一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于保健食品領(lǐng)域，具體涉及一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品。該功能性食品由以下重量份數(shù)的原料組成：羊肚菌酶解粉60?80份，靈芝提取物50?70份，松茸多糖20?40份，枸杞多糖20?40份，低聚果糖5?10份，小麥纖維5?10份，大豆纖維5?8份，茶多酚0.01?0.03份，麥精10?50份，植物乳桿菌粉劑10?20份。本發(fā)明所提供的多糖提取方法使得多糖提取率得到提高，使產(chǎn)品具有較好的提高免疫力的效果，并且獲得的產(chǎn)品具有較好的降解膽固醇的功效。CGMCC NO.1176320151130
【專利說明】
一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001] 本發(fā)明屬于營養(yǎng)保健食品領(lǐng)域，具體涉及一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合 功能性食品。
【背景技術(shù)】：
[0002] 羊肚菌是一種珍稀食用菌品種，因其菌蓋表面凹凸不平、狀如羊肚而得名。羊肚菌 又稱羊肚菜、羊蘑、羊肚蘑。用于食積氣滯、脘腹脹滿、痰壅氣逆喘咳。羊肚菌又稱羊肚菜、羊 蘑。羊肚菌(Morchella)，又名草笠竹，是一種珍貴的食用菌和藥用菌。其菌蓋部分含有異亮 氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸和纈氨酸7種人體必需的氨基酸，甘寒無 毒，有益腸胃、化痰理氣藥效。羊肚菌的營養(yǎng)相當豐富，據(jù)測定，羊肚菌含粗蛋白20%、粗脂 肪26 %、碳水化合物38.1 %，還含有多種氨基酸，特別是谷氨酸含量高達1.76 %。人體中的 蛋白質(zhì)是由20種氨基酸搭配而組成的，而羊肚菌就含有18種，其中羊肚菌8種氨基酸是人體 不能制造的，另外，據(jù)測定羊肚菌至少含有8種維生素:維生素 B1、維生素 B2、維生素 B12、煙 酸、泛酸、吡噦醇、生物素、葉酸等。羊肚菌的營養(yǎng)成份，可與牛乳、肉和魚粉相當。因此，國際 上常稱它為"健康食品"之一。羊肚菌還含抑制腫瘤的多糖，抗菌、抗病毒的活性成分，具有 增強機體免疫力、抗疲勞、抗病毒、抑制腫瘤等諸多作用。
[0003] 靈芝，被歷代醫(yī)藥家視為滋補強壯、扶正固本的神奇珍品。主含氨基酸、多肽、蛋白 質(zhì)、真菌溶菌酶(fungal lysozyme)，以及糖類(還原糖和多糖）、麥角留醇、三砲類、香豆精 甙、揮發(fā)油、硬脂酸、苯甲酸、生物堿、維生素 B2及C等；孢子還含甘露醇、海藻糖 (trehalose)。經(jīng)過大量臨床研究，靈芝對神經(jīng)衰弱、高脂血癥、冠心病心絞痛、心律失常、克 山病、高原不適癥、肝炎、出血熱、消化不良、氣管炎等各有不同程度的療效。需要注意的是， 僅僅通過用靈芝食療這種方法并不能起到明顯的防治效果，建議可用決明子、黑烏龍等組 方為決烏湯茶這種中醫(yī)經(jīng)典組方茶，對高血脂等癥可以起到很好的防治效果。藥理研究證 明，靈芝有多方面的生物活性。
[0004] 真菌多糖又稱多聚糖，是生物有機體內(nèi)普遍存在的一類生物大分子，不僅參與組 織細胞骨架的構(gòu)成，而且是多種內(nèi)源性生物活性分子的重要組成成分。有一定的調(diào)節(jié)機體 免疫功能的作用，其作用是多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點的，如促進免疫細胞增殖與分化，分泌各 種淋巴因子，調(diào)節(jié)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)(·Μ)的平衡等。
[0005] 真菌多糖對細胞有著極強的修復(fù)作用。服用真菌多糖保健食品，能及時補充細胞 間質(zhì)中缺乏的多糖等物質(zhì)，使受損的細胞得到及時的修復(fù)，達到保持細胞健康、延長細胞壽 命、從而實現(xiàn)人體健康的目的。上海醫(yī)科大學(xué)李瑞等試驗發(fā)現(xiàn)，真菌多糖能顯著提高細胞膜 的流動性和封閉度，衰老的細胞用真菌多糖培養(yǎng)后，封閉度提高11 %，流動性提高32%，細 胞膜流動性、封閉性的提高，表明細胞生理功能得到提高。
[0006] 現(xiàn)代科技表明，真菌多糖是食用菌中所含的最重要的藥效成分。是一種β-型的多 糖，具有廣泛的藥理活性。靈芝、冬蟲夏草、木耳、銀耳、香菇、猴頭菇、白靈菇、竹黃、云芝、雞 腿蘑、松茸、桑黃等食用菌，都含有真菌多糖。
