一種具降血糖功能的臘八豆及其加工方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及通過(guò)利用具有降血糖功能的1-脫氧野尻霉（DNJ)高產(chǎn)菌株進(jìn)行大豆 發(fā)酵，制備一種尚廣DNJ食品 臘八_&，屬于食品生廣加工領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 1-脫氧野尻霉(簡(jiǎn)稱(chēng)DNJ)及其衍生物是一種哌啶類(lèi)多羥基生物堿，能與糖苷酶所 形成非常穩(wěn)定復(fù)合物，且與糖苷酶的結(jié)合能力要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于糖與酶的結(jié)合能力，因此DNJ可 作為一種競(jìng)爭(zhēng)性糖苷酶抑制劑。當(dāng)在消化道或者糖蛋白加工過(guò)程中，糖苷酶可被1-脫氧野 尻霉素等多羥基生物堿競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，使得消化道內(nèi)的糖類(lèi)吸收發(fā)生障礙，并且糖蛋白寡糖 鏈的合成出現(xiàn)異常，從而呈現(xiàn)出能抑制血糖升高、抗腫瘤、抗病毒、降血脂、降血壓、抗氧化、 延緩衰老等一系列生物學(xué)活性(陳華，2013)。
[0003] 隨著糖尿病日益全球化且青年化，糖尿病的治療已成為醫(yī)學(xué)界一個(gè)棘手的問(wèn)題。 最近糖尿病流行病學(xué)資料顯示，中國(guó)有1. 14億糖尿病患者，18歲以上糖尿病患病率已經(jīng)高 達(dá)11. 6%，中國(guó)已經(jīng)成為全世界第一糖尿病大國(guó)。雖治療糖尿病的藥物種類(lèi)繁多，但能長(zhǎng)久 立足臨床的寥寥無(wú)幾，DNJ及其衍生物作為高效的a -葡萄糖苷酶抑制劑，已廣泛應(yīng)用于治 療糖尿病藥物的開(kāi)發(fā)，天然DNJ更是公認(rèn)的用于糖尿病治療的零傷害生物制品。
[0004] 傳統(tǒng)臘八豆是以黃豆為原料，在臘月經(jīng)簡(jiǎn)單腌制而成，具有開(kāi)胃消食的工效，其成 品中細(xì)菌種類(lèi)雜且多，但DNJ極低。通過(guò)以高產(chǎn)DNJ的細(xì)菌菌株對(duì)黃豆進(jìn)行發(fā)酵，開(kāi)發(fā)一種 新型的臘八豆，使其含有豐富的DNJ。通過(guò)長(zhǎng)期食用此產(chǎn)品，并結(jié)合運(yùn)動(dòng)治療對(duì)糖尿病初期 患者達(dá)到很好的治療效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的是以大豆為原料經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵方法制備出一種降血糖的功能性保 健食品。 所用菌株LX-12為解淀粉芽孢桿菌a野ioii識(shí)/e/acieas)，該菌株于2015 年4月15日保藏于位于湖北省武漢市武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)：CCTCC NO :M 2015234。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下方案實(shí)現(xiàn)的： 高產(chǎn)DNJ菌株固體發(fā)酵 步驟1 :大豆原料準(zhǔn)備： 將大豆放入3-4倍質(zhì)量的水中10-30°C下浸泡8~16 h或80-100°C下浸泡2~6 h，倒掉 多余水，然后121°C、0.1 MPa高壓滅菌30 min制得培養(yǎng)基質(zhì)。
[0007] 步驟2:菌種制備： 將甘油管保存的解淀粉芽胞桿菌LX-12菌株在30-40°C，120-240r/min下以LB固體培 養(yǎng)基(蛋白胨10 g，酵母粉5 g，氯化鈉10 g，瓊脂粉20g，pH 7.0~7.2,水1000 mL，121°C、0.1 MPa高壓滅菌30 min)進(jìn)行復(fù)活；復(fù)活菌株用LB液體培養(yǎng)基(蛋白胨10 g，酵母粉5 g，氯 化鈉 10 g，pH 7.0~7.2,水 1000 mL，121°C、0.1 MPa 高壓滅菌 30 min)，裝液量 30mL/500mL 三角瓶，37°C，200r/min進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)6-12 h，制得種子液。
