專利名稱：檢測(cè)非嗜鏈烷烴微生物的抗菌劑敏感性的方法和相關(guān)裝置的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)非嗜鏈烷烴微生物的抗菌劑敏感性的方法和相關(guān)裝置。
治療感染經(jīng)常包括醫(yī)務(wù)人員針對(duì)涉及的微生物的特性、正確的抗菌劑以及其有效治療存在于被感染組織中的微生物所需要的量所進(jìn)行的科學(xué)推測(cè)。通常，需要治療多種微生物的混合菌叢。醫(yī)務(wù)人員對(duì)迅速確定為了確保有效地抑制存在于病人中的所有微生物的生長(zhǎng)必需哪些抗菌劑以及何種劑量尤為感興趣。
目前沒(méi)有一種有效、可行和經(jīng)濟(jì)的方法用于醫(yī)生迅速確定為了治療病人必需哪些抗菌劑以及何種劑量。醫(yī)生甚至不能獲得關(guān)于抗菌劑敏感性的信息，而該信息將對(duì)可能的抗菌劑作出一個(gè)較為精確的選擇，并且一旦選擇了適宜的抗菌劑，則便于選擇較為精確的治療劑量。如果能夠獲得這一信息，醫(yī)生可更加有效地治療感染，而且，由于一些抗菌劑價(jià)格昂貴，因此可以利用這些信息，以便可以僅僅使用所需量的抗菌劑來(lái)治療感染。最后，并且最重要的是，由于抗菌劑可具有不希望的副作用，這一信息可被用來(lái)尋找最有效的抗菌劑和它的劑量，這將限制不希望的副作用。
本文所采用的術(shù)語(yǔ)“非嗜鏈烷烴微生物”指任何依賴于非鏈烷烴碳源的微生物。該非嗜鏈烷烴微生物的實(shí)例包括，但不局限于下面結(jié)核分枝桿菌，副結(jié)核分枝桿菌；麻風(fēng)分枝桿菌；葡萄球菌屬；鏈球菌屬；大腸桿菌，李斯特氏菌屬；布魯氏菌屬；Humemophilus；密螺旋體屬；肺炎球菌屬；梭菌屬；隱球菌屬；球孢子菌屬；和組織胞漿菌屬。而且，如本文所采用術(shù)語(yǔ)“病人”指動(dòng)物界的成員，包括人類，它們的身體樣本用本發(fā)明的方法和裝置處理。
美國(guó)專利號(hào)5,153,119和5,316,918公開(kāi)了用于鑒定和檢測(cè)鳥(niǎo)細(xì)胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌(“MAI”)(一種嗜鏈烷烴微生物)的抗菌劑敏感性的方法和裝置。這些專利的發(fā)明人為Robert-A.Ollar，他是本文公開(kāi)的本發(fā)明的一個(gè)共同發(fā)明人。該方法涉及提供一種包含一種水溶液的容器并將樣品接種到溶液中。此后，將鏈烷烴覆蓋的載玻片放進(jìn)該容器中。接著觀察載玻片中的MAI生長(zhǎng)的存在與否。
盡管存在Dr.Ollar的專利，仍然需要一種檢測(cè)一種或多種非嗜鏈烷烴微生物的抗菌劑敏感性的方法，用這種方法使被用于抑制可能存在于病人中的一種或多種非嗜鏈烷烴微生物的生長(zhǎng)的抗菌劑的功效達(dá)到最大。
發(fā)明概述本發(fā)明滿足或超過(guò)了上述以及其它需要。用于檢測(cè)來(lái)自從病人獲得的樣本中的至少一種非嗜鏈烷烴微生物對(duì)不同的抗菌劑及其預(yù)定量的敏感性的方法包括提供至少一個(gè)包含水溶液的容器并用樣本接種該溶液。該方法進(jìn)一步包括將(i)用碳源覆蓋的載玻片和(ii)預(yù)定量的待檢測(cè)的抗菌劑放入容器中。通過(guò)觀察載玻片上非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)與否，可以檢測(cè)預(yù)定量的抗菌劑在抑制載玻片上的非嗜鏈烷烴微生物的生長(zhǎng)中是否有效。
