一種內(nèi)生菌發(fā)酵茶及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于保健飲品或保健食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種內(nèi)生菌發(fā)酵茶及其制備 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 茶，是中華民族的舉國之飲。發(fā)于神農(nóng)，聞?dòng)隰斨芄?，興于唐朝，盛于宋代。中國茶 文化糅合了中國儒、道、佛諸派思想，獨(dú)成一體，是中國文化中的一朵奇葩，芬芳而甘醇。
[0003] 茶不僅具有生津止喝、醒腦明目、抗疲勞、清熱、利尿的作用，還有降血脂、降膽固 醇等多種功效。茶是世界三大飲料之一，是多數(shù)中國人的一種常用飲品，而且，隨著人們健 康消費(fèi)觀念的普及，茶正被越來越多的人接受、喜愛和追求。茶葉深加工產(chǎn)品開發(fā)也逐漸呈 現(xiàn)多樣化，功能型茶飲料消費(fèi)需求進(jìn)一步加大，為適應(yīng)國際、國內(nèi)的市場需求，急需開發(fā)出 更有效、更方便的健康快速消費(fèi)茶產(chǎn)品。
[0004] 發(fā)酵茶是指在茶葉制作中有"發(fā)酵"這一工序的茶的統(tǒng)稱，茶樹芽葉經(jīng)過萎凋，揉 切，發(fā)酵，干燥等初制工序制成毛茶后，再經(jīng)精制制成的茶，就是發(fā)酵茶。茶葉中含有茶多 酚，茶多酚具有收斂性，對(duì)胃有一定的刺激作用，在空腹的情況下刺激性更強(qiáng)。而發(fā)酵茶就 不一樣了。它是經(jīng)過發(fā)酵烘制而成的，茶多酚在氧化酶的作用下發(fā)生酶促氧化反應(yīng)，含量減 少，對(duì)胃部的刺激性就隨之減小了。另外，這些茶多酚的氧化產(chǎn)物還能夠促進(jìn)人體消化，因 此發(fā)酵茶不僅不會(huì)傷胃，反而能夠養(yǎng)胃。經(jīng)常飲用加糖的發(fā)酵茶、加牛奶的發(fā)酵茶，能消炎、 保護(hù)胃黏膜，對(duì)治療潰瘍也有一定效果，因此，研宄新型的發(fā)酵茶，能夠進(jìn)一步促進(jìn)茶文化 的發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 基于上述原因，申請人經(jīng)過多年的研宄，以茶葉、石斛內(nèi)生菌菌液和/或松露產(chǎn)香 菌菌液為原料，得到一種新的發(fā)酵茶制備方法，該方法得當(dāng)?shù)陌l(fā)酵茶，具有很好的保護(hù)人體 器官衰老的作用。
[0006] 本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
[0007] 一種內(nèi)生菌發(fā)酵茶，由1-99. 99重量份茶葉、0. 01-30重量份石斛內(nèi)生菌菌液和/ 或松露產(chǎn)香菌菌液制備而成。
[0008] 所述茶葉為茶青、半成品茶或成品茶。
[0009] 其制備方法包含以下步驟：
[0010] 步驟1 :采摘茶樹鮮葉或石斛伴生茶鮮葉，攤放l_20h，以60-280°C殺青l(xiāng)_30min， 將殺青葉冷卻，以揉搶機(jī)揉搶l〇_3〇min，得揉搶葉；
[0011] 步驟2 :將得到的揉搶葉或成品茶分裝于透明玻璃容器中，擠壓至裝滿為止，密 封，于121°C高壓蒸汽下滅菌10_20min，冷卻后得滅菌茶葉，備用；
[0012] 步驟3 :將得到的滅菌茶葉，按每100g滅菌茶葉的量接種0. 5ml-200ml石斛內(nèi)生 菌菌液和/或松露產(chǎn)香菌菌液，在10-60°C下培養(yǎng)發(fā)酵1-60天，取出于60-300°C下烘焙或 曬干至水分含量為5 % -7 %，得到內(nèi)生菌發(fā)酵茶。
[0013] 其中石斛內(nèi)生菌菌液由以下方法制備：
[0014] 步驟1 :將新鮮石斛的莖、葉、菌根、假鱗莖、花或果實(shí)在無菌條件下，以75%酒精 處理30s，再用0. 1 %升汞處理7min后用無菌水沖洗，吸干多余水分，分別切成0. 5cm左右 的小段或用無菌研缽磨成漿狀，分別接種在查氏培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基上，在20-50°C恒溫培 養(yǎng)l-10d，長出不同類型的微生物，對(duì)不同形態(tài)、不同顏色的菌落進(jìn)行初步分類，并在相應(yīng)的 培養(yǎng)基純化獲得一批石斛內(nèi)生菌的微生物菌株，然后用篩選培養(yǎng)基發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，利用薄層層 析法定性檢測發(fā)酵液石斛多糖和高效液相色譜定量檢測發(fā)酵液中石斛多糖的含量，富產(chǎn)石 斛多糖的菌株即為篩選的石斛內(nèi)生菌；所述篩選培養(yǎng)基為：葡萄糖l_50g/L、蛋白胨I-IOg/ U硫酸銨0. l-10g/L，氯化錳0. 01-10g/L、硫酸鎂0. l-10g/L、磷酸二氫鉀0. l-5g/L、茶葉汁 200-800ml/L〇
[0015] 步驟2 :取石斛內(nèi)生菌在液體搖瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)；然后按1-10%的接種量接入裝有 20-90mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，在搖床轉(zhuǎn)速10-600rpm，溫度20-60°C條件下，培養(yǎng) l-48h得到石斛內(nèi)生菌菌液；發(fā)酵培養(yǎng)基的成份為：葡萄糖0. l-20g/L、蛋白胨0. l-20g/L、 酵母膏0. l-10g/L、氯化鈉0. l-10g/L、磷酸二氫鉀0. l-10g/L ;培養(yǎng)基初始pH5-8。
