專利名稱：診斷和評(píng)定既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病素因的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及診斷和評(píng)定既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BAD)素因的方法。
背景技術(shù)：
BAD是影響1-2％人口的特征在于情緒波動(dòng)的疾病(狂躁和抑郁)。孿生和族研究表明該疾病具有強(qiáng)的遺傳成分。但是，其具有復(fù)雜的遺傳基礎(chǔ)并且加大的易感性可能源于許多獨(dú)特基因的相互作用。在不同的染色體位置鑒定到許多陽(yáng)性連鎖，其支持復(fù)雜遺傳病因?qū)W模型。已經(jīng)報(bào)道過(guò)染色體4p,18p,18q和21q上可能的易感性基因座(Berrettini等，1994；Straub等，1994；Gurling等，1995；Stine等，1995；Blackwood等，1996；De bruyn等，1996；Coon等，1996；Freimer等，1996)。但是，還沒(méi)有鑒定到誘病基因。本發(fā)明人對(duì)來(lái)自有BAD歷史的大的澳大利亞家系35個(gè)人進(jìn)行了214微衛(wèi)星標(biāo)記的15-cM基因組篩選。使用幾種診斷模型通過(guò)參數(shù)兩點(diǎn)連鎖方法來(lái)分析數(shù)據(jù)。對(duì)于21個(gè)標(biāo)記得到優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)＞1.00，對(duì)于至少一個(gè)模型，其中4個(gè)＞2.00。然后用這4個(gè)標(biāo)記對(duì)該家族其余的52個(gè)人確定基因型，對(duì)于3個(gè)標(biāo)記，優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)保持正值。在對(duì)于染色體4q35獲得的最陽(yáng)性的結(jié)果的這些區(qū)域中進(jìn)行更深入的篩選。使用具有90％最大年齡特異性外顯率并且感染Ⅰ期，Ⅱ期既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病，情感性分裂/狂躁和非既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病個(gè)體的遺傳顯性模型，在D4S1652得到最大兩點(diǎn)優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)2.20(θ=0.15)，并且在D4S408和D4S2924之間得到最大三點(diǎn)優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)3.19。非參數(shù)分析進(jìn)一步支持染色體4q35上誘病基因座的存在。應(yīng)用GENEHUNTER程序在D4S1652和D4S171之間得到最大化分?jǐn)?shù)2.62(p=0.01)，應(yīng)用感染的家系成員(APM)方法在D4S2914獲得最大分?jǐn)?shù)3.57(p=0.0002)。對(duì)另外23個(gè)家系的分析提示在至少3個(gè)另外的家族中存在該易感性基因座，表明誘病易感性基因座和非家系特異性突變。該結(jié)果提示在染色體4q35上存在BAD易感性基因座。
發(fā)明概述第一方面，本發(fā)明提供評(píng)定個(gè)體既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BAD)素因的方法，包括測(cè)定染色體4上存在BAD-連鎖標(biāo)記步驟。
優(yōu)選地，該方法包括測(cè)定在染色體基因座4q35上存在的BAD-連鎖標(biāo)記。
該方法可以包括單一BAD-連鎖標(biāo)記的測(cè)定，但是更優(yōu)選地，涉及存在至少兩個(gè)BAD-連鎖標(biāo)記的測(cè)定。優(yōu)選地，BAD-連鎖標(biāo)記是微衛(wèi)星標(biāo)記。更優(yōu)選地，BAD-連鎖標(biāo)記選自D4S1652,D4S408,D4S171和D4S2924。
優(yōu)選地，測(cè)定BAD-連鎖標(biāo)記存在的步驟包括PCR擴(kuò)增和凝膠電泳來(lái)測(cè)定給定標(biāo)記的特異性微衛(wèi)星等位基因的存在。
第二方面，本發(fā)明提供評(píng)定個(gè)體既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BAD)素因的方法，包括分析與個(gè)體染色體4上BAD-易感性基因相關(guān)的等位基因變異步驟。
優(yōu)選地，第二方面的方法包括分析染色體基因座4q35處等位基因變異。
