茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及茶樹油作為抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的 用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 金黃色葡萄球菌屬于革蘭氏陽性球菌，廣泛分布于自然界，是引起化膿性疾病的 重要病原菌，也是引起食品污染和細(xì)菌性食物中毒的一種重要細(xì)菌。食品受金黃色葡萄球 菌污染后，不僅會(huì)腐敗變質(zhì)，而且部分菌株產(chǎn)生金黃色葡萄 球菌腸毒素而引起食物中毒，由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個(gè)細(xì)菌性 食物中毒的首位。近年來，由金黃色葡萄球菌所致醫(yī)院感染的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，其耐 藥性也逐年增加。細(xì)菌感染已成為感染性疾病的主要原因之一，嚴(yán)重威脅到了人類和動(dòng)物 的健康，引起了基礎(chǔ)和臨床研宄的極大關(guān)注。金黃色葡萄球菌分泌的外毒素主要包括以及 腸毒素等。金葡菌分泌的溶血素是其致病力構(gòu)成的重要因素之一，而其中又以α-溶血素 最為常見，毒性最強(qiáng)，該毒素分泌至細(xì)胞外可與宿主體內(nèi)的紅細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞等 大部分細(xì)胞膜結(jié)合，也是廣受人們關(guān)注的一類毒力因子。腸毒素主要是指在特定條件下由 金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生的一類結(jié)構(gòu)相似、毒力相似、而抗原性各不相同的胞外單鏈小分子 蛋白質(zhì)，具有很高的熱穩(wěn)定性，此外還具有的超抗原活性，屬于超抗原蛋白，可以刺激非特 異性T細(xì)胞增殖。
[0003] 茶樹油，又名茶樹精油，是由桃金娘科白千層屬灌木樹種互葉白千層的新鮮枝葉 經(jīng)水蒸氣蒸餾得到的芳香精油，具有廣譜的抗菌、抗真菌能力和抗氧化能力，中國衛(wèi)生部于 2003年已將茶樹油列入食品香料名單。
[0004] 本發(fā)明采用茶樹油作為抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的物質(zhì)，為研宄開發(fā)新型 的金黃色葡萄球菌外毒素食品防腐奠定基礎(chǔ)。
[0005] 茶樹油為本發(fā)明提供的一種抗金黃色葡萄球菌外毒素分泌的天然植物精油

【發(fā)明內(nèi)容】
： 本發(fā)明的目的是為解決金黃色葡萄球菌變異，耐藥性逐漸增強(qiáng)的，食品防腐劑不能有 效抑制食品中金黃色葡萄球菌的生長，而產(chǎn)生毒素，引起食品中毒的問題，而提供一種抑制 金黃色葡萄球菌外毒素分泌的抑制劑。
[0006] 茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的用途。
[0007] 一種食品防腐劑，它包括：茶樹油和抗金黃色葡萄球菌素； 一種食品防腐劑的使用方法，茶樹油添加量為每克食品中添加0. 25-32 mL ; 所述的茶樹油添加量為每克食品中添加〇. 25-3mL ; 所述的茶樹油添加量每克食品中添加〇. 25-0. 5mL。
[0008] 本發(fā)明提供了茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的新用途，本發(fā)明人利用微 量稀釋法藥物敏感性實(shí)驗(yàn)，測(cè)定茶樹油對(duì)金黃色葡萄球菌懸浮菌的最低抑菌濃度（MIC)和 最低殺菌濃度（MBC)，進(jìn)而證明茶樹油對(duì)金黃色葡萄球菌浮游菌抑制效果。通過溶血實(shí)驗(yàn) 來測(cè)定茶樹油對(duì)金黃色葡萄球菌中α -溶血素分泌的抑制作用，為了使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具有說 服力，我們除了定性觀察結(jié)果，還可以通過對(duì)吸光度值的測(cè)定來進(jìn)一步定量測(cè)定。除此之 夕卜，蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)可以進(jìn)一步驗(yàn)證茶樹油的抑菌效果。由于腸毒素會(huì)刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn) 生腫瘤壞死因子TNF-α，所以通過測(cè)定TNF-α來間接測(cè)定腸毒素。在基因水平上，利用 real-time RT-PCR技術(shù)對(duì)sea, 三種基因轉(zhuǎn)錄水平的考察來探宄茶樹油抑制外毒 素分泌的作用機(jī)制，說明茶樹油對(duì)抑制金黃色葡萄球菌外毒素的分泌具有良好的作用。本 次試驗(yàn)采用金黃色葡萄球菌ATCC 29213以及食品分離株作為實(shí)驗(yàn)菌株。
[0009] 茶樹油對(duì)具有廣譜的抗菌、抗真菌能力和抗氧化能力，茶樹油對(duì)金黃色葡萄球菌 最低抑菌濃度在8-32mL/L，該濃度茶樹油的存在可能改變了某些食品的口味和口感。我們 在溶血實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在0. 125 -0.5mL/L時(shí)(見圖1)，抑制了金黃色葡萄球菌外毒素的分泌。 茶樹油與其它抗金黃色葡萄球菌素配合做為食品防腐劑，在不能有效抑制耐藥金黃色葡萄 球菌菌株生長時(shí)，可有效地抑制金黃色葡萄球菌外毒素的分泌。防止金黃色葡萄球菌外毒 素中毒。為預(yù)防外毒素中毒，多一個(gè)安全保障。同時(shí)也為在食品調(diào)制中，使用茶樹油提供了 更廣闊的空間。
