一種多功能菌發(fā)酵復(fù)合酶飼料及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種多功能菌發(fā)酵復(fù)合酶飼料及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 飼用復(fù)合酶是一類水解酶，包括淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶等多種酶。家畜添食中 的有機(jī)物有相當(dāng)一部分不能被消化，而添加復(fù)合酶能補充動物內(nèi)源酶的不足，消除飼料中 的抗?fàn)I養(yǎng)因子，可顯著提高飼料的利用率，擴(kuò)大可以用飼料資源范圍，降低養(yǎng)殖成本，改善 養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境。
[0003] 近幾年來人們對酶在飼料工業(yè)中的應(yīng)用取得了快速的發(fā)展，在畜禽應(yīng)用上取得了 很好的效果。據(jù)報道，豬、雞增重均在5-40%之間，節(jié)約飼料10-30%，并且可以減少畜、 禽疾病和死亡率。但同時我國復(fù)合酶發(fā)酵飼料也存在著菌種單一，發(fā)酵技術(shù)落后等不足，造 成我國復(fù)合酶發(fā)酵飼料的不穩(wěn)定，達(dá)不到預(yù)期效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種多功能菌發(fā)酵復(fù)合 酶飼料，由多種菌對飼料進(jìn)行發(fā)酵，不僅產(chǎn)生了酸性蛋白酶、中性蛋白酶和纖維素酶，還大 幅提高了飼料中的蛋白含量，并且能夠有效消除牲畜糞便異味。
[0005] 本發(fā)明的另一目的是提供該多功能菌發(fā)酵復(fù)合酶飼料的制備方法。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] -種多功能菌發(fā)酵復(fù)合酶飼料，由白曲霉、擬內(nèi)孢霉和枯草芽孢桿菌按體積比 (1-2) :(2-3) :(4-6)復(fù)合的菌液，與飼料混合、發(fā)酵，然后向發(fā)酵后的發(fā)酵料中加入由酵母 菌、益生菌和光合細(xì)菌按體積比（2-3) :(4-6) :(2-3)復(fù)合的菌液，進(jìn)行厭氧發(fā)酵而制成；
[0008] 所述飼料是由麩皮、豆餅粉和蘑菇菌渣按質(zhì)量比（50-70) :(10-20) :(10-20)混合 而成；
[0009] 所述白曲霉、擬內(nèi)孢霉和枯草芽孢桿菌復(fù)合的菌液的加入量為飼料質(zhì)量的 5-15% ；
[0010] 所述酵母菌、益生菌和光合細(xì)菌復(fù)合的菌液的加入量為飼料質(zhì)量的6-15% ;
[0011] 所述益生菌為嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌中的一種或多 種。
[0012] 本發(fā)明中所用的發(fā)酵菌株均可以通過常規(guī)的商業(yè)途徑購買得到。
[0013] 優(yōu)選的，本發(fā)明中所用的白曲霉菌具體為中國普通微生物菌種保藏管理中心的編 號為3. 7885的菌株；擬內(nèi)孢霉菌具體為中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的保藏編號為 CICC31258的菌株；枯草芽孢桿菌具體為中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的保藏編號為 CICC21312 的菌株。
[0014] 該多功能菌發(fā)酵復(fù)合酶飼料的制備方法，步驟如下：
[0015] (1) -級種子液的制備：分別刮取白曲霉菌、酵母菌和擬內(nèi)孢霉菌斜面菌種接種 到PDA液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，分別得到白曲霉、酵母菌和擬內(nèi)孢霉的一級種子液；將益生菌 菌種接種到MRS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，得到益生菌的一級種子液；將光合細(xì)菌液體菌種接種到光 合細(xì)菌培養(yǎng)基培養(yǎng)，得到光合菌的一級種子液；將枯草芽孢桿菌接種到LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)， 得到芽孢桿菌的一級種子液。
[0016] (2)二級種子液的制備：分別將步驟（1)制備的白曲霉、擬內(nèi)孢霉和枯草芽孢桿菌 的一級種子液接種到固體發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，分別得到白曲霉菌、擬內(nèi)孢霉菌和枯草 芽孢桿菌的的二級種子液；將酵母菌的一級種子液接種到PDA液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，得到酵 母菌的二級種子液；益生菌菌種的一級種子液接種到MRS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，得到益生菌的二 級種子液；將光合細(xì)菌米用光合細(xì)菌培養(yǎng)基培養(yǎng)，得到光合菌的二級種子液；
