一種天然竹葉提取物抗菌劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種天然竹葉提取物抗菌劑的制備方法，屬于抗菌劑制備領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]通常，在食品中應(yīng)用的防腐劑有人工合成防腐劑和從生物原料中提取的天然防腐劑。過去，合成防腐劑以其成本低廉、使用方便、效果顯著等諸多優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用。但隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，不少合成的化學(xué)防腐劑日益暴露出潛在的安全問題和對(duì)生態(tài)環(huán)境不利的影響。因此，這就迫切需要人們發(fā)現(xiàn)和研究一些具有良好防腐作用的天然防腐劑，這種防腐劑不但要求能抑制腐敗微生物的污染和繁殖，還要對(duì)人體健康無(wú)害，同時(shí)不能破壞食品的風(fēng)味及營(yíng)養(yǎng)成分。隨著人類對(duì)自身健康和環(huán)保問題認(rèn)識(shí)的不斷提高，健康、綠色食品越來越受到歡迎，天然植物防腐劑因其良好的安全性而日益受到人們的青睞。
[0003]我國(guó)素有“竹子王國(guó)”之稱，擁有極為豐富的竹類資源，而且我國(guó)的竹林大多分布在老、少、邊、窮地區(qū)。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，，，，我國(guó)有I億多人口直接或間接從事竹林種植或竹子產(chǎn)品加工產(chǎn)業(yè)。竹子不僅與人們的生活息息相關(guān)，而且還在保持水土和維護(hù)生態(tài)環(huán)境中發(fā)揮著特殊的作用。當(dāng)前，西部大開發(fā)中的一項(xiàng)重要舉措就是“退耕還竹”，竹葉資源的開發(fā)具有極為重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)意義。
[0004]從竹葉中提取的天然抑菌活性物質(zhì)應(yīng)用于食品的防腐保鮮具有無(wú)毒、安全等特點(diǎn)。因此，研究和開發(fā)竹葉抑菌提取物質(zhì)作為天然防腐劑，不僅可以提高竹葉的附加值，而且將其進(jìn)行精加工后作為天然植物防腐劑成品投入市場(chǎng)，具有十分廣闊的開發(fā)和應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對(duì)目前食品防腐劑多以化學(xué)防腐劑為主，長(zhǎng)期食用此類防腐劑保存的食物會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生危害，并且殘留的化學(xué)物質(zhì)對(duì)環(huán)境也會(huì)造成污染的缺陷，提供了一種天然竹葉提取抗菌劑的制備方法，該方法是以新鮮毛竹葉為原料，通過剔除發(fā)黃以及腐爛的竹葉，干燥粉碎后溶于磷酸緩沖液，冰水浴下磁力攪拌得竹葉漿，之后高速離心得上清液，用硫酸銨鹽析得粗抗菌蛋白肽，再通過透析最終制得一種天然竹葉提取物抗菌劑，本發(fā)明提取的抗菌劑具有可生物降解性，對(duì)環(huán)境無(wú)污染。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)選取新鮮毛竹葉，分撿去除其中腐爛、發(fā)黃的葉片，用去離子水沖洗葉片表面3?5次，去除葉片表面浮灰，之后放入恒溫干燥器，在30?40°C下干燥3?4h，干燥后將其放入氣流粉碎機(jī)中，粉碎成I?1.5cm的碎片，備用；