[0016] 其中松露產(chǎn)香菌菌液由以下方法制備：
[0017] 步驟1 :將新鮮松露的子囊果或共生菌根在無菌條件下，以75%酒精處理30s，再 用0. 1 %升汞處理7min后用無菌水沖洗，吸干多余水分，用無菌研缽磨成漿狀，分別接種在 查氏培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基和MS培養(yǎng)基上，在20-50°C恒溫培養(yǎng)l-10d，長出不同類型的微生 物，對(duì)不同形態(tài)、不同顏色的菌落進(jìn)行初步分類，并在相應(yīng)的培養(yǎng)基純化獲得一批松露微生 物菌株，然后用篩選培養(yǎng)基發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，利用薄層層析法定性檢測發(fā)酵液a-雄烷醇和高效液 相色譜定量檢測發(fā)酵液中a-雄烷醇的含量，富產(chǎn)a-雄烷醇的菌株即為篩選的松露產(chǎn)香菌； 所述篩選培養(yǎng)基為：葡萄糖或蔗糖l_50g/L、蛋白胨l-10g/L、硫酸鎂0. l-10g/L、磷酸二氫 鉀 0· l-5g/L、茶葉汁 200-800ml/L。
[0018] 步驟2 :取松露產(chǎn)香菌，在液體搖瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)；然后按1-10%的接種量接入裝有 20-90mL發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，在搖床轉(zhuǎn)速10-600rpm，溫度20-60°C條件下，培養(yǎng) 時(shí)間l-48h得到松露產(chǎn)香菌菌液；發(fā)酵培養(yǎng)基的成份為：葡萄糖或蔗糖0. l-100g/L、蛋白胨 和/或麩皮（浸出汁）〇. l-l〇〇g/L、酵母膏或松針（浸出液）0. l-100g/L、硫酸鎂和/或氯 化鈣0. l-10g/L、磷酸二氫鉀0. l-10g/L ;培養(yǎng)基初始pH5-8。
[0019] 藥效學(xué)試驗(yàn)
[0020] 對(duì)D-半乳糖致亞急性衰老小鼠生殖器官的作用研宄
[0021] 試藥：實(shí)施例1-實(shí)施例5發(fā)酵茶5g用水煮3次，每次100mL水，合并水液，濃縮， 干燥，加入20mL注射用水，備用。
[0022] 試驗(yàn)動(dòng)物：昆明小鼠，SPF級(jí)，18-22g。
[0023] 試驗(yàn)方法：取昆明種成年小鼠，體重20±2g，雌雄各半。將動(dòng)物隨機(jī)分組，分別為： 正常對(duì)照組、衰老模型組、實(shí)施例1-實(shí)施例5組，每組18只。除正常對(duì)照組外，各鼠每天在 頸背部皮下注射D-半乳糖（注射用水配制）125mg/kg，連續(xù)8周，普通飼料常規(guī)喂養(yǎng)。各組 動(dòng)物在造模第IOd后，同時(shí)每日灌胃相應(yīng)受試藥液容量0. lml/10g，正常對(duì)照組以同等劑量 的蒸餾水灌胃。
[0024] 給藥9周后，取血后頸椎脫臼處死，測定SOD值。
[0025] 數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差士 s)表示，η為樣本量。統(tǒng)計(jì)作圖軟件用Microsoft Excel。統(tǒng)計(jì)方法用One-way t test，P <0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0026] 試驗(yàn)結(jié)果：見表1和表2.
[0027] 表1雄性小鼠血清SOD含量情況見表士s)
[0030] 注：與模型組相比：*Ρ < 0· 05林P < 0· 01[0031] 表2雌性小鼠血清SOD含量情況見表趕）[0032]
[0028]
[0029]
[0033] 注：與模型組相比：*Ρ < 0· 05林P < 0· 01
[0034] 試驗(yàn)結(jié)論：上述試驗(yàn)表明，本發(fā)明發(fā)酵茶具有很好的抗衰老的作用。
[0035] 本發(fā)明發(fā)酵茶具有傳統(tǒng)茶葉的功效。 實(shí)施例
[0036] 實(shí)施例1
[0037] 500g茶葉、75g石斛內(nèi)生菌菌液、75g松露產(chǎn)香菌菌液。
[0038] 步驟1 :采摘茶樹鮮葉或石斛伴生茶鮮葉，攤放10h，以150°C殺青15min，將殺青葉 冷卻，以揉搶機(jī)揉搶20min，得揉搶葉；
[0039] 步驟2 :將得到的揉搶葉分裝于透明玻璃容器中，擠壓至裝滿為止，密封，于121°C 高壓蒸汽下滅菌15min，冷卻后得滅菌茶葉，備用；
[0040] 步驟3 :將得到的滅菌茶葉，按每100g滅菌茶葉的量接種50ml石斛內(nèi)生菌菌液和 50ml松露產(chǎn)香菌菌液，在30 °C下培養(yǎng)發(fā)酵30天，取出于150 °C下烘至水分含量為6 %，得到 內(nèi)生菌發(fā)酵茶。
[0041] 其中石斛內(nèi)生菌菌液由以下方法制備：
[0042] 步驟1 :將新鮮石斛的莖在無菌條件下，以75%酒精處理30s，再用0. 1 %升汞處 理7min后用無菌水沖洗，吸干多余水分，分別切成0. 5cm左右的小段，分別接種在查氏培養(yǎng) 基和PDA培養(yǎng)基上，在35°