一種用于輔助降血脂的白藜蘆醇花青素復(fù)合物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種輔助降血脂的白襲蘆醇花青素復(fù)合物，本發(fā)明還設(shè)及一種輔助降 血脂的白襲蘆醇花青素復(fù)合物的制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著現(xiàn)代人們生活水平的提升，伴隨而來的各種富貴病如糖尿病、肥胖癥、高血 月旨、高血壓等高發(fā)，導(dǎo)致冠屯、病的多發(fā)因素之一就是血清中的高膽固醇，冠屯、病的發(fā)生是動(dòng) 脈粥樣硬化的結(jié)果。人們已經(jīng)開始重視高血脂運(yùn)個(gè)問題，人們的消費(fèi)觀念已悄然發(fā)生了轉(zhuǎn) 變，使得現(xiàn)在功能食品受到青睞。功能食品（化nctional化ods)是指對(duì)人體具有增強(qiáng)機(jī)體 防御功能、調(diào)節(jié)生命節(jié)律、預(yù)防疾病和促進(jìn)康復(fù)等有關(guān)生理調(diào)節(jié)功能的加工食品。高血脂引 起的屯、腦血管疾病是一種嚴(yán)重威脅人類，特別是50歲W上中老年人健康的常見病的疾病。 目前治療高脂血癥的化學(xué)類藥物大都會(huì)呈現(xiàn)出不同程度的毒副作用，天然降血脂活性成分 越來越受到消費(fèi)者和研究者的親睞。
[0003] 花青素因其抗氧化性而具有降血脂和防治屯、血管疾病的功效。藍(lán)替花青素W維持 血管壁的正常功能及皮膚彈性，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞防止動(dòng)脈硬化、降血脂和血管壁功能退 化等屯、血管方面起著重要的作用，可W很好地降低膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇的水平， 預(yù)防血栓的形成，從而有助于預(yù)防屯、腦血管疾病的發(fā)生。
[0004] 白襲蘆醇作為葡萄、虎杖等植物的天然產(chǎn)物，具有良好抗氧化、抗衰老作用，可預(yù) 防動(dòng)脈粥樣硬化、防止冠屯、病、降低血清和肝臟的脂質(zhì)、抑制肝臟癌細(xì)胞組織變異。白襲蘆 醇的抗氧化、抗衰老作用與下基徑基甲苯、搬皮素和生育酪相比，白襲蘆醇的抗氧化作用最 強(qiáng)。白襲蘆醇具有抑制脂質(zhì)氧化酶過氧化作用的活性。白襲蘆醇具有良好的舒張血管的效 應(yīng)，其與NO的產(chǎn)生密切相關(guān)，而且大劑量的白襲蘆醇可能會(huì)有直接舒張血管的作用。研究 表明，白襲蘆醇是植物在遇到紫外線照射、真菌感染等不利的條件時(shí)所產(chǎn)生的一種植物補(bǔ) 體，對(duì)植物本身起著保護(hù)作用，同時(shí)對(duì)人體也具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、保護(hù)屯、血管、抑制血小板 聚集、抗腫瘤等多種藥理作用。近年來W白襲蘆醇為活性成分的保健食品層出不窮。將白 襲蘆醇與花青素復(fù)配制備新型降血脂保健產(chǎn)品將具有巨大的市場(chǎng)前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種輔助降血脂的白襲蘆醇花青素復(fù)合物。
[0006] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種白襲蘆醇花青素復(fù)合物的制備方法。
[0007] -種用于輔助降血脂的白襲蘆醇花青素復(fù)合物，其特征在于：將來源于傳統(tǒng)中藥 材虎杖中的98-99%純度的白襲蘆醇，與藍(lán)替花青素提取物按質(zhì)量比1 : 5-1 : 10的比例 混合制成。
