專利名稱：酶處理提取中藥材中皂甙成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取中藥材中皂甙成份的方法，特別是采用酶處理提取中藥材中皂甙成份的方法。
人參是舉世公認(rèn)的名貴藥材，其主要有效成份為人參皂甙，已知道的人參皂甙種類有30余種。人們常將人參的有效成份～人參皂甙浸出提取后配制成人參酒、人參精、人參茶(液狀、固狀)，也有與其他藥物混合的保健茶、酒類等保健飲料。
現(xiàn)有技術(shù)對于人參皂甙的提取，都是采用浸出法，即用水、醇或其它有機溶劑對破碎后的人參進行浸泡，從而浸出、提取人參皂甙成份。如《中國藥學(xué)雜志》(27(5)，291～293，1992)中公開的水、乙醇浸出法，是在人參粉中加入40％乙醇浸出，過濾；渣中再加入沸水浸出、過濾。渣可以重復(fù)提取，濾液合并，濃縮，加乙醇再濃縮、乙醚脫脂，正丁醇萃取，減壓蒸去正丁醇可得皂甙。又如日本特許公報(91109、1978)公布的Shibata法，也是用醇對人參浸出、提取皂甙，乙醚脫脂、正丁醇萃取，減壓蒸去正丁醇可得皂甙。
上述的浸出法存在著一個最大缺點無論采用什么溶劑及什么條件進行浸出，20～60％以上皂甙有效成份將仍殘留在被浸出后的人參渣中。換言之，現(xiàn)有技術(shù)對皂甙的提取率太低，浪費了人參一類名貴藥材的資源。
本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，提供一種對以皂甙為主要有效成份的中藥材進行酶處理提取其皂甙成份的方法，旨在大幅度提高提取率。
現(xiàn)有技術(shù)的浸出法之所以對皂甙提取率低，這是因為人參中含有很大一部分皂甙的糖部位與其它多糖或生物大分子以糖苷健或酯健相結(jié)合，皂甙部分牢固地吸附于人參纖維、果膠、淀粉等多糖和其它生物大分子上，因而用純物理的水、醇或有機溶劑浸泡是提取不出這部分皂甙成份的。黨參、桔梗、麥冬、沙參、黃苓等幾百種以皂甙為主要有效成份的中藥材，都與上述人參情況相似。
本發(fā)明的基本思想是針對上述原理，利用不破壞皂甙的內(nèi)切糖苷酶類及其它不含外切糖苷酶的酶類處理人參等中藥材一是切割皂甙糖與其它多糖所結(jié)合的化學(xué)健，如糖苷健等，使皂甙脫落；二是水解吸附皂甙的生物大分子使之脫落。然后再行浸出、從而大幅度提高皂甙提取率。
本發(fā)明實現(xiàn)方案為酶處理提取中藥材中皂甙成份的方法，其特征是(1)、將被提取物加水浸泡，(2)、取內(nèi)切糖苷酶類或其它不含外切糖苷酶成份的酶類與被提取物水浸液相混合、反應(yīng)，(3)、以水、乙醇或甲醇作浸出劑，采用浸出法工藝步驟對經(jīng)過上述酶處理步驟的被提取物進行浸出、提取皂甙成份。
在以上述方案實施本發(fā)明時，可以將被提取物及其浸泡水一同加熱后，冷卻至將要使用酶種合適的溫度，再加入相應(yīng)酶。所選用的酶種可為下列其中一種或幾種組合(1)、淀粉酶類α-淀粉酶、β-淀粉酶、淀粉糖化酶，(2)纖維素內(nèi)切酶，(3)、果膠酶類，(4)、曲霉屬、根霉屬、毛霉屬、紅曲等霉菌屬及擔(dān)子菌類的液體曲或者固體曲浸出液酶，天然曲的浸出液的混合酶，植物種子芽浸出的酶。
另外，在實施本發(fā)明時，所選用的酶中若含水解皂甙的外切糖苷酶類成份，用加熱或加抑制劑方法除掉其酶活性。
本發(fā)明的優(yōu)點是1、本發(fā)明不但適用于人參屬(Panax genus)中所有種類人參的全部植物體，也適用于所有以皂甙為主要有效成份的中藥材(如黨參、桔梗、麥冬、沙參、黃苓、過崗龍、絞股蘭)植物(如大豆等)。
