專(zhuān)利名稱(chēng)：一種絲蘭植物堿性蛋白酶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物中提取的新蛋白酶種及其提取方法。
酶制劑在工業(yè)生產(chǎn)上有廣泛的用途。植物蛋白酶一般具有資源來(lái)源豐富。價(jià)格低廉的特點(diǎn)，因而易被大量開(kāi)發(fā)。市場(chǎng)上銷(xiāo)售的植物蛋白酶如木瓜蛋白酶，菠蘿蛋白酶，無(wú)花果蛋白酶等，就廣泛應(yīng)用在蠶絲脫膠，皮革脫毛，啤酒澄清、肉類(lèi)嫩化及醫(yī)藥等方面。
蛋白酶所具有的不同特殊的性質(zhì)，決定了它們自身的應(yīng)用價(jià)值。目前市售的植物蛋白酶，都是中酸性蛋白酶。在PH中性偏酸性條件下比較穩(wěn)定。在堿性條件下就容易喪失活力。本發(fā)明的目的在于尋找一種用簡(jiǎn)單的提取工藝制備出。在PH堿性條件下酶活力穩(wěn)定的新植物蛋白酶種。
本發(fā)明是采用百合科(LILACEAE)絲蘭屬(YUCCA)植物葉片為原料。將葉片洗凈涼干，刮取綠色柵狀組織，直接將柵狀組織用熱風(fēng)干燥后粉碎成粗酶。也可按上述工藝刮取柵狀組織后榨汁。加入是汁量一倍的水，靜置10分鐘，離心去除懸浮物。清液按8%的重量加入硫酸銨靜置約4小時(shí)后離心去除沉淀，上清補(bǔ)足硫酸銨50%飽和度，靜置12小時(shí)后離心收集沉淀，抽真空凍于成酶制劑。
本發(fā)明采用絲蘭屬植物作酶提取原料，其品種是filame-ntosa，金邊絲蘭、光邊絲蘭和gloroiosa、經(jīng)用DHT-Casain法測(cè)上述4種植物酶活性、gloroiosa品種活性最高。gloroiosa品種的葉片中。酶主要存在于正常展開(kāi)、生長(zhǎng)正常的健康葉中，而未張開(kāi)的白色嫩葉及枯萎的老葉含酶量極少。
用本發(fā)明方法提取制備的絲蘭植物蛋白酶，適應(yīng)PH范圍在PH7～12.5，PH12時(shí)酶活性最高。該酶經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳證明為兩個(gè)蛋白酶組分，簿層等電聚焦電泳證實(shí)這兩個(gè)組分等電點(diǎn)各為PH9.77和9.61。絲蘭植物蛋白酶可用于洗滌劑、果汁澄清等方面。
實(shí)施例1取gloroiosa成熟健康的葉片30.05千克，刮取綠色柵狀組織12.6千克，刮取物置-網(wǎng)眼為1×1(mm)的網(wǎng)袋中，在熱風(fēng)干燥房中于55℃下干燥至水份＜7%時(shí)，取干燥物用球磨機(jī)粉碎得粗酶粉3.94千克，用DHT-酪蛋白法測(cè)活性為15718μ/克。
實(shí)施例2取成熟健康的金邊絲蘭葉片15千克，刮取綠色柵狀組織6.1千克，按實(shí)施例1方法得粗酶粉1.87千克，活性為8700μ/克。
實(shí)施例3取成熟健康的光葉絲蘭葉片17千克，刮取綠色柵狀組織7.0千克，按實(shí)施例1方法得粗酶粉2.03千克，活性為9500μ/克。
實(shí)施例4取成熟健康的絲蘭麻葉片3.2千克，刮取綠色柵狀組織0.97千克，榨取汁410毫升。汁水離心(2000轉(zhuǎn)/分)，取上清水加一倍無(wú)離子水后，稱(chēng)取汁水量8%的硫酸銨，慢慢加入汁水中攪拌至溶，并繼續(xù)攪拌10分鐘，室溫靜置4小時(shí)后離心(2000轉(zhuǎn)/分)，取上清水再加到50%飽和度的硫酸銨鹽析，靜置12小時(shí)離心(2000轉(zhuǎn)/分)，收集沉淀物得酶糊0.082千克。酶糊經(jīng)真空冷凍干燥得精酶0.043千克，用DHT-酪蛋白法測(cè)活性為51300μ/克。
權(quán)利要求
1.一種植物蛋白酶。其特征在于采用絲蘭屬植物葉片為原料。按下例步驟提取
經(jīng)上述步驟提取的絲蘭植物蛋白酶?；钚赃m應(yīng)PH范圍在7～12.5、PH12時(shí)酶活性最高。
2.按權(quán)利要求1所述的提取步驟，其特征在于是用filamentosa，金邊絲蘭，光邊絲蘭和gloroiosa作原料，以gloroiosa品種酶活性最高。
3.按權(quán)利要求1、2所述的提取步驟，其特征在于采用正常展開(kāi)，生長(zhǎng)正常的健康葉片。
4.按權(quán)利要求1所述的提取步驟，其特征在于加入汁液一倍量的水。
5.按權(quán)利要求1所述的提取步驟，其特征在于將硫酸銨按汁水量8%的比例加入汁水后靜置4小時(shí)離心去除沉淀。
6.按權(quán)利要求1所述的提取步驟，其特征在于將上清液補(bǔ)足硫酸銨50%飽和度靜置12小時(shí)離心取沉淀。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從植物中提取的新蛋白酶種及其提取方法。用絲蘭屬(YUCCA)植物葉片作原料，將葉表柵狀組織直接干燥成粗酶制劑；亦可用硫酸銨分級(jí)鹽析成精酶制劑。絲蘭蛋白酶適應(yīng)pH范圍在7～12.5、pH12時(shí)活性最高。該酶可用于洗滌劑、果汁澄清等方面。
文檔編號(hào)C12N9/50GK1066469SQ9110316
公開(kāi)日1992年11月25日 申請(qǐng)日期1991年5月9日 優(yōu)先權(quán)日1991年5月9日
發(fā)明者葉啟騰, 陳強(qiáng), 李春香 申請(qǐng)人:廣西熱帶作物研究所