樹(shù)舌發(fā)酵浸膏飼料添加劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬飼料添加劑領(lǐng)域，具體地說(shuō)是樹(shù)舌發(fā)酵浸膏飼料添加劑及用于生產(chǎn)低膽 固醇畜禽產(chǎn)品的飼料。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗生素作為抑菌藥物和促生長(zhǎng)劑已在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中廣泛應(yīng)用了半個(gè)多世紀(jì)。然 而，長(zhǎng)期使用抗生素引起的抗藥性、二重感染及藥物殘留等問(wèn)題雖然尚未有足夠的證據(jù)加 以證實(shí)，卻一直使消費(fèi)者心存憂慮。因而，積極尋求能改善畜禽健康，安全無(wú)毒的免疫增強(qiáng) 劑已成為目前研宄的熱點(diǎn)之一。
[0003] 越來(lái)越多的研宄報(bào)道表明，多糖作為一種免疫促進(jìn)和調(diào)節(jié)劑，具有抗菌、抗腫瘤、 抗氧化和抗病毒等生物學(xué)活性。樹(shù)舌（Ganoderma applanatum (Pers. ex Gray.) Pat.)是 隸屬于真菌門擔(dān)子菌綱的食藥用真菌。一些研宄顯示，樹(shù)舌多糖對(duì)治療胃潰瘍、消化性胃炎 及病毒性肝炎，提高機(jī)體免疫力有良好功效。此外，樹(shù)舌發(fā)酵浸膏除含有多糖外，還有氨基 酸、微量元素、維生素、酚類、萜類等物質(zhì)，具有廣泛的藥理活性能夠防止動(dòng)脈硬化、提高免 疫力、抗腫瘤、雙向調(diào)節(jié)高血壓多種生物功效。目前已有多種來(lái)源于樹(shù)舌發(fā)酵浸膏的藥品上 市。
[0004] 目前對(duì)樹(shù)舌的研宄都僅著眼于藥品或保健食品的開(kāi)發(fā)，在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上，尚未見(jiàn) 到利用樹(shù)舌做飼料添加劑的相關(guān)產(chǎn)品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的是提供一種來(lái)源于有益真菌，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，促生長(zhǎng)、提高免疫能力、降 低動(dòng)物膽固醇含量的純天然飼料添加劑，樹(shù)舌發(fā)酵浸膏飼料添加劑。
[0006] 樹(shù)舌發(fā)酵浸膏飼料添加劑，它是樹(shù)舌菌株經(jīng)接種、搖瓶培養(yǎng)、種子罐發(fā)酵；發(fā)酵液 經(jīng)95-KKTC蒸煮，過(guò)濾，濾液濃縮成的浸膏； 所述的濾液濃縮，罐溫控制在60~80°C之間，蒸汽壓力0. 04-0. 06兆帕左右；真空罐真 空度控制在0. 06-0. 09兆帕； 所述的種子罐發(fā)酵的培養(yǎng)基為：〇. 3%葡萄糖，0. 03%KH2P04,0. 3%蛋白胨，0. 05%氯化鈉， 維生素B1，消泡劑，余量為水； 一種用于生產(chǎn)低膽固醇畜禽產(chǎn)品的飼料，它是在飼料中添加了 0.05-0. 2%上述的樹(shù)舌 發(fā)酵浸膏飼料添加劑； 所述的添加量為〇. 1% ; 所述的禽為肉用雞； 所述的飼料重量％ :玉米58. 70、豆柏33. 90、玉米油3. 50、蛋氨酸0. 10、磷酸氫鈣1. 30、 食鹽0. 20、石粉1. 30、預(yù)混料1. 00 ; 所述的飼料重量％ :玉米54. 69、豆柏37. 40、玉米油3. 50、蛋氨酸0. 20、磷酸氫鈣1. 90、 食鹽0. 21、石粉1. 10、預(yù)混料1. 00。
[0007] 樹(shù)舌發(fā)酵浸膏飼料添加劑在調(diào)節(jié)畜禽消化道菌群方面的應(yīng)用； 所述的禽為肉用雞。
