一種熱穩(wěn)定性好的復(fù)合酶制劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于酶制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種熱穩(wěn)定性好的復(fù)合酶及其制備方法。
【背景技術(shù)】：
[0002] 在畜牧業(yè)中，乳豬飼養(yǎng)是所有階段豬中最復(fù)雜的。營養(yǎng)供給不合理的后果是豬生 長緩慢，腹瀉率高，死亡率高，進(jìn)而使中大豬階段生長緩慢，延長出欄時(shí)間。
[0003] 但是，為了切斷母源疾病的垂直傳播途徑，同時(shí)縮短母豬繁殖周期，延長種用年 限，人們將早期斷奶技術(shù)廣泛的應(yīng)用于豬的大規(guī)模養(yǎng)殖工業(yè)中。然而由于新生仔豬缺乏先 天免疫、消化系統(tǒng)發(fā)育尚不完善，消化酶分泌能力弱，直接供給以玉米等為主的飼料很容易 引起豬仔對(duì)飼料的消化率低、采食量低、生長速度緩慢、腹瀉率高等問題。
[0004] 為了克服乳豬在斷奶后所出現(xiàn)的種種問題，多數(shù)企業(yè)從斷奶前補(bǔ)飼、誘食、日糧酸 化、使用適口性好且易消化吸收的飼料原料、添加外源酶、降低日糧的抗原性、降低日糧的 粗蛋白含量以及使用促進(jìn)劑等多個(gè)方面進(jìn)行了改善和優(yōu)化，但實(shí)際效果參差不齊。
[0005] 考慮到仔豬在斷奶時(shí)，其自身的蛋白酶、淀粉酶等酶活應(yīng)激而大幅下降到斷奶時(shí) 的三分之一，而這些酶類對(duì)于仔豬獲取營養(yǎng)和能量起著至關(guān)重要的作用。同時(shí)，飼料用酶在 畜禽生產(chǎn)中具有不俗的效果，比如前蘇聯(lián)科學(xué)家在早期斷奶仔豬日糧中添加淀粉糊精酶， 使得日增重提高14. 6%，碳水化合物消化率提高77. 2%。據(jù)美國有關(guān)資料報(bào)道，Collier在 早期斷奶仔豬日糧中補(bǔ)充酶制劑（含蛋白酶、淀粉酶、葡聚糖酶），結(jié)果實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組日 增重提高了 25%，飼料轉(zhuǎn)化率提高了 15. 5%。
[0006] 添加酶制劑能補(bǔ)充蛋白酶和淀粉酶，是輔助分解日糧中的蛋白和淀粉，降解日糧 中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，并能有效分解玉米/豆柏型日糧中的植物細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì) 如淀粉、蛋白質(zhì)等釋放出來。同時(shí)分解可溶性纖維，降低植物纖維物質(zhì)的吸水能力和腸道內(nèi) 容物的粘度。
[0007] 此外，在動(dòng)物飼料領(lǐng)域中，多以硫酸銅等無機(jī)銅作為銅元素的來源，但是無機(jī)銅存 在吸收率低，與其他營養(yǎng)物質(zhì)存在拮抗作用等問題，而螯合銅則可以很好的解決上述問題， 它能夠減輕與其他營養(yǎng)物質(zhì)的拮抗，促進(jìn)銅和其他礦物質(zhì)元素的利用，促進(jìn)動(dòng)物的生長發(fā) 育，提尚伺料利用率，改善脳體品質(zhì)，提尚繁殖性能，同時(shí)還具有抗生物氧化和免疫以及良 好的穩(wěn)定性等一系列功能，能夠帶來較佳的經(jīng)濟(jì)效益。
[0008] 類胡蘿卜素是一類呈黃色、橙色或紅色的多烯類化合物，它是自然界中最普遍存 在也是最穩(wěn)定的天然色素，廣泛存在于許多動(dòng)植物中。類胡蘿卜素作為一種優(yōu)良的添加劑 和改善營養(yǎng)的營養(yǎng)增補(bǔ)劑，它的優(yōu)良品質(zhì)和效果，很久以來就被世界各國所公認(rèn)，被譽(yù)為最 有希望的抗氧化劑。目前，類胡蘿卜素被廣泛應(yīng)用于飼料添加劑行業(yè)中，由于其良好的應(yīng)用 前景及卓越的功能，長久以來倍受人們青睞。如何有效開發(fā)以天然植物以及真菌獲得綠色 飼料添加劑產(chǎn)品對(duì)飼料添加劑行業(yè)發(fā)展具有重要意義。