2、實施本發(fā)明，可使皂甙提取率比現(xiàn)有技術(shù)浸出法提高20～150％以上。
3、采用本發(fā)明對人參及其它中藥材進行酶處理，不僅提高皂甙等有效成份的提取，也同時提高了對其它可溶性物質(zhì)(如多糖、多肽)的提取率。
4、采用本發(fā)明所提取到的皂甙，用硅膠G薄層層析法或高壓液相色譜分析法測定，未發(fā)現(xiàn)其組成的明顯變化(可參看附圖)，說明酶處理并未破壞其皂甙結(jié)構(gòu)。


圖1為現(xiàn)有技術(shù)用甲醇浸出法提取皂甙的高壓液相色譜圖。
圖2為現(xiàn)有技術(shù)用乙醇浸出法提取皂甙的高壓液相色譜圖。
圖3為本發(fā)明以糖苷酶處理～乙醇浸出法提取皂甙的高壓液相色譜圖。
圖4為本發(fā)明以霉菌曲浸出液酶處理～乙醇浸出法提取皂甙的高壓液相色譜圖。
以上各圖儀器，Shimadzu；色譜柱，φ0.9×29cm碳水化合物柱；檢測器，RI；流動相，乙氰∶水＝80∶20；流速，2ml/分鐘；注祥量，20μl。
下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明做進一步敘述實施例140目的人參根粉100克中加入200～1000ml水或0.01M，PH5.5的醋酸緩沖液(加水比可以是1.5～200倍)，100℃處理20分鐘，冷卻至60℃，加纖維素內(nèi)切酶，在40～60℃處理兩小時，加入95％乙醇350～850ml，離心過濾得濾液；渣中再加入40％乙醇500ml，在80℃浸出2小時，離心過濾，濾液合并(浸出可以幾次重復(fù))，濃縮至1/10左右體積，殘留液里加入同體積乙醚脫脂(乙醚脫脂重復(fù)3～6次)、取水層，50ml水飽和正丁醇萃取皂甙十次，合并萃取液，減壓蒸去正丁醇可得7～11克以上米黃色的人參皂甙。
從未經(jīng)酶處理的100克相同人參粉中，用上述的相同方法只可得4～6克相同純度的皂甙。其人參渣經(jīng)酶處理可得1～3克皂甙。
從上述方法得到人參皂甙，以Re為標(biāo)準(zhǔn)、香草醛顯色比色法(鄒春杰、徐景達中草藥，13(8)，19～23，1982)測定其含量，誤差不超過1％；再用硅膠G薄層層析法82)測定其含量，誤差不超過1％；再用硅膠G薄層層析法(鄒春杰、徐景達中草藥，13(8)，19～23，1982)或者高壓液相色譜分析法(Nagasawa T.et alChem.Pharm.Bull.，28，2059-2064，1980.)測定其各皂甙，參看圖3與圖1、2相比較，未發(fā)現(xiàn)其組成的明顯變化，說明未破壞其皂甙結(jié)構(gòu)，方法是很成功的。
實施例240目的100克人參粉中加入200～2000ml水，100℃處理20分鐘，冷卻至50℃，再加入5～30萬單位淀粉酶或者1～10萬單位淀粉糖化酶，攪拌反應(yīng)2小時；加入95％乙醇至40％(V/V)，80℃保溫2小時，離心收集浸出液，其渣再用40％乙醇浸出幾次，合并浸出液濃縮至1/10體積，每次用80ml乙醚脫脂5～7次，收集水相用100ml水飽和正丁醇萃取7次，收集正丁醇相減壓蒸干，殘渣再溶于80ml甲醇、過濾，將甲醇液滴到1000ml丙酮中，收集沉淀、烘干即得米黃色的6～9克人參皂甙粉。
未經(jīng)酶處理、按上述方法只能得3～4克人參皂甙粉。其人參渣再經(jīng)按上述方法酶處理，提取皂甙可得1～3克左右。
實施例3