(2)稱取71.6g磷酸氫二鈉和31.2g磷酸二氫鈉分別溶于100mL蒸餾水中，配制成磷酸緩沖液母液，之后量取51mL磷酸二氫鈉母液和49mL磷酸氫二鈉母液倒入200mL燒杯中攪拌均勻，配制成pH為6.8的磷酸緩沖溶液；
(3)將干燥后的竹葉碎片和磷酸緩沖溶液按固液比為1:15?1:17加入到100mL燒杯中，再加入I?2g纖維素酶，移入冰水浴鍋內(nèi)，保持溫度在4?6°C之間，放置在磁力攪拌機(jī)上，以300?400r/min的轉(zhuǎn)速攪拌12?24h，得到竹葉漿；
(4)將上述制得的竹葉漿放入高速冷凍離心機(jī)，以8000?9000r/min的轉(zhuǎn)速冷凍離心處理10?15min，分離去除沉淀物得到上清液；
(5)量取200?300mL上述分離得到的上清液，用慢速攪拌機(jī)以100?150r/min的轉(zhuǎn)速緩慢攪拌，在攪拌的狀態(tài)下分5?7次加入30?60g硫酸銨粉末，在40?50min內(nèi)加完，之后提高轉(zhuǎn)速至300?400r/min繼續(xù)攪拌10?15min，放入冷凍箱，在4?6°C下靜置30?40min，使沉淀充分析出；
(6)將上述鹽析出沉淀的溶液放入高速冷凍離心機(jī)，在4?5°C下以10000?IlOOOr/min的轉(zhuǎn)速離心處理30?40min，分離去除上清液得到沉淀，將得到的沉淀用等體積上述制得的磷酸緩沖溶液溶解，即得粗竹葉抗菌蛋白肽；
(7)將透析袋用質(zhì)量濃度為60%的乙醇溶液浸泡30?40min，取出后用去離子水沖洗干凈，再用質(zhì)量濃度為5?10%的碳酸氫鈉和濃度為lmmol/L的乙二胺四乙酸溶液分別煮沸10?15min，再用蒸餾水沖洗干凈，去除透析袋表面的污染物質(zhì)；
(8)將上述溶解于磷酸緩沖液中的粗竹葉抗菌蛋白肽裝入透析袋，在流動(dòng)水中透析20?30h，直至透析液不能讓氯化鋇溶液變渾濁為止，之后將透析袋中的竹葉抗菌蛋白肽用液氮在-30?-20 °C下凍干，經(jīng)氣流粉碎機(jī)粉碎，過50?60目鋼篩，包裝即得一種天然竹葉提取物抗菌劑。
[0007]本發(fā)明的具體應(yīng)用方法是:取10?15g本發(fā)明制得的天然抗菌劑包裝成袋，與待保存的食品放在一起，自然條件下保存即可，本發(fā)明制得的抗菌劑具有很強(qiáng)的高溫耐受性和酸堿適應(yīng)性，通過抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與普通化學(xué)抗菌劑相比，兩類抗菌劑在相同用量的情況下，本發(fā)明制得的抗菌劑抑菌數(shù)量高出普通化學(xué)抗菌劑抑菌數(shù)量達(dá)30%以上，具有明顯抑菌優(yōu)勢(shì)。
[0008]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明所采用的原料屬于天然植物的樹葉，為可再生資源，且資源保有量大，生產(chǎn)成本低，制備步驟簡(jiǎn)單易操作，竹葉中含有多種天然化合物，具有很好的抑菌效果，且不會(huì)對(duì)待保存的食品風(fēng)味產(chǎn)生影響，抑菌效果明顯高于普通化學(xué)抗菌劑。
【具體實(shí)施方式】