[0007] 中國發(fā)明專利201110407414.2公布了一種具有保健作用的真菌營養(yǎng)液，該營養(yǎng)液 以香菇、灰樹花、猴頭菇、云芝等真菌為主要原料，輔以低聚木糖、異麥芽酮糖醇、?；撬?、賴 氨酸、維生素 E、黃原膠和水等營養(yǎng)素加工而成，原料配伍科學(xué)，協(xié)同作用，具有提高人體免 疫力和促進機體胃粘膜損傷修復(fù)雙功能保健作用。
[0008] 益生菌，是一類對宿主有益的活性微生物，是定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn) 生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱。其廣 泛應(yīng)用于生物工程、工農(nóng)業(yè)、食品安全以及生命健康領(lǐng)域。
[0009] 調(diào)節(jié)腸胃功能紊亂是益生菌最廣為人知的功能之一，除此之外，益生菌還具有產(chǎn) 生營養(yǎng)物質(zhì)、抵抗細菌病毒的感染以及預(yù)防治療某些疾病的功能。本發(fā)明將提供一種添加 有益生菌的復(fù)合真菌多糖組合物，兼具真菌及多糖提高免疫力的功能以及益生菌的保健功 效，改善目前保健品效果單一、復(fù)合功能不理想的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0010] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食 品，由以下重量份數(shù)的原料組成：
[0011] 羊肚菌酶解粉60-80份，靈芝提取物50-70份，松茸多糖20-40份，枸杞多糖20-40 份，低聚果糖5-10份，小麥纖維5-10份，大豆纖維5-8份，茶多酚0.01-0.03份，麥精10-50份， 植物乳桿菌粉劑10-20份。
[0012] 所述羊肚菌酶解粉的制備方法如下：
[0013] (1)羊肚菌子實體干燥粉碎；
[0014] (2)水溶均質(zhì)：將粉碎后的羊肚菌子實體加入不銹鋼筒中，加入子實體質(zhì)量3-6倍 的水，浸泡3-5小時，然后將此羊肚菌子實體液通過膠體磨，膠體磨操作條件為:調(diào)整膠體磨 定子與轉(zhuǎn)子的間隙為〇. 5-1微米，膠體磨流量為0.4-1噸/小時；
[0015] (3)升溫酶解:將經(jīng)過膠體磨處理的羊肚菌子實體液轉(zhuǎn)移到不銹鋼酶解罐中加熱 到50-60°C，調(diào)整pH到4.5-6.0，加入羊肚菌子實體重量0.05-0.1 %的纖維素酶、0.01-0.1 % 的β-葡聚糖酶、0.01-0.1%的蛋白酶，保溫酶解0.5-1.5小時，酶解過程中不斷攪拌；
[0016] (4)干燥:酶解后的醪液過濾后干燥獲得羊肚菌酶解粉；
[0017] 所述靈芝提取物制備方法如下：
[0018] 靈芝粉碎，過40-50目篩后，添加靈芝3-6倍重量無水乙醇浸漬提取，控制溫度30-45°C，2-4小時后調(diào)整溫度為55-60°C 1-2小時，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取 后的靈芝殘渣中添加75-85°C熱水，熱水添加量為靈芝殘渣重量的2-4倍，處理時間30-50分 鐘，連續(xù)提取2-3次，將提取液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和 熱水提取物合并粉碎，過60目篩，即得靈芝提取物；
[0019] 所述枸杞多糖提取方法如下：
[0020] (1)取市售的枸杞烘干粉碎后過80目篩；
[0021] (2)超聲熱水浸提:按枸杞與水質(zhì)量體積比1-3:20的比例加入純凈水，在pH7條件 下，400W超聲波，105 °C水浴浸提0.5h;
[0022] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12rC，5min;
[0023] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0024] (5)離心分離獲得上清液；
[0025] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥，即得枸杞多糖。
[0026]所述松茸多糖的制備方法如下：
[0027] (1)取松茸，裝入有0.3-0.5%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200W、40KHz清洗 5-10min，然后于-21--25°C冷凍10_30min，立即進行粉碎；
[0028] (2)粉碎后的松茸與水以1:3-5(m: v)的比例混合，調(diào)整溫度為40-60°C，pH為5.0- 7.0，加入松茸質(zhì)量0.1-0.3%的纖維素酶酶解1-2.5小時后調(diào)整溫度到80-95°C保持2-5分 鐘，調(diào)整溫度到50 °C、隨后添加松茸質(zhì)量0.1-0.3 %風(fēng)味蛋白酶進行酶解，酶解溫度40-50 °C、pH值6-7，酶解時間卜2小時，離心分離獲得上清液；