優(yōu)選地，分析等位基因變異的步驟包括通過(guò)PCR擴(kuò)增和凝膠電泳測(cè)定微衛(wèi)星等位基因。
進(jìn)一方面，本發(fā)明提供診斷個(gè)體既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BAD)素因的方法，包括測(cè)定染色體4上存在BAD-連鎖標(biāo)記的步驟，或者分析與染色體4上BAD-易感性基因相關(guān)的等位基因變異步驟。
在后一方面，本發(fā)明可以與用于其它易感性標(biāo)記(例如染色體基因座21q22(Straub等，1994),18p(Berretini等，1994)和18q(Freimer等，1996)處的標(biāo)記)的類似篩選結(jié)合，從而可以提供有價(jià)值的臨床試驗(yàn)。這樣的試驗(yàn)的一個(gè)例子是其中對(duì)病人例如篩選12個(gè)易感性基因座。如果試驗(yàn)是，例如大于6陽(yáng)性的，則是高危類。
本發(fā)明可以用來(lái)指導(dǎo)易感性基因的克隆和鑒定導(dǎo)致對(duì)攜帶者提供相對(duì)更高危險(xiǎn)的基因等位變異的易感性基因中等位基因變異。對(duì)于這樣的等位基因變異的直接測(cè)試將是優(yōu)選的診斷測(cè)試。本發(fā)明方法可以使阻斷或增強(qiáng)該基因作用的藥物的鑒定能進(jìn)一步在臨床治療既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病中有價(jià)值。
因此，第三方面，本發(fā)明提供來(lái)自人染色體基因座4q35的包含BAD易感性基因的分離的多核苷酸分子。
說(shuō)明書(shū)自始至終使用的術(shù)語(yǔ)“包含”，“包括”和“含有”意指包容所述步驟，成分，步驟的成分或性質(zhì)或團(tuán)組，有或沒(méi)有進(jìn)一步包容步驟成分，步驟的成分或性質(zhì)或團(tuán)組，成分或性質(zhì)。
發(fā)明的詳細(xì)公開(kāi)材料和方法家族該項(xiàng)研究中利用的家族來(lái)自澳大利亞大部分洲，并且通過(guò)情緒性疾病單位，Prince Henry醫(yī)院，Sydney；Nw South Wales抑郁和情緒性疾病學(xué)會(huì)的調(diào)查；和公開(kāi)雜志中的文章所公布的而確定。應(yīng)用用于基因研究的診斷訪記(DIGS)(Nurnberger等，1994)對(duì)這些家族評(píng)價(jià)，并且在所有的訪記和記錄獨(dú)立評(píng)價(jià)之后作出最好評(píng)價(jià)調(diào)查診斷標(biāo)準(zhǔn)(RDC)診斷法。在該項(xiàng)研究中使用其DNA的個(gè)人提供了合適的通知同意。吸收中等至大規(guī)模多世代家系，其中包括最少3個(gè)已經(jīng)感染的個(gè)體，其中最少2個(gè)診斷帶有Ⅰ期既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病。在最初基因篩選中利用的家族包括帶有DNA樣品的87名成員，包括11名已經(jīng)感染的個(gè)體；5名Ⅰ期既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BPⅠ),1名情感性分裂/狂躁(SZ/MA)和5名復(fù)發(fā)非既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(UP)(Mitchell等，1991)。根據(jù)SLINK(Ott 1989；Weeks等，1990)的測(cè)定，對(duì)于該家族的最大和平均預(yù)期的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)是8.64和3.95。用相同方法確定的10個(gè)以上家系就從基因組篩選中鑒定的最陽(yáng)性區(qū)域標(biāo)記分類。這些家系由137個(gè)進(jìn)行確定基因型的個(gè)體組成，包括47名感染者(22名BPⅠ；2名SZ/MA；4名Ⅱ工期既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BPⅡ)和19名UP)。根據(jù)SLINK測(cè)定對(duì)這些家系綜合了設(shè)想同質(zhì)性分別是19.79和8.44下的最大和平均預(yù)期的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)，和設(shè)想異質(zhì)性分別是19.68和4.99下的最大和平均優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)。也對(duì)包括包括51名感染者(30名BPⅠ；9名SZ/MA；2名BPⅡ和10名UP)的182名個(gè)體的13個(gè)家系的進(jìn)一步的樣品測(cè)試了連鎖的存在。