還公開(kāi)了相關(guān)裝置。該裝置包括適宜于包含水溶液、一定量的待測(cè)抗菌劑和樣本的容器。該裝置進(jìn)一步包括用碳源覆蓋的載玻片，該載玻片適宜于放入容器中。而且，觀察來(lái)自樣本的非嗜鏈烷烴微生物在載玻片上的生長(zhǎng)，可用于確定抵制載玻片上非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)所必需的抗菌劑的濃度。
附圖
的簡(jiǎn)要說(shuō)明當(dāng)與所附單一的附圖結(jié)合起來(lái)閱讀時(shí)，可從下面的本發(fā)明的詳細(xì)描述中獲得對(duì)本發(fā)明的完整的理解，其中附圖顯示抗菌劑敏感性設(shè)備的一個(gè)具體實(shí)例。
詳細(xì)描述本發(fā)明的方法和裝置提供一種有效、可行和經(jīng)濟(jì)地檢測(cè)至少一種非嗜鏈烷烴微生物對(duì)不同抗菌劑和其預(yù)定量的敏感性的方法。現(xiàn)參考唯一的附圖，抗菌劑敏感性方法通過(guò)參考抗菌劑敏感性裝置50這一具體實(shí)例而得到解釋。裝置50由試管60、61、62、63、64、65形式的六個(gè)容器組成，其中每一個(gè)盛有一定量的水溶液，例如Czapek培養(yǎng)液70、71、72、73、74、75。應(yīng)該理解水溶液應(yīng)該不包含任何碳源，因?yàn)橄Ｍ谳d玻片上提供唯一的碳源(下面討論)以使待測(cè)的非嗜鏈烷烴微生物在載玻片上而非在水溶液中有效生長(zhǎng)。試管61-65中的水溶液含有均勻間隔的遞增濃度的待測(cè)抗菌劑。試管60被用作對(duì)照試管，它不含任何抗菌劑。
接著將來(lái)自病人的樣本加入試管60-65各管中。樣本可為血液樣品，任何活體或組織樣本；胃液；尿液；腦脊液；鼻咽粘液或唾液。這些樣本可從醫(yī)院醫(yī)生辦公室或急診室中的病人，例如通過(guò)已知技術(shù)用已知的標(biāo)準(zhǔn)方法而獲得。
接著將用碳源覆蓋的載玻片80、81、82、83、84和85加入各個(gè)試管60、61、62、63、64和65中。將載玻片保溫至少24小時(shí)。通過(guò)觀察載玻片80-85上的非嗜鏈烷烴微生長(zhǎng)物生長(zhǎng)90、91、92、93、94，可確定防止非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)所必需的抗菌劑的最小抑制濃度(“MIC”)。在這種情況下，載玻片85沒(méi)有非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)，因此在試管75中找到MIC濃度。
應(yīng)該理解樣本可有時(shí)具有多于一種微生物存在于其中。例如，如果病人患有與細(xì)菌心內(nèi)膜炎相關(guān)的腦膿腫，病人極有可能具有單一病原體(例如葡萄球菌屬)。然而，仍可能具有生長(zhǎng)于載玻片上的混合菌叢(即葡萄球菌屬和meningococci)。然而，由于存在的任何細(xì)菌在病人中的致病性，因此處理所有的細(xì)菌菌叢是必不可少的。本發(fā)明使得醫(yī)生能確定將抑制生長(zhǎng)在載玻片上所有菌叢的抗菌劑及其具體的劑量，這從而在治療所有在病人中導(dǎo)致致病性的非嗜鏈烷烴微生物中有效。
應(yīng)該理解雖然裝置50顯示有多個(gè)容器和多個(gè)載玻片80-85，但本發(fā)明不局限于多個(gè)容器和多個(gè)載玻片，也包括一個(gè)容器和一個(gè)載玻片。
碳源和載玻片80-85可包括含碳源的明膠基質(zhì)。碳源可為選自葡萄糖、果糖、甘油、甘露醇、天冬酰胺和酪蛋白及其它的一種或多種。另一個(gè)具體實(shí)施方案可包括提供一載玻片，用粘附劑覆蓋玻片并將許多凝膠顆粒固定于粘附劑上。碳源可與凝膠顆粒離子性或親合性結(jié)合。