[0029] (3)上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得松茸多糖提取物；
[0030] 所述松茸粉碎至粒徑在0.5mm以下；
[0031 ] 所述植物乳桿菌粉劑由植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)tlj_2015制備， 該菌已于2015年11月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱 06110：)，保藏號為0610：^).11763，保藏地址為 ：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中 國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101;
[0032]所述植物乳桿菌粉劑中活菌含量為:7 X 1012_9 X 1012cfu/g;
[0033]所述植物乳桿菌粉劑的制備方法如下：
[0034] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC N0.11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12-16h，使菌體處于 對數(shù)生長中期；
[0035] (2)將對數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為10-15 %，35-38 °C下100_200rpm 培養(yǎng)8-12小時，溶氧控制10 % (通氣0.5L/min)，之后再厭氧培養(yǎng)60-70小時;發(fā)酵完畢發(fā)酵 液靜置沉淀、離心得到沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50 °C流化床干燥 即得植物乳桿菌粉劑，載體重量組成為:酸奶粉25份，糊精12份。
[0036]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下：蛋白胨10_12g，牛肉膏10-12g，酵母膏5-8g，檸檬酸氫 二銨2-4g，葡萄糖20-25g，吐溫80 l-2mL，乙酸鈉5-7g，磷酸氫二鉀2-3g，硫酸鎂0· 58-0.6g， 硫酸猛0.25-0.38，膽固醇100-12011^，中草藥粉劑5-88，蒸餾水10001111^，口!16.2~6.6;
[0037]所述膽固醇的添加方法為：先用無水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為10-12mg/mL的 膽固醇溶液，然后按一定比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為100-120yg/mL;
[0038]所述中草藥粉劑的制備方法如下：
[0039] 稱取五味子10-20份;黨參10-15份；山楂10-20份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑 為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度45-60°C保持2~4h， 加入混合酶制劑進行酶解，調(diào)節(jié)pH值為6-7，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇 和丙醇的混合物，110W功率下超聲萃取0.5~1.5h，過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中 草藥粉劑；
[0040] 所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ;
[0041] 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶15-20份，β-淀粉酶10-15份，果膠酶10- 15份，酸性蛋白酶10-15份，酸性磷酸酶5-10份；
[0042]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-2。
[0043]所述真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品的制備方法為:按本領(lǐng)域常規(guī) 方法加工為片劑、粉劑、顆粒劑、軟膠囊、硬膠囊等，直接服用，也可以作為食品原料使用。
[0044] 有益效果：