確定基因型用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)從全血中提取DNA。分析的微衛(wèi)星標(biāo)記來(lái)自CHLC數(shù)據(jù)庫(kù)和基因組數(shù)據(jù)庫(kù)(GDB)。由Research Genetics Inc進(jìn)行CHLC標(biāo)記的確定基因型。在含有60ngDNA,375μM dATP,dCTP,dGTP和dTTP,5μM各種引物(正向引物是用6-Fam或Tet熒光染料標(biāo)記的)，2.5mM MgCl2,1/10體積的10X PCR緩沖液Ⅱ(PE Applied Biosystems)和0.6單位AmpliTaqGold聚合酶(PE Applied Biosystems)的15μl體積中進(jìn)行GDB的PCR。用加熱墊在Hybaid OmniGene熱循環(huán)儀上擴(kuò)增樣品。用下面的形式進(jìn)行DNA擴(kuò)增95℃12分鐘；94℃15秒，10個(gè)循環(huán)，55℃15秒，72℃30秒；89℃15秒，20個(gè)循環(huán)，55℃15秒，72℃30秒；72℃30分鐘和35℃30分鐘。樣品在dH20中稀釋1/10倍，并且將1.5μl加入到載有染料的混合物(2.5μl甲酰胺，0.5μl藍(lán)葡聚糖[50mM EDTA,50mg/ml藍(lán)葡聚糖]，0.5μl GS500 Tamra大小標(biāo)準(zhǔn)(PE Applied Biosystems))中。將每種樣品的1.5μl負(fù)載到4％變性的聚丙烯酰胺凝膠上并且在ABI377測(cè)序儀上電泳。用2.0.2版Genescan程序(PE Applied Biosystems)檢測(cè)產(chǎn)物，并且用1.1.1版Genotyper程序(PE Applied Biosystems)設(shè)計(jì)等位基因。所有確定基因型用對(duì)臨床診斷不知的個(gè)體進(jìn)行。
使用染色體4q35標(biāo)記，并且它們之間的距離(以cM計(jì))如從http:∥cedar.genetics.soton.ac.uk/pub/chrom4/gmap中獲得的從著絲體至q末端方向是
D4S2417-9.2-D4S2951-4.3-D4S3041-3.1-D4S1554-0.4-D4S2920-4.4-D4S2954-3.4-D4S1535-1.0-D4S408-4.7-D4S2924-2.5-D4S171-0.04-D4S3051-0.4-D4S3032-0.04-D4S426-1.7-D4S2930-0.003-D4S1652.
D4S1652是報(bào)道的4q上的最遠(yuǎn)側(cè)的多態(tài)微衛(wèi)星標(biāo)記。也可以使用該區(qū)域內(nèi)的另外的微衛(wèi)星，單一的核苷酸多態(tài)性或VNTR標(biāo)記。
使用的引物見(jiàn)表1。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用5.2版LINKAGE文件包中的MLINK程序(Lathrop等，1984)計(jì)算各標(biāo)記和疾病之間的兩點(diǎn)優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)。分析了兩種疾病界線Ⅰ型考慮到感染的所有的BPⅠ,BPⅡ和SZ/MA個(gè)體，而所有其它家族成員被認(rèn)為是未感染的。Ⅱ型考慮到來(lái)自Ⅰ型的所有的感染的個(gè)體和感染的所有UP個(gè)體，并且所有其它家族成員被認(rèn)為是未感染的。
利用了具有最大年齡特異性外顯率水平60％或90％并且各自包括4個(gè)傾向級(jí)(1＜20歲，2=20-29歲，3=30-39歲和4≥40歲)的兩個(gè)外顯率組。90％外顯率組中傾向組確定外顯率為0.18,0.45,0.68和0.90，而60％組中的那些確定為外顯率為0.12,0.30,0.45和0.60。對(duì)顯性和隱性模型進(jìn)行了分析，對(duì)于顯性模型的疾病等位基因頻率是0.035，對(duì)于隱性模型的是0.20。也用顯性和疾病等位基因頻率，其分別是0.10和0.20分析了數(shù)據(jù)。應(yīng)用LINKAGE軟件包中的LINKMAP程序進(jìn)行了研究染色體4q35上的15個(gè)標(biāo)記的多點(diǎn)分析。所使用的診斷和外顯率模型組和用于兩點(diǎn)分析的一樣。應(yīng)用HOMOG程序(Ott1991)測(cè)試證明異質(zhì)性。
也使用了對(duì)同齡組中發(fā)現(xiàn)的更適于大規(guī)模家系研究中的三種非參數(shù)分析方法。這些非參數(shù)分析包括GENEHUNTER(Kruglyak等，1995),MFLINK(Curtis和Sham 1995)和APM(Weeks和Lange1988)程序。不存在非參數(shù)同胞對(duì)分析(這一點(diǎn)一般用較小或核家系通過(guò)其它組進(jìn)行)因?yàn)榧蚁低g組中少數(shù)獨(dú)立的同胞對(duì)不能提供足夠的統(tǒng)計(jì)學(xué)力度來(lái)得出明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)論。
