保證使用質(zhì)量。
作物增產(chǎn)菌的應(yīng)用方法一、拌種每畝用30～60克固體菌劑加水5倍均勻撤入種子中，翻動數(shù)次，使菌劑均勻沾附在種子表面，稍晾干后即可播種。
二、噴霧每畝取15～30克固體菌劑，用每畝噴霧所需的水量進(jìn)行稀釋，裝噴霧器，然后將濾液均勻噴到植株上。
三、浸沾根苗每畝取30～60克固體菌劑，用每畝浸沾根菌所需的水量稀釋，將根苗均勻地浸沾上菌液，稍涼即可扦插，栽植。
作物增產(chǎn)菌通過拌種、噴霧、浸沾根苗等方式，將菌株沾附在種子表面作大田試驗(yàn)，作物增產(chǎn)菌有二種，一種為地衣芽孢桿菌(90-B028)，一種為蠟狀芽孢桿菌(90-B048)，也可以將90-B028和90-B048二種菌株等量混合接種到含有固體培養(yǎng)料的塑料袋內(nèi)，發(fā)酵得到的菌種。結(jié)果見下表。
新型增產(chǎn)菌田間試驗(yàn)結(jié)果
注①菌劑用量為最低限，低于此用量增產(chǎn)不明顯，增加用量可不成正比的增加產(chǎn)量。
②當(dāng)畝用種量超過10公斤時(shí)加倍使用。
③本表數(shù)據(jù)僅小區(qū)對比試驗(yàn)。
新型作物增產(chǎn)菌的優(yōu)點(diǎn)具有作物增產(chǎn)菌(申請?zhí)枮?8106560.9簡稱YIB)的作用特點(diǎn)，彌補(bǔ)YIB的不足。
1.從應(yīng)用效果來看，新型增產(chǎn)菌對諸如油菜、棉花、大豆、西瓜等雙子葉類作物平均增產(chǎn)幅度達(dá)15～25%，對水稻、玉米、小麥、高梁等單子葉類作物平均增產(chǎn)幅度達(dá)15～20%，對蘿卜、甜菜、甘薯、馬鈴薯等塊根、塊莖或其他無性繁殖體增產(chǎn)幅度20～30%，明顯優(yōu)于作物增產(chǎn)菌YIB的增產(chǎn)效果，增產(chǎn)穩(wěn)定性優(yōu)于YIB。
2.新型增產(chǎn)菌的篩選同時(shí)注重了對水稻紋枯病、小麥赤霉病和油菜菌棱病三種病害的拮抗性能，兩菌株混用對油菜菌棱病防效達(dá)73～78%，對水稻紋枯病防效達(dá)66.5～78%，防小麥赤霉病效果達(dá)70～76%，明顯優(yōu)于作物增產(chǎn)菌YIB的僅起占領(lǐng)作用的防病效果。
3.從篩選方法來看，新型增產(chǎn)菌是定向篩選植物體特定微生境中的菌株，既提高了菌株的效能，又提高了優(yōu)良菌株的捕獲機(jī)率。
4.新型增產(chǎn)菌的固體發(fā)酵，產(chǎn)品含菌量達(dá)100億/克，為作物增產(chǎn)菌YIB的3倍左右，不僅降低了生產(chǎn)成本，而且應(yīng)用時(shí)，用菌劑量僅需YIB的70%，便利了運(yùn)輸和應(yīng)用。
5.固體發(fā)酵采用200目草碳省去YIB噴霧時(shí)過濾的手續(xù)，使用方便。
6.與YIB液體工藝相比，本產(chǎn)品可延長貯存期3倍。
7.與YIB可濕粉劑比，固體產(chǎn)品保留了發(fā)酵過程中的代謝產(chǎn)物，故應(yīng)用后，直觀效果明顯，易于被農(nóng)民接受。
權(quán)利要求
1.一種新型作物增產(chǎn)菌的篩選和生產(chǎn)方法，其特征在于它包括分離篩選和固體發(fā)酵工藝(1)分離篩選方法選大豆主根、主莖(從真葉出現(xiàn)至盛花期末)，剪取5～10cm段，經(jīng)自來水沖洗，消毒，去皮，再將剩下的木質(zhì)部削成長度0.5～1.0cm的薄片，約2～3克，裝入無菌水試管中，65～70℃恒溫水浴10分鐘，再倒入300ml無菌水中，用組織搗碎機(jī)搗碎約15分鐘，吸10ml清液，用90ml水稀釋，接種，培養(yǎng)分離篩選出地衣芽孢桿菌菌株(Bacillus Licheni-formis)(保存于CGMCC，保藏號NO.0154)，將菌株在溫室內(nèi)作生物測定，測定三次，測定時(shí)菌種的數(shù)目用牛肉蛋白胨液體培養(yǎng)液調(diào)至108cfu/ml，菌液拌雙子葉植物，播種于花盆中，隨機(jī)區(qū)組排列，以出現(xiàn)四片真葉為標(biāo)志，記錄株數(shù)和每盆重，性能優(yōu)越菌種作拮抗性能測定，篩選出的菌種進(jìn)行固體發(fā)酵。