專利名稱：疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的疫苗制劑，其制備方法和其在醫(yī)藥上的應(yīng)用。具體而言，本發(fā)明涉及包含QS21和3-De-O-?；膯瘟柞ｎ愔珹(3D-MPL)的疫苗，其中QS21為從QuillajaSaponariaMolina的莖皮得到的經(jīng)高壓液相色譜(Hplc)純化的無毒成分。
3De-O-酰化的單磷酰類脂A可參見GB2，220，211(Ribi)。從化學(xué)上說，它是一種具有4、5或6酰化鏈的3-脫酰的單磷酰類酯A的混合物，是由RibiImmunochemMontana制備的。
QS21是一種由南美樹種OuillajaSaponariamolina的莖皮得到的皂苷經(jīng)高壓液相色譜(HpLe)純化的無毒成分。其制備方法(以QA21)公開在US5，057，540中。
本發(fā)明是以下述驚人發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)的，即包含QS21和3D-MPL的組合體的制劑對于某種給定的抗原能協(xié)同增強(qiáng)免疫應(yīng)答。
例如，瘧疾抗原RTS，S佐以3D-MPL和QS21的疫苗制劑能有效地協(xié)同誘導(dǎo)脾臟中CS蛋白特異的細(xì)胞毒素的T淋巴細(xì)胞(CTL)的應(yīng)答。
RTS是一種雜種蛋白，它包含有幾乎所有的P.falciparum的環(huán)子孢子(CS)蛋白的C-末端部分，經(jīng)乙肝表面抗原的preS2部分的四個(gè)氨基酸連接至乙肝病毒的表面(S)抗原上。其整體結(jié)構(gòu)公開于審查中的國際專利申請PCT/EP92/02591中，以WO93/10152公開，優(yōu)先權(quán)為UK專利申請?zhí)?124390.7。當(dāng)以酵母表達(dá)時(shí)，RTS以脂蛋白顆粒產(chǎn)生，當(dāng)其與來自HBV的S抗原一起表達(dá)時(shí)，產(chǎn)生一種稱之為RTS，S的混合顆粒。
能夠誘導(dǎo)強(qiáng)烈的溶細(xì)胞的T淋巴細(xì)胞應(yīng)答的觀測結(jié)果意義重大，因?yàn)樵谀承┑湫蛣游镏羞@些應(yīng)答已表現(xiàn)出可誘導(dǎo)對疾病的預(yù)防。
本發(fā)明人表明，兩種佐劑QS21和3D-MPL與重組體顆?？乖璕TS，S的組合體能強(qiáng)有力地誘導(dǎo)脾臟中的CS蛋白特異性CTL.QS21自身也能增強(qiáng)誘導(dǎo)CTL，而3D-MPL則無此作用?？梢哉f這種組合是以一種協(xié)同性的方式而起作用，這是因?yàn)?，其效果大于每種佐劑單獨(dú)的效果之和。這兩種佐劑對CTL誘導(dǎo)的協(xié)同作用是一個(gè)驚人的發(fā)現(xiàn)，它有使用重組體分子作為用于誘導(dǎo)CTL介導(dǎo)的免疫的疫苗的重要結(jié)論。
當(dāng)靶抗原在胞內(nèi)合成時(shí)(如在病毒、胞內(nèi)細(xì)菌的感染中，或在腫瘤中)，易于發(fā)現(xiàn)CTL的誘導(dǎo)，這是因?yàn)橛煽乖牡鞍姿庑苑纸猱a(chǎn)生的肽能夠進(jìn)入適宜的處理途徑，從而導(dǎo)致與細(xì)胞膜上Ⅰ類分子有關(guān)的表現(xiàn)。但是，預(yù)形成的可溶性抗原通常不會到達(dá)該處理和表現(xiàn)途徑，也不會誘出Ⅰ類約束的CTL。因而，傳統(tǒng)的非活體疫苗在誘出抗體和T輔助應(yīng)答時(shí)通常不能誘導(dǎo)CTL介導(dǎo)的免疫作用。兩種佐劑QS21和3D-MPL的組合能夠克服基于重組體蛋白的疫苗的這種嚴(yán)重的局限，且能誘導(dǎo)寬范圍的免疫應(yīng)答。
對CS蛋白的CTL特異性已表示出在小鼠模型體系中預(yù)防瘧疾的功能(Romero等，Nature341∶323(1989))。對人體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，使用輻照過的P.falciparum的子孢子使志愿者免疫，表明其可防止隨后的瘧疾進(jìn)攻，因而顯示出對CS表位特異性的CTL的誘導(dǎo)作用(Malik等Proc.Natl.Acad.Sci.USA.88∶3300(1991))。