[0009] 因此，我們經(jīng)過多次飼喂實(shí)驗(yàn)，研制出了 一種復(fù)合酶，其能有效地提高飼料的穩(wěn)定 性、利用率、降低腹瀉率、促進(jìn)動(dòng)物生長，針對(duì)性強(qiáng)，效果好，經(jīng)濟(jì)效益顯著。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0010] 本發(fā)明的目的在于提供一種穩(wěn)定性好、利用率高的復(fù)合酶及其制備方法。
[0011] 本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
[0012] -種復(fù)合酶制劑，由以下重量份數(shù)的組分組成：木聚糖酶80-120份，纖維素酶 30-40份，β -葡聚糖酶40-100份，蛋白酶100-150份，中溫α -淀粉酶20-30份，復(fù)合維生 素3-8份，復(fù)合微量元素10-20份，抗菌肽10-20份，紅酵母培養(yǎng)物20-30份；
[0013] 本發(fā)明所使用的紅酵母，為一株高產(chǎn)類胡蘿卜素的富銅海洋紅酵母WYN1， 所述菌株已于2014年11月25日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（地址：中國.武 漢.武漢大學(xué)，郵編430072)，保藏編號(hào)為：CCTCC No :Μ 2014592,分類命名：海洋紅酵母 WYNl(Rhodotorula sp. WYNl)。
[0014] 所述木聚糖酶、纖維素酶、β -葡聚糖酶、蛋白酶、中溫α -淀粉酶和抗菌肽均為市 售廣品；
[0015] 所述復(fù)合微量元素每公斤包含碘lOOOmg，鉀180mg，鐵1800mg，硒80mg,鈷200mg， 鎂145mg，猛1400mg，絡(luò)20mg,鋅llOOmg，銅800mg ;其余量為載體，所述載體為木肩；
[0016] 所述木肩的制備方法包括如下步驟：將無發(fā)霉、無病蟲鋸木末或廢木肩除去雜物， 置于超聲波清洗機(jī)中于200W、30KHz清洗10min，沖洗、瀝干，放入蒸汽釜中于0. 3-0. 4MPa 蒸煮20-30min，然后置微波干燥機(jī)于2000W、120°C進(jìn)行間歇式干燥3min，使之水分達(dá)到 8-10%，最后2. 0篩片粉碎、密封包裝即得木肩；
[0017] 所述超聲波清洗機(jī)中清洗液為質(zhì)量百分比濃度0. 5%的碳酸氫鈉溶液；
[0018] 所述間歇式干燥工藝為：微波輻射10s，停留20s，如此重復(fù)，循環(huán)干燥。
[0019] 所述復(fù)合維生素每公斤包含維生素 A 2800mg，維生素 BI 3000mg，維生素 C2000mg，核黃素 1600mg，泛酸 1900mg，維生素 B6 1800mg，維生素 B12 1200mg，肌醇 5000mg， 維生素 E 600mg，維生素 D3 5500mg，維生素 K3 4000mg;其余量為載體，所述載體為上述制 備的木肩。
[0020] 所述紅酵母培養(yǎng)物制備方法如下：
[0021 ] 種子培養(yǎng)按酵母常規(guī)培養(yǎng)方法進(jìn)行培養(yǎng)；
