專利名稱：細菌生化鑒定卡的制作方法
技術領域：
本發(fā)明公開了細菌生化鑒定卡，它包括非腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡、腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡、腸桿菌科細菌生化鑒定卡、厭氧菌生化鑒定卡、奈瑟氏菌/嗜血桿菌屬生化鑒定卡、彎曲桿菌生化鑒定卡、酵母樣真菌生化鑒定卡、棒狀桿菌生化鑒定卡、微球菌科細菌生化鑒定卡、鏈球菌科細菌生化鑒定卡、芽胞桿菌生化鑒定卡、乳酸桿菌生化鑒定卡12種。
細菌鑒定是采用細菌生物學性狀試驗工具檢測待檢菌株的生物學性狀，然后根據(jù)待檢菌株生物學性狀的測定結果，運用鑒定方法，借助鑒定設備或鑒定編碼檢索工具確定其屬、種的過程。在細菌鑒定過程中，檢測待檢菌株的生物學性狀是進行細菌鑒定的前提條件，只有獲得待檢菌株生物學性狀的測定結果，才能運用鑒定方法和借助鑒定設備或鑒定編碼檢索工具實現(xiàn)細菌屬、種的鑒定。檢測細菌生物學性狀的傳統(tǒng)方法是將各種試驗用的培養(yǎng)基配制好后，分裝于試管內(nèi)再高壓滅菌后備用，或高壓滅菌后再分裝于試管內(nèi)備用。這種方法由于在使用前需配制好培養(yǎng)基并以試管為試驗用具，因而操作繁瑣、使用不方便;由于培養(yǎng)基為液體、瓊脂固體或半固體，因而有效期短;由于培養(yǎng)基的用量大，因而消耗多;由于測定一項細菌的生物學性狀需使一種試驗培養(yǎng)基，且試驗器具為試管，因而不適于一次檢測細菌的多項生物學性狀，工作效率低。為了簡化操作、延長有效期短、減少消耗并一次檢測細菌的多項生物學性狀，國內(nèi)外學者相繼發(fā)明了一系列細菌微量快速生化鑒定卡或試驗工具來檢測細菌的生化性狀，而實現(xiàn)細菌的鑒定。在公知的細菌生化鑒定卡如VITEK、ATB、API、Micro-ID、Entertube Ⅱ等中，它們不同程度地改善了細菌生物學性狀的測定依賴傳統(tǒng)試驗方法的落后局面，并具有操作簡便、培養(yǎng)基的有效期長、不需自配檢測試劑、一次可以檢測多項細菌生物學性狀、可以進行批量化檢測、工作效率高、可以使細菌生物學性狀的測定統(tǒng)一化和標準化。但是，由于上述細菌生化鑒定卡在卡的片基中加入培養(yǎng)基的種類多達15～32種，且其中有部分培養(yǎng)基即試驗項目中對被鑒定類群的細菌沒有鑒定價值，因而消耗多、浪費大;由于培養(yǎng)基種類的選擇與組合不合理，因而對被鑒定類群的細菌的可鑒定率較低，或用上述生化鑒定卡測得的細菌生化數(shù)據(jù)對細菌鑒定的可利用率較低。
本發(fā)明的目的是提供細菌生化鑒定卡，它包括非腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡、腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡、腸桿菌科細菌生化鑒定卡、厭氧菌生化鑒定卡、奈瑟氏菌/嗜血桿菌屬生化鑒定卡、彎曲桿菌生化鑒定卡、酵母樣真菌生化鑒定卡、棒狀桿菌生化鑒定卡、微球菌科細菌生化鑒定卡、鏈球菌科細菌生化鑒定卡、芽胞桿菌生化鑒定卡、乳酸桿菌生化鑒定卡12種。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的首先根據(jù)已知被鑒定細菌類群的生化性狀，用優(yōu)選法選擇出鑒定該類群細菌的最佳鑒定性狀;然后根據(jù)選擇出的細菌最佳鑒定性狀，決定細菌生化性狀測定培養(yǎng)基的種類，并配制出相映的試驗培養(yǎng)基;最后將配制好的各種培養(yǎng)基加入到細菌生化鑒定卡片基的孔中，每孔加入一種培養(yǎng)基，并經(jīng)干燥處理，包裝后即為細菌生化鑒定卡。加入細菌生化鑒定卡片基孔中的培養(yǎng)基種類，視被鑒定細菌類群的不同分為下述12種(1)非腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡是2-酮基-葡萄糖酸鹽(2KG)、3-羥基-苯甲酸鹽(3HB)、3-羥基丁酸鹽(OBU)、枸櫞酸鹽(CIT)、L-脯氨酸(LPR)、組氨酸(HIS)、N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)、糖原(GLY)、麥芽糖(MAL)、蔗糖(SUC)、D-密二糖(MEL)、L-巖藻糖(FUC)、D-葡萄糖(GLU)、肌醇(INO)、甘露醇(MAN)15個同化試驗培養(yǎng)基，用于同時測定非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定單元的15種生化性狀;