由于根據(jù)免疫應(yīng)答的產(chǎn)生和性能，使用輻照的子孢子將是不切實(shí)際的，因而誘導(dǎo)對于以重組體分子給藥的抗原特異的CTL的能力與瘧疾疫苗的開發(fā)是有關(guān)的。
除了瘧疾疫苗，誘導(dǎo)CTL應(yīng)答的能力還將有益于疫苗抵抗單純皰疹病毒、細(xì)胞肥大病毒、人體免疫缺乏病毒，以及一般地病原體處于胞內(nèi)生命期的所有病例。
同樣，對于已知的腫瘤抗原特異的CTL也能通過一種重組體腫瘤抗原和兩種佐劑的組合體進(jìn)行誘導(dǎo)。這將有益于開發(fā)抗癌疫苗。
在一些體系中，3D-MPL和QS21的組合能協(xié)同增強(qiáng)干擾素γ的生成。本發(fā)明人通過利用稱之為gD2t的單純皰疹抗原表明了3D-MPL和QS21的協(xié)同作用潛力。gD2t是一種得自HSV-2的可溶性截?cái)嗟奶堑鞍譊，并且可以按Berman等，Science 222 524-527所述的方法在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生。
IFN-γ分泌與抗胞內(nèi)病原體的保護(hù)性應(yīng)答有關(guān)，所述病原體包括寄生物，細(xì)菌和病毒。由INF-γ活化巨噬細(xì)胞增強(qiáng)了微生物的胞內(nèi)殺傷并增加了Fc受體的表達(dá)。直接的細(xì)胞溶解作用也可能發(fā)生，特別是與淋巴毒素(另一種THl細(xì)胞的產(chǎn)物)協(xié)同作用下發(fā)生。IFN-γ不僅是一種誘導(dǎo)物而且是NK細(xì)胞的一種產(chǎn)物，NK細(xì)胞為主要的先天保護(hù)效應(yīng)物?；蛘咄ㄟ^IFN-γ或者通過其它機(jī)理實(shí)現(xiàn)的THI型應(yīng)答優(yōu)先有助于IgG2a免疫球蛋白同種型。
糖蛋白D位于病毒被膜上，也能在感染的細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)上發(fā)現(xiàn)(Eisenberg R.J.等J.Of Virol 1980 35 428-435)。它含有393種包括一種信號肽的氨基酸，其分子量大約為60KD。在所有的HSV被膜糖蛋白中，這可能是最好的特征(Cohen等 J.Virology 60 157-166)。在體內(nèi)公知它在病毒向細(xì)胞膜的附著中起中心作用。進(jìn)而，糖蛋白D還表明能誘出體內(nèi)中和抗體(Eing等 J.Med Virology 127∶59-65)。然而，潛伏的HSV2病毒仍然能被再活化并誘導(dǎo)疾病復(fù)發(fā)，盡管在患者的血清中存在高的中和抗體值。因而很明顯，單獨(dú)誘導(dǎo)中和抗體的能力并不足以適宜地控制疾病。
為了防止疾病復(fù)發(fā)，任何一種疫苗均需要不僅激發(fā)中和抗體，而且要激發(fā)通過T細(xì)胞特別是細(xì)胞毒性T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫。
在這種情況下，gD2l是308種氨基酸的HSV2糖蛋白D，所述氨基酸包括1至306天然存在的糖蛋白以及在截?cái)嗟鞍椎腃末端處的天冬酰胺和谷氨酰胺。這種形式的蛋白包括信號肽，該肽被分成一種成熟的283氨基酸蛋白，在中國大田鼠(Chinese Hamster)的卵巢細(xì)胞中這種蛋白的生成在Genentech的EP-B-139417中有述。
從哺乳動物細(xì)胞中分泌出的成熟的截?cái)嗵堑鞍譊(rgD2t)或等價(jià)的蛋白是在本發(fā)明的疫苗制劑中優(yōu)選使用的。
