1)，按重量份稱取玉米粉、蘋果 渣、DDGS、玉米蛋白粉和豆柏，將其混合均勻后粉碎過30目篩，而后加入混合物重量30 %的 純凈水，攪拌均勻；步驟(2)，向步驟（1)攪拌得到的混合物中加入活化后的復(fù)合菌劑，繼續(xù) 攪拌均勻，而后在32°C發(fā)酵48小時，在此過程中向混合物中通過空氣，通氣量為15L空氣/ l〇〇kg飼料混合物/分鐘;步驟(3)，將步驟(2)制得的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行低溫干燥，再粉碎成粉， 過50目篩，即得對照試驗組1的產(chǎn)品。
[0050] 對照試驗組2是由玉米粉400重量份，玉米蛋白粉25重量份和豆柏150重量份經(jīng)復(fù) 合發(fā)酵菌劑發(fā)酵制備而成；其中所述的復(fù)合菌劑是地衣芽孢桿菌（Bacillus lichnifarimis)、短小芽抱桿菌(Bacillus brevis)和產(chǎn) |j元假絲酵母(Candida util is)組 成。其制備方法包括如下步驟:步驟（1)，按重量份稱取玉米粉、玉米蛋白粉和豆柏，將其混 合均勻后粉碎過30目篩，而后加入混合物重量30%的純凈水，攪拌均勻；步驟（2)，向步驟 (1)攪拌得到的混合物中加入活化后的復(fù)合菌劑，繼續(xù)攪拌均勻，而后在29°C發(fā)酵8小時，在 此過程中向混合物中通過空氣，通氣量為15L空氣/100kg飼料混合物/分鐘；而后調(diào)整發(fā)酵 混合物的溫度，在38°C發(fā)酵8小時，在此過程中向混合物中通過空氣，通氣量為5L空氣/ l〇〇kg飼料混合物/分鐘;接下來調(diào)整發(fā)酵物的溫度，在44 °C靜置發(fā)酵12小時;步驟(3)，將步 驟(2)制得的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行低溫干燥，再粉碎成粉，過50目篩，即得對照試驗組2的產(chǎn)品。 [0051 ]對照試驗組3為本發(fā)明實施例1的A組分。
[0052]設(shè)置兩個試驗組，分別為本發(fā)明實施例1、2的產(chǎn)品，分別取水常溫浸提實施例1、2 以及對照試驗組1-3的產(chǎn)品，產(chǎn)品和水的比例為1:10,常溫提取5小時，而后對浸提液過濾 后，將濾液過0.22微米的濾器，得到無菌提取濾液，取無菌提取濾液分別對金黃色葡萄球 菌、大腸桿菌、沙門氏菌和志賀氏菌進(jìn)行抑菌圈試驗，記錄抑菌圈的大小，具體結(jié)果見下表 1：
[0053] 表1抑菌試驗結(jié)果一抑菌圈大小(mm)
[0054]
[0055] 由以上抑菌試驗可，本發(fā)明實施例1、2的產(chǎn)品對于常見的畜禽、水產(chǎn)易感病菌-金 黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌和志賀氏菌都具有很好的抑制作用，并且通過對照試驗 組3與對照試驗組1和2的比較可知，本發(fā)明組分A的制備過程中，發(fā)酵底物和發(fā)酵參數(shù)對于 發(fā)酵產(chǎn)物一抗菌肽的產(chǎn)量及抗菌活性具有重要的影響，在偏離本發(fā)明的生產(chǎn)條件下，其抗 菌效果明顯減弱，而由實施例1和2與對比試驗組3的比較可知，本發(fā)明的產(chǎn)品中，組分B和組 分A的配合使用對于抑菌活性具有明顯的協(xié)同、增強(qiáng)的效果，其抑菌程度明顯好于單獨使用 A組分。
[0056] 實施例4:動物飼喂試驗
[0057]選取網(wǎng)箱養(yǎng)殖的、平均體重為1.0-1. lkg的草魚1000尾，隨機(jī)分為5組，每個網(wǎng)箱 200尾左右，在同一片水域飼養(yǎng)，其中組1為空白對照組，采用普通市售的草魚顆粒飼料進(jìn)行 飼喂；組2-3為實驗組，分別采用實施例1、2的抗菌肽活性淡水魚養(yǎng)殖專用飼料添加劑與普 通市售的草魚顆粒飼料原料按照1:80的質(zhì)量比混合均勻后按照傳統(tǒng)制粒方法制成草魚顆 粒飼料后進(jìn)行飼喂;組4-5為對比組，分別采用實施例1中的組分A、組分B與普通市售的草魚 顆粒飼料原料按照1:80的質(zhì)量比混合均勻后按照傳統(tǒng)制粒方法制成草魚顆粒飼料后進(jìn)行 飼喂，飼喂220天左右直至草魚上市，統(tǒng)計感染爆發(fā)次數(shù)（以出現(xiàn)2尾以上、且驗證為細(xì)菌性 感染導(dǎo)致的死魚為1次）、最終草魚的存活率和平均體重增長率(平均體重增加量/最初平均 體重*100%)。具體結(jié)果見下表2:
[0058] 表2飼喂試驗結(jié)果
[0060] 由上表的結(jié)果可知，相比不添加添加劑的情況，添加本發(fā)明的添加劑或者實施例1 制得的組分A或組分B均取得了改善淡水魚抗感染能力、提高淡水魚養(yǎng)殖存活率的效果，且 對于生長情況也有一定的改善，但是，相比組4和組5,組2-3的養(yǎng)殖效果明顯要好，其感染發(fā) 生次數(shù)以及死亡率顯然低于單獨飼喂組分A或組分B，且要好于二者簡單的疊加，說明組分A 和組分B起到了一定的協(xié)同增效的作用。
