專利名稱：新的人蛋白質(zhì)磷酸酯酶亞基、其編碼序列及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種新的人基因核苷酸序列。更具體地說，本發(fā)明涉及人IMYPNO1的cDNA序列，該蛋白是兔蛋白質(zhì)磷酸酯酶2A1(protein phosphatase 2A1，簡稱“PP2A1”)的B-gama亞基蛋白的同系物。本發(fā)明還涉及由該核苷酸序列編碼的多肽，這些多核苷酸和多肽的應(yīng)用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生產(chǎn)方法。
生物中廣泛存在著復(fù)雜的信號傳遞途徑。每個細胞通過表面的受體從外界接收信號，然后經(jīng)過一系列復(fù)雜的生物化學(xué)途徑，將信號從質(zhì)膜傳遞到胞內(nèi)。同時這一系列生物化學(xué)途徑也被用來幫助協(xié)調(diào)細胞各部分執(zhí)行各種特殊而復(fù)雜的功能(Physiol Rev.1993 Oct；73(4)673-699.Review.)。而蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化就是其中最重要的生物化學(xué)途徑之一(Bioorg Med Chem.1997 Sep；5(9)1751-1773.Review.)。
蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化是分別由蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶所催化的，其中蛋白激酶是一個十分龐大的家族，總體上包括蛋白質(zhì)的絲氨酸/蘇氨酸激酶，和蛋白質(zhì)的酪氨酸激酶兩大類，數(shù)量十分驚人，僅在真核生物中就發(fā)現(xiàn)了不下1000種之多。蛋白磷酸酯酶的分類與蛋白激酶十分相似，也相應(yīng)分為蛋白質(zhì)的絲氨酸/蘇氨酸磷酸酯酶和蛋白質(zhì)的酪氨酸磷酸酯酶，但是數(shù)量比蛋白激酶要少得多，真核和原核生物中總計只有15種(Physiol Rev.1993 Oct；73(4)673-699.Review.)。盡管數(shù)量如此懸殊，然而它們兩者卻可以協(xié)調(diào)的工作，共同維持蛋白質(zhì)的磷酸化平衡。
蛋白質(zhì)的絲氨酸/蘇氨酸磷酸酯酶家族是一個重要的蛋白磷酸酯酶家族，它負責(zé)催化己磷酸化的蛋白質(zhì)絲氨酸和蘇氨酸的去磷酸化作用。傳統(tǒng)上，該家族的成員可以根據(jù)其對底物和抑制劑的專一性，以及受調(diào)控和對金屬離子需要的不同而分為PP1、PP2A、PP2B三個結(jié)構(gòu)相似的亞家族(Eur J Biochem.1995 Jun 1；230(2)766-772.)。也曾有關(guān)于PP2C的報道，但由于其結(jié)構(gòu)上較為特殊，常被單獨討論(Physiol Rev.1993 Oct；73(4)673-699.Review.)。
蛋白質(zhì)磷酸酯酶2A(protein phosphatase 2A，簡稱“PP2A”)是一類典型的蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸磷酸酯酶，它廣泛存在于各種生物中；在人體內(nèi)，它廣泛存在于各種器官和組織，是一類無處不在的蛋白質(zhì)。PP2A的結(jié)構(gòu)大致由三個亞基構(gòu)成C2亞基為催化亞基，A亞基為保守的調(diào)控亞基，B亞基是不太保守的調(diào)控亞基。A-C2常被稱為核心亞基，它在各種PP2A中是變化很小的，而作為調(diào)控亞基的B亞基則較為多樣，至少可分為三類，B、B′、和B″。習(xí)慣上將A-C2-B稱為PP2A1，將A-C2-B′稱為PP2A0。近年來的研究表明，作為組成PP2A1的B類亞基又可進一步細分為B-alpha、B-beta和B-gama三種類型(J Biol Chem.1996 Feb 2；271(5)2578-2588.)。
1991年，瑞士的科學(xué)家Mayer RE等人已克隆并鑒定了兩種人類PP2A1的B-alpha和B-beta亞基的基因(GENEBANK ACCESSION No.gb|M64929 &gb|M64930)(Biochemistry 1991 Apr 16；30(15)3589-3597)。1994年，Zolnierowicz S等人克隆并鑒定了一種兔PP2A1的B-gama亞基的基因(GENEBANK ACCESSION No.gb|U09355)(Biochemistry.1994 Oct 4；33(39)11858-11867.)。進一步的研究表明，它們之間還存在著較高的同源性。
然而，到目前為止，還沒有有關(guān)本發(fā)明中人類PP2A1的B-gama亞基基因的報道。
本發(fā)明的一個目的是提供一種新的多核苷酸序列，該多核苷酸序列編碼人類的、與兔PP2A1的B-gama亞基同源的蛋白，本發(fā)明的與兔PP2A1的B-gama亞基同源的基因被命名為IMYPNO1。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種新的蛋白，該蛋白被命名為IMYPNO1蛋白。
本發(fā)明的再一個目的是提供一種利用重組技術(shù)生產(chǎn)所述的新的人IMYPNO1蛋白的方法。
本發(fā)明還提供了這種人IMYPNO1編碼序列和蛋白的應(yīng)用。
在本發(fā)明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，它包括編碼具有人IMYPNO1蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼一多肽，該多肽具有SEQ ID NO.4所示的序列。更佳地，該序列具有SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種分離的IMYPNO1蛋白多肽，它包括具有SEQ ID NO.4氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ ID NO.4序列的多肽。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種載體，它含有上述分離出的DNA。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種所述載體轉(zhuǎn)化的宿主細胞。