[0008] -種用于輔助降血脂的白襲蘆醇花青素復(fù)合物的制備方法，其特征在于包括W下 步驟： 1) 從虎杖中提取獲得98-99%純度的白襲蘆醇； 2) 藍(lán)替花青素的提?。悍Q取50g冷凍園藍(lán)藍(lán)替鮮果，研磨至泥狀后置于蒸饋瓶中，隨 后加入60%的乙醇（15血/g)作為提取劑，加入0.Imol/L鹽酸調(diào)節(jié)，使溶液的抑為3左 右。將樣品與提取劑充分混勻后，將蒸饋瓶置于磁力攬拌器上提取，4(TC提取2h，提取過 程重復(fù)兩次，合并濾液并過濾得到澄清的粗提取液，減壓濃縮，冷凍干燥，粗提物凍干后置 于-20°C保存至進(jìn)一步純化；將粗提物配成5mg/mL的水溶液上樣于25mmXlOOmm的AB-8 大孔吸附樹脂(粒徑大小為0. 3-1. 25mm);隨后用5倍柱體積的蒸饋水多次洗涂上樣后的 柱子，除去雜質(zhì)，最后采用濃度60%乙醇水溶液(體積比)洗脫至無色，收集后于40°C減壓濃 縮，冷凍干燥，得到純化后產(chǎn)品，并置于-20°C保存； 3) 將白襲蘆醇與藍(lán)替花青素提取物按質(zhì)量比1 : 5-1 : 10的比例均勻混合，即得。
[0009] 本發(fā)明的白襲蘆醇花青素復(fù)合物抗氧化效果良好；對(duì)高脂大鼠的TC下降了 31. 5%，TG下降了 29. 3%，提示藍(lán)替花青素與白襲蘆醇復(fù)配具有良好的降脂作用。
【附圖說明】
[0010] 圖1是BHT、白襲蘆醇的還原力測(cè)定對(duì)比。
[0011] 圖2是不同比例白襲蘆醇花青素復(fù)配樣品還原力的測(cè)定對(duì)比。
[001引圖3是不同比例白襲蘆醇花青素復(fù)配樣品對(duì)· 0H的清除作用對(duì)比。
[0013] 圖4是不同比例白襲蘆醇花青素復(fù)配樣品對(duì)〇2-·的清除作用對(duì)比（圖中"白"代 指白襲蘆醇、"花"代指花青素)。
[0014] 圖5是不同比例白襲蘆醇花青素復(fù)配樣品對(duì)DPPH·的清除作用對(duì)比。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0016] 實(shí)施例1 輔助降血脂的白襲蘆醇花青素復(fù)合物的制備 1、 從虎杖中提取獲得98-99%純度的白襲蘆醇； 2、 藍(lán)替花青素的提?。悍Q取50g冷凍園藍(lán)藍(lán)替鮮果，研磨至泥狀后置于蒸饋瓶中，隨 后加入60%的乙醇（15血/g)作為提取劑，加入0.Imol/L鹽酸調(diào)節(jié)，使溶液的抑為3左 右。將樣品與提取劑充分混勻后，將蒸饋瓶置于磁力攬拌器上提取，4(TC提取2h，提取過 程重復(fù)兩次，合并濾液并過濾得到澄清的粗提取液，減壓濃縮，冷凍干燥，粗提物凍干后置 于-20 °C保存至進(jìn)一步純化；將粗提物配成5mg/mL的水溶液上樣于25臟X100mm的AB-8 大孔吸附樹脂(粒徑大小為0. 3-1. 25mm);隨后用5倍柱體積的蒸饋水多次洗涂上樣后的 柱子，除去雜質(zhì)，最后采用濃度60%乙醇水溶液(體積比)洗脫至無色，收集后于40°C減壓濃 縮，冷凍干燥，得到純化后產(chǎn)品并置于-20°C保存； 3、 將白襲蘆醇與藍(lán)替花青素提取物按質(zhì)量比1 : 5-1 : 10的比例均勻混合，即得。
[0017] 實(shí)施例2白襲蘆醇花青素復(fù)合物的體內(nèi)外抗氧化活性研究 一、試驗(yàn)方法 1、溶液的配制 a、白襲蘆醇甲醇溶液分別取白襲蘆醇干粉若干，W甲醇為溶劑，配制濃度分別為10， 20，50，100，200，400，800μg/ml的系列溶液； b、白襲蘆醇花青素復(fù)配溶液分別取200mg的白襲蘆醇和200mg的藍(lán)替花青素提取物 混合，W甲醇為溶劑，定容至100ml容量瓶中，配制白襲蘆醇：花青素=1:1 (質(zhì)量比)濃度分 別為 10, 20, 50,100, 200μg/mL的系列溶液； C、白襲蘆醇花青素復(fù)配溶液分別取lOOmg的白襲蘆醇和300mg花青素提取物混合，W甲醇為溶劑，定容至100ml容量瓶，配制白襲蘆醇：花青素=1:3 (質(zhì)量比）的濃度分別為 10, 20, 50,100, 200μg/mL的系列溶液。
[001引 2、總還原力測(cè)定方法 移取1ml上述不同濃度樣品溶液于5個(gè)不同的離屯、管中，依次加入2. 5ml0. 2mol/L憐 酸緩沖溶液（pH=6. 6)、2. 5ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的K3化(CN) 6溶液，50°C水浴保溫20min，迅速冷 卻，再加入2. 5ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的Ξ氯乙酸溶液，W3000;r/min離屯、lOmin。取2. 5ml上清 液，加入2. 5ml蒸饋水和0. 5ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)0. 