可通過(guò)下面方法制備覆蓋有含碳源的明膠基質(zhì)的載玻片80-85。首先在一容器如實(shí)驗(yàn)室燒杯中盛入100ml蒸餾水。向燒杯中加入2g瓊脂(明膠基質(zhì))和3g碳源(例如葡萄糖)。接著煮沸該混合物并且蒸氣滅菌，將含有碳源的熔化的明膠基質(zhì)倒入平器中，該平器被放在熱平板上。在該方法中明膠基質(zhì)/碳源保持熔化狀態(tài)。此后，將滅菌的載玻片例如載玻片80放入熔化的明膠基質(zhì)/碳源中，并被其覆蓋。將被覆蓋的載玻片從平皿中移出，并讓其靜置1分鐘或兩分鐘以使其上的覆蓋層固化。接著準(zhǔn)備將具有含碳源的明膠基質(zhì)的覆蓋層的載玻片放入含有水溶液和樣本的試管60-65的一個(gè)中。
另一種制備載玻片的方法包括首先用粘附劑如火棉膠覆蓋載玻片，接著將大量凝膠顆粒(購(gòu)自Pharmacia of Parsippany，New Jersey)加入粘附劑中。凝膠顆粒直徑約為1微米。現(xiàn)將具有凝膠顆粒覆蓋層的載玻片浸在含有碳源(如葡萄糖)的緩沖試劑中來(lái)將碳源以離子或親和方式與凝膠顆粒相連。
可使用本發(fā)明方法鑒定的非嗜鏈烷烴微生物包括任何依賴于非鏈烷烴碳源的微生物。非嗜鏈烷烴微生物包括，但不局限于結(jié)核分枝桿菌；副結(jié)核分枝桿菌；麻風(fēng)分枝桿菌；葡萄球菌屬；鏈球菌屬；大腸桿菌；李斯特氏菌屬；布魯氏菌屬；Humemophilus；密螺旋體屬；肺炎球菌屬；梭菌屬；隱球菌屬；球孢子菌屬和組織胞漿菌屬。
應(yīng)該理解本發(fā)明已經(jīng)公開(kāi)了一種檢測(cè)樣本中至少一種非嗜鏈烷烴微生物敏感性的方法和相關(guān)裝置。該方法有效、可行，并且不涉及使用昂貴和復(fù)雜的裝置。還公開(kāi)了相關(guān)裝置。
雖然已公開(kāi)了本發(fā)明具體的實(shí)例，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解根據(jù)所公開(kāi)的所有教導(dǎo)，可對(duì)細(xì)節(jié)進(jìn)行各種修改和改變。因此，所公開(kāi)的具體方案意在僅僅說(shuō)明，而不限制被賦予所附權(quán)利要求的全部范圍和其所有和全部等同物的本發(fā)明的范圍。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)得自病人的樣本中至少一種非嗜鏈烷烴微生物對(duì)不同抗菌劑和其預(yù)定量的敏感性的方法，所述方法包括提供至少一個(gè)包含水溶液的容器；用所述樣本接種所述溶液；將(i)用碳源覆蓋的載玻片和(ii)預(yù)定量的抗菌劑加入所述容器中；和觀察所述載玻片上所述非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)與否以確定所述預(yù)定量的所述抗菌劑在抑制所述載玻片上的所述非嗜鏈烷烴微生物的生長(zhǎng)中是否有效。
2.權(quán)利要求1的方法，包括采用用含有所述碳源的明膠基質(zhì)覆蓋的載玻片作為所述載玻片。
3.權(quán)利要求1的方法，包括通過(guò)首先將許多凝膠顆粒粘附于所述載玻片上并接著將所述碳源與所述凝膠顆粒結(jié)合來(lái)提供所述載玻片。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述碳源與所述凝膠顆粒離子性結(jié)合。
5.權(quán)利要求3的方法，其中所述碳源與所述凝膠顆粒親和性結(jié)合。
6.權(quán)利要求3的方法，包括通過(guò)粘附劑將所述凝膠顆粒粘附于所述載玻片上。
