專利名稱：一種蘇云金桿菌(Bt)液體深層發(fā)酵工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種Bt菌液體深層發(fā)酵工藝，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。Bt菌屬于一種微生物，國(guó)內(nèi)外已廣泛用于農(nóng)作物及林、果、蔬菜和倉(cāng)庫(kù)害蟲(chóng)的防治。提高發(fā)酵水平，降低生產(chǎn)成本是進(jìn)一步推廣應(yīng)用的關(guān)鍵。目前發(fā)達(dá)國(guó)家采用的工藝，發(fā)酵液效價(jià)可達(dá)到3000IU/mg (見(jiàn)國(guó)外生防P185)。我國(guó)八·五攻關(guān)取得重大進(jìn)展，發(fā)酵水平已能達(dá)到2000-3000IU/mg(見(jiàn)國(guó)家八·五攻關(guān)總結(jié))，但波動(dòng)范圍過(guò)大，毒力不穩(wěn)定。
本發(fā)明的目的是要提供一種Bt液體深層發(fā)酵工藝，采用本工藝，可顯著提高發(fā)酵液毒力效價(jià)，選用優(yōu)良菌種發(fā)酵，發(fā)酵毒力效價(jià)可達(dá)到4500-5000IU(PX)/mg；發(fā)酵液毒力效價(jià)波動(dòng)范圍控制在20％以內(nèi)；縮短發(fā)酵周期，有效地抗噬菌體干擾。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的。用飼料酵母、豆餅粉、玉米粉、魚(yú)粉、碳酸鈣、氯化鉀、豆油或其它消泡劑配制發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)高溫蒸汽消毒后降溫至35℃接種，變溫變風(fēng)量攪拌通氣發(fā)酵28-35小時(shí)，80％芽孢與伴孢晶體分離，90％以上芽孢成熟為發(fā)酵終點(diǎn)。發(fā)酵液經(jīng)毒力檢測(cè)后按行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，調(diào)配加工成粉劑或液劑。
下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
1、配料魚(yú)粉100-150kg，酵母粉60-70kg，玉米粉280-350kg，豆餅粉50-80kg，加水7600kg，調(diào)PH至7.5，加入0.3％碳酸鈣，0.1％氯化鉀，0.15％豆油，打入12立方米發(fā)酵罐，夾層或列管通蒸汽預(yù)熱至80℃后，罐內(nèi)直接通入蒸汽，維持0.15mPa攪拌消毒40分鐘。
2、冷卻至35℃接種，通氣攪拌發(fā)酵。發(fā)酵采用變溫、變風(fēng)量發(fā)酵，溫度變化過(guò)程是0-5小時(shí) 34±1℃5-8小時(shí) 31±1℃8-13小時(shí)28±1℃13-15小時(shí) 32±1℃15小時(shí)后34±1℃根據(jù)各項(xiàng)參數(shù)確定最大通氣量為245立方米/小時(shí)，根據(jù)最大通氣量確定風(fēng)量變化過(guò)程是0-2小時(shí)80立方米/小時(shí)2-5小時(shí)120立方米/小時(shí)5-7小時(shí)150立方米/小時(shí)7-9小時(shí)220立方米/小時(shí)9小時(shí)以后 245立方米/小時(shí)發(fā)酵28-29小時(shí)取樣鏡檢，80％芽孢與伴孢晶體分離，90％芽孢分化成熟，停止發(fā)酵，泵入后加工處理車間。
3、加入3％二甲苯，0.3％農(nóng)孔-600，充分?jǐn)嚢韬笕由鷾y(cè)，經(jīng)生測(cè)毒力效價(jià)為4800IU(PX)/mg，加入2120kg自來(lái)水，充分?jǐn)嚢韬蠡靹颍渲瞥?000IU(PX)/mg藥液，再進(jìn)行其它后處理，裝瓶，即得毒力效價(jià)為4000IU(PX)/mg乳劑成品。
權(quán)利要求
1.一種蘇云金桿菌(Bt)液體深層發(fā)酵工藝，包括配料、消毒、冷卻、接種，發(fā)酵及風(fēng)量和溫度控制，生測(cè)步驟。其特征在于采用飼料酵母、豆餅粉、玉米粉、魚(yú)粉、碳酸鈣、氯化鉀作為基本原料按比例配制培養(yǎng)基；在發(fā)酵過(guò)程中采用變風(fēng)量、變溫條件。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Bt液體深層發(fā)酵工藝，其特征是用飼料酵母、豆餅粉、玉米粉、魚(yú)粉、碳酸鈣、氯化鉀按以下要求配制發(fā)酵培養(yǎng)基。(1)總固形物含量為4-9.5％(2)飼料酵母用量∶豆餅粉用量∶玉米粉用量∶魚(yú)粉用量＝1.0∶1.0-1.8∶4.0-6.0∶3.0-5.0(3)培養(yǎng)基中碳酸鈣含量為0.2-0.3％，氯化鉀含量為0.05-0.1％(4)碳氮比為3.5-6.5∶1.0
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Bt液體深層發(fā)酵工藝，其特征是采用變溫發(fā)酵，溫度與發(fā)酵時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系是0-4±1小時(shí) 34±1℃4±1-8±2小時(shí)31±1℃8±2-13±2小時(shí) 28±1℃13±2小時(shí)-15±1小時(shí) 32±1℃15±1小時(shí)34±1℃
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述Bt液體深層發(fā)酵工藝，其特征是采用變風(fēng)量發(fā)酵。發(fā)酵前要根據(jù)各項(xiàng)參數(shù)確定最大通氣量Vgz，最大通氣量Vgz的計(jì)算公式是0.00531Vgz＝πR2H＋πR2L－Vm＋VF＋0.667β(1＋P)[VT－R2π(H＋L)]式中，R發(fā)酵罐半徑(米)Vgz最大通氣量(立方米/小時(shí))Vm.培養(yǎng)基體積(立方米)VF下封頭體積(立方米)P發(fā)酵罐內(nèi)壓(公斤/平方厘米)VT消沫器以下發(fā)酵罐體積，如無(wú)消沫器，則為罐全體積(立方米)H上檔攪拌器園盤距罐筒體下邊緣垂直距離(米)β泡沫密度系數(shù)(噸/立方米)，與消沫劑性質(zhì)及用量和培養(yǎng)基性質(zhì)相關(guān)。風(fēng)量與發(fā)酵時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系是0-2±1小時(shí) 1/3Vgz2±1-4±1小時(shí)1/2Vgz4±1-7±1小時(shí)3/5Vgz7±1-9±1小時(shí)8/9Vgz9±1小時(shí)后 1Vgz
全文摘要
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。一種蘇云金桿菌(Bt)液體深層發(fā)酵工藝。該工藝采用飼料酵母、豆餅粉、玉米粉、魚(yú)粉、CaCO、KCl制備發(fā)酵培養(yǎng)基，變溫變風(fēng)量通氣攪拌發(fā)酵，發(fā)酵液毒力可達(dá)到4500-5000IU(PX)/mg，采用本工藝發(fā)酵，降壓生產(chǎn)成本，穩(wěn)定產(chǎn)品質(zhì)量，縮小發(fā)酵液毒力效價(jià)波動(dòng)范圍，縮短發(fā)酵時(shí)間，有效排除噬菌體干擾。
文檔編號(hào)C12N1/20GK1133884SQ9610078
公開(kāi)日1996年10月23日 申請(qǐng)日期1996年2月8日 優(yōu)先權(quán)日1996年2月8日
發(fā)明者王成球, 朱珠, 蘭家谷, 呂玉平 申請(qǐng)人:王成球