在本發(fā)明的另一方面，提供了一種產(chǎn)生具有IMYPNO1蛋白活性的多肽的方法，該方法包括(a)將編碼具有IMYPNO1蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調(diào)控序列，形成IMYPNO1蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列有至少70％的同源性；(b)將步驟(a)中的表達載體轉(zhuǎn)入宿主細胞，形成IMYPNO1蛋白的重組細胞；(c)在適合表達IMYPNO1蛋白多肽的條件下，培養(yǎng)步驟(b)中的重組細胞；(d)分離出具有IMYPNO1蛋白活性的多肽。
在本發(fā)明的一個具體實施方案中，本發(fā)明的分離的多核苷酸全長為1492個核苷酸，其詳細序列見SEQ ID NO.3，其中開放讀框位于91-1377位核苷酸。
在本發(fā)明中，“分離的”、“純化的”或“基本純的”DNA是指，該DNA或片段已從天然狀態(tài)下位于其兩側(cè)的序列中分離出來，還指該DNA或片段已經(jīng)與天然狀態(tài)下伴隨核酸的組份分開，而且已經(jīng)與在細胞中伴隨其的蛋白質(zhì)分開。
在本發(fā)明中，術(shù)語“IMYPNO1蛋白(或多肽)編碼序列”指編碼具有IMYPNO1蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.3中91-1377位核苷酸序列及其簡并序列。該簡并序列是指，位于SEQ ID NO.3序列的編碼框91-1377位核苷酸中，有一個或多個密碼子被編碼相同氨基酸的簡并密碼子所取代后而產(chǎn)生的序列。由于密碼子的簡并性，所以與SEQ ID NO.3中91-1377位核苷酸序列同源性低至約70％的簡并序列也能編碼出SEQ ID NO.4所述的序列。該術(shù)語還包括能在中度嚴緊條件下，更佳地在高度嚴緊條件下與SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。該術(shù)語還包括與SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列的同源性至少70％，較佳地至少80％，更佳地至少90％的核苷酸序列。
該術(shù)語還包括能編碼具有與人IMYPNO1相同功能的蛋白的、SEQ ID NO.3中開放閱讀框序列的變異形式。這些變異形式包括(但并不限于)若干個(通常為1-90個，較佳地1-60個，更佳地1-20個，最佳地1-10個)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加數(shù)個(通常為60個以內(nèi)，較佳地為30個以內(nèi)，更佳地為10個以內(nèi)，最佳地為5個以內(nèi))核苷酸。
在本發(fā)明中，“基本純的”蛋白質(zhì)或多肽是指其至少占樣品總物質(zhì)的至少20％，較佳地至少50％，更佳地至少80％，最佳地至少90％(按干重或濕重計)。純度可以用任何合適的方法進行測量，如用柱層析、PAGE或HPLC法測量多肽的純度?；炯兊亩嚯幕旧喜缓烊粻顟B(tài)下的伴隨其的組分。
在本發(fā)明中，術(shù)語“IMYPNO1蛋白多肽”指具有IMYPNO1蛋白活性的SEQ IDNO.4序列的多肽。該術(shù)語還包括具有與IMYPNO1相同功能的、SEQ ID NO.4序列的變異形式。這些變異形式包括(但并不限于)若干個(通常為1-50個，較佳地1-30個，更佳地1-20個，最佳地1-10個)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一個或數(shù)個(通常為20個以內(nèi)，較佳地為10個以內(nèi)，更佳地為5個以內(nèi))氨基酸。例如，在本領(lǐng)域中，用性能相近或相似的氨基酸進行取代時，通常不會改變蛋白質(zhì)的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一個或數(shù)個氨基酸通常也不會改變蛋白質(zhì)的功能。該術(shù)語還包括IMYPNO1蛋白的活性片段和活性衍生物。
該多肽的變異形式包括同源序列、等位變異體、天然突變體、誘導(dǎo)突變體、在高或低的嚴謹度條件下能與IMYPNO1 DNA雜交的DNA所編碼的蛋白、以及利用抗IMYPNO1多肽的抗血清獲得的多肽或蛋白。本發(fā)明還提供了其他多肽，如包含IMYPNO1多肽或其片段的融合蛋白。除了幾乎全長的多肽外，本發(fā)明還包括IMYPNO1多肽的可溶性片段。通常，該片段具有IMYPNO1多肽序列的至少約10個連續(xù)氨基酸，通常至少約30個連續(xù)氨基酸，較佳地至少約50個連續(xù)氨基酸，更佳地至少約80個連續(xù)氨基酸，最佳地至少約100個連續(xù)氨基酸。
發(fā)明還提供IMYPNO1蛋白或多肽的類似物。這些類似物與天然IMYPNO1多肽的差別可以是氨基酸序列上的差異，也可以是不影響序列的修飾形式上的差異，或者兼而有之。這些多肽包括天然或誘導(dǎo)的遺傳變異體。誘導(dǎo)變異體可以通過各種技術(shù)得到，如通過輻射或暴露于誘變劑而產(chǎn)生隨機誘變，還可通過定點誘變法或其他已知分子生物學(xué)的技術(shù)。類似物還包括具有不同于天然L-氨基酸的殘基(如D-氨基酸)的類似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的類似物。應(yīng)理解，本發(fā)明的多肽并不限于上述例舉的代表性的多肽。
修飾(通常不改變一級結(jié)構(gòu))形式包括體內(nèi)或體外的多肽的化學(xué)衍生形式如乙?；螋然?。修飾還包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或進一步加工步驟中進行糖基化修飾而產(chǎn)生的多肽。這種修飾可以通過將多肽暴露于進行糖基化的酶(如哺乳動物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修飾形式還包括具有磷酸化氨基酸殘基(如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸，磷酸蘇氨酸)的序列。還包括被修飾從而提高了其抗蛋白水解性能或優(yōu)化了溶解性能的多肽。
