由向日葵獲得富含咖啡?？鼘幩岬奶崛∥锏姆椒?br>【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于預(yù)防和治療血脂異常、高血糖和高血壓、代謝綜合征和2型糖尿 病的去油向日葵（helianthus annuus)的種子提取物。本發(fā)明還涉及制備所述提取物的方 法及含有所述提取物的組合物。本發(fā)明的提取物可以顯著降低超重或肥胖患者的餐后和基 線血糖水平以及血液甘油三酯水平。當(dāng)本發(fā)明的提取物與大分子復(fù)合，并加至富含淀粉性 碳水化合物的食物中后，可以降低其血糖指數(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002] 向日葵提取物極少用于中醫(yī)和對抗療法中；但是，向日葵種子卻被廣泛用于油的 工業(yè)化生產(chǎn)中，生物質(zhì)耗盡的殘?jiān)饕挥米鲃游镲暳匣蛴糜谏a(chǎn)沼氣。
[0003] 向日葵油是一種極佳的種子油，特征在于甘油酯含量非常可觀，它可以調(diào)節(jié)脂肪 的腸吸收。當(dāng)種子為完整的或剝離了其外殼后，它們包含了變量的以奎寧酸的單和二酯形 式存在的咖啡?？鼘幩?，其中綠原酸占優(yōu)勢。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 現(xiàn)已驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過以下所述的提取方法，可以得到咖啡?？鼘幩岷枯^高的 提取物，該提取物具有有效降低餐后血糖和基線血糖水平的活性。
[0005] 因此，本發(fā)明涉及向日葵提取物、其制備方法及含有該提取物的組合物。
[0006] 根據(jù)本發(fā)明的方法包括：
[0007] a)用脂肪醇水混合物對向日葵的工業(yè)殘?jiān)M(jìn)行提?。?br>[0008] b)真空濃縮得自步驟a)的水醇溶液至乙醇溶劑完全除去，然后濾除不溶物和殘 余的脂相；
[0009] C)將得自步驟b)的水溶液的pH值調(diào)節(jié)至約4. 5 ± 1 ;
[0010] d)通過400Da的有機(jī)膜對得自步驟c)的水溶液進(jìn)行超濾；
[0011] e)對得自步驟d)的溶液進(jìn)行色譜或納濾（nanofiltration);
[0012] f)真空或通過霧化濃縮得自步驟e)的截留物。
[0013] 在步驟a)中，"向日葵的工業(yè)殘?jiān)?指用已烷進(jìn)行熱提取、隨后在KKTC以上的溫 度下去除溶劑（"去溶劑化"）后得到的向日葵種子提取物。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選方面，步驟a)的提取過程在能夠?qū)H值保持在2以下的 有機(jī)酸或無機(jī)酸（優(yōu)選稀硫酸）存在下用乙醇/水混合物進(jìn)行至單-和二-咖啡酰喹尼酸 耗盡，優(yōu)選80 % v/v的乙醇/水混合物。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選方面，在步驟C)中，水溶液的pH值采用碳酸鈣調(diào)節(jié)至約 4. 5± 1〇
[0016] 得自步驟c)的水溶液，在使用聚苯乙烯樹脂和/或離子交換和吸附樹脂上進(jìn)行吸 附樹脂色譜，或者采用截留值為400~600Da的陶瓷膜進(jìn)行納濾，以除去鹽和不需要的低分 子量產(chǎn)物。截留物中保留咖啡酰奎尼酸，而鹽和糖則保留在滲透物中。