100克40目的人參粉加水400～2000ml，100℃處理20分鐘，冷卻至45～55℃，再加入符合食品標(biāo)準(zhǔn)的霉菌(如米曲霉、根霉、…)培養(yǎng)液或者霉菌固體培養(yǎng)浸出液酶(不含β-葡萄糖苷酶、α-木糖苷酶、α-阿拉伯糖苷酶和α-鼠李糖苷酶和人參皂甙源的氧化還原酶類活性)處理1.5～6小時，再用上述的乙醇或甲醇法提取皂甙。比未經(jīng)酶液處理的皂甙提取率提高了30～150％。
從上述方法得到人參皂甙，以Re為標(biāo)準(zhǔn)、香草醛顯色比色法(鄒春杰、徐景達中草藥，13(8)，19～23，1982)測定其含量，誤差不超過1％，再用硅膠G薄層層板法(鄒春杰、徐景達中草藥，13(8)，19～23，1982)或者高壓液相色譜法(Nagasawa T.et alChem.Pharm.Bull.，28，2059-2064，1980)測定其皂甙，參看圖4與圖1、2比較，未發(fā)現(xiàn)其組成的明顯變化，說明未破壞其皂甙結(jié)構(gòu)，方法是很成功的。
實施例4100克人參粉按上述方法處理人參或其他中藥，不僅大大提高皂甙的提取率，使整個人參的40～60％以上可變成可溶性物質(zhì)，比未酶處理提高100～250％。
實施例5以桔梗代替人參，按實施例1的方法提取皂甙，酶處理的桔梗皂甙提取量是相當(dāng)于未用酶處理桔梗皂甙提取量的120～200％；以未用酶處理桔梗提取過皂甙的渣為原料，再經(jīng)酶處理、提取皂甙，再提取量可達原提取量的20～100％。以黨參、麥冬、沙參、黃苓、過崗龍、絞股藍、大豆等按上述方法提取皂甙，經(jīng)酶處理的比未處理的皂甙提取率提高了30～100％。
權(quán)利要求
1.酶處理提取中藥材中皂甙成份的方法，其特征是(1)、將被提取物加水浸泡，(2)、取內(nèi)切糖苷酶類或其它不含外切糖苷酶成份的酶類與被提取物水浸液相混合、反應(yīng)，(3)、以水、乙醇或甲醇作浸出劑，采用浸出法工藝步驟對經(jīng)過上述酶處理步驟的被提取物進行浸出、提取皂甙成份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取皂甙方法，其特征是將被提取物及其浸泡水一同加熱后，冷卻至將要使用酶種合適的溫度，再加入相應(yīng)酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取皂甙方法，其特征是所選用的酶種可為下列其中一種或幾種組合(1)、淀粉酶類α-淀粉酶、β-淀粉酶、淀粉糖化酶，(2)纖維素內(nèi)切酶，(3)、果膠酶類，(4)、曲霉屬、根霉屬、毛霉屬、紅曲等霉菌屬及擔(dān)子菌類的液體曲或者固體曲浸出液酶，天然曲的浸出液的混合酶，植物種子芽浸出的酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征是所選用的酶中若含水解皂甙的外切糖苷酶類成份，用加熱或加抑制劑方法除掉其酶活性。
全文摘要
本發(fā)明系一種酶處理提取中藥材中皂甙成分的方法，其特征是(1)將被提取物加水浸泡，(2)取內(nèi)切糖苷酶類或其它不含外切糖苷酶成分的酶類與被提取物水浸液相混合、反應(yīng)，(3)以水、乙醇或甲醇作浸出劑，采用浸出法工藝步驟對經(jīng)過上述酶處理步驟的被提取物進行浸出、提取皂甙成分。其優(yōu)點是可將皂甙提取率提高20～150％以上、而且皂甙結(jié)構(gòu)不被破壞，同時還提高了其它可溶性物質(zhì)的提取率。
文檔編號C12P19/44GK1144847SQ9611515
公開日1997年3月12日 申請日期1996年3月12日 優(yōu)先權(quán)日1996年3月12日
發(fā)明者金鳳燮, 權(quán)春善, 魚紅閃, 張春枝 申請人:金鳳燮, 權(quán)春善, 魚紅閃, 張春枝