[0008] 本發(fā)明提供了樹(shù)舌發(fā)酵浸膏飼料添加劑，它是樹(shù)舌菌株經(jīng)接種、搖瓶培養(yǎng)、種子罐 發(fā)酵；發(fā)酵液經(jīng)95-100°C蒸煮，過(guò)濾，濾液濃縮成的浸膏；在飼料中添加了 0. 05-0. 2%上述 的樹(shù)舌發(fā)酵浸膏能夠提高肉雞日增重，提高飼料轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)；同時(shí)還能調(diào)節(jié)肉雞 盲腸腸道菌群，降低雞肉中膽固醇含量，此外，還能顯著提高肉雞的免疫功能及腸黏膜免 疫功能。效果優(yōu)于添加黃霉素，原料廉價(jià)易得，解決了飼料中添加抗菌素產(chǎn)生耐藥菌的問(wèn) 題。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 實(shí)施例1小刺猴頭發(fā)酵浸膏的制備 (1)斜面菌種培養(yǎng)： 于無(wú)菌室超凈臺(tái)迅速將樹(shù)舌純菌株接種到專用斜面培養(yǎng)基中，26-28°C下培養(yǎng)7-9天， 得液體搖瓶菌種；所述專用斜面培養(yǎng)基配方為：馬鈴薯100 :葡萄糖1 :磷酸二氫鉀1 :瓊脂 1，pH自然； 制法：將新鮮馬鈴薯200 g去皮切成小塊加水1000 ml煮沸25分鐘，用紗布過(guò)濾取濾 液，瓊脂預(yù)先浸濕后加入濾液中煮沸同時(shí)不斷攪拌，直至完全溶解，然后分別加入葡萄糖、 磷酸二氫鉀等物質(zhì)攪拌均勻，趁熱分裝于試管中，塞好瓶塞后置于滅菌鍋滅菌，蒸汽壓力 I. 1個(gè)大氣壓，120°C，時(shí)間30分鐘，取出后自然降溫至40-45°C，鋪成斜面，空白培養(yǎng)1天， 無(wú)雜菌方可使用。
[0010] (2)搖瓶培養(yǎng)： 一級(jí)搖瓶接種：于無(wú)菌室超凈臺(tái)將所述步驟（1)中得到的液體搖瓶菌種接入搖瓶后塞 上棉塞，放搖瓶機(jī)培養(yǎng)； 二級(jí)搖瓶接種：于無(wú)菌室超凈臺(tái)迅速取下一、二級(jí)搖瓶瓶塞，將一級(jí)種子迅速倒入二級(jí) 搖瓶?jī)?nèi)，塞上棉塞，蓋上紗布，系上線繩，放搖瓶機(jī)培養(yǎng)。
[0011] 培養(yǎng)條件：將一、二級(jí)搖瓶置于搖瓶機(jī)內(nèi)于180~230轉(zhuǎn)，26-28°C條件下振蕩培養(yǎng) 4-7天，4°C冰箱備用，得到可作為一級(jí)種子罐的液體種子； 所述搖瓶種子培養(yǎng)基配方(一、二級(jí)搖瓶制法相同）； 配方：3-4%葡萄糖，0. 03%KH2P04,0. 3%蛋白胨，0. 05%氯化鈉，適量維生素B1，少許消泡 劑。
[0012] 制法：將上述試劑用蒸餾水加熱溶解，500 ml瓶(一級(jí)搖瓶）內(nèi)裝量100 ml，2000 ml瓶（二級(jí)搖瓶）內(nèi)裝量500 ml，塞好棉塞，裝入滅菌鍋于一個(gè)大氣壓、121°C滅菌30分鐘， 冷卻至室溫放置一天，備用； (3) -級(jí)種子罐發(fā)酵：扣除滅菌過(guò)程中的冷凝水，然后按配方在種子罐內(nèi)加入液體培養(yǎng) 基的原料和消泡劑，通入熱蒸汽加熱到120°C，0. 12-0. 13兆帕個(gè)大氣壓下，30-40分鐘；滅 菌冷卻后將步驟（2)得到的液體種子接入培養(yǎng)，接種量5-10%，罐溫26-28°C，通氣量1 :0. 5 (V/V ? min)，罐壓0. 05兆帕，經(jīng)5-7天通氣培養(yǎng)，菌種達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，得到種子培養(yǎng)液。 所用液體培養(yǎng)基配方為：〇. 3%葡萄糖，0. 03%KH2P04,0. 3%蛋白胨，0. 05%氯化鈉，適量維生素 B1，少許消泡劑，其余為水。