本發(fā)明的制劑能非常有效地誘導(dǎo)天竹鼠的生殖器皰疹模型中的保護(hù)免疫。即使采用非常低的抗原劑量(如低至5μg rgD2t)，該制劑也能防止天竺鼠的原發(fā)感染且能促進(jìn)特異性中和抗體應(yīng)答。本發(fā)明人采用本發(fā)明的制劑已經(jīng)表明了小鼠中效應(yīng)物細(xì)胞介導(dǎo)的THI型應(yīng)答。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供一種包含有一種抗原及3脫酰單磷酰類酯A和QS21的疫苗或藥物制劑。該種制劑可適用于寬范圍的單價(jià)或多價(jià)疫苗。
疫苗制劑最好包含一種抗原或抗原組合物，這種抗原或抗原組合物能夠激發(fā)對人體或動物病原體的免疫應(yīng)答，所述抗原或抗原組合物得自于HIV-1(如gp120或gp160)、任一種貓免疫缺乏病毒、人或動物皰疹病毒如gD或其衍生物或ImmediateEarly蛋白如由HSV1或HSV2得到的IGP27，細(xì)胞肥大病毒(特別是人的)如(gB或其衍生物)、VaricellaZosterVirus(水痘帶狀皰疹病毒)(如gPⅠ、Ⅱ或Ⅲ)，或者得自于肝類病毒如乙肝病毒如乙型肝炎表面抗原或其衍生物，肝類A病毒、肝炎C病毒和肝炎E病毒，或者得自于其它病毒病原體，如呼吸合胞體病毒、人類乳頭狀瘤病毒或流感病毒，或者得自于細(xì)菌性病原體如Salmonella(沙門氏菌)、Neisseria(奈瑟菌屬)、Borrelia(疏螺旋體屬)(如OspA或OspB或其衍生物)或Chlamydia(衣原體屬)或Bordetella(博氏桿菌屬)如P.69，PT和FHA，或者得自于寄生物如瘧原蟲或Toxoplasma(弓漿蟲屬)。
制劑還可以包含一種抗腫瘤抗原并用于免疫療法治療癌癥。
制劑也可以用于與皰疹性輕顆粒一起使用，這些顆粒在國際專利申請PCT/GB92/00824和PCT/GB92/00179中有述。
乙型肝炎表面抗原衍生物在本領(lǐng)域中是公知的，它們包括在EP-A-414374;EP-A-0304578和EP198474中所述的PreS1，PreS2S抗原。
本發(fā)明的另一方面是提供了一種如下所述用于藥物的疫苗。
QS21與3D-MPL的比值通常在1∶10～10∶1的數(shù)量級，優(yōu)選1∶5～5∶1，更經(jīng)常的是1∶1。為了最適宜的協(xié)同作用優(yōu)選的范圍是2.5∶1～1∶13DMPL∶QS21。對于人體給藥，典型地在疫苗中每一個(gè)劑量中含QS21和3DMPL1μg～100μg，優(yōu)選10μg-50μg。通常疫苗無需任何特殊的載體，它們能在水或其它藥物可接受的緩沖液中配制。在有些情況下，本發(fā)明的疫苗最好還包含有明礬，或者是存在于水包油乳液中或其它適宜的載體中，如脂質(zhì)體、微球體或包囊的抗原顆粒。
疫苗制劑通常描述在下述文獻(xiàn)中NewTrendsandDevelopmentsinVaccines，由Voller等編輯，UniversityParkPress，Baltimore，Maryland，U.S.A.1978。在脂質(zhì)體內(nèi)的包囊也有述，如Fullerton的US4，235，877。蛋白與大分子的結(jié)合也有述，如Likhite的US4，372，945和Armor等的US4，474，757。
在每一疫苗劑量中蛋白的量應(yīng)使其能誘導(dǎo)免疫保護(hù)應(yīng)答但不會在典型的疫苗中造成顯著且有害的副作用。這樣的用量根據(jù)具體所采用的免疫原和它是如何存在的而改變。一般說來，最好每一劑量包含1-1000μg的蛋白，優(yōu)選2-100μg，最優(yōu)選4-40μg。對于特定的疫苗來說，其最適宜的用量可通過標(biāo)準(zhǔn)研究方法進(jìn)行確定，該方法包括對主體觀察其適宜的免疫應(yīng)答。在開始接種后，主體可以接受一次或幾次適當(dāng)間隔的加強(qiáng)免疫接種。
本發(fā)明的制劑可用于預(yù)防和治療。
相應(yīng)地，本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供一種治療方法，包括對患者施用有效量的本發(fā)明的疫苗。