本發(fā)明還包括IMYPNO1多肽編碼序列的反義序列。這種反義序列可用于抑制細胞內(nèi)IMYPNO1的表達。
本發(fā)明還包括一種可用作探針的核酸分子，該分子通常具有IMYPNO1多肽編碼序列的8-100個，較佳地15-50個連續(xù)核苷酸。該探針可用于檢測樣品中是否存在編碼IMYPNO1的核酸分子。
本發(fā)明還包括檢測IMYPNO1核苷酸序列的方法，它包括用上述的探針與樣品進行雜交，然后檢測探針是否發(fā)生了結(jié)合。較佳地，該樣品是PCR擴增后的產(chǎn)物，其中PCR擴增引物對應(yīng)于IMYPNO1多肽的編碼序列，并可位于該編碼序列的兩側(cè)或中間。引物長度一般為20-50個核苷酸。
在本發(fā)明中，可選用本領(lǐng)域已知的各種載體，如市售的載體。
在本發(fā)明中，術(shù)語“宿主細胞”包括原核細胞和真核細胞。常用的原核宿主細胞的例子包括大腸桿菌、枯草桿菌等。常用的真核宿主細胞包括酵母細胞，昆蟲細胞、和哺乳動物細胞。較佳地，該宿主細胞是真核細胞，如CHO細胞、COS細胞等。
另一方面，本發(fā)明還包括對IMYPNO1 DNA或是其片段編碼的多肽具有特異性的多克隆抗體和單克隆抗體，尤其是單克隆抗體。這里，“特異性”是指抗體能結(jié)合于IMYPNO1基因產(chǎn)物或片段。較佳地，指那些能與IMYPNO1基因產(chǎn)物或片段結(jié)合但不識別和結(jié)合于其它非相關(guān)抗原分子的抗體。本發(fā)明中抗體包括那些能夠結(jié)合并抑制IMYPNO1蛋白的分子，也包括那些并不影響IMYPNO1蛋白功能的抗體。本發(fā)明還包括那些能與修飾或未經(jīng)修飾形式的IMYPNO1基因產(chǎn)物結(jié)合的抗體。
本發(fā)明不僅包括完整的單克隆或多克隆抗體，而且還包括具有免疫活性的抗體片段，如Fab′或(Fab)2片段；抗體重鏈；抗體輕鏈；遺傳工程改造的單鏈Fv分子(Ladner等人，美國專利No.4,946,778)；或嵌合抗體，如具有鼠抗體結(jié)合特異性但仍保留來自人的抗體部分的抗體。
本發(fā)明的抗體可以通過本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員已知的各種技術(shù)進行制備。例如，純化的IMYPNO1基因產(chǎn)物或者其具有抗原性的片段，可被施用于動物以誘導(dǎo)多克隆抗體的產(chǎn)生。與之相似的，表達IMYPNO1或其具有抗原性的片段的細胞可用來免疫動物來生產(chǎn)抗體。本發(fā)明的抗體也可以是單克隆抗體。此類單克隆抗體可以利用雜交瘤技術(shù)來制備(見Kohler等人，Nature 256；495，1975；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6511，1976；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6292，1976；Hammerling等人，In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas，Elsevier，N.Y.，1981)。本發(fā)明的抗體包括能阻斷IMYPNO1功能的抗體以及不影響IMYPNO1功能的抗體。本發(fā)明的各類抗體可以利用IMYPNO1基因產(chǎn)物的片段或功能區(qū)，通過常規(guī)免疫技術(shù)獲得。這些片段或功能區(qū)可以利用重組方法制備或利用多肽合成儀合成。與IMYPNO1基因產(chǎn)物的未修飾形式結(jié)合的抗體可以用原核細胞(例如E.Coli)中生產(chǎn)的基因產(chǎn)物來免疫動物而產(chǎn)生；與翻譯后修飾形式結(jié)合的抗體(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核細胞(例如酵母或昆蟲細胞)中產(chǎn)生的基因產(chǎn)物來免疫動物而獲得。
本發(fā)明的人IMYPNO1核苷酸序列全長序列或其片段通常可以用PCR擴增法、重組法或人工合成的方法獲得。對于PCR擴增法，可根據(jù)本發(fā)明所公開的有關(guān)核苷酸序列，尤其是開放閱讀框序列來設(shè)計引物，并用市售的cDNA庫或按已知方法制備的cDNA庫作為模板，擴增而得有關(guān)序列。當(dāng)序列較長時，常常需要進行兩次或多次PCR擴增，然后再將各次擴增出的片段按正確次序拼接在一起。
一旦獲得了有關(guān)的序列，就可以用重組法來大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細胞，然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細胞中分離得到有關(guān)序列。
此外，還可用人工合成的方法來合成有關(guān)序列，尤其是片段長度較短時。當(dāng)然，通過先合成多個小片段，然后再進行連接可獲得序列很長的片段。
在本發(fā)明的一個實例中，人IMYPNO1的cDNA核苷酸序列是如此獲得的，以人腦λgt11cDNA文庫(購自Clontech公司)為模板，合成正向引物A5′-CTGCGGGACCACAGCTATGTGAC-3′和反向引物B5′-CAGCTGTCCTCATCAGTGCTGTG-3’，進行PCR，獲得1492bp的目的片段。測序后得到SEQ ID NO.3的全長cDNA序列。
PP2A被認為與細胞生長，細胞分裂周期和細胞信息傳遞有關(guān)，B-gama作為PP2A的重要調(diào)控亞基，它一定對生物細胞的正常生長有重要作用。在本發(fā)明中，IMYPNO1基因與兔的PP2A1的B-gama基因高度同源，同時與鼠B-gama基因的同源性也很高，因而這表明它是B-gama在人中的一個同源基因，并且與兔B-gama，鼠B-gama有著相似的生物學(xué)功能，這些功能包括參與RNA的轉(zhuǎn)錄加工、信息受體與離子通道作用、胞內(nèi)信息傳遞、調(diào)控細胞生長、細胞周期以及細胞分裂等方面。