[0045] 1、本發(fā)明所提供的真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品中除含有羊肚 菌、靈芝、松茸多糖、枸杞多糖外還含有植物乳桿菌CGMCC N0.11763,該菌株①降解亞硝酸 鹽速度快，分解能力達到10.9mg/h/kg，可有效的分解人們由于飲食不當而攝入的亞硝酸 鹽;②該菌對膽固醇降解率高，可達到64.76%，尤其適用于肥胖人群及三高患者;③該菌黏 附能力高，測定的自凝集率為95.71 %，可有效地定植于胃腸道系統(tǒng)中，充分發(fā)揮其生理活 性作用。
[0046] 2、本發(fā)明所提供的植物乳桿菌培養(yǎng)方法中，發(fā)酵培養(yǎng)基中添加有中藥成分五味 子、黨參和山楂，這三種重要成分的添加可有效提高植物乳桿菌的耐酸耐膽鹽能力，從而提 高其在人體腸道中發(fā)揮的作用。
[0047] 3、本發(fā)明所提供的植物乳桿菌培養(yǎng)方法中，發(fā)酵培養(yǎng)基中以可溶性形式添加有膽 固醇，發(fā)酵完成后可有效提高菌株降解膽固醇的能力。由于本發(fā)明提供的產(chǎn)品中添加有所 述植物乳桿菌，使得本發(fā)明除了具有提高人體免疫力能力外，還具有較好的降解膽固醇的 能力。
【具體實施方式】：
[0048] 實施例1: 一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品
[0049] -種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，由以下重量份數(shù)的原料組 成：
[0050] 羊肚菌酶解粉60份，靈芝提取物50份，松茸多糖20份，枸杞多糖20份，低聚果糖5 份，小麥纖維5份，大豆纖維5份，茶多酚0.01份，麥精10份，植物乳桿菌粉劑10份。
[0051 ]所述羊肚菌酶解粉的制備方法如下：
[0052] (1)羊肚菌子實體干燥粉碎；
[0053] (2)水溶均質(zhì)：將粉碎后的羊肚菌子實體加入不銹鋼筒中，加入子實體質(zhì)量3倍的 水，浸泡3小時，然后將此羊肚菌子實體液通過膠體磨，膠體磨操作條件為:調(diào)整膠體磨定子 與轉(zhuǎn)子的間隙為〇. 5微米，膠體磨流量為0.4噸/小時；
[0054] (3)升溫酶解:將經(jīng)過膠體磨處理的羊肚菌子實體液轉(zhuǎn)移到不銹鋼酶解罐中加熱 到50°C，調(diào)整pH到4.5，加入羊肚菌子實體重量0.05%的纖維素酶、0.01 %的β-葡聚糖酶、 0.01 %的蛋白酶，保溫酶解0.5小時，酶解過程中不斷攪拌；
[0055] (4)干燥:酶解后的醪液過濾后干燥獲得羊肚菌酶解粉；
[0056]所述靈芝提取物制備方法如下：
[0057] 靈芝粉碎，過40目篩后，添加靈芝3倍重量無水乙醇浸漬提取，控制溫度30°C，2小 時后調(diào)整溫度為55°C1小時，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的靈芝殘渣中 添加75°C熱水，熱水添加量為靈芝殘渣重量的2倍，處理時間30分鐘，連續(xù)提取2次，將提取 液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和熱水提取物合并粉碎，過60 目篩，即得靈芝提取物；
[0058]所述枸杞多糖提取方法如下：
[0059] (1)取市售的枸杞烘干粉碎后過80目篩；
[0060] (2)超聲熱水浸提:按枸杞與水質(zhì)量體積比1:20的比例加入純凈水，在pH7條件下， 400W超聲波，105 °C水浴浸提0.5h;
[0061] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12?Γ，5π?η;
[0062] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0063] (5)離心分離獲得上清液；
[0064] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥，即得枸杞多糖。
[0065]所述松茸多糖的制備方法如下：
[0066] (1)取松茸，裝入有0.3%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200W、40KHz清洗 5min，然后于-21°C冷凍lOmin，立即進行粉碎；
[0067] (2)粉碎后的松茸與水以1:3(m: v)的比例混合，調(diào)整溫度為40°C，pH為5.0，加入松 茸質(zhì)量0.1 %的纖維素酶酶解1小時后調(diào)整溫度到80°C保持2分鐘，調(diào)整溫度到50°C、隨后添 加松茸質(zhì)量〇. 1%風(fēng)味蛋白酶進行酶解，酶解溫度40 °C、pH值6,酶解時間1小時，離心分離獲 得上清液；
[0068] (3)上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得松茸多糖提取物；
[0069] 所述松茸粉碎至粒徑在0.5mm以下；
[0070] 所述植物乳桿菌粉劑的制備方法如下：