7.權(quán)利要求6的方法，包括采用含所述碳源的明膠基質(zhì)作為所述粘附劑。
8.權(quán)利要求1的方法，包括采用葡萄糖、果糖、甘油、甘露醇、天冬酰胺和酪蛋白中的一種或多種作為所述碳源。
9.權(quán)利要求1的方法，包括采用選自血液、胃液、尿、腦脊液、鼻咽粘液和唾液中的一種作為所述樣本。
10.權(quán)利要求1的方法，包括提供多個(gè)各自包含水溶液的容器；將一定量的所述樣本接種到各容器中；將(i)用碳源覆蓋的各個(gè)載玻片和(ii)一定量的待測(cè)抗菌劑放入各容器中，每個(gè)所述容器含有不同的預(yù)定量的所述抗菌劑；和觀察在所述載玻片上所述非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)與否以確定抑制所述非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)的所述抗菌劑的最小抑制濃度。
11.一種用于檢測(cè)來(lái)自病人的樣本中至少一種非嗜鏈烷烴微生物對(duì)不同抗菌劑和其預(yù)定量的敏感性的裝置，包括一個(gè)適宜于含有(i)一種水溶液；(ii)一定量的待測(cè)抗菌劑；和(iii)所述樣本的容器；和一個(gè)用碳源覆蓋的載玻片，所述載玻片適宜于被放入所述容器中，從而對(duì)所述載玻片上的來(lái)自所述樣本的所述非嗜鏈烷烴微生物的生長(zhǎng)的觀察可用于確定用于抑制所述載玻片上所述非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)所必需的所述抗菌劑的濃度。
12.權(quán)利要求12的裝置，其中所述載玻片用含所述碳源的明膠基質(zhì)覆蓋。
13.權(quán)利要求11的裝置，其中所述載玻片用與所述碳源結(jié)合的許多凝膠顆粒覆蓋。
14.權(quán)利要求13的裝置，其中所述碳源與所述凝膠顆粒離子性結(jié)合。
15.權(quán)利要求13的裝置，其中所述碳源與所述凝膠顆粒親和性結(jié)合。
16.權(quán)利要求13的裝置，其中所述凝膠顆粒通過(guò)粘附劑與所述載玻片粘附。
17.權(quán)利要求16的裝置，其中所述粘附劑為火棉膠。
18.權(quán)利要求11的裝置，其中所述碳源為葡萄糖、果糖、甘油、甘露醇、天冬酰胺、脲、酪蛋白和水解產(chǎn)物中的一種或多種。
19.權(quán)利要求11的裝置，包括各個(gè)均適宜包含(i)一種水溶液；(ii)一定量的待測(cè)抗菌劑；和(iii)所述樣本的多個(gè)容器；和均被碳源覆蓋的多個(gè)載玻片，其中每一個(gè)均適宜于放在一個(gè)所述容器中。
全文摘要
一種檢測(cè)來(lái)自病人的樣本中至少一種非嗜鏈烷烴微生物對(duì)不同抗菌劑和其預(yù)定量的敏感性的方法,該方法包括提供至少一個(gè)含有水溶液的容器并用樣本接種溶液。該方法進(jìn)一步包括將(i)碳源覆蓋的載玻片和(ii)預(yù)定量的待測(cè)抗菌劑加入容器中。通過(guò)觀察載玻片上非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)與否,可以確定預(yù)定量的抗菌劑在抑制載玻片上的非嗜鏈烷烴微生物生長(zhǎng)中是否有效。還公開(kāi)了相關(guān)裝置。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK1200151SQ96196940
公開(kāi)日1998年11月25日 申請(qǐng)日期1996年8月23日 優(yōu)先權(quán)日1995年9月14日
發(fā)明者R·A·奧拉, M·S·菲爾德 申請(qǐng)人:茵法克泰施公司