[0017] 本發(fā)明的制備方法具有特別的工業(yè)意義，因?yàn)樯镔|(zhì)實(shí)質(zhì)上是可以無限獲得的而 且其成本可以忽略不計(jì)，所以從方法的經(jīng)濟(jì)學(xué)而言具有顯著的意義并可顯著降低獲得提取 物的最終成本。
[0018] 通過本發(fā)明方法得到的提取物的特征在于該提取物具有高含量的咖啡?？鼘幩?， 對餐后和基線血糖水平顯示有效的降糖活性。如果將適量的本產(chǎn)品加至富含碳水化合物的 食物中，所述作用仍可被保持，此為這種新提取物在飲食領(lǐng)域中的主要應(yīng)用。
[0019] 去溶劑化中使用的熱處理方法和提取步驟中的酸處理可以使結(jié)構(gòu)得以修飾，由此 使提取物的生物學(xué)活性在抗氧化和促新陳代謝效應(yīng)方面得到提升。處理方法裂解了蛋白結(jié) 構(gòu)之間的化學(xué)鍵，轉(zhuǎn)變?yōu)轷问降目Х弱？鼘幩嵩贛ichael反應(yīng)中與蛋白質(zhì)的SH基團(tuán)結(jié)合 或與常常存在于植物多酚中的氨基反應(yīng)。
[0020] 優(yōu)選按照本發(fā)明的方法獲得的向日葵提取物中的咖啡?？鼘幩岷糠秶鸀?40% - 80%，優(yōu)選 50% - 60%。
[0021 ] 本發(fā)明的提取物可被方便地配制為富含甘油二酯的油用于人類疾病的治療，制劑 可以含有或不含有磷脂作為表面活性劑載體，或者將該提取物加至各種食物中，例如面包、 各種類型的餅干和一般不能耐受高溫水洗的食物，這是由于活性成分可自由地溶于水。有 鑒于此，咖啡?？鼘幩峥梢酝ㄟ^與植物或動物蛋白質(zhì)形成復(fù)合物變得不溶于水，這些蛋白 通過熱變性后可以穩(wěn)定形式摻入。蛋白質(zhì)被酶水解后在腸中釋放出活性產(chǎn)物，該活性產(chǎn)物 可以在腸內(nèi)與其他底物相互作用并改善糖的吸收，抑制6磷酸合成酶。
[0022] 已經(jīng)觀察到，當(dāng)將提取物添加至富含淀粉性碳水化合物的食物中時，該提取物可 以顯著降低餐后血糖水平。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明，提取物以營養(yǎng)制劑的形式與含有淀粉性碳水化合物一起每餐服用時 的劑量范圍通常為50 - 500mg，優(yōu)選250mg。
[0024] 臨床試驗(yàn)結(jié)果如下。
[0025] 餐后血糖水平
[0026] 在有對照的臨床試驗(yàn)條件下，給予實(shí)驗(yàn)對象混合的地中海食物（Mediterranean meal)，該食物含有60 %碳水化合物、25 %脂質(zhì)和15 %蛋白質(zhì)以及250mg本發(fā)明的提取物。 可以觀察到餐后血糖降低了 18% (p< 0.05) (12名志愿者，安慰劑）。
[0027] 基線血糖
[0028] 實(shí)驗(yàn)對象為健康志愿者，于早、中、晚餐時服用三顆含有250mg提取物的膠囊一個 月，同時服用標(biāo)準(zhǔn)地中海食物（見上文），這和安慰劑對照交叉實(shí)驗(yàn)組的不同實(shí)驗(yàn)對象的飲 食是一樣的。在一個月治療結(jié)束后，可以觀察到實(shí)驗(yàn)對象的基線血糖水平降低了 15% (實(shí) 驗(yàn)對象的基線血糖邊界線為110 ±5)。
[0029] 可以增強(qiáng)餐后和空腹降糖活性使這些提取物成為體重和代謝綜合征的有效調(diào)節(jié) 劑，在這些情況中，由年齡引起的飲食不當(dāng)或代謝失調(diào)已經(jīng)產(chǎn)生了健康問題。