基因組掃描用來(lái)自微衛(wèi)星標(biāo)記的Weber(CHLC)6和6a系列的202個(gè)標(biāo)記對(duì)來(lái)自01家族的35名最有信息的個(gè)體進(jìn)行大約15cM基因組篩選。沒(méi)有對(duì)染色體確定基因型，因?yàn)檫@些個(gè)體的每一個(gè)事先已經(jīng)對(duì)12個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記確定基因型(Adams等，1997)。這35名個(gè)體是從用于該最初篩選的整個(gè)家系中挑選的，因?yàn)樗鼈兲峁┳銐虻牧Χ葋?lái)檢測(cè)連鎖，通過(guò)SLINK測(cè)定的最大優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)是6.43。應(yīng)用LINKAGE套中的MLINK程序分析所有的數(shù)據(jù)。用60％和90％最大年齡特異性外顯率水平用顯性和隱性遺傳模型分析疾病模型Ⅰ(窄定義，其中只是將BPⅠ,BPⅡ和SZ/MA分類為感染)和Ⅱ(寬定義，其中將BPⅠ,BPⅡ,SZ/MA和UP分類為感染)。應(yīng)用SLINK模擬，沒(méi)有來(lái)自對(duì)于給定遺傳和診斷模型的214標(biāo)記基因組篩選的標(biāo)記預(yù)期隨機(jī)給出大于3.00的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)，預(yù)期少于一個(gè)標(biāo)記隨機(jī)給出大于2.00的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)。對(duì)于至少一個(gè)診斷模型對(duì)于分析標(biāo)記的21個(gè)獲得大于1.00的兩點(diǎn)優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)，而其中4個(gè)給出大于2.00的分?jǐn)?shù)。給出大于2.00優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)的4個(gè)標(biāo)記是D1S518(優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)=2.42模型Ⅰ,90％顯性)；D4S1652(優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)=2.39；模型Ⅱ,90％顯性)；D5S807(優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)=2.12；模型Ⅱ,90％顯性)和D5S1470(優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)=2.92；模型Ⅱ,90％顯性)，之后對(duì)每一個(gè)進(jìn)行更詳細(xì)分析。
對(duì)可得到DNA樣品的01家族另外52個(gè)個(gè)體分析定型給出大于2.00優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)的4個(gè)標(biāo)記，并且對(duì)整個(gè)家族進(jìn)行了兩點(diǎn)分析。對(duì)于D1S518優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)從2.42減小到0.20，因此進(jìn)一步的分析中取消了染色體1。兩個(gè)染色體5標(biāo)記，D5S807和D5S1470優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)大約相距位于31cM，保持大于1.00(表2)。分析染色體5p上其它7個(gè)標(biāo)記，其中一個(gè)，D5S1492給出1.00優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)(表2)。
