一種乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米胚芽粕的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬生物飼料技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米胚芽巧的制 作方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國是世界上蛋白類飼料資源最為缺乏的國家，蛋白類飼料的對外依存度已超過 70%，每年用于飼料的大豆巧進(jìn)口量高達(dá)5000萬噸，魚粉進(jìn)口量120萬噸，每年的進(jìn)口總價 值在1500-1800億元。因此，開發(fā)利用非常規(guī)蛋白飼料資源顯得尤為重要。玉米胚芽巧是W 玉米為原料，在生產(chǎn)淀粉或酒精之前，將玉米巧實(shí)進(jìn)行浸泡、粉碎和胚芽分離后棒油或浸提 油脂后剩余的副產(chǎn)品。玉米胚芽巧經(jīng)壓棒或浸提提取油脂后，除脂肪含量降低外，其余營養(yǎng) 成分不變。玉米胚芽巧的粗蛋白含量在20-27%之間，是玉米巧實(shí)的2-3倍，但是其賴氨酸含 量較低僅為大豆巧的27%，且氨基酸組成也不平衡，粗脂肪含量約為2%，與大豆巧含量接 近，但是粗纖維含量較高，并且由于口感偏酸性，動物適口性較差，使得在生長育肥豬日糧 中使用很受限制，一般添加量在5-10%。目前，常用的解決方法有氨基酸平衡法，添加復(fù)合 酶法等，不同處理方法的效果差異很多，而且運(yùn)些方法從根本上并未改變玉米胚芽巧的營 養(yǎng)缺陷。微生物發(fā)酵技術(shù)處理被認(rèn)為是最安全、有效的處理方法。
[0003] 大分子難W消化的植物蛋白質(zhì)在微生物發(fā)酵過程中，被分泌產(chǎn)生的蛋白酶降解為 小膚及游離氨基酸，大幅增加了蛋白質(zhì)的利用率，在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的大量有益菌，及有機(jī) 酸、細(xì)菌素等次級代謝產(chǎn)物，能夠有效降解抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高動物機(jī)體免疫力，并使玉米胚 芽巧具有特殊的酸香味，增加適口性，同時具有益生活性，能夠緩解腸道氧化應(yīng)激和腹瀉的 產(chǎn)生。微生物發(fā)酵玉米胚芽巧可W作為優(yōu)質(zhì)的動物飼料蛋白質(zhì)來源，并且能夠增加益生菌 數(shù)量，提高消化與吸收，減少飼料浪費(fèi)，保障動物健康生長和發(fā)育。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米胚芽巧的制備方法。
[0005] 本發(fā)明的一種乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米胚芽巧的制作方法，包括下列步驟：
[0006] 1.1將豆巧粉碎，形成40目的玉米胚芽巧粉；
[0007] 1.2制備活菌數(shù)為2.OX 108-2.OX IO9C化/ml的乳酸菌發(fā)酵種子液，包括下列步驟： [000引1.2.1將葡萄糖20邑、蛋白腺10邑、酵母提取物5邑、硫酸二氨鐘2邑、水10001111，口制直 7.0，121°C條件滅菌，作為液體培養(yǎng)基；
[0009] 1.2.2用無菌吸管吸取步驟1.2.1的液體培養(yǎng)基，滴入裝有乳酸菌凍干粉的瓶中， 振蕩（100次/min),使凍干菌體呈懸浮狀;液體培養(yǎng)基和乳酸菌凍干粉的比例為1:10;
[0010] 1.2.3用無菌吸管吸取步驟1.2.2得到的凍干菌體的全部懸浮液，移植到MRS固體 培養(yǎng)基中，在37°C培養(yǎng)36-4化，然后接種到MRS斜面培養(yǎng)基上，斜面培養(yǎng)36-4化，再接種到步 驟1.2.1的液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行振蕩頻率為160次/min的搖瓶培養(yǎng)12-2地，得到活菌數(shù)為1.0 X IO8-1.0 X IO9CfVml的乳酸菌發(fā)酵種子液；
[0011] 1.2.4將步驟1.2.3得到的乳酸菌發(fā)酵種子液W5-10 %的接菌量接種到10化種子 罐中，培養(yǎng)12-2地，所述乳酸菌發(fā)酵種子液W5-10%的接菌量接種到I(K)L種子罐中，是指發(fā) 酵罐的裝液量為發(fā)酵罐體積的70%，接菌量指的是運(yùn)70%的5-10% ;
[0012] 1.2.5將步驟1.2.4得到的乳酸菌發(fā)酵種子液接W5-10%的接種量種到It發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)24-3化，得到活菌數(shù)為2.0 X 108-2.0 X IO9Cfu/ml的乳酸菌發(fā)酵種子液，所述乳酸菌 發(fā)酵種子液W5-10%的接菌量接種到It發(fā)酵罐中，是指發(fā)酵罐的裝液量為發(fā)酵罐體積的 70%，接菌量指的是運(yùn)70%的5-10%。；