在附圖中，

圖1為本發(fā)明的人IMYPNO1與兔PP2A1的B-gama亞基基因的核酸序列同源比較圖。其中，相同的核苷酸用“|”標(biāo)出。
圖2為本發(fā)明的人IMYPNO1與大鼠PP2A1的B-gama亞基基因的核酸序列同源比較圖。其中，相同的核苷酸用“|”標(biāo)出。
圖3為本發(fā)明的人IMYPNO1與兔PP2A1的B-gama亞基的氨基酸序列的同源比較圖。其中，相同的氨基酸在兩個序列之間用單字符標(biāo)出。
圖4為本發(fā)明的人IMYPNO1與大鼠PP2A1的B-gama亞基的氨基酸序列的同源比較圖。其中，相同的氨基酸在兩個序列之間用單字符標(biāo)出。
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(New YorkColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1IMYPNO1的cDNA序列的克隆和測定1.引物擴增以人腦λgt11cDNA文庫(購自Clontech公司)為模板，用一對寡核苷酸為引物——A5′-CTGCGGGACCACAGCTATGTGAC-3′(SEQ ID NO.1)為正向引物，寡核苷酸B5′-CAGCTGTCCTCATCAGTGCTGT-3’(SEQ ID NO.2)為反向引物，進行PCR。A、B引物對的PCR條件為93℃4分鐘，隨之以93℃1分鐘、66℃1分鐘和72℃1分鐘進行35個循環(huán)，最后72℃延伸5分鐘。電泳檢測得到的PCR片段，以A、B為引物對擴增出的目的片段長1492bp。
2.PCR產(chǎn)物的測序?qū)⑦@段PCR擴增產(chǎn)物與pGEM-T載體(Promega)連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM103，用QIAprep Plasmid試劑盒(QIAGEN)提取質(zhì)粒，用雙鏈嵌套式缺失試劑盒(Pharmacia)對插入片段進行定向系列缺失，然后用PCR對缺失子進行快速鑒定及排序。用SequiTherm EXCELTMDNA測序試劑盒(Epicentre Technologies)對依次截短的缺失子進行測序，最后用電腦軟件拼接順序，獲得全長cDNA序列，共1492bp，詳細序列見SEQ ID NO.3，其中開放讀框位于91-1377位核苷酸。
根據(jù)得到的全長cDNA序列推導(dǎo)出IMYPNO1的氨基酸序列，共428個氨基酸殘基，其氨基酸序列詳見SEQ ID NO.4。
實施例2同源比較和結(jié)構(gòu)研究用IMYPNO1的全長cDNA序列及其編碼蛋白在Non-redundantGenBank+EMBL+DDBJ+PDB數(shù)據(jù)庫及Non-redundant GenBank CDStranslations+PDB+SwissProt+Spupdate+PIR數(shù)據(jù)庫中用BLAST軟件進行核酸和蛋白同源檢索。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，它與已被發(fā)表并確認為PP2A1的B-gama亞基的基因間存在高度同源的序列，并且本發(fā)明涉及的蛋白具有PP2A1的B-gama亞基家族高度保守的氨基酸序列。進一步的檢索表明，其在核酸和蛋白水平上與已被公布的兔(Oryctolagus cuniculus)PP2A1的B-gama亞基基因(核酸和蛋白檢索號分別為gb|U09355和sp|P50410)存在高度同源性，其中它們的核酸序列間有約92％同一性(identity)(圖1)，而其蛋白序列間更有93％同一性，94％相似性(圖3)。另外，本發(fā)明在核酸和蛋白水平上與已被公布的鼠PP2A1的B-gama亞基基因(核酸和蛋白檢索號分別為dbj|D38261和pir‖S65686)也存在高度同源性，其中它們的核酸序列間平均有約90％同一性(圖2)，而其蛋白序列間也有93％同一性，94％相似(圖4)。因此該基因被確認為兔和鼠PP2A1的B-gama亞基基因的同源基因。
又由于兔和鼠PP2A1的B-gama亞基基因已被鑒定為B-gama家族成員，且IMYPNO1的蛋白質(zhì)序列中具有B-gama家族的嚴格保守的標(biāo)志性序列，特別是在IMYPNO1的氨基酸序列中存在兩組各15個氨基酸組成的PP2A1的B-gama亞基基因家族共有的特征性序列——EFDYLKSLEIEEKIN；和N(A/G)H(T/A)YHINSIS(L/I/V/M)NSD.。
在本發(fā)明的蛋白中符合上述模式的序列片段是EFDYLKSLEIEEKIN(SEQID NO.4中103-117位)、NGHTYHINSISVNSD(SEQ ID NO.4中194-208位)。因此這進一步證實了本發(fā)明的IMYPNO1是一種新的人類PP2A1的B-gama亞基基因。根據(jù)結(jié)構(gòu)決定功能，結(jié)構(gòu)相似功能相似的原理，可以從這些相似基因或蛋白的功能來推測IMYPNO1的功能。
研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)的絲氨酸/蘇氨酸磷酸酯酶家族的功能驚人的廣泛，它幾乎涵蓋了代謝調(diào)節(jié)、參與信息受體和離子通道的作用、RNA的轉(zhuǎn)錄和加工，以及細胞的生長、分裂和分化(Biochemistry.1994 Oct 4；33(39)11858-11867.)。
之所以蛋白質(zhì)的絲氨酸/蘇氨酸磷酸酯酶有如此多的功能，是因為它參與了生物體中最重要的信號途徑，也就是蛋白質(zhì)的可逆磷酸化途徑。在細胞中存在著大量可以通過磷酸化和去磷酸化來改變其功能狀態(tài)的酶和信號分子，這樣就提供了相當(dāng)數(shù)量的，如反饋抑制這樣的正向和反向的調(diào)控位點，而這就是它參與各種細胞功能的化學(xué)基礎(chǔ)。事實上，越來越多的資料表明，PP2A參與了鉀離子流通平衡的調(diào)控(Adv Exp Med Biol.1996；396209-215.Review.)；參與了由腫瘤病毒及其病毒蛋白引起的細胞形變(Semin Cancer Biol.1995 Aug；6(4)229-237.Review.)；PP2A還與Bloom Syndrom(BS)、Alzheimer’s desease(AD)等臨床病癥有關(guān)(Indian JExp Biol.1996 Apr；34(4)298-301.Review.、FASEB J.1995 Dec；9(15)1570-1576.Review.)。