(2)腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡是賴氨酸脫羧酶(LDC)、烏氨酸脫羧酶(ODC)、精氨酸雙水解酶(ADH)、吲哚產(chǎn)生(IND)、尿素酶(URE)、枸櫞酸鹽利用(CIT)、葡萄糖氧化(GLO)、甘露醇發(fā)酵(MAN)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、鼠李糖發(fā)酵(RHA)、苦杏仁苷發(fā)酵(AMY)、山梨醇發(fā)酵(SOR)12種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定單元的12項生化性狀;
(3)腸桿菌科細菌生化鑒定卡是賴氨酸脫羧酶(LDC)、烏氨酸脫羧酶(ODC)、丙二酸鹽利用(MAU)、尿素酶(URE)、纖維二糖發(fā)酵(CEL)、山梨醇發(fā)酵(SOR)、阿拉伯糖發(fā)酵(LAR)、側金盞花醇發(fā)酵(ADO)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、衛(wèi)矛醇發(fā)酵(DUL)、α-甲基-葡萄糖苷發(fā)酵(AMG)、甘露醇發(fā)酵(MAN)12種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定腸桿菌科細菌鑒定單元的12項生化性狀;
(4)厭氧菌生化鑒定卡是α-葡萄糖苷酶(AGL)、α-半乳糖苷酶(AGA)、α-阿拉伯糖苷酶(AAR)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、β-半乳糖苷酶(BGA)、β-葡萄糖醛酸苷酶(BGU)、亮氨酸芳胺酶(LAA)、脯氨酸芳胺酶(PRA)、鹼性磷酸酶(ALP)、吲哚產(chǎn)生(IND)、甘露糖發(fā)酵(MAS)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄酶(NAG)12種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定厭氧菌鑒定單元的12項生化性狀;
(5)奈瑟氏菌/嗜血桿菌屬生化鑒定卡是葡萄糖發(fā)酵(GLU)、麥芽糖發(fā)酵(MLT)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、苯基磷酸鹽(OPS)、甘氨酸芳胺酶(GLY)、r-谷氨酰芳胺酶(GGT)、脯氨酸芳胺酶(PRO)、樹脂天青還原(RES)8種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定奈瑟氏菌/嗜血桿菌屬鑒定單元的8項生化性狀;
(6)彎曲桿菌生化鑒定卡是硝酸鹽還原(NIT)、尿素酶(URE)、丁二酸鹽同化(SUT)、醋酸鹽同化(ACE)、馬尿酸鹽水解(HIP)、硫化氫產(chǎn)生(HYS)、r-谷氨?；D移酶(GGT)、鹼性磷酸酶(ALP)8種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定彎曲桿菌鑒定單元的8項生化性狀;
(7)酵母樣真菌生化鑒定卡是2-酮基-葡萄糖(2KG)、放線菌酮(ACT)、赤蘚醇(ERY)、甘露醇(MAN)、肌醇(INO)、N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)、L-阿拉伯糖(LAR)、半乳糖(GAL)、棉子糖(RAF)、纖維二糖(CEL)、乳糖(LAC)、麥芽糖(MAL)、密二糖(MEL)、海藻糖(TRE)、七葉苷(ESC)15種同化試驗培養(yǎng)基，用于同時測定酵母樣真菌鑒定單元的15項生化性狀;