4q35處的潛在的易感性基因座染色體4q35標(biāo)記D4S1652是對(duì)整個(gè)家族分類后唯一一個(gè)優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)保持2.00以上的。對(duì)于遺傳顯性模型和90％最大年齡特異性外顯率的模型Ⅱ，在θ=0.20處獲得2.20最大優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)。對(duì)于跨越大約35cM染色體4q遠(yuǎn)側(cè)臂的其它14個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記獲得87個(gè)家系成員的基因型。數(shù)據(jù)的兩點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn)間隔大約10cM的7個(gè)標(biāo)記具有大于1.00的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)(表3),D4S1652仍然具有最大兩點(diǎn)分?jǐn)?shù)。為了確定這些連鎖產(chǎn)生的強(qiáng)度，對(duì)多種模型參數(shù)標(biāo)記變化，包括疾病等位基因頻率，外顯率水平和擬表型比例，來(lái)確定它們?cè)鯓佑绊懽畲髢?yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)。發(fā)現(xiàn)這些標(biāo)記的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)對(duì)于這些變化相對(duì)強(qiáng)(表4)，所有值保持正值，支持染色體4q35處易感性基因座的存在。
4q35基因座的進(jìn)一步分析應(yīng)用LINKAGE套的LINKMAP程序進(jìn)行15個(gè)4q35標(biāo)記的序列對(duì)之間的三點(diǎn)連鎖分析。對(duì)于具有遺傳顯性模型和90％最大年齡特異性外顯率水平的模型Ⅱ在D4S408和D4S2924之間獲得3.19最大分?jǐn)?shù)(表1a)。該分?jǐn)?shù)也是強(qiáng)的，因?yàn)閷⒆畲竽挲g特異性外顯率水平降低到60％，仍然導(dǎo)致3.19最大分?jǐn)?shù)(
圖1b)。盡管明確的遺傳或診斷模型的缺乏導(dǎo)致多個(gè)假設(shè)試驗(yàn)，但是兩點(diǎn)(表4)和三點(diǎn)連鎖分析一致性的陽(yáng)性結(jié)果表明數(shù)據(jù)的一致性比如果只是在試驗(yàn)的模型中的一些模型中發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的情況更大。
也使用了非參數(shù)分析方法來(lái)分析數(shù)據(jù)。應(yīng)用GENEHUNTER程序(Kruglyak等，1996)提供了進(jìn)一步的支持。對(duì)于所有的87名個(gè)體來(lái)說(shuō)，01家族太大，不能同時(shí)分析，不得不對(duì)GENEHUNTER編程進(jìn)行。在跨越D4S1652和D4S171的區(qū)域獲得2.62最大分?jǐn)?shù)(p=0.01)。但是，根據(jù)家系再分的方式，GENEHUNTER分?jǐn)?shù)范圍從2.62(p=0.01)高值至0.59(p=0.16)低值。對(duì)于4q35處的基因座，APM程序(Weeks和Lange,1988)也提供了有限的支持，對(duì)于D4S2924,f(q)=1，分?jǐn)?shù)是3.57(p=0.0002)，對(duì)于f(q)=1/√q，分?jǐn)?shù)是1.97(p=0.0245)。對(duì)于其它染色體4基因座沒(méi)有獲得明顯的APM分?jǐn)?shù)。也應(yīng)用了MFLINK程序(Curtis和Sham 1995)來(lái)分析數(shù)據(jù)。在D4S171和D4S2924之間獲得陽(yáng)性的但是不明顯的分?jǐn)?shù)1.43。
其它家系中對(duì)于4q35基因座的支持對(duì)我們一幫中另外10個(gè)家系對(duì)染色體4q35處的4個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記(D4S1652,D4S171,D4S2924,D4S408)確定基因型。使用具有顯性遺傳和90％最大年齡特異性外顯率的寬診斷模型(模型Ⅱ)對(duì)所有11個(gè)家系的兩點(diǎn)連鎖分析給出在D4S1652處θ=0.20時(shí)最大分?jǐn)?shù)2.03，表明總的來(lái)說(shuō)另外10個(gè)家系沒(méi)有對(duì)與染色體4q35連鎖的發(fā)現(xiàn)提供另外的支持，但是也沒(méi)有反駁。對(duì)于D4S171的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)是1.46(θ=0.25)，而對(duì)于其它兩個(gè)標(biāo)記的分?jǐn)?shù)小于1.00。