此外，尤為重要的是PP2A參與了對細胞生長和細胞周期的控制(Physiol Rev.1993 Oct；73(4)673-699.Review.)。例如曾發(fā)現(xiàn)PP2A可以調(diào)控真核的非洲爪蟾細胞從G2期到M期的轉(zhuǎn)變過程(Semin Cancer Biol.1995 Aug；6(4)203-209.Review.)；又發(fā)現(xiàn)在酵母中過量表達的PP2A會導(dǎo)致細胞無法進入細胞分裂期，或是推遲分裂期的到來(Ciba Found Symp.1992；170130-140.Review)。較為明顯的例子是在蛙卵中發(fā)現(xiàn)的一種促成熟因子(maturation-promoting factor，MPF)，它實際上是一種蛋白激酶(Physiol Rev.1993 Oct；73(4)673-699.Review.)，而由蛋白的磷酸酯酶與蛋白激酶相拮抗的性質(zhì)，可以推斷存在一種所謂“延緩成熟因子”，其實質(zhì)為蛋白質(zhì)的磷酸酯酶，并具有延緩分裂的作用。由此可見，蛋白質(zhì)的磷酸酯酶確實直接或間接的決定了細胞的生長和分裂狀況。而B-gama作為PP2A的調(diào)控亞基之一，起著引導(dǎo)整個磷酸酯酶完成所需功能的作用(Adv Enzyme Regul.1994；34199-224.Review.)，也就應(yīng)具有與相應(yīng)的蛋白磷酸酯酶同等重要的功能。
如前所述，IMYPNO1具有與B-gama家族成員相同或相近的功能，即也能引導(dǎo)所屬的PP2A參與各種細胞信號途徑，影響離子的流通，并可能與“Bloom綜合癥”、“Alzheimer’s病”等疾病的治療有關(guān)。另外，IMYPNO1也可能參與細胞生長和細胞周期的調(diào)控，并成為具有重要功能的細胞生長因子和細胞分裂因子之一。
除此之外，本發(fā)明還具有更為重要的意義。因為在自然界，蛋白激酶的種類要遠遠大于蛋白酯酶的種類，而之所以它們能夠相互協(xié)調(diào)的工作，很大程度上因為象PP2A的B亞基這樣存在著B-alpha，B-beta，B-gama的多種調(diào)控亞基形式，而這三種亞基的差異表達可以調(diào)控PP2A產(chǎn)生不同的底物專一性，使同一個PP2A產(chǎn)生不同的活性，因此這三種亞基實際上是密切相關(guān)的(Physiol Rev.1993 Oct；73(4)673-699.Review.)。人類PP2A1的B-alpha和B-beta亞基早在1991年就已克隆并鑒定了，但由于B-gama的空缺，使得這方面的研究無法開展。而本發(fā)明的IMYPNO1正好填補了這一空缺，為人類PP2A1的研究工作打開一個嶄新的局面。如果考慮到PP2A與細胞生長和分裂的關(guān)系，我們更可以通過基因的或是藥物的療法，調(diào)節(jié)PP2A三種B亞基的濃度比例來控制PP2A的酶活，進而控制細胞的生長和分裂，使人們有可能控制腫瘤和癌癥的發(fā)展，以達到最終治療癌癥的目標(biāo)。
本發(fā)明的人IMYPNO1除了可作為該家族一員用于進一步的功能研究，還可用于與其他蛋白一起產(chǎn)生融合蛋白，比如與免疫球蛋白一起產(chǎn)生融合蛋白。此外，本發(fā)明人IMYPNO1還可以與該家族的其他成員進行融合或交換片段，以產(chǎn)生新的蛋白。例如將本發(fā)明人IMYPNO1的N端與兔的PP2A1 B-game亞基或者人的B-alpha亞基的N端進行交換，以產(chǎn)生新的活性更高或具有新特性的蛋白。
針對本發(fā)明人IMYPNO1的抗體，用于篩選該家族的其他成員，或者用于親和純化相關(guān)蛋白(如該家族的其他成員)。
實施例3IMYPNO1在大腸桿菌中的表達在該實施例中，用對應(yīng)于編碼IMYPNO1的cDNA序列的5′和3′端的PCR寡核苷酸引物進行擴增，獲得IMYPNO1 cDNA作為插入片段。
PCR反應(yīng)中使用的5′寡核苷酸引物序列為5′-TAGGGGATCCATGCCCTCCGAAGCTGACA-3′(SEQ ID NO.5)，該引物含有BamHI限制性內(nèi)切酶的酶切位點，在該酶切位點之后是由起始密碼子開始的IMYPNO1編碼序列的19個核苷酸；3′端引物序列為5’-GTGAAAGCTTCTAGTGCATGTCAGAGTTT-3’(SEQ ID NO.6)，該引物含有HindIII限制性內(nèi)切酶的酶切位點、翻譯終止子和IMYPNO1的部分編碼序列。
引物上的限制性內(nèi)切酶的酶切位點對應(yīng)于細菌表達載體pQE-9(Qiagen Inc.，Chatsworth，CA)上的限制性內(nèi)切酶酶切位點，該質(zhì)粒載體編碼抗生素抗性(Ampr)、一個細菌復(fù)制起點(ori)、一個IPTG-可調(diào)啟動子/操縱子(P/O)、一個核糖體結(jié)合位點(RBS)、一個6-組氨酸標(biāo)記物(6-His)以及限制性內(nèi)切酶克隆位點。
用BamHI和HindIII消化pQE-9載體以及插入片段，隨后將插入片段連接到pQE-9載體并保持開放讀框在細菌RBS起始。隨后用連接混合物轉(zhuǎn)化購自Qiagen，商品名為M15/rep4的E.coli菌株，M15/rep4含有多拷貝的質(zhì)粒pREP4，其表達lacI阻遏物并攜帶卡那霉素抗性(Kanr)。在含有Amp和Kan的LB培養(yǎng)皿上篩選轉(zhuǎn)化子，抽提質(zhì)粒，測序驗證IMYPNO1的cDNA片段已正確插入了載體。
