專利名稱：一種新的腫瘤抑制物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抑癌物質(zhì)，用于腫瘤的預防、治療與研究。
目前，抑制腫瘤的物質(zhì)種類繁多，如有絲分裂阻斷劑、免疫調(diào)節(jié)劑、細胞凋亡促進劑等等。但由于腫瘤發(fā)生機制的復雜性，目前尚無特效的腫瘤抑制物，腫瘤依然是嚴重威脅人類健康的重要疾病。因此，尋找新的更好的腫瘤抑制物一直是當今醫(yī)學的重大課題。
本發(fā)明的目的是提供一種新的腫瘤抑制物，用于腫瘤的預防、治療和研究。
本發(fā)明是一種新的抗癌基因以及該基因所表達的蛋白質(zhì)，具有抑制腫瘤生長的作用。該基因的堿基序列為AGTCTTCAAGATGCCAAACTGGGGCGGAGGCGCAAAATGTGGAGCCTGTGAAAAGACCGTCTACCATGCAGAAGAAATCCAGTGCAATGGAAGGAGTTTCCACAAGACGTGTTTCCACTGCATGGCCTGCAGGAAGGCTCTTGACAGCACGACAGTCGCGGCTCATGAGTCGGAGATCTACTGCAAGGTGTGCTATGGGCGCAGATATGGCCCCAAAGGGATCGGGTATGGACAAGGCGCTGGCTGTCTCAGCACAGACACGGGCGAGCATCTCGGCCTGCAGTTCCAACAGTCCCCAAAGCCGGCACGCTCAGTTACCACCAGCAACCCTTCCAAATTCACTGCGAAGTTTGGAGAGTCCGAGAAGTGCCCTCGATGTGGCAAGTCAGTCTATGCTGCTGAGAAGGTTATGGGAGGTGGCAAGCCTTGGCACAAGACCTGTTTCCGCTGTGCCATCTGTGGGAAGAGTCTGGAGTCCACAAATGTCACTGACAAAGATGGGGAACTTTATTGCAAAGTTTGCTATGCCAAAAATTTTGGCCCCACGGGTATTGGGTTTGGAGGCCTTACACAACAAGTGGAAAAGAAAGAATGAAGAGGTGCGCCGTTTCTCAGATTTTTTGCGAGCCTAAAACACTTGCCAAGTAATCCTGCACAGATCGATACCTTTCCCCAAATAGCCTCTCCTTTGTAGTCGTACATTATGTGTTTCTCCTCAGAAGTGATCAGGTCTTTACTGAATGTTAGAAGAGGCCTTTGGAAGAAAATTATGTAAAGTTTAATCTATAACAAATGCTTTATTATTTATAATGCTTGGAATGGGAGAGGCAATAAATAAATGTTTTAGTGCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA該基因表達的蛋白質(zhì)的氨基酸序列為MPATGGGALCGACGLTVTHAGGIGCAGASPHLTCPHCMACALALASTTVAAHGSGITCLVCTGAATGPLGIGTGGGAGCLSTATGGHLGLGPGGSPLPAASVTTSAPSLPTALPGGSGLCPACGLSVTAAGLVMGGGLPTHLTCPACAICGLSLGSTAVTALAGGLTCLVCTALAPGPTGIGPGGLTGGVGLLG本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的根據(jù)心肌細胞罕發(fā)腫瘤(惡性腫瘤更為少見)的特點，推測心肌細胞中存在某種抗癌基因并表達能夠抑制細胞癌變和抑制腫瘤細胞生長的蛋白質(zhì)。為尋找這種基因和蛋白質(zhì)，發(fā)明人首先建立胎心和胎身的遞減基因文庫，通過DNAchip和分子雜交，克隆和篩選到一種全長cDNA(hhLIM cDNA)，經(jīng)核酸序列測定確定其堿基序列并由此推導出其所表達的相應蛋白的氨基酸序列。應用hhLIM cDNA為探針，通過分子克隆的方法與人體50種組織進行Northern Blot和斑點雜交，證明這種基因特異性在成年和胚胎心肌表達。將hhLIM cDNA插入原核表達載體中，轉(zhuǎn)移至大腸桿菌，表達并純化hhLIM蛋白質(zhì)，經(jīng)Western分析和免疫組化證明，這種蛋白質(zhì)主要存在于心肌細胞內(nèi)。因此它是一種心肌細胞特異表達的蛋白質(zhì)。應用分子克隆的方法將hhLIM cDNA插入哺乳動物的表達載體，構(gòu)建含有hhLIM基因的真核表達載體。應用基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將該基因轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)的腫瘤細胞和成纖維細胞，可以明顯抑制腫瘤細胞的生長和成纖維細胞的異常增殖。在體內(nèi)，將hhLIM轉(zhuǎn)移到小鼠移植腫瘤細胞內(nèi)，可以明顯抑制腫瘤細胞的生長，抑制率可達60％以上。因此，hhLIM是一種心臟特異性表達的蛋白質(zhì)，可以抑制腫瘤細胞的生長。由于這種腫瘤抑制物屬機體天然存在的物質(zhì)，對機體細胞安全無毒，這方面明顯優(yōu)于當前大多數(shù)細胞毒性抗腫瘤物質(zhì)。也由于本發(fā)明所闡述的是機體天然存在的基因與蛋白，這就使得可以應用基因治療的手段，通過調(diào)節(jié)體內(nèi)基因的表達水平而增強體內(nèi)這種自然的抗腫瘤活性，取得事半功的效果，這也是目前大多數(shù)抗腫瘤物質(zhì)所無法實現(xiàn)的。