[0008] 步驟3臘八豆的制作 將上述所得種子液按照2~10% (V/W)的接種量接入步驟1的培養(yǎng)基質(zhì)中，攪拌混勻， 37°C靜置培養(yǎng)2-4天。檢測(cè)臘八豆(濕重）中DNJ的含量在100-500mg/kg。
[0009] 根據(jù)上述方法制得的臘八豆具有降血糖的作用。
【附圖說(shuō)明】
[0010] 圖1為1-脫氧野尻霉標(biāo)品一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖2為發(fā)酵上清1-脫氧野尻霉一級(jí)質(zhì)譜圖； 圖3為1-脫氧野尻霉標(biāo)品二級(jí)質(zhì)譜圖； 圖4為發(fā)酵上清1-脫氧野尻霉二級(jí)質(zhì)譜圖； 圖5為1-脫氧野尻霉標(biāo)品液相圖； 圖6為發(fā)酵上清1-脫氧野尻霉液相圖。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 下面結(jié)合具體實(shí)例，對(duì)本方法進(jìn)一步說(shuō)明： 1、實(shí)施例1 本方法包括下列步驟： ① 斜面保存或者甘油凍存的解淀粉芽胞桿菌LX-12菌種中挑取1-2環(huán)菌體，接種到 LB培養(yǎng)基(重量百分比含有1. 0%的蛋白胨、0. 5%的酵母浸粉、1. 0%的氯化鈉，調(diào)節(jié)pH至 7.2-7.4，121°(：高壓滅菌2〇1^11)中，于37°(：，180以1^11搖瓶培養(yǎng)9 11，得到一級(jí)種子液； ② 液體擴(kuò)大LB培養(yǎng)基中以2%的接種量接種一級(jí)種子液，于37°C，180 r/min搖瓶培養(yǎng) 7 h，得到二級(jí)種子液； ③ 將黃豆放入容器，加入4倍重量的10~30°C冷水浸泡12 h，倒掉多余的水，將其分裝 于培養(yǎng)容器中，厚度為兩層黃豆厚，用封口膜封好，121°C，0.1 MPa高壓滅菌30 min，得到 固體培養(yǎng)基質(zhì)； ④ 在固體培養(yǎng)基質(zhì)中，按5%的接種量進(jìn)行接種解淀粉芽孢桿菌LX-12二級(jí)種子液，充 分混勻，于37°C保溫保濕靜置發(fā)酵，發(fā)酵48 h后，得到發(fā)酵產(chǎn)品； ⑤ 上述發(fā)酵產(chǎn)品即為富含DNJ，具有降血糖功能的臘八豆，其DNJ具體含量見(jiàn)表1。
[0012] 2、實(shí)施例2 根據(jù)實(shí)施例1，本實(shí)施例采用浸泡黃豆的水溫為80~100°C。其中步驟③將黃豆放入容 器，加入4倍重量、溫度80~100°C的水為浸泡4 h，倒掉多余的水，將其分裝于培養(yǎng)容器中， 厚度為兩層黃豆厚，用封口膜封好，121°C，0.1 MPa高壓滅菌30 min，得到固體培養(yǎng)基質(zhì)。
[0013] 3、實(shí)施例3 根據(jù)實(shí)施例1，其中步驟④在固體培養(yǎng)基質(zhì)中，按5%的接種量進(jìn)行接種解淀粉芽孢桿 菌LX-12二級(jí)種子液，充分混勻，于37°C保溫保濕發(fā)酵，每隔12 h翻樣1次，發(fā)酵48 h后， 得到發(fā)酵產(chǎn)品。
[0014] 4、實(shí)施例4 根據(jù)實(shí)施例1，其中步驟④在固體培養(yǎng)基質(zhì)中，按5%的接種量進(jìn)行接種解淀粉芽孢桿 菌LX-12二級(jí)種子液，充分混勻，于37°C保溫保濕靜置發(fā)酵，每隔12 h取樣檢測(cè)DNJ含量。
[0015] 5、實(shí)施例5 根據(jù)實(shí)施例1，其中步驟④在固體培養(yǎng)基質(zhì)中，分別按1、3、5、7、10%的接種量進(jìn)行接種 解淀粉芽孢桿菌LX-12二級(jí)種子液，充分混勻，于37°C保溫保濕靜置發(fā)酵，發(fā)酵48 h后，得 到發(fā)酵產(chǎn)品。
[0016] 6、實(shí)施例6 根據(jù)實(shí)施例1，其中步驟④在固體培養(yǎng)基質(zhì)中，按5%的接種量進(jìn)行接種解淀粉芽孢桿 菌LX-12二級(jí)種子液，充分混勻，分別置于30、34、37、40°(：保溫保濕靜置發(fā)酵，發(fā)酵48 11后， 得到發(fā)酵產(chǎn)品。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具降血糖的功能性食品一臘八豆的制作，所采用發(fā)酵菌株為：解淀粉芽孢桿菌 (你以7知似^^7〇心^/￡?/3以￡?&?)1^-12，保藏編號(hào)為0^0：勵(lì)：]\12015234 〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的功能性食品一臘八豆的制作，其特征在于：以一株高產(chǎn)具降 血糖功能物質(zhì)1-脫氧野尻霉(簡(jiǎn)稱(chēng)DNJ)的解淀粉芽孢桿菌LX-12菌株，采取大豆為原料經(jīng) 純種發(fā)酵而成。