對(duì)于另外確定基因型的家系，家族11對(duì)于D4S1652標(biāo)記給出1.07優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)，其是SLINK分析所預(yù)期的100％最大優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)，因此表明該家族中的連鎖也是可能的。對(duì)于標(biāo)記D4S171和D4S408也獲得了大于0.80的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)。為了能夠建立初步的疾病簡(jiǎn)單類型，對(duì)家族11的成員在4q35處的其它3個(gè)標(biāo)記(D4S2930,D4S426和D4S3032)確定基因型，并且獲得陽(yáng)性優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)D4S2930=0.61(θ=0.00),D4S426=1.08(θ=0.00)和D4S3032=0.14(θ=0.20)。具有7個(gè)標(biāo)記的家族11的三點(diǎn)分析在D4S2930和D4S1652之間產(chǎn)生1.16最大優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)。
兩個(gè)另外的家族對(duì)于4個(gè)標(biāo)記(D4S1652,D4S171,D4S408和D4S2924)獲得小的陽(yáng)性結(jié)果，但是當(dāng)與模擬分析(數(shù)據(jù)沒(méi)有給出)獲得的結(jié)果相比較時(shí)，這些結(jié)果中沒(méi)有一個(gè)是統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯的或代表最大可能的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)的主要部分。應(yīng)用HOMOG程序(Ott,1991)的異質(zhì)性分析給出D4S1652(P＜0.05)和D4S171(p＜0.01)與BAD連鎖的統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯的證明，但是對(duì)于異質(zhì)性沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯的證明。
對(duì)另外13個(gè)家系對(duì)6個(gè)標(biāo)記，D4S408,D4S2924,D4S171,D4S1652,D4S2954和D4S1535確定基因型。給出所有家族在具有顯性遺傳和90％最大年齡特異性外顯率的寬診斷模型下的兩點(diǎn)分析，在D4S1652處在q=0.3時(shí)最大優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)是1.44。在q=0.25時(shí)，D4S171的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)是1.15，而其它標(biāo)記的分?jǐn)?shù)小于1.00。
除了已經(jīng)充分描述的家族11外，在另外兩個(gè)家系，家族12和家族19中也可能是連鎖的。家族12的SLINK分析分別給出預(yù)期的平均和最大優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)0.4和0.67(q=0.1)。對(duì)于家族19，平均的和預(yù)期的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)分別是0.42和1.02。對(duì)于家族12獲得的最大優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)在D4S1652處在q=0.1時(shí)是0.63，以及對(duì)于家族19，在D4S2924處q=0.1時(shí)是0.57。
家族12的多點(diǎn)分析給出D4S1535和D4S171之間最大優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)是0.8。家族19的多點(diǎn)分析給出D4S2924和D4S171之間最大分?jǐn)?shù)是0.73。
討論大的澳大利亞BAD家系中214個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的基因組篩選導(dǎo)致對(duì)染色體4q35上新的既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病易感性基因座的鑒定。重要地，對(duì)于在模型中變化來(lái)說(shuō)，獲得的陽(yáng)性優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)是強(qiáng)的，即使當(dāng)在分析中使用60％最大年齡特異性外顯率水平時(shí)對(duì)于連鎖也提供強(qiáng)的支持(D4S408和D4S2924之間最大多點(diǎn)優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)是3.19)。此外，疾病等位基因頻率提高到0.20這樣高，或者擬表型發(fā)生率是0.10，仍然在4q35處給出陽(yáng)性結(jié)果，因此證明該發(fā)現(xiàn)的堅(jiān)定性。非參數(shù)分析的結(jié)果也對(duì)該連鎖結(jié)果提供了支持表1染色體4微衛(wèi)星引物
