一種水楊酸脫羧酶降解銀杏酸的應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種水楊酸脫羧酶（Salicylic acid decarboxylase，Sdc)對銀杏酸的降解的應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀杏在我國分布很廣且歷史悠久，其葉、種子等部位都有很高的應用價值。但在這 些部位普遍存在一種毒性成分一一銀杏酸。
[0003] 銀杏酸是一類鄰羥基苯甲酸類化合物，包括C13:l、C15:l、C17:2、C15:0、C17:l 等，對人體有很大的危害。
[0004] 物理去除方法和化學去除方法是降解銀杏酸的常用方法，國外的文獻報道的較 少，國內(nèi)曾使用微波和超臨界萃取等方法脫除銀杏酸，這些方法均需要利用有機溶劑對銀 杏酸進行溶解，工藝復雜。在生物降解方面，李銀亮等人在人工發(fā)酵銀杏葉中銀杏酸含量的 研宄中曾報道通過人工接種冠突散囊菌發(fā)酵銀杏葉制作發(fā)酵茶可以降低其中銀杏酸的含 量，但耗時較長，步驟較繁瑣。
[0005] 通過檢索，發(fā)現(xiàn)一篇與本專利申請相關(guān)公開專利文獻：一種銀杏酚酸的生物降 解方法（CN103053876)，該方法是在向含有一定濃度銀杏酚酸的降解系統(tǒng)中加入0. 004U/ ml-0. 006U/ml的漆酶LacC的同時（降解體系的PH4. 0-6. 0,降解溫度為45°C -60°C，降解 處理時間為l〇-24h)，加入介體物質(zhì)，特別是加入ABTS，降解率最高可達100%。
[0006] 通過對比，上述公開的文獻與本專利申請在技術(shù)方案方面有較大不同，獲得的技 術(shù)效果不同。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種酶降解銀杏酸的應用，提供另一種銀杏酸的降解途 徑。
[0008] 本發(fā)明實現(xiàn)目的的技術(shù)方案是：
[0009] 一種水楊酸脫羧酶降解銀杏酸的應用。所述水楊酸脫羧酶的基因序列如序列1所 述。
[0010] 所述水楊酸脫羧酶講解銀杏酸的溫度為5~80 °C，pH為3. 0~11. 0。
[0011] 所述銀杏酸為包括銀杏酸R = C13:0、銀杏酸R = C15:0、銀杏酸R = C15:1、銀杏 酸 R = C17:l、銀杏酸 R = C17:2。
[0012] 一種降解銀杏酸的基因工程菌，含有序列如序列1所述的水楊酸脫羧酶。
[0013] 所述質(zhì)粒載體為pET21a(+)。
[0014] 所述宿主菌為 E. coli BL21(DE3)。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果為：
[0016] 1、本發(fā)明提供了一種可以降解銀杏酸的酶，該酶為水楊酸脫羧酶Sdc，含有Sdc的 pET21a(+)-sdc/E. coli BL21(DE3)的細胞破碎液可明顯降低銀杏酸的含量。ImL其細胞破 碎液在40°C、pH= 5.5、5h內(nèi)使銀杏酸C15:l的含量降低了 39.017±0. 131%。
[0017] 2、本發(fā)明提供的水楊酸脫羧酶可以在較廣的溫度和pH范圍內(nèi)發(fā)揮對銀杏酸的降 解作用，為銀杏中取出銀杏酸提供更加快捷便利的方法，為銀杏的廣泛利用提供更多可能 性。
【附圖說明】
[0018] 圖1為重組質(zhì)粒pET21a(+)_sdc的構(gòu)建；
[0019] 圖 2 為 pET21a(+)_sdc 重組質(zhì)粒的鑒定；M :maker (IOkb)，I :pET21a(+)_sdc 的單 酶切結(jié)果，2 :pET21a(+)-Sdc的雙酶切結(jié)果；
[0020] 圖3為對照組pET21a(+)重組質(zhì)粒的鑒定。M :maker(10kb)，I :pET21a(+)的單酶 切結(jié)果；
【具體實施方式】
[0021] 下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步詳述，以下實施例只是描述性的，不是限 定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。
[0022] 本發(fā)明根據(jù)Kirimura等報道的基因序列，人工合成了 sdc基因，并構(gòu)建該基因的 重組質(zhì)粒，再將其轉(zhuǎn)入宿主細胞中，將重組菌接種到培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定時間，從中取一定量 的發(fā)酵液進行細胞破碎。稱取一定量的銀杏酸標準品，配置成溶液。將細胞破碎液和標準 品溶液混合后，反應一段時間，用LC-MS測定其中的銀杏酸含量。
[0023] 其中，銀杏酸是指一類2-羥基-6-烷基苯甲酸類化合物，包括銀杏酸（R = C13:0)、銀杏酸（R = C15:0)、銀杏酸（R = C15:l)銀杏酸（R = C17:l)銀杏酸（R = C17:2) 等。
【主權(quán)項】
1. 一種水楊酸脫羧酶降解銀杏酸的應用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水楊酸脫羧酶降解銀杏酸的應用，其特征在于：所述水楊酸 脫羧酶的基因序列如序列1所述。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水楊酸脫羧酶降解銀杏酸的應用，其特征在于：所述水楊酸 脫羧酶講解銀杏酸的溫度為5~80 °C，pH為3.O~11. 0。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的水楊酸脫羧酶降解銀杏酸的應用，其特征在于：所述銀杏酸 為包括銀杏酸R=C13:0、銀杏酸R=C15:0、銀杏酸R=C15:1、銀杏酸R=C17:1、銀杏酸 R=C17:2〇
5. -種降解銀杏酸的基因工程菌，其特征在于：含有序列如序列1所述的水楊酸脫羧 酶。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的降解銀杏酸的基因工程菌，其特征在于：所述質(zhì)粒載體為 pET21a(+)〇
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的降解銀杏酸的基因工程菌，其特征在于：所述宿主菌為 E.coliBL21(DE3) 〇
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種水楊酸脫羧酶降解銀杏酸的應用，所述酶的基因序列如序列1所述，該酶為水楊酸脫羧酶(Sdc)，含有Sdc的pET21a(+)-sdc/E.coli BL21(DE3)的細胞破碎液可明顯降低銀杏酸的含量，本發(fā)明的酶可以在較廣的溫度和pH范圍內(nèi)發(fā)揮對銀杏酸的降解作用，為銀杏中取出銀杏酸提供更加快捷便利的方法，為銀杏的廣泛利用提供更多可能性。
【IPC分類】C12N15-60, C12N1-21, A23L1-015, C12R1-19
【公開號】CN104770624
【申請?zhí)枴緾N201510052113
【發(fā)明人】戴玉杰, 孫國娟, 孫紫悅, 鐘永輝, 魏彧翹, 張會圖
【申請人】天津科技大學
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年2月2日