實(shí)施例1.0對誘導(dǎo)干擾素γ分泌的3DMPL和QS21之間的協(xié)同作用為了測定3D MPL和QS21為佐劑的含rgD2t的制劑誘導(dǎo)效應(yīng)物細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的能力，對幾組Balb/c小鼠進(jìn)行接種，按下述過程對其排液淋巴結(jié)細(xì)胞的IFN-γ分泌作用進(jìn)行測試。
1.1 rgD2t制劑該實(shí)驗(yàn)對三種佐劑的制劑進(jìn)行比較ⅰ)在3D-MPL中的rgD2tⅱ)在QS21中的rgD2tⅲ)在3D-MPL/QS21中rgD2t這些制劑制備過程如下由CHO細(xì)胞產(chǎn)生rgD2t且相應(yīng)于成熟的HSV-2gD的1-283氨基酸，按照Berman(Supra)的方法和EP0139417產(chǎn)生。
＊rgD2t/3D-MPL在攪拌，室溫下將5μg rgD2l/劑量培養(yǎng)1小時(shí)，然后與3D-MPL懸浮液(25μg/劑量)混合。用氯化鈉溶液(5M，PH6.5±0.5)和注射用水調(diào)節(jié)體積至70μl/劑量得到最后的濃度為0.15M NaCl。PH保持在6.5±0.5。
＊rgD2l/QS21
在攪拌，室溫下將5μg rgD2l/劑量培養(yǎng)1小時(shí)。用氯化鈉溶液(5M，PH6.5±0.5)和注射用水調(diào)節(jié)其體積至70μl。然后加入QS21(10μg/劑量)。保持PH值為6.5±0.5，氯化鈉的最后濃度為0.15M。
＊rgD2l/3D-MPL/QS21在攪拌和室溫下使5μg rgD2t培養(yǎng)1小時(shí)。然后加入3D-MPL(25μg/劑量)的水懸浮液。通過添加QS21(10μg/劑量)的水溶液使最后的體積為70μl，并保持PH值為6.5±0.5，氯化鈉濃度為0.15M。
1.2免疫接種用35μl/爪墊的制劑注射于小鼠的后爪墊中。因此，這樣每個(gè)小鼠接受了70μl。第零天和第14天進(jìn)行免疫接種，在第21天將小鼠殺死。
1.3干擾素γ測定在體外使用10、1、0.1、1、0μg/ml的rgD2l來刺激經(jīng)免疫的小鼠的腘淋巴結(jié)細(xì)胞。在園底96孔微量滴定(microtiter)極中作用2×105應(yīng)答細(xì)胞和2×105輻照(3000rad)過的同源的首次用來用實(shí)驗(yàn)的脾細(xì)胞備好一式三份的培養(yǎng)物(200μl體積)。培養(yǎng)介質(zhì)是含10%胎兒腓血清的RPMI1640。采集并匯集每一種復(fù)試驗(yàn)用的100μl培養(yǎng)介質(zhì)的等分試樣以作IFN-γ測定。培養(yǎng)物在72小時(shí)時(shí)分析測定。對于所有測定，均包括使用5μg/ml的ConA(Boehringer Mannheim)對照組。各組均呈陽性。
使用HollandBiotechnology(Gibco分部)生產(chǎn)的商用ELISA測定儀測定IFN-γ的分泌。對由一式三份的試樣容器得到的100μl匯集的上層清液進(jìn)行測試。
對所有三種制劑組(見表)觀察其以50Pg/μl為實(shí)驗(yàn)基準(zhǔn)IFN-γ的分泌作用。此外，測得QS21和3D-MPL間的協(xié)同效應(yīng)。雖然每種佐劑自身誘導(dǎo)細(xì)胞能分泌IFN-γ對rgD2t作出應(yīng)答，但它們的組合誘導(dǎo)的應(yīng)答則比單獨(dú)每一個(gè)應(yīng)答之和的兩倍還多。
1.4結(jié)果
IFN-γ以pg/ml表示。
該表清楚地表明了組合的疫苗以協(xié)同方式誘導(dǎo)IFN-γ的分泌。
2.03D-MPL和QS21對CTLs誘導(dǎo)的協(xié)同作用為了測試在基于3DMPL和QS21的佐劑制劑中的RTS，S顆粒誘導(dǎo)CTLs的能力，對幾組B10、BR小鼠進(jìn)行免疫接種，并在體外刺激它們的脾臟細(xì)胞，并對以CS蛋白表示的L細(xì)胞的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測試。