(2)固體發(fā)酵工藝a.菌種活化，再轉(zhuǎn)入扁瓶或搖瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)，無雜菌污染時(shí)，加入蛋白胨水刮下菌膜，準(zhǔn)備接種到種子罐。b.種子罐發(fā)酵采用高壓蒸汽滅菌，壓力為0.1～0.14MPa，溫度為120℃～126℃，滅菌30分鐘，冷卻到45℃以下時(shí)，注射接種扁瓶菌種，在30～32℃溫度和1∶0.8～1.0的通氣量培養(yǎng)到對數(shù)期放入貯液槽。種子罐培養(yǎng)基配方豆餅粉0.5%～0.6%；魚粉0.4～0.6%；蠶蛹粉0.4～0.6%；葡萄糖0.2～0.4%；花生油或糠油0.25%，其余為水，調(diào)節(jié)PH為7.5，消毒滅菌，保證PH在6.8～7.2之間。c.固體培養(yǎng)基配料將干燥的草碳粉碎，用風(fēng)選機(jī)篩至160～200目/吋，以草碳為基數(shù)，再加入0.1～0.2%的蛋白胨，0.1%～0.2%的魚粉，加水量為30～40%，以水量為基數(shù)，水內(nèi)加入H3BO3200～286PPm，MnCl2·H2O100PPm，ZnSO4220PPm，CuSO480～120PPm，H2MoO420～40PPm，F(xiàn)eSO4112～150PPm，KI10～28PPm，MgSO4200～350PPm，將配成營養(yǎng)液噴霧加入草碳中，并用攪拌機(jī)混合均勻。d.裝袋滅菌將混合均勻的培養(yǎng)料500克裝一聚丙烯塑料袋，裝滅菌車121℃～126℃(0.1MPa～0.14MPa)高壓蒸汽滅菌1～2小時(shí)，冷卻到45℃以下接菌。e.接菌將滅菌的培養(yǎng)料用傳送帶送入接菌室，用接在菌液貯槽的接菌器，每袋接菌27～33ml，保證每克固體培養(yǎng)基接菌1～1.2×108cfu/克，抖動混合均勻后，折口置30°～32℃培養(yǎng)室固體發(fā)酵，約培養(yǎng)24～36小時(shí)，保證菌劑含芽孢數(shù)超過100×108cfu/克時(shí)，進(jìn)行包裝，得到產(chǎn)品。
2.按權(quán)利要求1所述的篩選和生產(chǎn)方法，其特征在于所述的營養(yǎng)液中，以水為基數(shù)，水中添加的組份含量是H3BO3286PPm，MnCl2·H2O100PPm，ZnSO4220PPm，CuSO4120PPm，H2MoO420PPm，F(xiàn)eSO4150PPm，KI10PPm，MgSO4284PPm。
3.按權(quán)利要求1所述的篩選和生產(chǎn)方法，其特征在于所述的種子罐培養(yǎng)基配方為黃豆餅粉0.5%，魚粉0.4%，蠶蛹粉0.5%，葡萄糖0.3%，糠油0.25%，其他為水。
4.一種新型作物增產(chǎn)菌的篩選和生產(chǎn)方法，其特征在于它包括分離篩選、固體發(fā)酵工藝兩部分(1)分離篩選方法選水稻苗的新根(從出現(xiàn)第四片真葉開始)，經(jīng)自來水沖洗、消毒，剪取根伸長區(qū)部位1～2厘米，約5克，加入10ml水，用65～75℃恒溫水浴15分鐘，用鑷子將根段夾出，在無菌研缽中研碎，加水100ml左右，再用磁力攪拌5分鐘，再梯度稀釋到10-3，吸取1ml稀釋液，接種培養(yǎng)分離篩選出蠟狀芽孢桿菌菌株(Bucillus cereus)，(保存于CGMCC，保藏號No.0155)，菌株在溫室內(nèi)作生物測定，測定三次，測定時(shí)，菌種的數(shù)目用牛肉蛋白胨液體培養(yǎng)液調(diào)至108cfu/ml，菌種拌單子葉植物，播種于花盆中，隨機(jī)區(qū)組排列以出現(xiàn)四片真葉為標(biāo)誌，記錄株數(shù)和每盆重，性能優(yōu)越菌種作拮抗性能測定篩選出的菌種進(jìn)行固體發(fā)酵。