[0030] 還可以觀察到接受治療的患者血中甘油三酯水平的降低。在另一組由于轉(zhuǎn)氨酶值 升高而遭受肝病折磨的患者的臨床實(shí)驗(yàn)中，治療后所述參數(shù)恢復(fù)到正常，肝脂肪變性有明 顯降低。
[0031] 如前文所述，在適當(dāng)?shù)臈l件下，本發(fā)明的提取物可以與大分子、特別是糖蛋白快速 發(fā)生反應(yīng)，這具有兩方面的優(yōu)勢。首先，與大分子復(fù)合的提取物可以免受細(xì)菌攻擊并且不被 氧化，在被酶或細(xì)菌解離后，可以在原位釋放以發(fā)揮它們的降血糖和抗氧化活性。其次，與 大分子復(fù)合的提取物也可在含水環(huán)境中使用。這樣，可以將它們添加至例如意大利面（必 須在水中烹飪）的食物中而活性成分不會顯著丟失。
[0032] 還可以將本發(fā)明的提取物添加至面包、比薩、甜面包干、餅干、常規(guī)飲料和食物中， 包括基本成分為蛋白質(zhì)的那些。
[0033] 根據(jù)另一個優(yōu)選方面，本發(fā)明的提取物可配制為常規(guī)的或腸溶 (gastroprotected)膠囊或片劑以提高其局部活性，同時不改變胃的消化功能。根據(jù)另一優(yōu) 選的方面，可以向含有本發(fā)明的提取物的制劑中加入富含甘油二酯的油。
[0034] 根據(jù)再一方面，本發(fā)明的組合物也可以包含其它具有有用或互補(bǔ)活性的物質(zhì)。
[0035] 本發(fā)明的組合物可以通過常規(guī)方法配制，如"Remington' s Pharmaceutical Handbook(雷明頓藥物手冊）"，Mack Publishing Co.，N.Y. ,USA所述。具體而言，本發(fā)明 的組合物通過用于植物活性成分的常規(guī)制劑技術(shù)配制，需要特別注意的是，避免與賦形劑 和膠囊基質(zhì)之間發(fā)生反應(yīng)?？诜苿┑膶?shí)例為片劑、糖衣藥丸、軟和硬明膠膠囊以及纖維素 膠囊。
[0036] 以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
[0037] 實(shí)施例1 :通過納濾制備向日葵種子提取物
[0038] 將IOKg去油的向日葵種子制成小粒（pelletted)，并用85% v/v乙醇/水混合 物萃取，直至咖啡酰奎寧酸耗盡，所述混合物含有足量的硫酸以將pH保持為2. 5。提取在 40°C溫度下進(jìn)行。濃縮所述水-乙醇溶液至10升"直到完全除去乙醇"，接著濾除不溶于水 的產(chǎn)物。堿化水溶液至pH為5,接著使用IOKDa的平有機(jī)膜對其進(jìn)行超濾。含有咖啡?？?寧酸、黃酮類和少量多酚的完全透明的溶液通過截留值為400Da的陶瓷膜進(jìn)行納濾。濃縮 截留物中的咖啡?？鼘幩幔瑫r丟棄含有鹽、糖和不需要的低分子產(chǎn)物的滲透物。濃縮截留 物至10%的干殘?jiān)㈧F化。獲得I. 2kg淡米色提取物，其中包含使用HPLC測得的含量為 56%的咖啡?？鼘幩岷?2%的綠原酸。將提取物用于制備膠囊或片劑，或者適量加至各種 食物中。
[0039] 實(shí)施例2 :通過色譜法制備向日葵提取物
[0040] 將50Kg去油的向日葵種子制成小粒，并用85% v/v乙醇/水混合物提取，直至咖 啡酰奎寧酸被耗盡，所述混合物含有足量的硫酸以將PH保持為2. 5。萃取在40°C溫度下進(jìn) 行。丟棄殘余的生物質(zhì)，濃縮水一乙醇溶液直至除去乙醇。濃縮水溶液至10L，濾去不溶于 水的產(chǎn)物。堿化水溶液至pH為5,之后通過截?cái)嘀禐镮OKDa的有機(jī)膜對其進(jìn)行超濾。將清 澈的水濃縮液吸附于50L的聚苯乙烯吸附樹脂中，隨后通過用90%乙醇/水洗脫樹脂回收 活性提取物。
