一種復(fù)合微生物發(fā)酵制備飼料添加劑的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥發(fā)酵飼料添加劑生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)合微生物發(fā)酵制備飼料添加劑的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]中藥發(fā)酵就是采用微生物發(fā)酵方法生產(chǎn)中藥。在傳統(tǒng)的中藥生產(chǎn)中的中藥炮制就利用了天然微生物中藥發(fā)酵以提高中藥藥效、消除中藥毒副作用、改變中藥藥性。現(xiàn)代的中藥發(fā)酵采用了現(xiàn)代微生物發(fā)酵技術(shù)，有目的地選擇微生物和中藥搭配進(jìn)行中藥發(fā)酵，其代謝理論、藥效成分理念不同于傳統(tǒng)的中藥發(fā)酵，生產(chǎn)可控性好，藥效更高、更好、更新。
[0003]目前公認(rèn)的主要作用機(jī)理有以下幾個(gè)方面:(I)藥效更高，100%吸收:腸道益生菌發(fā)酵中藥，有效成分小分子化，易于吸收;藥用真菌發(fā)酵中藥，有效成分提高;微生物的葡萄糖苷酶將糖苷轉(zhuǎn)變成苷元;微生物的酶使植物細(xì)胞中的中藥成分溶出；(2)無(wú)毒副作用，口感更好:發(fā)酵過(guò)程微生物的代謝產(chǎn)物能分解毒素，同時(shí)能夠改善中藥口感，矯味；(3)藥效更新:微生物的菌體和代謝物，中藥成分的微生物轉(zhuǎn)化作用，中藥成分的代謝調(diào)控作用，微生物成分與中藥成分的相互作用等等，以上的種種因素均可以產(chǎn)生新藥效成分或?yàn)橹兴幓钚猿煞中揎椞峁┬峦緩剑?4)中藥中也含有糖類、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分，微生物代謝產(chǎn)生的消化酶能促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)成分的更好消化吸收；(5)藥效提高，療效提速。與傳統(tǒng)中藥相比，發(fā)酵后中藥的藥效提高4-28倍，且吸收后30分鐘到達(dá)血液。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種復(fù)合微生物發(fā)酵制備飼料添加劑的方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是，一種復(fù)合微生物發(fā)酵制備飼料添加劑的方法，包括以下步驟:①按固液比2.5kg:1L?5kg:1L向固體物料中加入水，滅菌，冷卻至33?38°C，得固液混合物；其中，所述固體物料由下述重量份數(shù)的原料組成:杜仲葉粉1-10份、構(gòu)樹葉粉1-1 O份、黃芪提取物1-5份、麩皮1-3份、碳酸鈣0.05-0.3份；
②糞腸球菌種子液的制備:將活化后的糞腸球菌接種于糞腸球菌液體培養(yǎng)基上，37?39°C培養(yǎng)24小時(shí);枯草芽孢桿菌種子液的制備:將活化后的枯草芽孢桿菌接種于枯草芽孢桿菌液體培養(yǎng)基上，33?37 °C培養(yǎng)24小時(shí);凝結(jié)芽孢桿菌種子液的制備:將活化后凝結(jié)芽孢桿菌接種于凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基上，33?37 °C培養(yǎng)24小時(shí)；
③將步驟②制備的糞腸球菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液和凝結(jié)芽孢桿菌種子液按體積比(1-10):(1-10):(1-10)混合，得混合種子液，將混合種子液接種于步驟①滅菌后得到的固液混合物，溫度35-40°C下發(fā)酵48-72小時(shí)，干燥至含水量〈6%，即得到飼料添加劑。
[0006]所述糞腸球菌液體培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨30?50g/L，葡萄糖30?40 g/L，食鹽5?10 g/L，肝粉5?7 g/L，pH 6.5;枯草芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉3-5g/L，葡萄糖10-20g/L，硫酸鎂3-5g/L,pH 6.0；凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉3_5g/L，胰蛋白胨2-5g/L，葡萄糖10-20g/L，氯化I丐3-5 g/L,pH 6.0。
[0007]所述步驟①中滅菌是在滅菌鍋中121°C滅菌30分鐘。
[0008]所述步驟③中混合種子液的接種重量為步驟①中固液混合物重量的10?20%。