在補加Amp(100μg/ml)和Kan(25μg/ml)的LB液體培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)(O/N)含所需構(gòu)建物的陽性轉(zhuǎn)化子克隆。過夜(O/N)培養(yǎng)物以1∶100-1∶250的稀釋率稀釋，然后接種到大體積培養(yǎng)基中，培養(yǎng)細胞至600光密度(OD600)為0.4-0.6，隨后加入IPTG(“異丙基硫代-β-D-半乳糖苷”)至終濃度為1mM。通過使lacI阻遏物失活，IPTG誘導(dǎo)啟動P/O導(dǎo)致基因表達水平提高。繼續(xù)培養(yǎng)細胞3-4小時，隨后離心(6000×g，20分鐘)。超聲裂解包涵體，收集細胞并將細胞沉淀溶于6M的鹽酸胍中。澄清后，通過在能使含6-His標(biāo)記物蛋白緊密結(jié)合的條件下，用鎳-螯合柱層析從溶液中純化溶解的IMYPNO1。用6M鹽酸胍(pH5.0)從柱中洗脫IMYPNO1?？捎脦追N方法從鹽酸胍中變性沉淀蛋白?；蛘?，使用透析步驟除去鹽酸胍，或者從鎳-螯合柱中分離出純化蛋白。純化后的蛋白質(zhì)被結(jié)合到第二個柱中，該柱中具有遞減的線性鹽酸胍梯度。在結(jié)合到該柱時蛋白質(zhì)變性，隨后用鹽酸胍(pH5.0)洗脫。最后，將可溶的蛋白質(zhì)用PBS進行透析，然后將蛋白質(zhì)保存在終濃度為10％(w/v)甘油的貯存液中。
用12％的SDS-PAGE膠進行電泳，鑒定表達蛋白的分子量大小為約49kDa。
此外，用常規(guī)方法對達蛋白的N端和C端各10個氨基酸長度的氨基酸進行測序，發(fā)現(xiàn)與SEQ ID NO.4的序列一致。
實施例4IMYPNO1在真核細胞(CHO細胞株)中的表達在該實施例中，用對應(yīng)于編碼IMYPNO1的cDNA序列的5′和3′端的PCR寡核苷酸引物進行擴增，獲得IMYPNO1 cDNA作為插入片段。
PCR反應(yīng)中使用的5′寡核苷酸引物序列為5′-TAGGGGATCCATGCCCTCCGAAGCTGACA-3′(SEQ ID NO.5)該引物含有BamHI限制性內(nèi)切酶的酶切位點，在該酶切位點之后是由起始密碼子開始的IMYPNO1編碼序列的19個核苷酸；3′端引物序列為5’-GTGAGAATTCCTAGTGCATGTCAGAGTTT-3’(SEQ ID NO.7)該引物含有EcoRI限制性內(nèi)切酶的酶切位點、一個翻譯終止子和IMYPNO1的部分編碼序列。
引物上的限制性內(nèi)切酶的酶切位點對應(yīng)于CHO細胞表達載體pcDNA3上的限制性內(nèi)切酶酶切位點，該質(zhì)粒載體編碼抗生素抗性(Ampr和Neor)、一個噬菌體復(fù)制起點(f1 ori)、一個病毒復(fù)制起點(SV40 ori)、一個T7啟動子、一個病毒啟動子(P-CMV)、一個Sp6啟動子、一個SV40啟動子、一個SV40加尾信號和相應(yīng)的polyA順序、一個BGH加尾信號和相應(yīng)的polyA順序。
用BamHI消化pcDNA3載體以及插入片段，隨后將插入片段連接到pcDNA3載體。隨后用連接混合物轉(zhuǎn)化E.coli DH5α菌株。在含有Amp的LB培養(yǎng)皿上篩選轉(zhuǎn)化子，在補加Amp(100μg/ml)的LB液體培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)(O/N)含所需構(gòu)建物的克隆。抽提質(zhì)粒，測序驗證IMYPNO1的cDNA片段已正確插入了載體。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細胞是采用脂轉(zhuǎn)染法，用Lipofectin試劑盒(GiBco Life)進行的。轉(zhuǎn)染48小時后，經(jīng)2-3周的持續(xù)G418加壓篩選，收集細胞及細胞上清測定表達蛋白酶活力。去G418，連續(xù)傳代培養(yǎng)；對混合克隆細胞極限稀釋，選擇具有較高蛋白活性的細胞亞克隆。按常規(guī)方法大量培養(yǎng)上述陽性亞克隆。48小時后，開始收集細胞及上清，用超聲裂解方法破碎細胞。以含0.05％Triton的50mMTris·HCl(pH7.6)溶液為平衡液及洗脫液，用經(jīng)預(yù)平衡的Superdex G-75柱收集上述蛋白的活性峰。再用50mM Tris·HCl(pH8.0)平衡的DEAE-Sepharose柱，以含0-1M NaCl的50mM Tris·HCl(pH8.0)溶液為洗脫液進行梯度洗脫，收集上述蛋白的活性峰。然后以PBS(pH7.4)為透析液對表達蛋白溶液進行透析。最后凍干保存。
用12％的SDS-PAGE膠進行電泳，鑒定表達蛋白的分子量大小為49kDa。
此外，用常規(guī)方法對達蛋白的N端和C端各10個氨基酸長度的氨基酸進行測序，發(fā)現(xiàn)與SEQ ID NO.4的序列一致。
實施例5制備抗體將實施例3和4中獲得的重組蛋白用來免疫動物以產(chǎn)生抗體，具體如下。重組蛋白用層析法進行分離后備用。也可用SDS-PAGE凝膠電泳法進行分離，將電泳條帶從凝膠中切下，并用等體積的完全Freund’s佐劑乳化。用50-100μg/0.2ml乳化過的蛋白，對小鼠進行腹膜內(nèi)注射。14天后，用非完全Freund’s佐劑乳化的同樣抗原，對小鼠以50-100μg/0.2ml的劑量進行腹膜內(nèi)注射以加強免疫。每隔14天進行一次加強免疫，至少進行三次。獲得的抗血清的特異反應(yīng)活性用它在體外沉淀IMYPNO1基因翻譯產(chǎn)物的能力加以評估。
在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
序列表(1)一般信息(i)申請人上海新黃浦復(fù)旦基因工程有限公司(ii)發(fā)明名稱新的人蛋白質(zhì)磷酸酯酶亞基、其編碼序列及制備方法(iii)序列數(shù)目7(2)SEQ ID NO.1的信息(i)序列特征(A)長度23堿基(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型寡核苷酸(xi)序列描述SEQ ID NO.1CTGCGGGACC ACAGCTATGT GAC23(2)SEQ ID NO.2的信息(i)序列特征(A)長度23堿基(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型寡核苷酸(xi)序列描述SEQ ID NO.2CAGCTGTCCT CATCAGTGCT GTG23(2)SEQ ID NO.3的信息(i)序列特征(A)長度1492bp(B)類型核酸