[0071] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC NO. 11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12h，使菌體處于對 數(shù)生長中期；
[0072] (2)將對數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為10%，35°C下lOOrpm培養(yǎng)8小時， 溶氧控制10% (通氣〇.5L/min)，之后再厭氧培養(yǎng)60小時;發(fā)酵完畢發(fā)酵液靜置沉淀、離心得 到沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50°C流化床干燥即得植物乳桿菌粉 劑，載體重量組成為:酸奶粉25份，糊精12份。
[0073] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下:蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，檸檬酸氫二銨2g，葡 萄糖20g，吐溫80 lmL，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，硫酸鎂0.58g，硫酸猛0.25g，膽固醇100mg， 中草藥粉劑5g，蒸餾水1000mL，pH6.2;
[0074] 所述膽固醇的添加方法為:先用無水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為10mg/mL的膽固 醇溶液，然后按一定比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為l〇〇yg/mL;
[0075] 所述中草藥粉劑的制備方法如下：
[0076] 稱取五味子10份;黨參10份；山楂10份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以 下，然后于容器中均勻混合并添加3倍重量的水，控制溫度45°C保持2h，加入混合酶制劑進 行酶解，調(diào)節(jié)pH值為6，酶解2h，最后添加混合物料0.5倍重量乙醇和丙醇的混合物，110W功 率下超聲萃取〇. 5h，過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑；
[0077] 所述混合酶添加量為混合物料總重量的5% ;
[0078]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶15份，β-淀粉酶10份，果膠酶10份，酸性 蛋白酶10份，酸性磷酸酶5份；
[0079]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1。
[0080]實施例2 -種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品
[0081] -種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，由以下重量份數(shù)的原料組 成：
[0082]羊肚菌酶解粉80份，靈芝提取物70份，松茸多糖40份，枸杞多糖40份，低聚果糖10 份，小麥纖維10份，大豆纖維8份，茶多酚0.03份，麥精50份，植物乳桿菌粉劑20份。
[0083]所述羊肚菌酶解粉的制備方法如下：
[0084] (1)羊肚菌子實體干燥粉碎；
[0085] (2)水溶均質(zhì)：將粉碎后的羊肚菌子實體加入不銹鋼筒中，加入子實體質(zhì)量6倍的 水，浸泡5小時，然后將此羊肚菌子實體液通過膠體磨，膠體磨操作條件為:調(diào)整膠體磨定子 與轉(zhuǎn)子的間隙為1微米，膠體磨流量為1噸/小時；
[0086] (3)升溫酶解:將經(jīng)過膠體磨處理的羊肚菌子實體液轉(zhuǎn)移到不銹鋼酶解罐中加熱 到60°C，調(diào)整pH到6.0，加入羊肚菌子實體重量0.1 %的纖維素酶、0.1 %的β-葡聚糖酶、 0.1 %的蛋白酶，保溫酶解1.5小時，酶解過程中不斷攪拌；
[0087] (4)干燥:酶解后的醪液過濾后干燥獲得羊肚菌酶解粉；
[0088]所述靈芝提取物制備方法如下：
[0089] 靈芝粉碎，過50目篩后，添加靈芝6倍重量無水乙醇浸漬提取，控制溫度45°C，4小 時后調(diào)整溫度為60°C2小時，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的靈芝殘渣中 添加85 °C熱水，熱水添加量為靈芝殘渣重量的4倍，處理時間50分鐘，連續(xù)提取3次，將提取 液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和熱水提取物合并粉碎，過60 目篩，即得靈芝提取物；