[0013] 1.3將步驟1.2制備的乳酸菌發(fā)酵種子液按5% (v/w)接入步驟1.1得到的玉米胚芽 巧粉中，并添加0.5% (w/w)的復(fù)合酶，調(diào)整含水量為40%，pH值為5.0-7.0，混合均勻后得到 發(fā)酵基礎(chǔ)料；
[0014] 1.4將步驟1.3中得到的發(fā)酵基礎(chǔ)料攬拌均勻，并按60-70cm的厚度攤鋪在發(fā)酵池 底，發(fā)酵池溫度保持在30-45°C，厭氧發(fā)酵36-4化，得到發(fā)酵玉米胚芽巧；
[0015] 1.5將步驟1.4中得到的發(fā)酵玉米胚芽巧移入流化床中進(jìn)行烘干，烘干溫度為50-55。。
[0016] 1.6待烘干后的發(fā)酵玉米胚芽巧降至室溫，即得到乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米 胚芽巧成品。
[0017]步驟1.3所述的復(fù)合酶成分為:酸性蛋白酶50000IU/g、纖維素酶36000IU/g、e-葡 聚糖酶3000IU/g、木聚糖酶lOOOOIU/g。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有W下優(yōu)點(diǎn)：
[0019] 1.玉米胚芽巧在乳酸菌和復(fù)合酶的聯(lián)合發(fā)酵下，產(chǎn)生的各種酶類、有機(jī)酸、氨基 酸、益生菌等大大提高了玉米胚芽巧的營養(yǎng)價值，發(fā)酵玉米胚芽巧中蛋白質(zhì)含量顯著增加， 纖維素等抗?fàn)I養(yǎng)因子含量顯著降低，減少了對動物的危害，是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)飼料資源；
[0020] 2.在動物中添加能夠顯著增加動物的采食量和消化率，提高機(jī)體抗氧化能力。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明提供的乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米胚芽巧的制作方 法進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0022] 實(shí)施例1
[0023] 參照本實(shí)施例的乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米胚芽巧的制做方法，它包括W下具 體步驟：
[0024] (1)發(fā)酵原料的制備
[0025] 將發(fā)酵原料一一玉米胚芽巧粉碎至40目（0.42mm)的粉狀。
[0026] (2)乳酸菌菌液的制備
[0027] 用無菌吸管吸取適宜的液體培養(yǎng)基，滴入乳酸菌凍干粉保存瓶中，輕輕振蕩，使凍 干菌體呈懸浮狀，吸取全部菌懸液，移植于MRS固體培養(yǎng)基中，在37°C培養(yǎng)36h后，接種到MRS 斜面培養(yǎng)基上，斜面培養(yǎng)3加后，接種到液體培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)12h，得到活菌數(shù)為1.0 X IO8的種子液，將種子液W5%的接菌量接種到10化種子罐中，培養(yǎng)1化后移種至It發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)24h后得到活菌數(shù)為2.OX IO8的發(fā)酵種子液。
[002引（3)發(fā)酵
[0029] 將上述制備的乳酸菌發(fā)酵種子液按5% (v/w)接入到玉米胚芽巧中，并添加0.5% (w/w)的復(fù)合酶(復(fù)合酶成分為:酸性蛋白酶50000IU/g，纖維素酶36000IU/g，e-葡聚糖酶 3000lU/g，和木聚糖酶10000lU/g)，調(diào)整含水量為40 %，pH值5.0，混合均勻后得到發(fā)酵基礎(chǔ) 料;接種后的發(fā)酵基礎(chǔ)料按厚度60cm，均勻的攤鋪在發(fā)酵池底，發(fā)酵池溫度保持在30°C，攬 拌均勻后，厭氧發(fā)酵36h，得到發(fā)酵酶解玉米胚芽巧。
[0030] (4)烘干
[0031] 發(fā)酵后的產(chǎn)物全部移入流化床中進(jìn)行烘干，烘干溫度控制在50°C，待烘干后的產(chǎn) 物降至室溫后，即得發(fā)酵玉米胚芽巧成品。
[0032] 實(shí)施例2
[0033] 參照本實(shí)施例的乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米胚芽巧的制做方法，它包括W下具 體步驟：
[0034] (1)發(fā)酵原料的制備
[0035] 將發(fā)酵原料一一玉米胚芽巧粉碎至40目（0.42mm)的粉狀。
[0036] (2)乳酸菌菌液的制備