2.1RTS，S顆粒的制劑以三種不同的組成來配制RTS，S顆粒1.含QS21(10μg)和3D-MPL(25μg)的RTS，S顆粒(10μg);
2.含QS21(10μg)的RTS，S顆粒(10μg);
3.含3DK-MPL(25μg)的RTS，S顆粒(10μg);
制劑按下述過程制備RTS，S/3DMPL在室溫?cái)嚢柘屡囵B(yǎng)10μg的RTS，S顆粒/劑量1小時(shí)，然后使其與3DMPL水懸浮液(25μg/劑量)混合。用注射用水和氯化鈉溶液(5N，PH6.5±0.5)調(diào)節(jié)體積至70μl/劑量，NaCl的最后濃度為0.15M(PH保持在6.5±0.5)。
RTS，S/QS21在室溫?cái)嚢柘屡囵B(yǎng)10μg的RTS，S顆粒/劑量1小時(shí)。用注射用水和氯化鈉溶液(5N，PH6.5±0.5)調(diào)節(jié)體積，并用QS21的水溶液(10μg/劑量)使最后的體積為70μl/劑量。PH保持在6.5±0.5，氯化鈉的最后濃度為0.15M。
RTS，S/3DMPL/QS21在室溫?cái)嚢柘屡囵B(yǎng)10μg的RTS，S顆粒/劑量1小時(shí)，然后使其與3DMPL(水懸浮液(25μg/劑量)混合。然后用注射用水和氯化鈉溶液(5NPH6.5±0.5)調(diào)節(jié)其體積。最好的體積通過添加QS21的水溶液(10μg/劑量)來完成。PH值保持6.5±0.5，氯化鈉的最后濃度為0.15M。
2.2用RTS，S顆粒對小鼠進(jìn)行免疫接種從IFFA CREDO(法國)購買4-6周的B10.BR(H-2K)種雌性小鼠。3個(gè)為一組對其進(jìn)行免疫接種，即在每個(gè)后肢內(nèi)爪墊內(nèi)注射35μl的抗原制劑。兩周后，用第二份相同劑量的抗原注射使小鼠加強(qiáng)接種。
2.3對于抗CSCTL進(jìn)行體外刺激被加強(qiáng)后兩周，采集脾臟細(xì)胞，并用經(jīng)P.falciparum環(huán)子孢子蛋白基因(7G8克隆)轉(zhuǎn)染的同源的成纖維細(xì)胞進(jìn)行體外刺激。這些CS轉(zhuǎn)染子細(xì)胞在Kumar，S.等(1988)的文章中有述，Nature334∶258-260。
在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的條件下，以補(bǔ)充有10%的熱失活的胎兒腓血清的常用的添加劑的RPMI1640介質(zhì)中確立培養(yǎng)物。
在105CS轉(zhuǎn)染子/ml存在下，以106細(xì)胞/ml的濃度對應(yīng)答細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。為了防止CS轉(zhuǎn)染子細(xì)胞的再育，用2×104rad的劑量對其進(jìn)行輻照。在第3天和第6天通過替換1/2的培養(yǎng)介質(zhì)培育培養(yǎng)物，在第七天測試其細(xì)胞溶解活性。
2.4對于抗CSCTL的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)對應(yīng)答細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行采集、洗滌，并在200μl介質(zhì)中在V型底96孔板中使其與常數(shù)為2000的靶細(xì)胞以100∶1～0.3∶1的比例進(jìn)行混合。
靶細(xì)胞是同源的成纖維細(xì)胞，它已用51Cr進(jìn)行標(biāo)記。
使用兩種不同類型的靶細(xì)胞1.L細(xì)胞2.CS轉(zhuǎn)染的L細(xì)胞它們在下述文獻(xiàn)中有述Kumar，S等(1988)，Nature334∶258-260。
被化驗(yàn)物在37℃下進(jìn)行培養(yǎng)6小時(shí)。測定經(jīng)靶細(xì)胞的溶胞而釋放進(jìn)入上層清液的放射性量。