[0017] (3)將步驟（2)制備的白曲霉、擬內(nèi)孢霉和枯草芽孢桿菌的二級種子液按體積 比（1-2) :(2-3) :(4-6)復(fù)合，將復(fù)合后的菌液接種到由麩皮、豆餅粉和蘑菇菌渣按質(zhì)量比 (50-70) :(10-20) :(10-20)混合而成的飼料中，發(fā)酵培養(yǎng)，得發(fā)酵料；
[0018] (4)將步驟（2)制備的酵母菌、益生菌和光合菌的二級種子液按體積比（2-3): (4-6) :(2-3)復(fù)合，將復(fù)合后的菌液接種到步驟（3)的發(fā)酵料中，進(jìn)行厭氧發(fā)酵，將發(fā)酵產(chǎn) 物低溫干燥，即得。
[0019] 步驟（3)中，白曲霉、擬內(nèi)孢霉和芽孢桿菌的二級種子液復(fù)合后的菌液的接種量 為飼料質(zhì)量的5-15% ;
[0020] 步驟（4)中，酵母菌、益生菌和光合菌的二級種子液復(fù)合后的菌液的接種量為飼 料質(zhì)量的6-15% ;
[0021] 步驟（3)中，發(fā)酵培養(yǎng)條件為：30-34°C，發(fā)酵5-7天；
[0022] 步驟（4)中，厭氧發(fā)酵的條件為：36-39°C，發(fā)酵5-7天。
[0023] 本發(fā)明的有益效果：
[0024] (1)本發(fā)明發(fā)酵所用的菌株，其中，白曲霉具有高的糖化酶、蛋白酶活性；擬內(nèi)孢 霉能夠發(fā)酵葡萄糖，同化可溶性淀粉；酵母菌、益生菌和光合菌是適宜飼料發(fā)酵的優(yōu)良菌 種，能夠協(xié)同和促進(jìn)各菌株的生長、有效抑制飼料中含有的大量雜菌、有害菌的生長繁殖； 各菌株之間不存在拮抗作用，而且能夠協(xié)同產(chǎn)生蛋白酶、纖維素酶和淀粉酶等，對飼料進(jìn)行 進(jìn)一步的分解，使其更容易被消化和吸收，而且蛋白酶、纖維素酶和淀粉酶屬于內(nèi)源性酶， 還能增強(qiáng)畜禽的自身消化能力；酵母菌和益生菌復(fù)合使用，能夠產(chǎn)生乳酸，形成酸性環(huán)境， 一方面可抑制飼料的腐敗，另一方面能夠有效的抑制畜禽腸道腐敗菌的繁殖，促進(jìn)有益菌 的生長，減少腸道疾病的發(fā)生；益生菌和光合菌的復(fù)合使用，通過益生菌對畜禽腸道內(nèi)菌群 環(huán)境的改善，光合菌對糞便的分解作用，內(nèi)外協(xié)同作用，有效降低了畜禽糞便的異味。
[0025] (2)本發(fā)明中用于發(fā)酵的飼料中含有蘑菇菌渣，通過對蘑菇菌渣肥料的回收利用， 降低了肥料的成本，而且綠色環(huán)保。
【具體實施方式】
[0026] 結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，應(yīng)該說明的是，下述說明僅是為了解釋本 發(fā)明，并不對其內(nèi)容進(jìn)行限定。
[0027] 實施例1 :多功能菌發(fā)酵復(fù)合酶飼料的制備
[0028] L發(fā)酵用菌株：
[0029] 白曲霉為中國普通微生物菌種保藏管理中心的編號為3. 7885的菌株；擬內(nèi)孢霉 為中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的保藏編號為CICC 31258的菌株；枯草芽孢桿菌為 中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心的保藏編號為CICC 21312的菌株；益生菌為嗜熱鏈球 菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌按質(zhì)量比1:1:1:1混合而成，其中，嗜熱鏈球菌、 嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌均可通過購買得到；酵母菌和光合菌為市售產(chǎn)品。
[0030] 2.培養(yǎng)基：
[0031] PDA液體培養(yǎng)基：馬鈴薯200g去皮，沸水煮半個小時，紗布過濾，加入20g蔗糖或 葡萄糖，加水至l〇〇〇ml，pH自然，121 °C 20min滅菌。
[0032] MRS培養(yǎng)基：蛋白陳10. 0g、牛肉膏5. 0g、酵母粉4. 0g、葡萄糖20. 0g、吐溫 801. OmU磷酸氫二鉀2. 0g、乙酸鈉5. 0g、檸檬酸三銨2. 0g、硫酸鎂0. 2g、硫酸錳0. 05g、瓊脂 粉 15. 0g、蒸饋水加至 lOOOmL，ρΗ6· 5,121°C 20min 滅菌。
[0033] LB培養(yǎng)基：蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化鈉10g，pH7. 2,121°C 20min滅菌。
[0034] 光合細(xì)菌培養(yǎng)基：醋酸鈉 I. 145g、蛋白胨0.055g、碳酸氫鈉0.6g、硫代硫酸鈉 〇· 4g、氯化鈉 0· 3g、硫酸鎂 0· 5g、磷酸二氫鉀 0· 05g，ρΗ7· 0,121°C 20min 滅菌。
[0035] 固體發(fā)酵培養(yǎng)基：麩皮55%、紅糖6%，均為質(zhì)量百分比，121°C 20min滅菌。
[0036] 3.制備方法：
[0037] (1) -級種子液制備：將白曲霉、酵母菌、擬內(nèi)孢霉接種到PDA液體培養(yǎng)基中，30°C 搖瓶培養(yǎng)3天。益生菌接種到MRS培養(yǎng)基，38°C靜止培養(yǎng)4天。光合細(xì)菌采用光合細(xì)菌培 養(yǎng)基，30°C光照靜止培養(yǎng)6天?？莶菅挎邨U菌米用LB培養(yǎng)基，32°C搖瓶培養(yǎng)1