本發(fā)明的應用方法有兩種類型，第一種是，采用基因工程技術(shù)將本發(fā)明所描述的基因轉(zhuǎn)入原核或真核細胞，培養(yǎng)、表達并提取其相應蛋白質(zhì)，將該蛋白質(zhì)作為研究用試劑用于抑瘤實驗，或作為藥品用于機體，起到預防或治療腫瘤的作用；第二種是，應用基因治療技術(shù)將該基因轉(zhuǎn)入機體細胞，分泌相應蛋白質(zhì)，發(fā)揮預防或治療腫瘤的作用，或開展腫瘤相關(guān)的實驗研究工作。例如，采用基因重組方法將本發(fā)明所描述的基因(hhLIM cDNA)插入真核表達載體(pcD2)中，構(gòu)建其質(zhì)粒真核表達載體pcD2/hhLIM，將pcD2/hhLIM轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，擴增并大量提取pcD2/hhLIM，采用電穿孔(electroporation)技術(shù)將10μg的pcD2/hhLIM轉(zhuǎn)入S180移植腫瘤小鼠瘤組織中，此腫瘤組織的生長即明顯受到抑制。
權(quán)利要求
1.一種新基因及其表達的蛋白質(zhì)，其特征是具有抑制腫瘤細胞生長的作用，可用于腫瘤及其他細胞異常增生性疾病的預防、治療和研究。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所描述的基因，其cDNA堿基序列為AGTCTTCAAGATGCCAAACTGGGGCGGAGGCGCAAAATGTGGAGCCTGTGAAAAGACCGTCTACCATGCAGAAGAAATCCAGTGCAATGGAAGGAGTTTCCACAAGACGTGTTTCCACTGCATGGCCTGCAGGAAGGCTCTTGACAGCACGACAGTCGCGGCTCATGAGTCGGAGATCTACTGCAAGGTGTGCTATGGGCGCAGATATGGCCCCAAAGGGATCGGGTATGGACAAGGCGCTGGCTGTCTCAGCACAGACACGGGCGAGCATCTCGGCCTGCAGTTCCAACAGTCCCCAAAGCCGGCACGCTCAGTTACCACCAGCAACCCTTCCAAATTCACTGCGAAGTTTGGAGAGTCCGAGAAGTGCCCTCGATGTGGCAAGTCAGTCTATGCTGCTGAGAAGGTTATGGGAGGTGGCAAGCCTTGGCACAAGACCTGTTTCCGCTGTGCCATCTGTGGGAAGAGTCTGGAGTCCACAAATGTCACTGACAAAGATGGGGAACTTTATTGCAAAGTTTGCTATGCCAAAAATTTTGGCCCCACGGGTATTGGGTTTGGAGGCCTTACACAACAAGTGGAAAAGAAAGAATGAAGAGGTGCGCCGTTTCTCAGATTTTTTGCGAGCCTAAAACACTTGCCAAGTAATCCTGCACAGATCGATACCTTTCCCCAAATAGCCTCTCCTTTGTAGTCGTACATTATGTGTTTCTCCTCAGAAGTGATCAGGTCTTTACTGAATGTTAGAAGAGGCCTTTGGAAGAAAATTATGTAAAGTTTAATCTATAACAAATGCTTTATTATTTATAATGCTTGGAATGGGAGAGGCAATAAATAAATGTTTTAGTGCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
3.根據(jù)權(quán)利要求1所描述的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列為MPATGGGALCGACGLTVTHAGGIGCAGASPHLTCPHCMACALALASTTVAAHGSGITCLVCTGAATGPLGIGTGGGAGCLSTATGGHLGLGPGGSPLPAASVTTSAPSLPTALPGGSGLCPACGLSVTAAGLVMGGGLPTHLTCPACAICGLSLGSTAVTALAGGLTCLVCTALAPGPTGIGPGGLTGGVGLLG
4.根據(jù)權(quán)利要求1所描述的基因和蛋白質(zhì)，其特征是，以其為骨架所生成的基因變異體和重組蛋白具有抑制腫瘤細胞生長的作用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新的抗腫瘤基因及該基因所表達的相應蛋白質(zhì),可用于腫瘤及其他細胞異常增生性疾病的預防、治療及研究。
文檔編號C12N15/12GK1303867SQ9912603
公開日2001年7月18日 申請日期1999年12月13日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月13日
發(fā)明者湯健, 陳光慧, 馬大龍, 柯楊, 趙興泰 申請人:北京科曼基因應用技術(shù)研究所