(2)固體發(fā)酵工藝a.菌種活化，再轉(zhuǎn)入扁瓶或搖瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)，無雜菌污染時(shí)，加入蛋白胨水刮下菌膜，準(zhǔn)備接種到種子罐。b.種子罐發(fā)酵采用高壓蒸汽滅菌，壓力為0.1～0.14MPa，溫度為120℃～126℃，滅菌30分鐘，冷卻到45℃以下時(shí)，注射接種扁瓶菌種，在30～32℃溫度和1∶0.8～1.0的通氣量培養(yǎng)到對數(shù)期放入貯液槽。種子罐培養(yǎng)基配方豆餅粉0.5%～0.6%，魚粉0.4～0.6%，蠶蛹粉0.4～0.6%，葡萄糖0.2～0.4%，花生油或糠油0.25%，其余為水，調(diào)節(jié)PH為7.5，消毒滅菌保證PH在6.8～7.2之間。c.固體培養(yǎng)基配料將干燥的草碳粉碎，用風(fēng)選機(jī)篩至160～200目/吋，以草碳為基數(shù)，再加入0.1～0.2%的蛋白胨，0.1%～0.2%的魚粉，加水量為30%～40%。以水量為基數(shù)，水內(nèi)加入H3BO3200～286PPm，MnCl2·H2O100PPm，ZnSO4220PPm，CuSO480～120PPm，H2MoO420～40PPm，F(xiàn)eSO4112～150PPm，KI10～28PPm，MgSO4200～350PPm，將配成營養(yǎng)液噴霧加入草碳中，并用攪拌機(jī)混合均勻。d.裝袋滅菌將混合均勻的培養(yǎng)料500克裝一聚丙烯塑料袋，裝滅菌車121℃～126℃(0.1MPa～0.14MPa)高壓蒸汽滅菌1～2小時(shí)，冷卻到45℃以下接菌。e.接菌將滅菌的培養(yǎng)料用傳送帶送入接菌室，用接在菌液貯槽的接菌器，每袋接菌27～33ml，保證每克固體培養(yǎng)基接菌1～1.2×108cfu/克，抖動混合均勻后，折口置30°～32℃培養(yǎng)室固體發(fā)酵，約培養(yǎng)24～36小時(shí)，保證菌劑含芽孢數(shù)超過100×108cfu/克時(shí)，進(jìn)行包裝，得到產(chǎn)品。
5.按權(quán)利要求4所述的篩選和生產(chǎn)方法，其特征在于所述營養(yǎng)液中，以水為基數(shù)，水中添加組份的含量是H3PO3286PPm，MnCl2·H2O100PPm，ZnSO4220PPm，CuSO4120PPm，H2MoO420PPm，F(xiàn)eSO4150PPm，KI10PPm，MgSO4284PPm。
6.按權(quán)利要求4所述的篩選和生產(chǎn)方法，其特征在于所述種子罐培養(yǎng)基配方為黃豆餅粉0.5%，魚粉0.4%，蠶蛹粉0.5%，葡萄糖0.3%，糠油0.25%，其他為水。
全文摘要
新型作物增產(chǎn)菌的選育和生產(chǎn)方法，它包括菌種選育和固體發(fā)酵工藝。菌種選育工藝中，采取從雙子葉植物大豆的主根、主莖中分離篩選菌株以及從單子葉植物水稻根系中分離篩選菌株，這二種菌株分別經(jīng)固體發(fā)酵工藝制得新型作物增產(chǎn)菌。經(jīng)實(shí)驗(yàn)，它們可使雙子葉類作物增產(chǎn)15～25％，單子葉作物增產(chǎn)15～20％，對塊根、塊莖或其他無性繁殖體增產(chǎn)20～30％，并可改善作物品質(zhì)，提高抗病害能力，其固體發(fā)酵產(chǎn)品的含菌量達(dá)120億/克，成本低，便于包裝運(yùn)輸。
文檔編號C12N1/20GK1056896SQ9010359
公開日1991年12月11日 申請日期1990年5月22日 優(yōu)先權(quán)日1990年5月22日
發(fā)明者陳延熙 申請人:陳延熙