(C)鏈性單鏈(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型cDNA(xi)序列描述SEQ ID NO.31 CTGCGGGACC ACAGCTATGT GACTGAAGGT AACGTACGTG TTGTCTGAGA CCCCTCCGGC61 CGGCCGCGGC GTGGGGATGC CTCGCACCGA ATGCCCTCCG AAGCTGACAT CATCTCTACC121 GTTGAGTTCA ACCACACGGG AGAGCTGCTG GCCACAGGTG ACAAGGGCGG CCGGGTCGTC181 ATCTTCCAGC GGGAACCAGA GAGTAAAAAT GCGCCCCACA GCCAGGGCGA CTACGACGTG241 TACAGCACTT TCCAGAGCCA CGAGCCGGAG TTTGACTATC TCAAGAGCCT GGAGATAGAG301 GAGAAGATCA ACAAGATCAA GTGGCTCCCA CAGCAGAACG CCGCCCACTC ACTCCTGTCC361 ACCAACGATA AAACTATCAA ATTATGGAAG ATTACCGAAC GAGATAAAAG GCCCGAAGGA421 TACAACCTGA AGGATGAAGA GGGGAAACTT AAGGACCTGT CCACGGTGAC GTCACTGCAG481 GTGCCAGTGC TGAAGCCCAT GGATCTGATG GTGGAGGTGA GCCCTCGGAG GATCTTTGCC541 AATGGCCACA CCTACCACAT CAACTCCATC TCCGTCAACA GTGACTGCGA GACCTACATG601 TCGGCGGATG ACCTGCGCAT CAACCTCTGG CACCTGGCCA TCACCGACAG GAGCTTCAAC661 ATCGTGGACA TCAAGCCGGC CAACATGGAG GACCTTACGG AGGTGATCAC AGCATCTGAG721 TTCCATCCGC ACCACTGCAA CCTCTTCGTC TACAGCAGCA GCAAGGGCTC CCTGCGGCTC781 TGCGACATGC CGGCAGCTGC CCTGTGTGAC AAGCATTCCA AGCTCTTTGA AGAGCCTGAG841 GACCCCAGTA ACCGCTCATT CTTCTCGGAA ATCATCTCCT CCGTGTCCGA CGTGAAGTTC901 AGCCACAGCG ACCGCTACAT GCTCACCCGG GACTACCTTA CAGTCAAGGT CTGGGACCTG961 AACATGGAGG CAAGACCCAT AGAGACCTAC CAGGTCCATG ACTACCTTCG GAGCAAGCTC1021 TGTTCCCTGT ACGAGAACGA CTGCATTTTC GACAAGTTTG AATGTGCCTG GAACGGGAGC1081 GACAGTTCAA TCATGACCGG GGCCTACAAC AACTTCTTCC GCATGTTCGA TCGGAACACC1141 AAGCGGGACG TGACCCTGGA GGCCTCGAGG GAAAGCAGCA AGCCCCGGGC TGTGCTCAAG1201 CCACGGCGCG TGTGCGTGGG GGGCAAGCGC CGGCGTGATG ACATCAGTGT GGACAGCTTG1261 GACTTCACCA AGAAGATCCT GCACACGGCC TGGCACCCGG CTGAGAACAT CATTGCCATC1321 GCCGCCACCA ACAACCTGTA CATCTTCCAG GACAAGGTAA ACTCTGACAT GCACTAGGTA1381 TGTGCAGTTC CCGGCCCCTG CCACCCAGCC TCATGCAAGT CATCCCCGAC ATGACCTTCA1441 CGACCGCAAT GCAAGGAGGG GAAGAAAGTC ACAGCACTGA TGAGGACAGC TG(2)SEQ ID NO.4的信息(i)序列特征
(A)長度428個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型多肽(xi)序列描述SEQ ID NO.41 Met Pro Ser Glu Ala Asp Ile Ile Ser Thr Val Glu Phe Asn His16 Thr Gly Glu Leu Leu Ala Thr Gly Asp Lys Gly Gly Arg Val Val31 Ile Phe Gln Arg Glu Pro Glu Ser Lys Asn Ala Pro His Ser Gln46 Gly Asp Tyr Asp Val Tyr Ser Thr Phe Gln Ser His Glu Pro Glu61 Phe Asp Tyr Leu Lys Ser Leu Glu Ile Glu Glu Lys Ile Asn Lys76 Ile Lys Trp Leu Pro Gln Gln Asn Ala Ala His Ser Leu Leu Ser91 Thr Asn Asp Lys Thr Ile Lys Leu Trp Lys Ile Thr Glu Arg Asp106 Lys Arg Pro Glu Gly Tyr Asn Leu Lys Asp Glu Glu Gly Lys Leu121 Lys Asp Leu Ser Thr Val Thr Ser Leu Gln Val Pro Val Leu Lys136 Pro Met Asp Leu Met Val Glu Val Ser Pro Arg Arg Ile Phe Ala151 Asn Gly His Thr Tyr His Ile Asn Ser Ile Ser Val Asn Ser Asp166 Cys Glu Thr Tyr Met Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ile Asn Leu Trp181 His Leu Ala Ile Thr Asp Arg Ser Phe Asn Ile Val Asp Ile Lys196 Pro Ala Asn Met Glu Asp Leu Thr Glu Val Ile Thr Ala Ser Glu211 Phe His Pro His His Cys Asn Leu Phe Val Tyr Ser Ser Ser Lys226 Gly Ser Leu