1%的化C13溶液，W水調(diào)零于700皿處測(cè)定吸 光度，每一次吸光值平行測(cè)定Ξ次，取平均值。W吸光度的大小來表示其還原力的大小。 [001引 3、· 0H自由基的清除作用測(cè)定方法 A1 為樣品組：反應(yīng)體系中含 20mmol/L肥02 0. 5ml，8mmol/LFeS04 0. 6ml，3mmol/L水楊酸-乙醇溶液2ml，不同濃度的樣品溶液2ml，其中肥02是最后加入并啟動(dòng)整個(gè)反應(yīng)。 37°C反應(yīng)30min后流水冷卻，加0. 9ml蒸饋水，使得體系總體積為6ml，3000r/min離屯、 lOmin，在510nm下測(cè)定吸光度。每一次吸光值平行測(cè)定Ξ次，取平均值。
[0020] A0為空白組：W1ml蒸饋水代替不同濃度的樣品溶液。
[0021]A2為對(duì)照組：W1ml蒸饋水代替水楊酸-乙醇溶液。
[0022] 清除率=[A0- (A1-A2) ] /A0X!00〇/〇。
[0023] 4、02- ·自由基的清除作用測(cè)定方法 采用鄰苯Ξ酪自氧化法測(cè)定取抑=8. 2的0.05mol/LTris-肥1緩沖溶液4. 5ml， 不同濃度的樣品溶液各4. 2ml，混勻后，在25 °C水浴中保溫20min，取出后立即加入25 °C水 浴預(yù)熱的3mmol/L的鄰苯Ξ酪0. 3ml(3mmol/L的鄰苯Ξ酪WlOmmol/L的肥L溶液配制）， 迅速搖勻后，325nm處每隔30s測(cè)定一次吸光度。計(jì)算線性范圍內(nèi)每分鐘吸光度的增加?？?白組W4. 2ml蒸饋水代替樣品溶液。每一次吸光值平行測(cè)定Ξ次，取平均值。
[0024]ΔΑ0為空白組的吸光度增長率，ΔA為樣品組的吸光度增長率。
[00巧]02-·自由基抑制率（％)= (ΔΑ〇-ΔΑ)/ΔΑΟΧ100〇/〇。
[002引 5、DPPH·自由基的清除作用測(cè)定方法 取0. 15mmol/L的DPPH乙醇（95%)溶液2ml，不同濃度的樣品溶液2ml，混合震蕩后，室 溫放置30min，在波長517nm處測(cè)的吸光值A(chǔ)i;W蒸饋水代替樣品溶液，測(cè)得吸光值A(chǔ)0 ;乙 醇代替DPPH溶液，測(cè)得吸光值A(chǔ)j。每一次吸光值平行測(cè)定Ξ次，取平均值。
[0027]DPPH·自由基清除率（％) ={l-(Ai-Aj/A0) }X100。
[0028] 6、抗氧化動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 選用12月齡雄性昆明小鼠，按血中MDA水平分組，隨機(jī)分為1個(gè)老齡對(duì)照組和4個(gè)受 試樣品劑量組W及一個(gè)模型對(duì)照組，每組10只。另增設(shè)1個(gè)少齡對(duì)照組，選用8周齡雄性 昆明小鼠，每組10只。試驗(yàn)前動(dòng)物在試驗(yàn)環(huán)境下進(jìn)行一周的環(huán)境適應(yīng)，然后按照設(shè)定好的 劑量，連續(xù)給各組小鼠灌胃給藥30d。30d后饑餓過夜，給小鼠稱重，眼底取血，并取臟器進(jìn) 行稱重。
[0029] 實(shí)驗(yàn)設(shè)白襲蘆醇對(duì)照組（2個(gè)劑量組)、白襲蘆醇花青素復(fù)合物（2個(gè)劑量組）和一 個(gè)少齡空白對(duì)照組及一個(gè)老齡空白對(duì)照組，并且設(shè)置一個(gè)陽性對(duì)照組。少齡空白對(duì)照組、老 齡空白對(duì)照組每只小鼠按lOmg生理鹽水/kg的劑量灌胃。白襲蘆醇高、低劑量組分別按每 只小鼠20m曲es/kg、10mgRes/kg的劑量灌胃給藥。白襲蘆醇花青素復(fù)合物高、低劑量組每 只小鼠分別按20mg/kgRes和200mg/kg藍(lán)替提取物、lOmg/kgRes和lOOmg/kg藍(lán)替提取物 的劑量灌胃給藥。陽性對(duì)照組按10μg砸代半脫氨酸Ag的劑量灌胃給藥。
[0030] 7、白襲蘆醇花青素復(fù)合物對(duì)老齡小鼠體內(nèi)生化指標(biāo)影響的檢測(cè) 總抗氧化能力（T-A0C)測(cè)定、超氧化物歧化酶（SOD)測(cè)定、谷脫甘膚過氧化物酶 (GSH-PX)測(cè)定、丙二醒（MDA)測(cè)定按照試劑盒說明書操作進(jìn)行。
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