[0037] 用無菌吸管吸取適宜的液體培養(yǎng)基，滴入乳酸菌凍干粉保存瓶中，輕輕振蕩，使凍 干菌體呈懸浮狀，吸取全部菌懸液，移植于MRS固體培養(yǎng)基中，在37°C培養(yǎng)4化后，接種到MRS 斜面培養(yǎng)基上，斜面培養(yǎng)42h后，接種到液體培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)1她，得到活菌數(shù)為3.OX IO8的種子液，將種子液W7%的接菌量接種到10化種子罐中，培養(yǎng)1她后移種至It發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)24h后得到活菌數(shù)為1.0 X IO9的發(fā)酵種子液。
[003引（3)發(fā)酵
[0039] 將上述制備的乳酸菌發(fā)酵種子液按5% (v/w)接入到玉米胚芽巧中，并添加0.5% (w/w)復(fù)合酶（復(fù)合酶成分為：酸性蛋白酶50000IU/g，纖維素酶36000IU/g，e-葡聚糖酶 3000lU/g，和木聚糖酶10000lU/g)，調(diào)整含水量為40 %，pH值6.0，混合均勻后得到發(fā)酵基礎(chǔ) 料;接種后的發(fā)酵基礎(chǔ)料按厚度65cm，均勻的攤鋪在發(fā)酵池底，發(fā)酵池溫度保持在35°C，攬 拌均勻后，厭氧發(fā)酵42h，得到發(fā)酵酶解玉米胚芽巧。
[0040] (4)烘干
[0041] 發(fā)酵后的產(chǎn)物全部移入流化床中進(jìn)行烘干，烘干溫度控制在53°C，待烘干后的產(chǎn) 物降至室溫后，即得發(fā)酵玉米胚芽巧成品。
[0042] 實(shí)施例3
[0043] 參照本實(shí)施例的乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米胚芽巧的制做方法，包括W下具體 步驟：
[0044] (1)發(fā)酵原料的制備
[0045] 將發(fā)酵原料一一玉米胚芽巧粉碎至40目（0.42mm)的粉狀。
[0046] (2)乳酸菌菌液的制備
[0047] 用無菌吸管吸取適宜的液體培養(yǎng)基，滴入乳酸菌凍干粉保存瓶中，輕輕振蕩，使凍 干菌體呈懸浮狀，吸取全部菌懸液，移植于MRS固體培養(yǎng)基中，在37°C培養(yǎng)4她后，接種到MRS 斜面培養(yǎng)基上，斜面培養(yǎng)4她后，接種到液體培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)24h，得到活菌數(shù)為2.0 X IO8的種子液，將種子液W10%的接菌量接種到I(K)L種子罐中，培養(yǎng)24h后移種至It發(fā)酵罐 中，培養(yǎng)36h后得到活菌數(shù)為2.OX IO9的發(fā)酵種子液。
[004引（3)發(fā)酵
[0049]將上述制備的乳酸菌發(fā)酵種子液按5% (v/w)接入到玉米胚芽巧中，并添加0.5% (w/w)復(fù)合酶（復(fù)合酶成分為：酸性蛋白酶50000IU/g，纖維素酶36000IU/g，e-葡聚糖酶 3000IU/g，和木聚糖酶lOOOOIU/g)，調(diào)整含水量為40%，pH值7.0，混合均勻后得到發(fā)酵基礎(chǔ) 料;接種后的發(fā)酵基礎(chǔ)料按厚度70cm，均勻的攤鋪在發(fā)酵池底，發(fā)酵池溫度保持在40°C，攬 拌均勻后，厭氧發(fā)酵4她，得到發(fā)酵酶解玉米胚芽巧。
[00加](4)烘干
[0051] 發(fā)酵后的產(chǎn)物全部移入流化床中進(jìn)行烘干，烘干溫度控制在55°C，待烘干后的產(chǎn) 物降至室溫后，即得發(fā)酵玉米胚芽巧成品。
[0052] 通過W下試驗(yàn)數(shù)據(jù)，可W體現(xiàn)采用本發(fā)明制作的乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵玉米胚 芽巧的實(shí)際應(yīng)用效果：
[0053] -、乳酸菌和復(fù)合酶固態(tài)發(fā)酵對玉米胚芽巧營養(yǎng)成分及抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的影響
[0化4] 1、材料與方法
[0055] 玉米胚芽巧（市售，CP為21.05%)，乳酸菌為吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧分院動物營養(yǎng) 研究所自主保藏。MRS固體培養(yǎng)基:蛋白腺lOg、牛肉膏l(xiāng)Og、酵母提取物5g、巧樣酸二錠2g、乙 酸鋼5g、K2HP04 2g、MnS〇4*4出0 0.25g、MgS〇4*7H2〇 0.58g、葡萄糖20g、吐溫-801 血、瓊脂 25邑、水1000 mL,調(diào)抑6.2~6.4，121°(3滅菌2〇111111。液體培養(yǎng)基:葡萄糖20旨、蛋白腺10旨、酵母 提取物5g、K2HP〇42g、水1000血，pH 7.0，12 rC滅菌20min。
[0056] 酸性蛋白酶(50000IU/g)纖維素酶(36000IU/g)，e-葡聚糖酶(3000IU/g)，和木聚 糖酶(lOOOOIU/g)購自黑龍江省肇東日成酶制劑有限公司。
[0057] 2.發(fā)酵樣品制備及測定指標(biāo)
[005引按照本發(fā)明的發(fā)酵方法，將玉米胚芽巧密閉發(fā)