[0090] 所述枸杞多糖提取方法如下：
[0091] (1)取市售的枸杞烘干粉碎后過80目篩；
[0092] (2)超聲熱水浸提:按枸杞與水質(zhì)量體積比3:20的比例加入純凈水，在pH7條件下， 400W超聲波，105 °C水浴浸提0.5h;
[0093] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12rC，5min;
[0094] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0095] (5)離心分離獲得上清液；
[0096] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥，即得枸杞多糖。
[0097]所述松茸多糖的制備方法如下：
[0098] (1)取松茸，裝入有0.5%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200W、40KHz清洗 lOmin，然后于-25°C冷凍30min，立即進行粉碎；
[0099] (2)粉碎后的松茸與水以1:5(m: v)的比例混合，調(diào)整溫度為60°C，pH為7.0，加入松 茸體質(zhì)量〇. 3%的纖維素酶酶解2.5小時后調(diào)整溫度到95°C保持5分鐘，調(diào)整溫度到50°C、隨 后添加松茸質(zhì)量0.3%風(fēng)味蛋白酶進行酶解，酶解溫度50°C、pH值7,酶解時間2小時，離心分 離獲得上清液；
[0100] (3)上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得松茸多糖提取物；
[0101] 所述松茸粉碎至粒徑在0.5mm以下；
[0102] 所述植物乳桿菌粉劑的制備方法如下：
[0103] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC N0.11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)16h，使菌體處于對 數(shù)生長中期；
[0104] (2)將對數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為15 %，38 °C下200rpm培養(yǎng)12小 時，溶氧控制10 % (通氣〇 . 5L/min)，之后再厭氧培養(yǎng)70小時;發(fā)酵完畢發(fā)酵液靜置沉淀、離 心得到沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50°C流化床干燥即得植物乳桿 菌粉劑，載體重量組成為:酸奶粉25份，糊精12份。
[0105] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下:蛋白胨12g，牛肉膏12g，酵母膏8g，檸檬酸氫二銨4g，葡 萄糖25g，吐溫80 2mL，乙酸鈉7g，磷酸氫二鉀3g，硫酸鎂0.6g，硫酸猛0.3g，膽固醇120mg，中 草藥粉劑8g，蒸餾水1000mL，pH 6.6;
[0106] 所述膽固醇的添加方法為:先用無水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為12mg/mL的膽固 醇溶液，然后按一定比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為WOyg/mL;
[0107] 所述中草藥粉劑的制備方法如下：
[0108] 稱取五味子20份;黨參15份；山楂20份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以 下，然后于容器中均勻混合并添加6倍重量的水，控制溫度60 °C保持4h，加入混合酶制劑進 行酶解，調(diào)節(jié)pH值為7，酶解4h，最后添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物，110W功率 下超聲萃取1.5h，過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑；
[0109] 所述混合酶添加量為混合物料總重量的10% ;
[0110] 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶20份，β-淀粉酶15份，果膠酶15份，酸性 蛋白酶15份，酸性磷酸酶10份；
[0111] 所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:2。
[0112] 實施例3: -種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品
[0113] -種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，由以下重量份數(shù)的原料組 成：
