專利名稱：蛹蟲草菌高產(chǎn)栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥用食用真菌的栽培方法，特別是蛹蟲草菌高產(chǎn)栽培方法。
在專利號為93105056.1的專利中，公開了一種“北冬蟲夏草菌人工栽培子實體的方法”，其菌種為蛹草頭孢霉Cepnalosporl-um C868，由于該菌種退化現(xiàn)象比較嚴重，且培養(yǎng)基營養(yǎng)不足，不能充分滿足子實體生長需要，故栽培效果不太理想，一般轉(zhuǎn)化率60-70％，達不到高產(chǎn)的目的。
本發(fā)明的目的是提供一種選用新菌種源人工栽培蛹蟲草菌的方法，采用合成培養(yǎng)基以達到高產(chǎn)的目的。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的選用蛹草擬青霉菌種[Paecilom-yces militaris(Kob.)Br.etSm]定名為Pm66，保藏號為CGMCC NO 0301，其栽培方法包括以下步驟1、菌種選育將采集的野生蛹蟲草菌按常規(guī)方法在無菌條件下進行菌種分離，菌種在平皿培養(yǎng)基中進行插片培養(yǎng)7天后，顯微鏡下觀察菌絲及分生孢子形態(tài)，蛹草擬青霉特征是菌絲無色，絲狀，具有隔膜，直徑2微米，分生孢子梗有兩種類型一是從營養(yǎng)菌絲上生單根的分生孢子梗，頂端鏈生成迭瓦狀孢子鏈；二是從營養(yǎng)菌絲上生的分生孢子梗，頂端分枝呈擬青霉?fàn)畹漠a(chǎn)孢細胞，其上也鏈生迭瓦狀孢子鏈，分生孢子近球形，卵圓形，單胞，無色，大小為1.5-2.5×1-2微米，將純化后的該菌種Pm66接種到液體培養(yǎng)基中，在23±2℃，避光條件下靜止培養(yǎng)2天，搖瓶培養(yǎng)5天，再在散射光(3000lux左右)照射下靜止培養(yǎng)2-3天，其菌苔表面呈淡黃色，菌絲絨毛狀，有凸凹不平，呈不規(guī)則的龜裂紋。
2、子實體培養(yǎng)將上述選育的菌種接種到含水量55-60％的優(yōu)質(zhì)稻米加營養(yǎng)液的合成培養(yǎng)基中，PH8-8.5，常規(guī)滅菌后接入菌種，在潔凈環(huán)境下，控制溫度23±2℃，避光培養(yǎng)7-10天，當(dāng)菌絲長滿培養(yǎng)基后，溫度降至21±2℃，給于散射光照射并通風(fēng)保濕，經(jīng)過20-25天，子實體成熟，肉質(zhì)，橙黃色，全長5-120毫米，有的可達150毫米以上，頂端子座呈棍棒狀，長30-80毫米，粗3-9毫米。
由于本發(fā)明選用了蛹草擬青霉菌種，其栽培成活率及出子實體率均達到100％，所以為穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn)奠定了良好的基礎(chǔ)。因采用了優(yōu)質(zhì)稻米加營養(yǎng)液的合成培養(yǎng)基，在適合的溫度、光照、PH等條件下栽培一次可連續(xù)采收2-4茬子實體，使生物轉(zhuǎn)化率高達160％以上，從而實現(xiàn)了穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn)，顯著降低成本40％以上。經(jīng)中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所及遼寧中醫(yī)測試結(jié)果表明本發(fā)明所選用的蛹草擬青霉菌種Pm66所含氨基酸總量及其它幾種營養(yǎng)與藥用成份均高于93105056.1專利中采用的蛹草頭孢霉菌種的C868。所以用Pm66菌種栽培的子實體是一種更為理想的應(yīng)用廣泛的藥品和保健品。它不僅用于治療肺腎兩虛引起的咳嗽氣喘、腎虛乏力等疾病，還可用于癌癥的輔助治療，如與環(huán)磷酰胺合用，能明顯抑制癌細胞生長，具有增效減毒、提高生存質(zhì)量、明顯延長壽命的功效。另外，由于它不含興奮劑，對恢復(fù)運動疲勞、增強體力有明顯效果?？蓮V泛應(yīng)用于運動領(lǐng)域。