【附圖說明】
[0010] 圖1茶樹油對(duì)金黃色葡萄球菌中α -溶血素溶血能力影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果； 圖2茶樹油對(duì)金黃色葡萄球菌中外毒素分泌抑制作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果； 圖3茶樹油抑制腫瘤壞死因子釋放的實(shí)驗(yàn)結(jié)果； 圖4茶樹油對(duì)相關(guān)基因表達(dá)抑制作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 實(shí)施例1 微量稀釋法藥物敏感性實(shí)驗(yàn)-茶樹油對(duì)金黃色葡萄球菌懸浮菌的最低抑菌濃度（MIC) 和最低殺菌濃度（MBC)測(cè)定：從保存的金黃色葡萄球菌瓊脂板菌株中挑取單菌落，并將菌 落接種于Muller-Hinton肉湯（MHB)培養(yǎng)基中，于37 °C震蕩過夜培養(yǎng)。將菌液濃度用MHB 培養(yǎng)基調(diào)整到OD6cJ直為0. 4 (相當(dāng)于5 X 10 8 CFU/ml )，并進(jìn)一步稀釋到I X IO6 CFU/ml。用 MHB培養(yǎng)基稀釋茶樹油藥液，使藥液終濃度為256 mg/ml。在無菌96孔微量滴定板的每排第 一孔中加入200 μ?終濃度為256 mg/ml的藥液，在第2孔到第10孔中加入100 μ? MHB培 養(yǎng)基。在執(zhí)行每排的操作中，用移液器從每排的第一孔中移出100 μ?濃度為256 mg/ml的 藥液加入到各自排的第2孔中進(jìn)行稀釋混勻，然后再從第2孔吸出100 μ?濃度為128 mg/ ml的溶液加入到第3個(gè)孔中，以此類推，直到每排的第10孔，每稀釋混勻一孔換一次槍頭。 在每排第11孔中加入200 μ? MHB培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，在每排第12孔中加入100 μ? MHB 培養(yǎng)基和100 μ?稀釋好的菌液作為正常生長對(duì)照孔。再在每排第一到第10孔中每孔加入 100 μ?調(diào)好的稀釋菌液。這樣每排第一孔到第10孔中藥液濃度分別為：128 mg/ml，64 mg/ml, 32 mg/ml, 16 mg/ml, 8 mg/ml, 4 mg/ml, 2 mg/ml, I mg/ml, 0. 5mg/ml, 0. 25 mg/ml，各孔中DMSO含量均小于I %。將96孔微量滴定板放置在37 °C溫箱內(nèi)孵育24 h。 通過酶標(biāo)儀（λ =660 nm)測(cè)定其OD值，檢測(cè)細(xì)菌的生長情況。MIC是能抑制細(xì)菌生長的最 低藥物濃度。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，計(jì)算MIC。從第一孔到MIC孔中吸取10 μ?液體接種于MHA平 板上，37 °C溫箱中孵育24 h。觀察結(jié)果，接種平板中未見菌體生長的最低藥物濃度為MBC。 茶樹油對(duì)金黃色葡萄球菌懸浮菌(見表1)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的用途。
2. -種食品防腐劑，它包括：茶樹油和抗金黃色葡萄球菌素。
3. -種食品防腐劑的使用方法，其特征在于：茶樹油添加量為添加量為每克食品中添 加 0·25-32 mL。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種食品防腐劑的使用方法，其特征在于：所述的茶樹油添 加量為每克食品中添加0. 25-3mL。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種食品防腐劑的使用方法，其特征在于：所述的茶樹茶樹 油的添加量為添加量為每克食品中添加0. 25-0. 5mL。
【專利摘要】本發(fā)明公開了茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的新用途，茶樹油具有廣譜的抗菌、抗真菌能力和抗氧化能力，茶樹油對(duì)金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度在8-32mL/L，該濃度茶樹油的存在可能改變了某些食品的口味和口感。我們?cè)谌苎獙?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在0.125？-0.5mL/L時(shí)，抑制了金黃色葡萄球菌外毒素的分泌。茶樹油與其它抗金黃色葡萄球菌素配合做為食品防腐劑，在不能有效抑制耐藥金黃色葡萄球菌菌株生長時(shí)，可有效地抑制金黃色葡萄球菌外毒素的分泌。防止金黃色葡萄球菌外毒素中毒。為預(yù)防外毒素中毒，多一個(gè)安全保障。同時(shí)也為在食品調(diào)制中，使用茶樹油提供了更廣闊的空間。
【IPC分類】A23L3-3481
【公開號(hào)】CN104544469
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510025162
【發(fā)明人】郭娜, 史冊(cè), 趙梓雯, 于錄, 孟日增, 趙星晨, 劉宗慧, 李曉旭, 朱宣直
【申請(qǐng)人】吉林大學(xué)
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2015年1月19日