(8)棒狀桿菌生化鑒定卡是硝酸鹽還原(NIT)、尿素酶(URE)、七葉苷水解(ESC)、麥芽糖發(fā)酵(MAL)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、核糖發(fā)酵(RIB)、乳糖發(fā)酵(LAC)、α-葡萄糖苷酶(AGL)、β-半乳糖苷酶(BGA)9種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定棒狀桿菌鑒定單元的9項生化性狀;
(9)微球菌科細菌生化鑒定卡是尿素酶(URE)、硝酸鹽還原(NIT)、3-羥基丁酮產(chǎn)生(V-P)、精氨酸雙水解酶(ADH)、烏氨酸脫羧酶(ODC)、鹼性磷酸酶(ALP)、β-半乳糖苷酶(BGA)、β-葡萄糖醛酸苷酶(BGU)、葡萄糖發(fā)酵(GLF)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、甘露醇發(fā)酵(MAN)、海藻糖發(fā)酵(TRE)12種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定微球菌科細菌鑒定單元的12項生化性狀;
(10)鏈球菌科細菌生化鑒定卡是3-羥基丁酮產(chǎn)生(V-P)、馬尿酸鹽水解(HIP)、精氨酸雙水解酶(ADH)、α-亮氨酸芳胺酶(LAA)、β-葡萄糖醛酸酶(BGU)、β-半乳糖苷酶(BGA)、核糖發(fā)酵(RIB)、棉子糖發(fā)酵(RAF)、山梨醇發(fā)酵(SOR)、阿拉伯糖發(fā)酵(LAR)、海藻糖發(fā)酵(TRE)、乳糖發(fā)酵(LAC)12種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定鏈球菌科細菌鑒定單元的12項生化性狀;
(11)芽胞桿菌生化鑒定卡是精氨酸雙水解酶(ADH)、尿素酶(URE)、枸櫞酸鹽利用(CIT)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、淀粉水解(AMD)、L-阿拉伯糖發(fā)酵(LAR)、核糖發(fā)酵(RIB)、山梨醇發(fā)酵(SOR)、D-塔格糖發(fā)酵(DTA)、N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)、果糖發(fā)酵(FRU)、甘露糖發(fā)酵(MAS)、半乳糖發(fā)酵(GAL)、龍膽二糖發(fā)酵(GEN)、α-甲基-D-甘露糖(MDM)15種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定芽胞桿菌鑒定單元的15項生化性狀;
(12)乳酸桿菌生化鑒定卡是對苯二酚葡萄苷發(fā)酵(ARB)、核糖發(fā)酵(RIB)、N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)、D-木糖發(fā)酵(DXY)、海藻糖發(fā)酵(TRE)、山梨醇發(fā)酵(SOR)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、乳糖發(fā)酵(LAC)、纖維二糖發(fā)酵(CEL)、密二糖發(fā)酵(MEL)、L-阿拉伯糖發(fā)酵(LAR)、鼠李糖發(fā)酵(RHA)、D-塔格糖發(fā)酵(DTA)、葡萄糖酸鹽利用(GNT)、淀粉水解(AMD)15種試驗培養(yǎng)基，用于同時測定乳酸桿菌鑒定單元的15項生化性狀。
使用本生化鑒定卡檢測細菌的生化性狀，可用于對臨床上常見的12大類群致病菌、條件致病菌、機會致病菌總計668個細菌鑒定單元進行鑒定。每一種細菌生化鑒定卡對各類群細菌的鑒定單元數(shù)為(1)非腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡鑒定單元104個;
(2)腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡鑒定單元108個;
(3)腸桿菌科細菌生化鑒定卡鑒定單元97個;
(4)厭氧菌生化鑒定卡鑒定單元80個;
(5)奈瑟氏菌/嗜血桿菌生化鑒定卡鑒定單元30個;
(6)彎曲桿菌生化鑒定卡鑒定單元18個;
(7)酵母樣真菌生化鑒定卡鑒定單元80個;
(8)棒狀桿菌生化鑒定卡鑒定單元33個;
(9)微球菌科細菌生化鑒定卡鑒定單元35個;
(10)鏈球菌科細菌生化鑒定卡鑒定單元47個;