<p>表2對(duì)于全部87名家系對(duì)染色體5q標(biāo)記的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)。應(yīng)用感染情況模型Ⅱ進(jìn)行連鎖分析。
標(biāo)記 90％顯性 60％顯性 90％隱性 60％隱性D5S392 -10.34-1.28 -3.65-0.57D5S1492 1.00 0.80 0.79 0.72D5S2505 0.33 0.61 0.74 0.60D5S807 1.10 0.73 0.89 0.70D5S817 -2.25 -0.19 -0.11-0.05D5S1473 0.66 0.17 0.29 0.16D5S819 0.47 0.12 0.47 0.18D5S1470 1.03 0.41 0.43 0.42D5S2494 -1.94 0.12 0.23 0.17表3應(yīng)用具有最大年齡特異性外顯率水平是60％和90％的顯性傳遞的模型Ⅰ(窄疾病定義)和模型Ⅱ(寬疾病定義)對(duì)家族1對(duì)染色體4q35標(biāo)記的兩點(diǎn)優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)。粗體字表明優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)大于1.00。
基因座 重組部分0.000.05 0.10 0.150.20外顯率 90％60％90％60％90％60％90％60％90％60％模型1D4S2417-3.89 -2.18 -2.08 -1.18 -1.33 -0.76 -0.86 -0.49-0.55 -0.31D4S2951-2.54 -1.35 -0.91 -0.24 -0.280.120.070.27 0.25 0.33D4S3041 0.220.030.190.000.150.030.110.05 0.07 0.06D4S1554-3.45 -1.12 -1.45 -0.45 -0.77 -0.20 -0.41 -0.07-0.20 -0.01D4S2920 0.540.480.510.420.460.360.410.29 0.34 0.23D4S2954-1.54 -1.26 -0.72 -0.74 -0.46 -0.53 -0.32 -0.39-0.23 -0.29D4S1535-1.19 -0.73 -0.36 -0.25 -0.11 -0.080.01 -0.01 0.07 0.02D4S408 -3.66 -1.30 -1.50 -0.57 -0.81 -0.28 -0.44 -0.14-0.22 -0.06D4S2924-0.31 -0.30 -0.30 -0.26 -0.29 -0.22 -0.26 -0.17-0.21 -0.12D4S171 -6.12 -1.69 -2.75- 0.91 -1.65 -0.55 -1.02 -0.34-0.61 -0.21D4S3051-0.26 -0.18 -0.26 -0.15 -0.25 -0.12 -0.21 -0.08-0.15 -0.05D4S3032 0.080.130.080.110.080.080.080.00 0.06 0.04D4S426 -0.29 -0.24 -0.280.21 -0.27 -0.18 -0.24 -0.14-0.20 -0.10D4S2930-6.51 -1.87 -3.00 -1.08 -1.78 -0.68 -1.09 -0.44-0.66 -0.28D4S1652-6.50 -1.93 -2.60 -1.05 -1.43 -0.63 -0.80 -0.37-0.42 -0.22模型2D4S2417 -6.30-2.18-3.06-1.68-1.96-1.17-1.29-0.80-0.83-0.53D4S2951 -6.72-3.97-4.40-2.60-2.98-1.93-2.04-1.42-1.37-0.99D4S3041 -1.15-0.65-0.93-0.57-0.76-0.49-0.60-0.40 0.47-0.31D4S1554 -2.91-2.04-1.02-0.77-0.29-0.26 0.11 0.01 0.32 0.14D4S2920 -1.64-0.97-1.30-0.78-1.03 0.64-0.81-0.51 0.63-0.41D4S2954 -2.67-1.89-1.46-1.32-0.99-0.92-0.69-0.63-0.46-0.41D4S1535 -0.19-0.40 0.73 0.18 0.98 0.39 1.06 0.47 1.04 0.47D4S408 -0.39-0.04 1.27 0.87 1.66 1.13 1.75 1.17 1.67 1.10D4S2924 0.67 1.29 