以%特異性溶胞來表示細(xì)胞溶解活性結(jié)果
用QS21和3D-MPL作佐劑的RTS，S(制劑＃1)對B10.BR小鼠的免疫接種在脾中誘導(dǎo)了對于RTS，S的環(huán)子孢子組分特異的高含量的CTL。用QS21作佐劑的RTS，S顆粒(制劑＃2)的免疫接種也能誘導(dǎo)脾中的CTL，但僅僅是制劑＃1所給出的含量的約1/30。用3D-MPL作佐劑的RTS，S(制劑＃3)則不能誘導(dǎo)CTL。
由于用于本實(shí)驗(yàn)的靶細(xì)胞并不表示MHCⅡ級分子，效應(yīng)物細(xì)胞可被假定為CD8+，Ⅰ級限制的CTL。
3.其它制劑乙型肝炎表面抗原，明礬3D-MPL和QS21。
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的制備已有許多論述，如可參見Harford等，DevelopBiolStandard54P125(1983)，Gregg等，Biotechnology5p479(1987)，EP-A-0226846和EP-A-299108，它們均被在此引用作為參考。
3D-MPL由RibiImmunochem得到，QS21由CambridgeBiotech得到，氫氧化鋁由Superfos(Alhydrogel)得到。
制備多種不同的制劑用以研究對小鼠的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性及對獼猴進(jìn)行研究。
3.1在磷酸鹽緩沖溶液(PH6.8)中制備制劑1，每60μl劑量的制劑包含
20μgHBsAg30μg Al(OH)330μg3D-MPL10μgQS2110mM PO43-0.15MNaCl制劑按下述過程制備，在室溫及溫和的振蕩下使20μg HBsAg劑量與Al(OH)3培養(yǎng)1小時(shí)。隨后加入3D-MPL和水懸浮液，通過添加QS21、磷酸鹽緩沖液和氯化鈉完成制劑制備，并在室溫下培養(yǎng)1小時(shí)。最后的制劑的PH值在6.5-7.0之間，并將其用于小鼠的爪墊研究。
3.2在磷酸鹽緩沖溶液(PH6.8)中制備制劑2，每200μl劑量的制劑包含1μgHBsAg100μg Al(OH)350μg3D-MPL20μgQS2110mM PO43-0.15MNaCl制劑按下述過程制備。在室溫及溫和的振蕩下使用HBsAg與Al(OH)3一起培養(yǎng)1小時(shí)。通過添加Al(OH)3、3D-MPL的水懸浮液及QS21，用磷酸鹽緩沖液和氯化鈉溶液完成制劑的制備，并再培養(yǎng)30分鐘。制劑的PH值保持在6.5-7.0之間，它用于小鼠的體液免疫性研究。
3.3用類似的方式在磷酸鹽緩沖液(PH6.5-7.0)中制備制劑3，每1ml劑量中包含10μgHBsAg500μg Al(OH)350μg3D-MPL10μgQS21制劑被用于猴的研究。
4結(jié)論兩種佐劑QS21和3D-MPL與重組體顆粒性抗原RTS，S的組合能有效地誘導(dǎo)脾臟中CS蛋白特異的CTL。QS21自己增強(qiáng)了CTL的誘導(dǎo)，而3D-MPL則不能誘導(dǎo)。這種組合能以協(xié)同的方式起作用，由于其作用大于每種佐劑單獨(dú)效用之和。兩種佐劑對CTL誘導(dǎo)的協(xié)同性是一個(gè)令人驚奇的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，該結(jié)果表明了QS21和3D-MPL對T細(xì)胞的誘導(dǎo)具有協(xié)同作用，所述T細(xì)胞能夠分泌IFN-γ以應(yīng)答對用可溶性重組體蛋白gD2t的刺激。該發(fā)現(xiàn)對于使用重組體分子用于誘導(dǎo)CTL介導(dǎo)的免疫的疫苗具有重要意義。這是因?yàn)閮煞N佐劑QS21和3D-MPL的組合能夠克服基于重組體蛋白的疫苗的嚴(yán)重的局限性，并較之現(xiàn)有的疫苗能在更寬范圍內(nèi)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。