本發(fā)明所選用的蛹草擬青霉菌種Pm66所含氨基酸總量及其它幾種營養(yǎng)成份與藥用成份均高于93105056.1專利中采用的蛹草頭孢霉菌種的C868，細見下表Pm66與C868菌種有效成份對比項 目Pm66 C868氨基酸種 ASP1705 ILE853ASP1531ILE722類與含量 THR1174 LEU1142 THP1184LEU901(mg/100g) SER933TYR1157 SER1047TYR862GLU3263 PHE823GLU3120PHE670GLY1146 LYS1160 GLY823 LYS962ALA1564 NH3245ALA1256NH3627CYS154HIS385CYS微量HIS370VAL1210 APG1242 VAL1063APG1104MET134PRO1072 MET852 PRO772氨基酸 19,362 17,866總量(mg/100g)蟲草多糖13.23.1(mg/g)有機鍺 4.157 0.030(PPM/g)SOD(鮮品) 154.5 54(U/mg蛋白)蟲草素 0.230.15(純品)(％)維 VA 1.250.347生(mg/g)VB1 0.182 0.130素Pm66菌種與C868菌種顯微鏡形態(tài)比較

圖1是蛹草擬青霉Pm66顯微觀察菌絲及分生孢子形態(tài)。
圖2是蛹草頭孢霉C868顯微觀察菌絲及分生孢子形態(tài)。
根據(jù)圖1-2顯微觀察結(jié)果表明，蛹草擬青霉Pm66的菌絲粗壯、清晰，分生孢子呈迭瓦狀孢子鏈。而頭孢霉C868的菌絲細弱，不清晰，分生孢子團聚呈頭狀。二者的菌絲有明顯差異，因此其栽培成活率及出子實體率大不相同。
Pm66菌種與C868菌種栽培效果比較Pm66C868出草率(％) 10070-80最高生物效率(％) 16090-100下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作詳細說明實施例1將采集的野生蛹蟲草菌按常規(guī)方法在無菌條件下進行菌種分離，然后將菌種接種在平皿培養(yǎng)基中，插入蓋玻片，在23±2℃溫度下培養(yǎng)7天，顯微鏡觀察菌絲及分生孢子形態(tài)，符合蛹草擬青霉特征的即為Pm66純菌種。該母種培養(yǎng)基為胡蘿卜汁10％、土豆汁10％、蔗糖3％、天門冬酰胺0.1％、氯化鉀0.05％、硫酸鎂0.05％、硫酸鐵0.001％、硝酸鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、瓊脂2％、PH7-7.5。
實施例2將上述母種取豆粒大小的菌絲塊接種到液體培養(yǎng)基中，在23±2℃，避光條件下，靜止培養(yǎng)2天，然后搖瓶振蕩5天，再在散射光(3000lux左右)照射下，靜止培養(yǎng)2-3天，觀察菌絲狀態(tài)，由白色轉(zhuǎn)為淡黃色，表面菌苔呈絨毛狀，有凸凹不平，呈不規(guī)劃的龜裂紋。此為優(yōu)選栽培菌種。其液體培養(yǎng)基除不含瓊脂外，其它成份同實施例1培養(yǎng)基。
實施例3在500毫升廣口玻璃瓶中裝入優(yōu)質(zhì)稻米50克，填加含胡蘿卜汁10％、土豆汁10％、蔗糖2％、蛋白胨0.5％、磷酸二氫鉀0.3％、硫酸鎂0.15％、活性氨基酸0.2％的營養(yǎng)液、二氧化鍺0.01％的營養(yǎng)液40-60毫升，使培養(yǎng)基含水量為55-60％，調(diào)PH8-8.5，封口滅菌，1.5公斤/平方厘米滅菌50分鐘，然后接種例2栽培菌種3-4毫升，在23±2℃，避光條件下，培養(yǎng)7-10天，當(dāng)菌絲長至培養(yǎng)基表面90％，用散射光(3000lux左右)照射，當(dāng)菌絲長滿培養(yǎng)基表面，進行表面搔菌及溫差刺激(5-7℃、3-4天)，促進子實體大量生成，并使其生長整齊、一致，為高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)打下基礎(chǔ)。瓶口覆蓋一層細孔膜，控制溫度在21±2℃，空氣相對濕度80-90％，每天通風(fēng)3-4次，每次20-30分鐘，經(jīng)過10天左右，長出橙黃色或橙紅色子實體。
實施例4當(dāng)蟲草子實體長出2厘米左右時噴施0.2％活性氨基酸液，促使子實體粗壯，長至10厘米左右時，去掉封口膜，噴施1％蔗糖水，瓶口套上塑料薄膜筒，上蓋細孔薄膜，使子實體向上生長至15厘米以上。經(jīng)過20-25天，子實體成熟即可采收。