(11)芽胞桿菌生化鑒定卡鑒定單元24個;
(12)乳酸桿菌生化鑒定鑒定單元29個。
本發(fā)明由于將細菌生化性狀測定用的多種試驗培養(yǎng)基加入一次性使用的卡片材料中而制成細菌生化鑒定卡，因而檢驗人員在檢測待檢菌株生物學性狀時不需自配各種試驗培養(yǎng)基，操作簡單，使用方便，培養(yǎng)基的有效期長，一次可以檢測細菌的多項生物學性狀，可以進行批量化檢測，工作效率高，可以使細菌生物學性狀的測定統(tǒng)一化和標準化;由于生化鑒定卡在卡的片基中加入的培養(yǎng)基種類為前述8～15種，因而每一種培養(yǎng)基即試驗項目對被鑒定類群的細菌都有鑒定價值而無浪費;由于生化鑒定卡中培養(yǎng)基種類的選擇與組合合理，因而對被鑒定類群細菌的可鑒定率較高，或用本生化鑒定卡測得的細菌生化數(shù)據(jù)對細菌鑒定的可利用率較高。
實施例將細菌生化鑒定卡中各種試驗培養(yǎng)基配好后，分別加入經(jīng)吸塑機械吸塑成型的PVC材料卡片的孔中，經(jīng)干燥處理后即為細菌生化鑒定卡。其中每種細菌生化鑒定卡中之PVC材料卡片的孔數(shù)與說明書中敘述的各種細菌生化鑒定卡培養(yǎng)基的種數(shù)相同，培養(yǎng)基的種類亦與說明書中的敘述一致。
權利要求
1.細菌生化鑒定卡，其特征在于卡孔中加入的細菌生化試驗培養(yǎng)基是下述12組中的一種(1)非腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡是2-酮基-葡萄糖酸鹽(2KG)、3-羥基-苯甲酸鹽(3HB)、3-羥基丁酸鹽(OBU)、枸櫞酸鹽(CIT)、L-脯氨酸(LPR)、組氨酸(HIS)、N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)、糖原(GLY)、麥芽糖(MAL)、蔗糖(SUC)、D-密二糖(MEL)、L-巖藻糖(FUC)、D-葡萄糖(GLU)、肌醇(INO)、甘露醇(MAN)同化試驗培養(yǎng)基；(2)腸道革蘭氏陰性桿菌生化鑒定卡是賴氨酸脫羧酶(LDC)、烏氨酸脫羧酶(ODC)、精氨酸雙水解酶(ADH)、吲哚產(chǎn)生(IND)、尿素酶(URE)、枸櫞酸鹽利用(CIT)、葡萄糖氧化(GLO)、甘露醇發(fā)酵(MAN)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、鼠李糖發(fā)酵(RHA)、苦杏仁苷發(fā)酵(AMY)、山梨醇發(fā)酵(SOR)試驗培養(yǎng)基；(3)腸桿菌科細菌生化鑒定卡是賴氨酸脫羧酶(LDC)、烏氨酸脫羧酶(ODC)、丙二酸鹽利用(MAU)、尿素酶(URE)、纖維二糖發(fā)酵(CEL)、山梨醇發(fā)酵(SOR)、阿拉伯糖發(fā)酵(LAR)、側金盞花醇發(fā)酵(ADO)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、衛(wèi)矛醇發(fā)酵(DUL)、α-甲基-葡萄糖苷發(fā)酵(AMG)、甘露醇發(fā)酵(MAN)試驗培養(yǎng)基；(4)厭氧菌生化鑒定卡是α-葡萄糖苷酶(AGL)、α-半乳糖苷酶(AGA)、α-阿拉伯糖苷酶(AAR)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、β-半乳糖苷酶(BGA)、β-葡萄糖醛酸苷酶(BGU)、亮氨酸芳胺酶(LAA)、脯氨酸芳胺酶(PRA)、鹼性磷酸酶(ALP)、吲哚產(chǎn)生質(zhì)(IND)、甘露糖發(fā)酵(MAS)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄酶(NAG)試驗培養(yǎng)基；(5)奈瑟氏菌/嗜血桿菌屬生化鑒定卡是葡萄糖發(fā)酵(GLU)、麥芽糖發(fā)酵(MLT)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、苯基磷酸鹽(OPS)、甘氨酸芳胺酶(GLY)、γ-谷氨酰芳胺酶(GGT)、脯氨酸芳胺酶(PRO)、樹脂天青氧化(RES)試驗培養(yǎng)基；(6)彎曲桿菌生化鑒定卡是硝酸鹽還原(NIT)、尿素酶(URE)、丁二酸鹽同化(SUT)、醋酸鹽同化(ACE)、馬尿酸鹽水解(HIP)、硫化氫產(chǎn)生(HYS)、γ-谷氨?