[0009]所述步驟②中糞腸球菌活化是斜面培養(yǎng)基上于38°C下培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行活化，糞腸球菌活化所用斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨30?50 g/L，葡萄糖30?40 g/L，食鹽5?10 g/L,肝粉5?7 g/L，瓊脂15g/L,pH 6.5；枯草芽孢桿菌活化是斜面培養(yǎng)基上于35°C下培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行活化，枯草芽孢桿菌活化所用斜面培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉3_5g/L，葡萄糖10-20g/1，硫酸鎂3-58/1，瓊脂15-20 g/L，pH 6.0;凝結(jié)芽孢桿菌活化是斜面培養(yǎng)基上于35°C下培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行活化，凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉3-5g/L，胰蛋白胨2-5g/L，葡萄糖 10-20g/L，瓊脂 15-20 g/L，氯化鈣3-5 g/L,pH 6.0。
[0010]所述黃芪提取物可以市購(gòu)現(xiàn)有的黃芪提取物;優(yōu)選的，所述黃芪提取物的制備方法如下:向黃芪粉中加入水，水的加入質(zhì)量為黃芪粉質(zhì)量的8倍，40-50°C下浸漬4小時(shí)，然后回流提取2小時(shí)，得濾渣和濾液；向?yàn)V渣中加入6倍于濾渣質(zhì)量的水，回流提取2小時(shí)，過(guò)濾，然后合并兩次得到的濾液，濃縮至密度為1.15-1.25g/ml，加入乙醇得到混合物，混合物中乙醇質(zhì)量含量為75%，靜置8小時(shí)，抽去上清液，將沉淀干燥，即為黃其提取物。
[0011]固體物料中杜仲和黃芪提取物所含的糖類物質(zhì)作為碳源，杜仲和構(gòu)樹中的蛋白質(zhì)和氨基酸作為氮源，其所含的維生素和胡蘿卜素作為生長(zhǎng)因子，促進(jìn)乳酸菌(糞腸球菌、枯草芽孢桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌)的生長(zhǎng)，麩皮能促進(jìn)芽孢菌芽孢的產(chǎn)量。
[0012]本發(fā)明中采用的有益效果是:采用本發(fā)明中菌群組合，創(chuàng)新性的利用其優(yōu)勢(shì)摒棄其缺點(diǎn)。首先，糞腸球菌的代謝產(chǎn)物肽聚糖對(duì)免疫低下和反復(fù)呼吸道感染等有明顯療效，但是糞腸球菌經(jīng)過(guò)胃酸后死亡率較高，凝結(jié)芽孢桿菌耐胃酸能力強(qiáng)，且無(wú)耐藥性，穩(wěn)定性好；枯草芽孢桿菌能代謝一些脂肪酶，纖維素酶對(duì)固體物料的深度降解具有很好的作用。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。以下實(shí)施例中糞腸球菌采購(gòu)于北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院，編號(hào)LICC10319，拉丁學(xué)名:Enterococcus faecalis ;枯草芽孢桿菌采購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，編號(hào)CICC 20445，拉丁學(xué)名:Baci I Ius subtil is;凝結(jié)芽孢桿菌采購(gòu)于青島東海藥業(yè)有限公司，菌株為凝結(jié)芽孢桿菌TBC169，拉丁學(xué)名:Bacillus coagulans。所用的豬肝粉購(gòu)自于三門峽百特生化有限公司。
[0014]實(shí)施例1
一種復(fù)合微生物發(fā)酵制備飼料添加劑的方法，包括以下步驟:①按固液比4kg:1L向固體物料中加入水，在滅菌鍋中121°C滅菌30分鐘，冷卻至38 °C，得固液混合物;其中，所述固體物料由下述重量份數(shù)的原料組成:杜仲葉粉5份、構(gòu)樹葉粉5份、黃芪提取物3份、麩皮2份、碳酸鈣0.1份；
②糞腸球菌種子液的制備:將活化后的糞腸球菌接種于糞腸球菌液體培養(yǎng)基上，38°C培養(yǎng)24小時(shí);枯草芽孢桿菌種子液的制備:將活化后的枯草芽孢桿菌接種于枯草芽孢桿菌液體培養(yǎng)基上，35 °C培養(yǎng)24小時(shí);凝結(jié)芽孢桿菌種子液的制備:將活化后凝結(jié)芽孢桿菌接種于凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基上，35 °C培養(yǎng)24小時(shí)；
③將步驟②制備的糞腸球菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液和凝結(jié)芽孢桿菌種子液按體積比5:5:4混合，得混合種子液，將混合種子液接種(混合種子液的接種重量為步驟①中固液混合物重量的15%)于步驟①滅菌后得到的固液混合物，溫度38°C下發(fā)酵48小時(shí)，在干燥箱中43°C下干燥至含水量〈5%，即得到飼料添加劑。
[0015]所述糞腸球菌液體培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨40g/L，葡萄糖35 g/L，食鹽8 g/L，豬肝粉6 g/L,pH 6.5;枯草芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉58/1，葡萄糖158/1，硫酸鎂5g/L，pH 6.0;凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉3g/L，胰蛋白胨2g/L，葡萄糖15g/L，氯化鈣5 g/L,pH 6.0ο