實施例5采收一茬子實體后，整理好料面，加入營養(yǎng)液10-20毫升，在23±2℃避光條件下，10天左右給于散射光照射，溫度降至21±2℃，約20天左右，第二茬子實體即可采收，同樣方法還可采收第三茬、第四茬子實體。
權(quán)利要求
1.一種蛹蟲草菌高產(chǎn)栽培方法，其特征是選用蛹草擬青霉菌種[Pae-ciomyces mlitaris(Kob.)Br.etSm]定名為Pm66，保藏號為CGMCC NO 0301，其栽培方法包括以下步驟(1)、菌種選育；將采集的野生蛹蟲草菌按常規(guī)方法在無菌條件下進行菌種分離，菌種在平皿培養(yǎng)基中進行插片培養(yǎng)7天后，顯微鏡下觀察菌絲及分生孢子形態(tài)，蛹草擬青霉特征是菌絲無色，絲狀，具有隔膜，直徑2微米，分生孢子梗有兩種類型一是從營養(yǎng)菌絲上生單根的分生孢子梗，頂端鏈生成迭瓦狀孢子鏈；二是從營養(yǎng)菌絲上生的分生孢子梗，頂端分枝呈擬青霉?fàn)畹漠a(chǎn)孢細胞，其上也鏈生迭瓦狀孢子鏈，分生孢子近球形，卵圓形，單胞，無色，大小為1.5-2.5×1-2微米，將純化后的該菌種Pm66接種到液體培養(yǎng)基中，在23±2℃，避光條件下靜止培養(yǎng)2天，搖瓶培養(yǎng)5天，再在散射光(3000lux左右)照射下靜止培養(yǎng)2-3天，其菌苔表面呈淡黃色，菌絲絨毛狀，有凸凹不平，呈不規(guī)則的龜裂紋。(2)、子實體培養(yǎng)將上述選育的菌種接種到含水量55-60％的優(yōu)質(zhì)稻米加營養(yǎng)液的合成培養(yǎng)基中，PH8-8.5，常規(guī)滅菌后接入菌種，在潔凈環(huán)境下，控制溫度23±2℃，避光培養(yǎng)7-10天，當(dāng)菌絲長滿培養(yǎng)基后，溫度降至21±2℃，給于散射光照射并通風(fēng)保濕，經(jīng)過20-25天，子實體成熟，肉質(zhì)，橙黃色，全長5-120毫米，有的可達150毫米以上，頂端子座呈棍棒狀，長30-80毫米，粗3-9毫米。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是在子實體長出前要及時進行表面搔菌，并進行晝夜溫差刺激(5-7℃、3-4天)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是在子實體長至2厘米左右時，噴施0.2％活性氨基酸營養(yǎng)液，可促使子實體粗壯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是當(dāng)子實體長至10厘米時，再噴施1％蔗糖水，瓶口套上塑料薄膜筒，上蓋微孔膜，子實體可長至15厘米以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是采收一茬子實體后，整理好料面，每瓶加營養(yǎng)液10-20毫升，在相同條件下培養(yǎng)20天左右后可采收第二茬子實體，同樣方法還可采收第三茬子實體或第四茬子實體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1和3所述的方法，其特征是營養(yǎng)液配方為胡蘿卜汁10％、土豆汁10％、蔗糖2％、蛋白胨0.5％、磷酸二氫鉀0.3％、硫酸鎂0.15％、活性氨基酸0.2％、二氧化鍺0.01％、。
全文摘要
本發(fā)明是一種蛹蟲草菌的高產(chǎn)栽培方法,采用蛹草擬青霉菌種[Paecilomyces mlitaris (Kob.)Br.etSm],通過母種選育,子實體選用優(yōu)質(zhì)稻米加營養(yǎng)液合成培養(yǎng)基,在pH8—8.5、溫度23±2℃,避光培養(yǎng)7—10天,菌絲長滿培養(yǎng)基后,進行表面搔菌與溫差刺激,溫度降至21±2℃,散射光照射并通風(fēng)保濕,經(jīng)過20—25天子實體成熟,可連續(xù)采收2—4茬,成活率及出子實體率100%,生物轉(zhuǎn)化率高達160%,降低成本40%以上。
文檔編號C12N1/14GK1200403SQ9710585
公開日1998年12月2日 申請日期1997年5月7日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月7日
發(fā)明者李春燕 申請人:李春燕