；D移酶(GGT)、鹼性磷酸酶(ALP)試驗培養(yǎng)基；(7)酵母樣真菌生化鑒定卡是2-酮基-葡萄糖(2KG)、放線菌酮(ACT)、赤蘚醇(ERY)、甘露醇(MAN)、肌醇(INO)、N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)、L-阿拉伯糖(LAR)、半乳糖(GAL)、棉子糖(RAF)、纖維二糖(CEL)、乳糖(LAC)、麥芽糖(MAL)、密二糖(MEL)、海藻糖(TRE)、七葉苷(ESC)同化試驗培養(yǎng)基；(8)棒狀桿菌生化鑒定卡是硝酸鹽還原(NIT)、尿素酶(URE)、七葉苷水解(ESC)、麥芽糖發(fā)酵(MAL)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、核糖發(fā)酵(RIB)、乳糖發(fā)酵(LAC)、α-葡萄糖苷酶(AGL)、β-半乳糖苷酶(BGA)試驗培養(yǎng)基；(9)微球菌科細菌生化鑒定卡是尿素酶(URE)、硝酸鹽還原(NIT)、3-羥基丁酮產(chǎn)生(V-P)、精氨酸雙水解酶(ADH)、烏氨酸脫羧酶(ODC)、鹼性磷酸酶(ALP)、β-半乳糖苷酶(BGA)、β-葡萄糖醛酸苷酶(BGU)、葡萄糖發(fā)酵(GLF)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、甘露醇發(fā)酵(MAN)、海藻糖發(fā)酵(TRE)試驗培養(yǎng)基；(10)鏈球菌科細菌生化鑒定卡是3-羥基丁酮產(chǎn)生(V-P)、馬尿酸鹽水解(HIP)、精氨酸雙水解酶(ADH)、α-亮氨酸芳胺酶(LAA)、β-葡萄糖醛酸酶(BGU)、β-半乳糖苷酶(BGA)、核糖發(fā)酵(RIB)、棉子糖發(fā)酵(RAF)、山梨醇發(fā)酵(SOR)、阿拉伯糖發(fā)酵(LAB)、海藻糖發(fā)酵(TRE)、乳糖發(fā)酵(LAC)試驗培養(yǎng)基；(11)芽胞桿菌生化鑒定卡是精氨酸雙水解酶(ADH)、尿素酶(URE)、枸櫞酸鹽利用(CIT)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、淀粉水解(AMD)、L-阿拉伯糖發(fā)酵(LAR)、核糖發(fā)酵(RIB)、山梨醇發(fā)酵(SOR)、D-塔格糖發(fā)酵(DTA)、N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)、果糖發(fā)酵(FRU)、甘露糖發(fā)酵(MAS)、半乳糖發(fā)酵(GAL)、龍膽二糖發(fā)酵(GEN)、α-甲基-D-甘露糖(MDM)試驗培養(yǎng)基；(12)乳酸桿菌生化鑒定卡是對苯二酚葡萄苷發(fā)酵(ARB)、核糖發(fā)酵(RIB)、N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)、D-木糖發(fā)酵(DXY)、海藻糖發(fā)酵(TRE)、山梨醇發(fā)酵(SOR)、蔗糖發(fā)酵(SUC)、乳糖發(fā)酵(LAC)、纖維二糖發(fā)酵(CEL)、密二糖發(fā)酵(MEL)、L-阿拉伯糖發(fā)酵(LAR)、鼠李糖發(fā)酵(RHA)、D-塔格糖發(fā)酵(DTA)、葡萄糖酸鹽利用(GNT)、淀粉水解(AMD)試驗培養(yǎng)基。
2.根據(jù)權利要求1所述的鑒定卡，其特征在于卡的片基為吸塑成型的PVC材料。
3.根據(jù)權利要求1和2所述的鑒定卡，其特征在于卡的片基為一次性使用的卡片。
全文摘要
本發(fā)明公開了細菌生化鑒定卡，它包括非腸道革蘭氏陰性桿菌、腸道革蘭氏陰性桿菌、腸桿菌科細菌、厭氧菌、奈瑟氏菌/嗜血桿菌屬、彎曲桿菌、酵母樣真菌、棒狀桿菌、微球菌科細菌、鏈球菌科細菌、芽胞桿菌和乳酸桿菌12種生化鑒定卡。利用該卡檢測細菌的生化性狀，對待鑒細菌的利用率高，其操作簡單，使用方便，有效期長，一次可以檢測細菌的多項生化性狀，可以進行批量化檢測和使細菌生物學性狀的測定標準化。
文檔編號C12Q1/04GK1081717SQ9310693
公開日1994年2月9日 申請日期1993年6月14日 優(yōu)先權日1993年6月14日
發(fā)明者何林, 劉秋鳴, 梁寶鐸, 王金良 申請人:何林