[0013] (4)發(fā)酵罐發(fā)酵：扣除滅菌過(guò)程中的冷凝水，然后按配方在發(fā)酵罐內(nèi)加入發(fā)酵用培 養(yǎng)基原料和消泡劑，通入熱蒸汽加熱到120°C，0. 2兆帕個(gè)大氣壓下，30分鐘；滅菌冷卻后， 從一級(jí)種子罐內(nèi)將步驟（3)得到的種子液接入發(fā)酵罐，接種量5-10%，通氣培養(yǎng)，罐溫28°C， 攪拌轉(zhuǎn)速150r/m，通氣量1:0. 4-0. 5 (V/V ^min),罐壓0. 05兆帕，培養(yǎng)時(shí)間5-7天，得到發(fā) 酵液。所用發(fā)酵用培養(yǎng)基配方為：〇. 3%葡萄糖，0. 03%KH2P04,0. 3%蛋白胨，0. 05%氯化鈉， 適量維生素B1，少許消泡劑，其余為水。
[0014] (5)發(fā)酵液加溫：通蒸汽給發(fā)酵罐加溫，溫度加到KKTC后保持10分鐘。
[0015] (6)濾液過(guò)濾：將發(fā)酵液過(guò)板框過(guò)濾，不能漏料，濾液要求澄清透明，濾液流入貯料 罐內(nèi)貯存。
[0016] 對(duì)發(fā)酵液中總糖的測(cè)定采用斐林試劑法：取發(fā)酵液Iml置于25ml比色管中，加入 2mol/L H2S0415ml，把比色管放入沸水中溶15分鐘；于250ml三角瓶中加入菲林甲、乙試液 各5ml ;將沸溶后的中間體迅速冷卻，用40%Na0H調(diào)pH6. 8后置入100mL容量瓶中，反復(fù)沖 洗比色管定容；取PH6. 8的中間體5ml于備好的250ml三角瓶中，置1200W電爐使其沸騰， 從沸騰起計(jì)時(shí)1分鐘；用〇. 1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液滴定；記下消耗數(shù)為y ;測(cè)定空白；250ml三角 瓶中加入菲林甲、乙液各5ml，不加中間體，直接以0. 1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液滴定，消耗數(shù)為x，然 后計(jì)算?？倲?shù)=(x-y) X2 (7)濾液濃縮為浸膏：罐溫控制在60~80°C之間，蒸汽壓力0. 04-0. 06兆帕左右；真空罐 真空度控制在0. 06-0. 09兆帕。在最上的加熱管要露出來(lái)時(shí)加料，每次加料要少加勤加，約 30分鐘。濃縮到所有的料全部進(jìn)完時(shí)，將兩個(gè)缸的料合在一起，放缸前將真空度下降，罐溫 度提高到90°C左右。料濃縮到最上邊的加熱管露出取樣測(cè)婆美度，然后就要勤測(cè)婆美度控 制在33-38即要出料。每次取樣、放料時(shí)，先停泵，真空回零后再取樣測(cè)比重。出料裝桶時(shí) 取樣測(cè)多糖，測(cè)定方法同（6)中發(fā)酵液中總糖的測(cè)定。料出完徹底清洗罐內(nèi)。濃縮浸膏即 得所述樹(shù)舌發(fā)酵物飼料添加劑。
[0017] 實(shí)施例1 樹(shù)舌菌流浸膏的測(cè)定 本品為樹(shù)舌(Pers.exGray. )Pat.)的發(fā)酵液與菌絲提取液 的濃縮浸膏。本品顯褐色、氣微香、味微苦。
[0018] 多糖含量：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密稱取105°C干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照 品0. lg，置100mL容量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無(wú)水葡萄糖 Img)〇
[0019] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、1. 2、1. 4、 I. 6ml，分別置于25ml量瓶中，加水至2. 0ml，分別精密加3, 5-二硝基水楊酸試液I. 5ml，混 勻