[0009]選取新鮮毛竹葉，分撿去除其中腐爛、發(fā)黃的葉片，用去離子水沖洗葉片表面3?5次，去除葉片表面浮灰，之后放入恒溫干燥器，在30?40°C下干燥3?4h，干燥后將其放入氣流粉碎機(jī)中，粉碎成I?1.5cm的碎片，備用；稱取71.6g磷酸氫二鈉和31.2g磷酸二氫鈉分別溶于100mL蒸餾水中配制磷酸緩沖液母液，之后量取51mL磷酸二氫鈉母液和49mL磷酸氫二鈉母液倒入200mL燒杯中攪拌均勻，配制成pH為6.8的磷酸緩沖溶液；將干燥后的竹葉碎片和磷酸緩沖溶液按固液比為1:15?1:17加入到100mL燒杯中，移入冰水浴鍋內(nèi)，保持溫度在4?6°C之間，放置在磁力攪拌機(jī)上，以300?400r/min的轉(zhuǎn)速攪拌12?24h，得到竹葉漿；將上述制得的竹葉漿放入高速冷凍離心機(jī)，以8000?9000r/min的轉(zhuǎn)速冷凍離心處理10?15min，分離去除沉淀物得到上清液；量取200?300mL上述分離得到的上清液，用慢速攪拌機(jī)以100?150r/min的轉(zhuǎn)速緩慢攪拌，在攪拌的狀態(tài)下分5?7次加入30?60g硫酸銨粉末，在40?50min內(nèi)加完，之后提高轉(zhuǎn)速至300?400r/min繼續(xù)攪拌10?15min，放入冷凍箱，在4?6°C下靜置30?40min，使沉淀充分析出；將上述鹽析出沉淀的溶液放入高速冷凍離心機(jī)，在4?5°C下以10000?11000r/min的轉(zhuǎn)速離心處理30?40min，分離去除上清液得到沉淀，將得到的沉淀用等體積上述制得的磷酸緩沖溶液溶解，即得粗竹葉抗菌蛋白肽；將透析袋用質(zhì)量濃度為60%的乙醇溶液浸泡30?40min，取出后用去離子水沖洗干凈，再用質(zhì)量濃度為5?10%的碳酸氫鈉和濃度為Immol/L的乙二胺四乙酸溶液分別煮沸10?15min，再用蒸餾水沖洗干凈，去除透析袋表面的污染物質(zhì)；將上述溶解于磷酸緩沖液中的粗竹葉抗菌蛋白肽裝入透析袋，在流動(dòng)水中透析20?30h，直至透析液不能讓氯化鋇溶液變渾濁為止，之后將透析袋中的竹葉抗菌蛋白肽用液氮在-30?-20 °C下凍干，經(jīng)氣流粉碎機(jī)粉碎，過50?60目鋼篩，包裝即得一種天然竹葉提取物抗菌劑。
[0010]實(shí)例I
選取新鮮毛竹葉，分撿去除其中腐爛、發(fā)黃的葉片，用去離子水沖洗葉片表面3次，去除葉片表面浮灰，之后放入恒溫干燥器，在30°C下干燥3h，干燥后將其放入氣流粉碎機(jī)中，粉碎成Icm的碎片，備用；稱取71.6g磷酸氫二鈉和31.2g磷酸二氫鈉分別溶于100mL蒸餾水中配制磷酸緩沖液母液，之后量取51mL磷酸二氫鈉母液和49mL磷酸氫二鈉母液倒入200mL燒杯中攪拌均勻，配制成pH為6.8的磷酸緩沖溶液；將干燥后的竹葉碎片和磷酸緩沖溶液按固液比為1:15加入到100mL燒杯中，移入冰水浴鍋內(nèi)，保持溫度在4°C之間，放置在磁力攪拌機(jī)上，以300r/min的轉(zhuǎn)速攪拌12h，得到竹葉楽；將上述制得的竹葉楽放入高速冷凍離心機(jī)，以8000r/min的轉(zhuǎn)速冷凍離心處理lOmin，分離去除沉淀物得到上清液；量取200mL上述分離得到的上清液，用慢速攪拌機(jī)以lOOr/min的轉(zhuǎn)速緩慢攪拌，在攪拌的狀態(tài)下分5次加入30g硫酸錢粉末，在40min內(nèi)加完，之后提高轉(zhuǎn)速至300r/min繼續(xù)攪拌lOmin，放入冷凍箱，在4°C下靜置30min，使沉淀充分析出；將上述鹽析出沉淀的溶液放入高速冷凍離心機(jī)，在4°C下以lOOOOr/min的轉(zhuǎn)速離心處理30min，分離去除上清液得到沉淀，將得到的沉淀用等體積上述制得的磷酸緩沖溶液溶解，即得粗竹葉抗菌蛋白肽；將透析袋用質(zhì)量濃度為