酸奶發(fā)酵劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物領域，公開一種新型的抑菌性很好的植物乳桿菌及其應用。
【背景技術】
[0002] 植物乳桿菌(LactobaciIlus plantarum)是一類厭氧，不產(chǎn)孢子的革蘭氏陽性菌， 菌體呈短桿狀，在MRS瓊脂平板培養(yǎng)基中呈乳白色不透明，圓形，光滑的菌落。植物乳桿菌與 人類的生活密切相關，被廣泛用于乳制品、肉類、蔬菜以及果汁中，能通過胃腸道并定植于 腸道發(fā)揮益生作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種抑菌性能優(yōu)良的植物乳桿菌。
[0004] 本發(fā)明從健康的婦女母乳中分離出植物乳桿菌，具有良好的益生性能，極強的抑 菌性，良好的耐酸耐膽鹽性，耐胃腸液和抗藥性;同時可以抑制致病菌對小腸結(jié)腸細胞的粘 附，從而使致病菌無法在小腸內(nèi)定殖，減少腸炎疾病的發(fā)生，促進腸道健康，發(fā)揮益生菌的 優(yōu)良性能。
[0005] 本發(fā)明抑菌植物乳桿菌WLPL04(Lactobacillus plantarum WLPL04)，于2015年8 月31日保藏在中國武漢武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心，編號:CCTCC NO:M 2015501。
[0006] 本發(fā)明抑菌植物乳桿菌WLPL04可以在MRS瓊脂平板培養(yǎng)基上生長，為革蘭氏陽性 桿菌，屬于兼性厭氧生長，不產(chǎn)芽孢。為維持時間穩(wěn)定地保存本發(fā)明植物乳桿菌的優(yōu)良性 能，將其保存在含有15 %甘油的混合保存液中，于-80°C凍存，或?qū)⑵浔４嬖?0 %的脫脂乳 中進行凍干保存。
[0007] 為了對微生物進行鑒定和分類，對本發(fā)明所述用植物乳桿菌進行了 16S rRNA堿基 序列分析，結(jié)果為，與植物乳桿菌標準菌株(Lactobacillus plantarum strain WCFS1)顯 示出最高的同源性(99%)，顯示出與植物乳桿菌最高的分子系統(tǒng)學上的親緣關系。因此，將 此微生物鑒定為植物乳桿菌，并命名為植物乳桿菌WLPL04。于2015年8月31日保存于武漢市 中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC Ν0:Μ 2015501。植物乳桿菌WLPL04的測序結(jié)果 顯示的堿基序列如下：
[0008] AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAACTCTGGTATTGATT GGTGCTTGCATCATGATTTACATTTGAGTGAGTGGCGAACTGGTGAGTAACACGTGGGAAACCTGCCCAGAAGCGGG GGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAACAACTTGGACCGCATGGTCCGAGCTTGAAAGATGGCTTCGG CTATCACTTTTGGATGGTCCCGCGGCGTATTAGCTAGATGGTGGGGTAACGGCTCACCATGGCAATGATACGTAGCC GACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTT CCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAACTCTGTTGTTAA AGAAGAACATATCTGAGAGTAACTGTTCAGGTATTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGC AGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTC TGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAA CTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGA CGCTGAGGCTCGAAAGTATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATGAATGCTAAG TGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTG AAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTA CCAGGTCTTGACATACTATGCAAATCTAAGAGATTAGACGTTCCCTTCGGGGACATGGATACAGGTGGTGCATGGTT GTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTATCAGTTGCCAGCATTAA GTTGGGCACTCTGGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATG ACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAACTCGCGAGAGTAAGCTAATCTCTTAAAGCC ATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGC GGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGGTGGGGTA ACCTTTTAGGAACCAGCCGCCTAAGGTGGGACAGATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCT GCGGCTGGATCACCTo
[0009]
[0010] 本發(fā)明的植物乳桿菌WLPL04作為益生菌，不僅具有極強抑菌性，且有良好的耐酸 耐膽鹽性，能抑制致病菌在腸道上的定殖，促進宿主健康。是一株性能優(yōu)良的菌種。因此具 有很高的研究價值和應用價值。
[0011]進一步的，本發(fā)明公開了：
[0012] 酸奶發(fā)酵劑，其特征在于包括植物乳桿菌WLPL04;所述植物乳桿菌WLPL04于2015 年8月31日保藏在在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號:CCTCC NO:M 2015501。
[0013] 所述酸奶發(fā)酵劑，還包括保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌；按質(zhì)量比植物乳桿菌 WLPL04:保加利亞乳桿菌:嗜熱鏈球菌=1:2:3。
[0014] 利用本發(fā)明發(fā)酵劑制備酸奶，能改善酸奶的口感，抑制酵母和霉菌的生長，從而延 緩酸奶的變質(zhì)。
[0015] -種酸奶的制備方法，包括如下步驟：
[0016]水化:將脫脂奶粉（l〇g)、鹿糖(6g)和水（100mL)混合，在40-50°C下水化45min;殺 菌:在65°C預熱5min，然后在98°C下熱處理1〇111；[11;冷卻:室溫下冷卻至45°(3;接種:接種5區(qū)酸 奶發(fā)酵粉+Ig植物乳桿菌WLPL04凍干粉;所述酸奶發(fā)酵粉中含保加利亞乳桿菌凍干粉和嗜 熱鏈球菌凍干粉，兩者質(zhì)量比例為2:3;所述植物乳桿菌WLPL04于2015年8月31日保藏在中 國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號:CCTCC Ν0:Μ 2015501;發(fā)酵:置于38°C發(fā)酵10小時。
[0017] 益生菌風味酸奶的制備工藝，包括如下步驟：
[0018] 1)將100g紅棗汁或核桃汁或水蜜桃汁或草莓汁或花生乳與100g鮮牛奶混勻，加入 Hg的白砂糖進行調(diào)配、混勻；
[0019] 2)殺菌:將混合液加熱至90°c-100°c，維持5-10min，殺死其中的有害微生物；
[0020] 3)接種:滅菌后的混合液冷卻至40°C_45°C，在無菌條件下按IOg的菌種(按質(zhì)量凍 干粉保加利亞乳桿菌:嗜熱乳桿菌:植物乳桿菌WLPL04 = 2:3 :1 )，混合均勻;所述植物乳桿 菌WLPL04于2015年8月31日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號：CCTCC NO : M2015501；
[0021] 4)發(fā)酵:將裝好的酸奶放入恒溫箱，42°C下發(fā)酵7h，酸奶完全凝固時終止發(fā)酵；
[0022] 5)后熟:將發(fā)酵好的酸奶置于0°C_4°C環(huán)境中儲藏24h即得終產(chǎn)品。
[0023] 所述紅棗汁的制備:紅棗預先煮好清洗干凈去核，按質(zhì)量紅棗：水=1:1的比例投 入到榨汁機中榨汁，之后用紗布過濾，除去雜質(zhì)和纖維素，紅棗汁冷藏備用。
[0024]所述核桃汁的制備:選擇質(zhì)量較好的核桃仁放入150°C的烘箱中烘烤15_30min至 呈現(xiàn)暗紅色、去除生異味、散發(fā)出焦香氣為止，然后在7%氫氧化鈉溶液中煮沸15min除去核 桃仁上的褐色皮層后待用;核桃仁放入榨汁機中，放入五倍質(zhì)量的水，制備核桃汁。
[0025] 所述水蜜桃汁的制備:選擇質(zhì)量好的水蜜桃清洗干凈去核，按質(zhì)量水蜜桃:水=1: 1的比例投入到榨汁機中榨汁，之后用紗布過濾，除去雜質(zhì)和纖維素，水蜜桃汁冷藏備用。
[0026] 所述草莓汁的制備:選擇質(zhì)量好的草莓清洗干凈，按質(zhì)量草莓:水=1:1的比例投 入到榨汁機中榨汁，之后用紗布過濾，除去雜質(zhì)和纖維素，草莓汁冷藏備用。
[0027] 所述花生乳的制備:選擇子粒飽滿，新鮮的花生仁，剔除霉爛變質(zhì)及其它雜質(zhì)。置 于120°C烘箱，烘烤20min，產(chǎn)生花生香味并去皮。將去皮的花生仁在0.1 %的NaHCO3溶液中 浸泡Ih~2h，以去除