專利名稱：一種凝血酶的制做方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種止血藥，特別是對各種出血都能達(dá)到速效止血的一種凝血酶的制做方法。
目前，臨床上對各種出血所采用的是用常規(guī)止血藥止血，止血時(shí)間長，又有付作用，特別是對血液病所致出血，止血效果更差;而使用凝血酶，止血時(shí)間短，作用迅速，療效顯著，使用方便，無副作用。凝血酶直接作用于凝血，使纖維蛋白原迅速轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白多聚體，同時(shí)包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、血漿構(gòu)成血凝塊，堵塞出血點(diǎn)，達(dá)到止血目的。
Cohn于1940年建立了低溫乙醇法，該法主用是通過五個(gè)因素的變動(dòng)(五變系統(tǒng))，使血漿蛋白得以分離。歐洲專利56629、德國專利2902657和美國專利92626分別介紹的是以硫酸鋇、氫氧化鋁、磷酸鈣、磷酸鈉、聚二醇和羥基烷酸為制劑，用鈣離子進(jìn)行吸咐、分離，達(dá)到把血漿蛋白質(zhì)的分離和提純的目的，采用上述幾種方法制做的凝血酶的不足之處是工藝流程復(fù)雜，投資大，成本高，時(shí)間長，純度低，活性低、得利少。
本發(fā)明目的在于避免上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種工藝流程簡單，投資小，成本低，時(shí)間短，純度高，活性高，得利多的速效止血藥-凝血酶的制做方法。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施來達(dá)到一種凝血酶的制做方法，其特征在于在動(dòng)物血液中加入抗凝劑后，再加入乙醇和緩沖液，PH調(diào)節(jié)值，離心分離，有沉淀物產(chǎn)生(即凝血酶原);加水溶解沉淀物，上層析柱層析，流出液用緩沖液調(diào)節(jié)PH值離心，有沉淀物產(chǎn)生;再加水溶解沉淀物，常溫下活化一小時(shí)以上，用緩沖液調(diào)PH值，上層析柱層析，洗脫液即為凝血酶。
本發(fā)明的目的還可以通過以下措施達(dá)到加入乙醇或緩沖液后，調(diào)PH值為5.3時(shí)，即可離的分離;上肝素瓊脂糖層析柱層析，流出液用緩沖液調(diào)PH值為4.4時(shí)離心;常溫下活化3小時(shí)以上的溶液，用CaHPO4調(diào)H7.2，上葡聚糖G-25層析。
本發(fā)明以下將結(jié)合(附圖
)實(shí)施例作進(jìn)一步的詳述取動(dòng)物血(如豬血或牛血)液，加入抗凝劑檸檬酸鈉抗凝;離心分離后的血漿中加入10%的無水乙醇，用緩沖液HAC10%調(diào)PH5.3時(shí)離心，沉淀物產(chǎn)生，即為凝血酶原;凝血酶原沉淀加入水溶解，上肝素瓊脂糖層析柱，控制一定流量，經(jīng)層析柱流出的液體用HAC調(diào)PH4.4后離心，沉淀為精制的凝療酶原;沉淀加入10倍以上體積水溶解，常溫下水浴化1小時(shí)，用CaHPO4調(diào)PH7.2，加入CaCl2，然后上G-25層析，流出液即為精制凝血酶，經(jīng)除菌，無菌分裝，凍干后即為成品。
本發(fā)明比較現(xiàn)有技術(shù)，具有如下優(yōu)點(diǎn)工藝流程簡單，投資小，成本低，時(shí)間短，純度高，活性高，得利多等等。
權(quán)利要求
1.一種凝血酶的制做方法，其特征在于a.在動(dòng)物血液中加入抗凝劑后，再加入乙醇和緩沖液，PH調(diào)節(jié)值，離心分離，有沉淀物產(chǎn)生(即凝血酶原)；b.加水溶解沉淀物，上層析柱層析，流出液用緩沖液調(diào)節(jié)PH值離心，有沉淀物產(chǎn)生；c.再加水溶解沉淀物，常溫下活化一小時(shí)以上，用緩沖液調(diào)PH值，上層析柱層析，洗脫液即為凝血酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝血酶的制做方法，其特征在于加入乙醇或緩沖液后，調(diào)PH值為5.3時(shí)，即離心分離。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝血酶的制做方法，其特征在于上肝素瓊脂糖層析柱層析，流出液用緩沖液調(diào)PH值為4.4時(shí)離心。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝血酶的制做方法，其特征在于常溫下活化1小時(shí)以上的溶液，用CaHPO4調(diào)H7.2，上葡聚糖G-25層析。
全文摘要
一種凝血酶的制做方法，它是以動(dòng)物血液為主，加入抗凝劑，上層析柱層析、緩沖液和調(diào)節(jié)pH值等，使蛋白質(zhì)分子“脫水”，在等電點(diǎn)時(shí)易沉淀等步驟，制做出一種速效止血藥凝血酶。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)工藝流程簡單，投資小、成本低，時(shí)間短、純度高，活性高，得利多等等。
文檔編號C12N9/74GK1074709SQ92112188
公開日1993年7月28日 申請日期1992年11月26日 優(yōu)先權(quán)日1992年11月26日
發(fā)明者劉高東, 黃偉東 申請人:劉高東, 黃偉東