[0114] 羊肚菌酶解粉70份，靈芝提取物60份，松茸多糖30份，枸杞多糖30份，低聚果糖8 份，小麥纖維8份，大豆纖維5份，茶多酚0.02份，麥精30份，植物乳桿菌粉劑15份。
[0115] 所述羊肚菌酶解粉的制備方法如下：
[0116] (1)羊肚菌子實體干燥粉碎；
[0117] (2)水溶均質(zhì)：將粉碎后的羊肚菌子實體加入不銹鋼筒中，加入子實體質(zhì)量5倍的 水，浸泡4小時，然后將此羊肚菌子實體液通過膠體磨，膠體磨操作條件為:調(diào)整膠體磨定子 與轉(zhuǎn)子的間隙為〇. 8微米，膠體磨流量為0.8噸/小時；
[0118] (3)升溫酶解:將經(jīng)過膠體磨處理的羊肚菌子實體液轉(zhuǎn)移到不銹鋼酶解罐中加熱 到55°C，調(diào)整pH到5.0，加入羊肚菌子實體重量0.08%的纖維素酶、0.05 %的β-葡聚糖酶、 0.05 %的蛋白酶，保溫酶解1小時，酶解過程中不斷攪拌；
[0119] (4)干燥:酶解后的醪液過濾后干燥獲得羊肚菌酶解粉；
[0120] 所述靈芝提取物制備方法如下：
[0121] 靈芝粉碎，過40目篩后，添加靈芝5倍重量無水乙醇浸漬提取，控制溫度40°C，3小 時后調(diào)整溫度為60°C2小時，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的靈芝殘渣中 添加80°C熱水，熱水添加量為靈芝殘渣重量的3倍，處理時間40分鐘，連續(xù)提取3次，將提取 液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和熱水提取物合并粉碎，過60 目篩，即得靈芝提取物；
[0122] 所述枸杞多糖提取方法如下：
[0123] (1)取市售的枸杞烘干粉碎后過80目篩；
[0124] (2)超聲熱水浸提:按枸杞與水質(zhì)量體積比2:20的比例加入純凈水，在pH7條件下， 400W超聲波，105 °C水浴浸提0.5h;
[0125] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12?Γ，5π?η;
[0126] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0127] (5)離心分離獲得上清液；
[0128] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥，即得枸杞多糖。
[0129] 所述松茸多糖的制備方法如下：
[0130] (1)取松茸，裝入有0.4%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200W、40KHz清洗 8min，然后于-23 °C冷凍20min，立即進行粉碎；
[0131] (2)粉碎后的松茸與水以1:4(m: v)的比例混合，調(diào)整溫度為50°C，pH為6.0，加入松 茸質(zhì)量0.2%的纖維素酶酶解2小時后調(diào)整溫度到90°C保持3分鐘，調(diào)整溫度到50°C、隨后添 加松茸質(zhì)量〇. 2 %風(fēng)味蛋白酶進行酶解，酶解溫度45 °C、pH值7，酶解時間2小時，離心分離獲 得上清液；
[0132] (3)上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得松茸多糖提取物；
[0133] 所述松茸粉碎至粒徑在0.5mm以下；
[0134] 所述植物乳桿菌粉劑的制備方法如下：
[0135] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC N0.11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12-16h，使菌體處于 對數(shù)生長中期；
[0136] (2)將對數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為12 %，37 °C下150rpm培養(yǎng)10小 時，溶氧控制10 % (通氣〇 . 5L/min)，之后再厭氧培養(yǎng)65小時;發(fā)酵完畢發(fā)酵液靜置沉淀、離 心得到沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50°C流化床干燥即得植物乳桿 菌粉劑，載體重量組成為:酸奶粉25份，糊精12份。
[0137] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下:蛋白胨llg，牛肉膏l(xiāng)lg，酵母膏6g，檸檬酸氫二銨3g，葡 萄糖22g，吐溫80 1.5mL，乙酸鈉6g，磷酸氫二鉀2.5g，硫酸鎂0.6g，硫酸錳0.25g，膽固醇 110mg，中草藥粉劑6g，蒸餾水1000mL，pH 6 · 5;