小鼠細(xì)胞介導(dǎo)的免疫原性數(shù)據(jù)表明，基于QS21的rgD2t制劑誘導(dǎo)了顯著的協(xié)同性THI型T細(xì)胞應(yīng)答(IFN-γ分泌)。
這種THI型T細(xì)胞已表明與誘導(dǎo)小鼠延遲型過敏性應(yīng)答有關(guān)。我們自己的預(yù)防HSV疾病的數(shù)據(jù)表明，中和抗體值和抗原特異性DTH應(yīng)答的伴隨誘導(dǎo)對于抵抗單純皰疹疾病提供最好的防護(hù)。
總之，這些數(shù)據(jù)向我們表明，rgD2t的QS21制劑可以有效地誘導(dǎo)一種保護(hù)性應(yīng)答以抵抗HSV疾病。所提供的數(shù)據(jù)還表明了3D單磷酰類酯A(3D Monophosphoryl Lipid A)和QS21對于誘導(dǎo)IFN-γ分泌抗原特異性T細(xì)胞具有意外的協(xié)同作用。這種協(xié)同性可以表現(xiàn)為增強(qiáng)誘導(dǎo)保護(hù)性應(yīng)答以抵抗HSV疾病的能力，而且這些制劑的確可有效地防護(hù)抵抗天竺鼠的疾病。
權(quán)利要求
1.一種疫苗組合物，它包含一種抗原和/或抗原組合物、QS21的3De-O-?；膯瘟柞ｎ愔珹(3D-MPL)。
2.一種按權(quán)利要求1的疫苗，其中QS21與3D-MPL的比值為1∶10-10∶1。
3.一種權(quán)利要求1或2所要求保護(hù)的疫苗組合物，能夠在哺乳動物中對抗原或抗原組合物引起細(xì)胞溶解的T細(xì)胞應(yīng)答。
4.一種按權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所要求保護(hù)的疫苗組合物，能夠刺激干擾素γ生成。
5.一種按權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所要求保護(hù)的疫苗組合物，其中QS21與3D-MPL的比值為1∶1～1∶2.5。
6.一種按以上權(quán)利要求的疫苗組合物，包含一種抗原或抗原組合物，它們得自于下述中的任一種人體免疫缺乏病毒、貓免疫缺乏病毒、單純皰疹病毒1型、單純皰疹病毒2型、人體細(xì)胞肥大病毒、肝炎A、B、C或E、呼吸全胞體病毒、人體乳頭狀瘤病毒、流感病毒、沙門氏菌、奈瑟菌屬、疏螺旋體屬、衣原體屬、博代桿菌屬、瘧原蟲屬或弓漿蟲屬。
7.一種按權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所要求保護(hù)的疫苗，其中抗原為一種腫瘤抗原。
8.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所限定的組合物的用途，用于制造一種用于預(yù)防治療病毒、細(xì)菌或寄生蟲感染的疫苗。
9.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所限定的組合物的用途，用于制造一種用于免疫療法治療病毒、細(xì)菌、寄生蟲感染或癌癥的疫苗。
10.一種治療患有或可能被一種病原感染的哺乳動物的方法，該方法包括施用安全且有效量的權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的組合物。
11.一種治療患有癌癥的哺乳動物的方法，該方法包括施用安全且有效量的權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的組合物。
12.一種制備權(quán)利要求1-5的疫苗組合物的方法，該方法包括使QS21和3D-MPL與一種抗原或抗原組合物混合。
全文摘要
本發(fā)明提供了包含3De-O-?；膯瘟柞ｎ愔珹和QS21的疫苗組合物。該疫苗組合物是CTL和γIFN應(yīng)答的有效誘導(dǎo)物。
文檔編號C12N5/00GK1086142SQ93107990
公開日1994年5月4日 申請日期1993年6月24日 優(yōu)先權(quán)日1992年6月25日
發(fā)明者J·P·普里伊斯, N·M·-J·C·加康-約翰遜, M·施勞伊, P·帕拉 申請人:史密絲克萊恩比徹姆生物有限公司