[0041] 濃縮至干燥后，可獲得大約4kg包含56%以綠原酸形式表示的咖啡?？鼘幩岬奶?取物。
[0042] 實(shí)施例3 :纖維素膠囊
[0043] 將下列成分填充至0型纖維素膠囊中：
[0044] 單位組成：
[0045]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 制備向日葵提取物的方法，該方法包括： a) 用脂肪醇水混合物提取通過已烷提取得到的向日葵種子，然后在高于100°C的溫度 下除去溶劑； b) 真空濃縮得自步驟a)的水-醇溶液直至完全除去醇溶劑，并且濾除殘留的不溶物和 脂相； c) 將得自步驟b)的水溶液的pH調(diào)節(jié)至5 ; d) 用lOkDa的有機(jī)膜對得自步驟c)的水溶液進(jìn)行超濾； e) 對得自步驟d)的溶液進(jìn)行色譜或納濾； f) 真空或通過霧化濃縮得自步驟e)的截留物。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中在步驟a)中，提取是在能夠?qū)H保持在2以下的有機(jī)酸或 無機(jī)酸存在下采用乙醇/水混合物進(jìn)行的。
3. 權(quán)利要求2的方法，其中在步驟a)中，提取是在稀硫酸存在下米用80%v/v乙醇/ 水混合物進(jìn)行的。
4. 權(quán)利要求1的方法，其中在步驟c)中，使用碳酸鈣調(diào)節(jié)水溶液的pH至大約5。
5. 權(quán)利要求1的方法，其中在步驟e)中，使用聚苯乙烯樹脂和/或離子交換和吸附樹 脂在吸附樹脂上對溶液進(jìn)行色譜。
6. 權(quán)利要求1的方法，其中在步驟e)中，使用截留值為400 - 600Da的陶瓷膜對溶液 進(jìn)行納濾。
7. 采用權(quán)利要求1 一 6的方法得到的向日葵提取物。
8. 權(quán)利要求7的向日葵提取物，所述提取物含有40% - 80%、優(yōu)選50 - 60%的咖啡 ?？鼘幩?。
9. 權(quán)利要求7或8的向日葵提取物，該提取物與植物和動物蛋白復(fù)合。
10. 制劑，該制劑含有權(quán)利要求7 - 9的向日葵提取物。
11. 權(quán)利要求10制劑，所述制劑含有50 - 500mg向日葵提取物。
12. 權(quán)利要求9 一 11的制劑，所述制劑還包含富含甘油二酯的油和任選的表面活性劑。
13. 權(quán)利要求10 - 12的制劑，所述制劑為常規(guī)形式的或腸溶膠囊或片劑。
14. 基本成分為碳水化合物的食物，該食物含有權(quán)利要求7 - 9的提取物。
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于預(yù)防和治療血糖異常、高血糖和高血壓、代謝綜合征和2型糖尿病的去油向日葵(helianthus annuus)種子提取物。本發(fā)明還涉及制備所述提取物的方法及含有該提取物的組合物。當(dāng)將本發(fā)明的提取物加至以碳水化物為基本成分的食物中時，該提取物可以降低血糖指數(shù)和餐后葡萄糖的吸收，并引起脂質(zhì)特征發(fā)生改變。
【IPC分類】A61K36-28, A23L1-30, A61P3-10
【公開號】CN104717892
【申請?zhí)枴緾N201380053559
【發(fā)明人】E·邦巴爾代利, F·科爾蒂
【申請人】因德納有限公司
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2013年10月8日
【公告號】CA2888305A1, EP2908663A1, US20150258155, WO2014060244A1