[0022] 發(fā)酵培養(yǎng)：初始pH為8,將種子培養(yǎng)液按接種量3-8%接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，搖床轉(zhuǎn) 速為50-80r/min，24-28°C培養(yǎng)10-15小時(shí)后調(diào)整溫度為16-20°C進(jìn)行低溫靜止培養(yǎng)，停止 攪拌，pH調(diào)整為3-5,保持2-4小時(shí)；之后階梯形升溫到24-30°C，pH調(diào)整為4. 6-5. 5,按照 2. 5%的添加量添加蛋白胨，按照2%的量添加酵母粉；搖床轉(zhuǎn)速為50-100r/min，繼續(xù)發(fā)酵 10-15h〇
[0023] 發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液經(jīng)孔徑10-1000 μ m粗濾，然后與10-20°C循環(huán)超濾濃縮去除 水分得固形物含量20-40 %濃縮液，濃縮液經(jīng)真空冷凍干燥、超微粉碎得紅酵母培養(yǎng)物。
[0024] 發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)量體積比組成為：葡萄糖1 %，酶解玉米粉1-3%，蛋白胨2. 5%，硫 酸鎂0. 02 %，磷酸二氫鉀0. 15 %，銅含量150-200mg/L，氯化鈉20 %，其余為水；
[0025] 所述酶解玉米粉的制備方法為：將玉米粉置于配料罐中，以V:m為2:1加入純凈 水，調(diào)節(jié)pH值3-7,加入中溫淀粉酶，酶活為30u/g玉米粉，與酶活為30u/g玉米粉的蛋白 酶，邊攪拌邊升溫至45-55°C保溫15-30min，然后緩慢升溫至60-65°C保溫15-30min，冷凍 干燥備用。
[0026] 所述復(fù)合酶適用于飼料加工廠和養(yǎng)殖場(chǎng)自配飼料，使用時(shí)應(yīng)與飼料中的其它原料 混合均勻，可事先將本發(fā)明與少量飼料混合均勻，再混合到大批飼料中，直接飼喂。建議每 噸全價(jià)料添加量為80_120g。
[0027] 有益效果：
[0028] 1、本發(fā)明利用從海洋環(huán)境中分離獲得一株高產(chǎn)胡蘿卜素的富銅海洋紅酵母WYN1， 通過靜止培養(yǎng)方法有效的提高了酵母中胡蘿卜素和銅產(chǎn)量。采用上述方法發(fā)酵培養(yǎng)海洋 紅酵母WYN1，其生物量、類胡蘿卜素產(chǎn)量及胞內(nèi)銅含量分別為27g/L以上、35-40mg/L和 7240-8000 yg/g干菌。研發(fā)中，發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)低溫靜止培養(yǎng)可以有效提高胡蘿卜和銅含 量，是本發(fā)明的重要成果。
[0029] 2、由于本發(fā)明所使用的紅酵母能夠高產(chǎn)胡蘿卜素，并且將培養(yǎng)基中的無機(jī)銅轉(zhuǎn)化 為螯合銅進(jìn)行富集，更好的促進(jìn)了動(dòng)物的生長發(fā)育，提高飼料利用率，斷奶仔豬日增重提高 48. 91%，料肉比提高14. 1%，腹瀉率減少10%，死淘率降低3. 7%。
[0030] 3、由于螯合銅具有良好的熱穩(wěn)定性，紅酵母的添加使得本發(fā)明所提供的復(fù)合酶具 有較好的保存活性和熱穩(wěn)定性，保存活性提高25-30%，熱穩(wěn)定性提高35%以上。
[0031] 4、本發(fā)明根據(jù)豬消化生理特點(diǎn)，并經(jīng)過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)篩選復(fù)合配方，設(shè)置復(fù)合酶酶譜， 有效補(bǔ)充消化道蛋白酶、淀粉酶等內(nèi)源酶的不足，有效提高對(duì)飼料的消化利用率，防止?fàn)I養(yǎng) 性腹瀉的產(chǎn)生。
【具體實(shí)施方式】：
[0032] 實(shí)施例1 :海洋紅酵母菌WYNl的獲得及耐銅能力馴化
[0033] (1)將從黃海海邊采集新鮮的海蝦、海星、海藻等生物樣本，置于無菌的YEro培養(yǎng) 基中，挑取紅