[0016]所述步驟②中糞腸球菌活化是斜面培養(yǎng)基上于38°C下培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行活化，糞腸球菌活化所用斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨40 g/L，葡萄糖35 g/L，食鹽8 g/L，豬肝粉6 g/L，瓊脂15 g/L,pH 6.5;枯草芽孢桿菌活化是斜面培養(yǎng)基上于35°C下培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行活化，枯草芽孢桿菌活化所用斜面培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉5g/L，葡萄糖15g/L，硫酸鎂5g/L，瓊脂20 g/L,pH 6.0;;凝結(jié)芽孢桿菌活化是斜面培養(yǎng)基上于35°C下培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行活化，凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉3g/L，胰蛋白胨2g/L，葡萄糖15g/L，瓊脂18 g/L，氯化鈣5 g/L,pH 6.0ο
[0017]所述黃芪提取物的制備方法如下:向黃芪粉中加入水，水的加入質(zhì)量為黃芪粉質(zhì)量的8倍，45°C下浸漬4小時(shí)，然后回流提取2小時(shí)，得濾渣和濾液；向?yàn)V渣中加入6倍于濾渣質(zhì)量的水，回流提取2小時(shí)，過(guò)濾，然后合并兩次得到的濾液，濃縮至密度為1.2g/ml，加入乙醇得到混合物，混合物中乙醇質(zhì)量含量為75%，靜置8小時(shí)，抽去上清液，將沉淀干燥，即為黃其提取物。
[0018]實(shí)施例2
一種復(fù)合微生物發(fā)酵制備飼料添加劑的方法，包括以下步驟:①按固液比2.5kg:1L向固體物料中加入水，在滅菌鍋中121 °C滅菌30分鐘，冷卻至35 °C，得固液混合物;其中，所述固體物料由下述重量份數(shù)的原料組成:杜仲葉粉I份、構(gòu)樹葉粉10份、黃芪提取物I份、麩皮3份、碳酸鈣0.3份；
②糞腸球菌種子液的制備:將活化后的糞腸球菌接種于糞腸球菌液體培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)24小時(shí);枯草芽孢桿菌種子液的制備:將活化后的枯草芽孢桿菌接種于枯草芽孢桿菌液體培養(yǎng)基上，33 °C培養(yǎng)24小時(shí);凝結(jié)芽孢桿菌種子液的制備:將活化后凝結(jié)芽孢桿菌接種于凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基上，33 °C培養(yǎng)24小時(shí)；
③將步驟②制備的糞腸球菌種子液、枯草芽孢桿菌種子液和凝結(jié)芽孢桿菌種子液按體積比1:10:1混合，得混合種子液，將混合種子液接種(混合種子液的接種重量為步驟①中固液混合物重量的20%)于步驟①滅菌后得到的固液混合物，溫度35°C下發(fā)酵72小時(shí)，鼓風(fēng)干燥箱中40°C下干燥至含水量〈5%，即得到飼料添加劑。
[0019]所述糞腸球菌液體培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨30g/L，葡萄糖40 g/L，食鹽5 g/L，豬肝粉5 g/L,pH 6.5;枯草芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉38/1，葡萄糖2(^/1，硫酸鎂4 g/L,pH 6.0;凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉5g/L，胰蛋白胨3g/L，葡萄糖 10g/L，氯化I丐3 g/L,pH 6.0ο
[0020]所述步驟②中糞腸球菌活化是斜面培養(yǎng)基上于38°C下培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行活化，糞腸球菌活化所用斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨30 g/L，葡萄糖40 g/L，食鹽5 g/L，豬肝粉5 g/L，瓊脂20 g/L,pH 6.5;枯草芽孢桿菌活化是斜面培養(yǎng)基上于35°C下培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行活化，枯草芽孢桿菌活化所用斜面培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉3g/L，葡萄糖20g/L，硫酸鎂4g/L，瓊脂15 g/L,pH 6.0;;凝結(jié)芽孢桿菌活化是斜面培養(yǎng)基上于35°C下培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行活化，凝結(jié)芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的配方為:酵母浸粉5g/L，胰蛋白胨3g/L，葡萄