3. -種具降血糖功能性食品一臘八豆的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 將權(quán)利要求1所述解淀粉芽孢桿菌LX-12菌株接在LB液體培養(yǎng)基上37°C培養(yǎng)12h 后放置于無(wú)菌管中，-80°C冷凍保藏； 2) 制備種子液； 3) 制備黃豆類(lèi)發(fā)酵底物； 4) 發(fā)酵培養(yǎng)：按照3 % -10 % (v/w)的接種量，將種子液加入黃豆發(fā)酵底物中混勻， 31-37°C靜止培養(yǎng)24~72h，獲得納豆食品。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的臘八豆的制作，其特征在于，所述豆類(lèi)發(fā)酵底物制備方法包 括以下步驟： 大豆原料選擇：去除變質(zhì)、霉?fàn)€、蟲(chóng)蛀的豆子，除去其中雜物，用水洗凈； 浸泡：將大豆放入3~6倍質(zhì)量的水中10~30°C下浸泡8~16h或80-100°C下浸泡2~6h， 倒掉多余水，使豆子初始含水量為60~80% ; 分裝：將豆子分裝于培養(yǎng)容器中，厚度為兩層黃豆厚，用封口膜封好； 蒸煮：將分裝好的豆子于121°C，0.IMPa高壓滅菌30min，得到固體培養(yǎng)基質(zhì)。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的臘八豆的制作，其特征在于，所述種子液制備方法包括以下 步驟： 菌種制備：將甘油管保存菌株在劃線于LB固體培養(yǎng)基（蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化 鈉 10g，瓊脂粉 20g，pH7.0~7.2,水 1000mL，121°C、0.1MPa高壓滅菌 30min)，30-40°C 培養(yǎng)8~12h，出現(xiàn)游離單菌落； 將單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基(蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化鈉10g，pH7. 0~7. 2， 水 1000mL，121°C、0.1MPa高壓滅菌 30min)，裝液量 30mL/250mL三角瓶，37°C，180r/ min進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)8~10h，制得一級(jí)種子液； 液體擴(kuò)大LB培養(yǎng)基中以1~4%的接種量接種一級(jí)種子液，于37°C，180r/min搖瓶培養(yǎng) 6~9h，得到二級(jí)種子液。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的臘八豆的制作，其特征在于：將二級(jí)種子液按照2~10 % (V/ W)的接種量接入培養(yǎng)機(jī)制中，充分混勾，37°C靜置培養(yǎng)24~72h。7. 根據(jù)權(quán)利要求3-5所述的臘八豆的制作，其特征在于：檢測(cè)臘八豆中DNJ的含量在 100-500mg/L〇
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。發(fā)明要點(diǎn)是以黃豆為原料，通過(guò)利用高產(chǎn)具降血糖功能的1-脫氧野尻霉（簡(jiǎn)稱(chēng)DNJ）菌株對(duì)其進(jìn)行固體發(fā)酵，開(kāi)發(fā)出一種具降血糖功能的新型臘八豆食品，并提供其加工方法。所用菌株為解淀粉芽孢桿菌（<i>Bacillusamyloliquefaciens</i>）LX-12，保藏編號(hào)為CCTCC？NO：M2015234。CCTCC NO:M201523420150415
【IPC分類(lèi)】A23L1/20, A23L1/29
【公開(kāi)號(hào)】CN105192592
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510476531
【發(fā)明人】陳守文, 魏雪團(tuán), 李鑫淼, 劉夢(mèng)潔, 蔡冬波, 陳建剛, 馬昕, 楊歡
【申請(qǐng)人】武漢駿安生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年12月30日
【申請(qǐng)日】2015年8月6日