[0061] 以上所涉及的原料均為現(xiàn)有技術(shù)可以購買得到的常規(guī)原料及菌種。此外應(yīng)理解， 在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些 等價形式同樣落于本發(fā)明所限定的范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種抗菌肽活性淡水魚養(yǎng)殖專用飼料添加劑及其制備方法，其特征在于，是由組分A 和組分B組成，其中組分A是由玉米粉300-500重量份，蘋果渣20-30重量份，DDGS 10-15重量 份，玉米蛋白粉20-30重量份和豆柏100-200重量份經(jīng)復(fù)合發(fā)酵菌劑發(fā)酵制備而成;組分B是 由黃芪9-15重量份，馬齒莧22-30重量份，貫眾3-5重量份，牡丹皮5-7重量份，白礬0.05-0.1 重量份，米糠50-80重量份制備而成;其中所述的復(fù)合菌劑是地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌 和產(chǎn)朊假絲酵母組成； 其中制備組分A的制備方法包括如下步驟： 步驟（1)，按重量份稱取玉米粉、蘋果渣、DDGS、玉米蛋白粉和豆柏，將其混合均勻后粉 碎過10-30目篩，而后加入混合物重量30%的純凈水，攪拌均勻； 步驟(2)，向步驟（1)攪拌得到的混合物中加入活化后的復(fù)合菌劑，繼續(xù)攪拌均勻，而后 在27-29°C左右發(fā)酵8-12小時，在此過程中向混合物中通過空氣，通氣量為15L空氣/100kg 飼料混合物/分鐘;而后調(diào)整發(fā)酵混合物的溫度，在35-38 °C左右發(fā)酵8-12小時，在此過程中 向混合物中通過空氣，通氣量為5L空氣/100kg飼料混合物/分鐘；接下來調(diào)整發(fā)酵物的溫 度，在42-44 °C左右靜置發(fā)酵12-24小時； 步驟(3)，將步驟(2)制得的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行低溫干燥，再粉碎成粉，過30-50目的，即得組 分A; 其中組分B的制備方法包括如下步驟： 步驟(一），按重量份稱取黃芪、馬齒莧、貫眾、牡丹皮、白礬和米糠，并將稱取的牡丹皮、 貫眾和馬齒莧碎成10-20目的粉末，將稱取的米糠、白礬分別粉碎成50-60目的粉末； 步驟(二），取稱取的牡丹皮、貫眾和馬齒莧，將其與體積濃度為75%的乙醇按等質(zhì)量混 合，在密閉容器中加熱至55-65Γ左右，提取3-5小時，而后過濾得到醇提濾渣和醇提濾液； 將醇提濾渣和稱取的黃芪以及白礬粉末混合，加入混合物質(zhì)量1.5-2倍的水，在密閉容器中 加熱至50-55°C左右，提取8-12小時，而后過濾得到水提濾液； 步驟(三），將步驟(二）制得的醇提濾液和水提濾液以及步驟(一）制得的米糠粉混合， 攪拌均勻后進(jìn)行低溫干燥，再粉碎成30-50目的粉末，即得組分B。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌肽活性淡水魚養(yǎng)殖專用飼料添加劑及其制備方法，其特 征在于，組分A是由玉米粉400重量份，蘋果渣25重量份，DDGS 15重量份，玉米蛋白粉25重量 份和豆柏150重量份經(jīng)復(fù)合發(fā)酵菌劑發(fā)酵制備而成。3. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗菌肽活性淡水魚養(yǎng)殖專用飼料添加劑及其制備方法，其特 征在于，組分B是由黃芪12重量份，馬齒莧25重量份，貫眾4重量份，牡丹皮6重量份，白礬 0.08重量份，米糠60重量份。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗菌肽活性淡水魚養(yǎng)殖專用飼料添加劑及其制備方法，是由組分A和組分B組成，其中組分A是由玉米粉300-500重量份，蘋果渣20-30重量份，DDGS？10-15重量份，玉米蛋白粉20-30重量份和豆粕100-200重量份經(jīng)復(fù)合發(fā)酵菌劑發(fā)酵制備而成；組分B是由黃芪9-15重量份，馬齒莧22-30重量份，貫眾3-5重量份，牡丹皮5-7重量份，白礬0.05-0.1重量份，米糠50-80重量份制備而成。本發(fā)明的飼料添加劑精選天然原料，經(jīng)發(fā)酵或提取制得了一種天然、綠色、安全的飼料添加劑，其相比傳統(tǒng)的抗生素藥物，更加符合現(xiàn)代漁業(yè)發(fā)展的需求，具有極大的生產(chǎn)價值。
【IPC分類】A23K50/80, A23K10/30, A23K20/147, A23K10/37, A23K10/12, A23K10/38
【公開號】CN105614059
【申請?zhí)枴緾N201511016843
【發(fā)明人】曾勇
【申請人】寧波市江東農(nóng)茹生物科技有限公司
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2015年12月30日