1.00 1.23 1.04 1.13 0.99 1.01 0.88 0.86D4S171 -0.86 0.74 1.34 1.38 1.87 1.55 2.03 1.56 1.98 1.45D4S3051 0.92 1.45 1.22 1.35 1.22 1.23 1.14 1.09 1.00 0.92D4S3032 -0.43-0.49-0.22-0.33-0.10-0.22-0.02-0.14 0.02-0.09D4S4260.60 1.24 0.93 1.18 0.98 1.09 0.94 0.97 0.84 0.83D4S2930 -1.57 0.51 0.63 1.15 1.28 1.34 1.53 1.37 1.57 1.28D4S1652 -0.02 1.68 1.76 2.02 2.15 2.02 2.20 1.89 2.07 1.69表4模型參數(shù)變化的優(yōu)勢(shì)對(duì)數(shù)分?jǐn)?shù)中的變異變數(shù) D4S1652 D4S171 D4S2924 D4S408正常*2.20 2.031.041.75擬表型％ 2.16 2.071.001.77擬表型10％ 1.15 1.480.211.42發(fā)病頻率10％ 2.21 2.031.041.75發(fā)病頻率20％ 2.22 2.051.041.74最大外顯率30％ 1.53 1.031.300.56最大外顯率12％ 1.00 0.611.020.25*正常=90％最大外顯率，疾病等位基因頻率是3.5％和擬表型比例是0.5％。參考文獻(xiàn)AdamsLJ,Salmon JA,Vivero C,Donald JA,Mitchell PB,SchofieldPR(1997)12個(gè)澳大利亞家系中既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病和染色體16之間連鎖的排除(exclusion of linkage between bipolaraffective disorder and chromosome 16 in 12 Australian Pedigrees)，美國(guó)醫(yī)藥遺傳雜志(Am.J.Med Genet)74:304-310。
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權(quán)利要求
1．評(píng)價(jià)個(gè)體既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BAD)素因的方法，包括測(cè)定染色體4上BAD-連鎖標(biāo)記的存在的步驟。
2．權(quán)利要求1的方法，其中該方法包括測(cè)定染色體基因座4q35處BAD-連鎖標(biāo)記的存在。
3．權(quán)利要求1或2的方法，其中BAD-連鎖標(biāo)記是微衛(wèi)星標(biāo)記。
4．權(quán)利要求3的方法，其中BAD-連鎖標(biāo)記選自D4S1652,D4S408,D4S171和D4S2924和它們的組合。
5．任一項(xiàng)前面權(quán)利要求的方法，其中測(cè)定BAD-連鎖標(biāo)記存在的步驟包括PCR擴(kuò)增和凝膠電泳。
6．評(píng)價(jià)個(gè)體既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BAD)素因的方法，包括分析與個(gè)體染色體4上BAD易感性基因相關(guān)的等位基因變異步驟。
7．權(quán)利要求6的方法，其中該方法包括分析染色體基因座4q35處的等位基因變異。
8．權(quán)利要求6或7的方法，其中分析等位基因變異的步驟包括通過(guò)PCR擴(kuò)增和凝膠電泳測(cè)定微衛(wèi)星等位基因。
9．診斷個(gè)體既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BAD)的方法，包括測(cè)定染色體4上BAD-連鎖標(biāo)記的存在或者分析與個(gè)體染色體4上BAD易感性基因相關(guān)的等位基因變異的步驟。
10．包含來(lái)自人染色體基因座4q35的既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BAD)易感性基因的分離的多核苷酸分子。
全文摘要
本發(fā)明涉及診斷和評(píng)價(jià)既有狂躁又有抑郁發(fā)作的情感性精神病(BAD)易感性的方法,該方法包括測(cè)定染色體4上BAD－連鎖標(biāo)記的存在或者分析與染色體4上BAD易感性基因相關(guān)的等位基因變異。
文檔編號(hào)C12N15/09GK1236396SQ98801140
公開(kāi)日1999年11月24日 申請(qǐng)日期1998年6月10日 優(yōu)先權(quán)日1997年6月10日
發(fā)明者P·R·肖菲爾德, P·B·米切爾, L·J·亞當(dāng)斯 申請(qǐng)人:加文醫(yī)學(xué)研究所