Arg Leu Cys Asp Met Pro Ala Ala Ala Leu Cys Asp241 Lys His Ser Lys Leu Phe Glu Glu Pro Glu Asp Pro Ser Asn Arg256 Ser Phe Phe Ser Glu Ile Ile Ser Ser Val Ser Asp Val Lys Phe271 Ser His Ser Asp Arg Tyr Met Leu Thr Arg Asp Tyr Leu Thr Val286 Lys Val Trp Asp Leu Asn Met Glu Ala Arg Pro Ile Glu Thr Tyr301 Gln Val His Asp Tyr Leu Arg Ser Lys Leu Cys Ser Leu Tyr Glu316 Asn Asp Cys Ile Phe Asp Lys Phe Glu Cys Ala Trp Asn Gly Ser331 Asp Ser Ser Ile Met Thr Gly Ala Tyr Asn Asn Phe Phe Arg Met346 Phe Asp Arg Asn Thr Lys Arg Asp Val Thr Leu Glu Ala Ser Arg361 Glu Ser Ser Lys Pro Arg Ala Val Leu Lys Pro Arg Arg Val Cys376 Val Gly Gly Lys Arg Arg Arg Asp Asp Ile Ser Val Asp Ser Leu391 Asp Phe Thr Lys Lys Ile Leu His Thr Ala Trp His Pro Ala Glu406 Asn Ile Ile Ala Ile Ala Ala Thr Asn Asn Leu Tyr Ile Phe Gln421 Asp Lys Val ASn Ser Asp Met His(2)SEQ ID NO.5的信息(i)序列特征(A)長度29堿基(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型寡核苷酸(xi)序列描述SEQ ID NO.5TAGGGGATCC ATGCCCTCCG AAGCTGACA 29(2)SEQ ID NO.6的信息(i)序列特征(A)長度29堿基(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型寡核苷酸(xi)序列描述SEQ ID NO.6GTGAAAGCTT CTAGTGCATG TCAGAGTTT 29(2)SEQ ID NO.7的信息(i)序列特征(A)長度29堿基(B)類型核酸(C)鏈性單鏈(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型寡核苷酸(xi)序列描述SEQ ID NO.7GTGAGAATTC CTAGTGCATG TCAGAGTTT 29
權(quán)利要求
1.一種分離出的DNA分子，其特征在于，它包括編碼具有人IMYPNO1蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列雜交。
2.如權(quán)利要求1所述的DNA分子，其特征在于，所述的序列編碼一多肽，該多肽具有SEQ ID NO.4所示的序列。
3.如權(quán)利要求1所述的DNA分子，其特征在于，該序列具有SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列。
4.一種分離的IMYPNO1蛋白多肽，其特征在于，它包括具有SEQ ID NO.4氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。
5.如權(quán)利要求4所述的多肽，其特征在于，該多肽是具有SEQ ID NO.4序列的多肽。
6.一種載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求1所述的DNA。
7.一種用權(quán)利要求6所述載體轉(zhuǎn)化的宿主細胞。
8.如權(quán)利要求7所述的宿主細胞，其特征在于，該細胞是大腸桿菌。
9.如權(quán)利要求7所述的宿主細胞，其特征在于，該細胞是真核細胞。
10.一種產(chǎn)生具有IMYPNO1蛋白活性的多肽的方法，其特征在于，該方法包括(a)將編碼具有IMYPNO1蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調(diào)控序列，形成IMYPNO1蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位的核苷酸序列有至少70％的同源性；(b)將步驟(a)中的表達載體轉(zhuǎn)入宿主細胞，形成IMYPNO1蛋白的重組細胞；(c)在適合表達IMYPNO1蛋白多肽的條件下，培養(yǎng)步驟(b)中的重組細胞；(d)分離出具有IMYPNO1蛋白活性的多肽。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，該序列為SEQ ID NO.3中從核苷酸91-1377位。
12.一種能與權(quán)利要求4所述的IMYPNO1蛋白多肽特異性結(jié)合的抗體。
13.一種核苷酸分子，其特征在于，它是權(quán)利要求1所述DNA分子的反義序列。
14.一種探針分子，其特征在于，它含有權(quán)利要求1所述的DNA分子中約8-100個連續(xù)核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的人基因核苷酸序列。更具體地,本發(fā)明提供人IMYPNO1的cDNA序列,該蛋白是兔蛋白質(zhì)磷酸酯酶2A1(protein phosphatase 2A1,簡稱“PP2A1”)的B－gama亞基蛋白的同系物。本發(fā)明還提供由該核苷酸序列編碼的多肽,這些多核苷酸和多肽的應(yīng)用,以及所述多核苷酸和所述多肽的生產(chǎn)方法。
文檔編號C12N15/11GK1250096SQ9812092
公開日2000年4月12日 申請日期1998年10月5日 優(yōu)先權(quán)日1998年10月5日
發(fā)明者余龍, 屠強, 畢安定, 趙勇, 趙壽元 申請人:上海新黃浦復(fù)旦基因工程有限公司