[0138] 所述膽固醇的添加方法為:先用無水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為Ilmg/mL的膽固 醇溶液，然后按一定比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為1 l〇yg/mL;
[0139] 所述中草藥粉劑的制備方法如下：
[0140]稱取五味子15份;黨參12份；山楂15份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以 下，然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度50°C保持3h，加入混合酶制劑進 行酶解，調(diào)節(jié)pH值為6.5，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，110W功 率下超聲萃取lh，過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑；
[0141 ]所述混合酶添加量為混合物料總重量的8% ;
[0142] 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶18份，β-淀粉酶12份，果膠酶12份，酸性 蛋白酶12份，酸性磷酸酶8份；
[0143] 所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1.5。
[0144] 實施例4效果實驗
[0145] 1、植物乳桿菌061〇：從).11763的培養(yǎng)
[0146] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC Ν0.11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12h左右，使菌體處 于對數(shù)生長中期。
[0147] (2)將對數(shù)期的菌種接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中。接種量為10%，37°C下 lOOrpm培養(yǎng)8小時，對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣0.5L/min)，后期厭氧培養(yǎng)63小時。
[0148] 發(fā)酵培養(yǎng)基：
[0149] ①：蛋白胨llg，牛肉膏l(xiāng)lg，酵母膏6g，檸檬酸氫二銨3g，葡萄糖22g，吐溫80 1.5mL，乙酸鈉6g，磷酸氫二鉀2.5g，硫酸鎂0.6g，硫酸錳0.25g，膽固醇110mg，中草藥粉劑 6g，蒸饋水 1000mL，pH 6.5;
[0150] ②:刪去①中的膽固醇；
[0151] ③:刪去①中的中草藥粉劑；
[0152] 2、降解膽固醇能力測定
[0153]步驟1中分別以發(fā)酵培養(yǎng)基①和②為發(fā)酵培養(yǎng)基完成發(fā)酵后，分別取lml發(fā)酵液離 心并用無菌水洗滌2遍后重懸于lml無菌水中，分別接種于10mL的MRS膽固醇液體培養(yǎng)基(膽 固醇含量0.1mg/ml，pH 6.2)中，37°C的恒溫靜置分別培養(yǎng)20h、40h、60h備用，取以上培養(yǎng)不 同時間的菌液樣品各11111，900(^/ 1^11，4°(：下離心101^11，得到發(fā)酵上清液，鄰苯二甲醛法測 定上清液中膽固醇含量(具體為:取各上清液0. lml于相應(yīng)的試管中，加冰醋酸0.3ml，lmg/ ml的鄰苯二甲醛0.15ml，緩緩加入濃硫酸1.0ml，混合均勻。室溫靜置10min，于550nm下測吸 光值）。每一處理3個重復(fù)，以同樣方法制作膽固醇標準曲線，計算上清液中膽固醇含量及降 解率，結(jié)果見表1?？芍?，CGMCC NO. 11763對膽固醇有很好的降解作用，60h小時后，降解率可 達到64.76 %。并且，添加有膽固醇的培養(yǎng)基所培養(yǎng)出的CGMCC NO. 11763降解膽固醇的能力 顯者提尚。
[0154]表1對膽固醇的降解情況。
[0155]
[0156] 3、耐膽鹽實驗
[0157] 步驟1中分別以發(fā)酵培養(yǎng)基①和③為發(fā)酵培養(yǎng)基完成發(fā)酵后，分別取lml發(fā)酵液離 心并用無菌水洗滌2遍后重懸于lml無菌水中，分別接種于含有不同膽鹽（含量梯度為 0.0%、0.4%、0.6%、1%)的1011^]\?5液體培養(yǎng)基化!1=6.4)，置于37°(：下分別培養(yǎng)0、2、411， 每個處理3個重復(fù)。各取lml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋度溶液，取0.1ml稀釋 液于MRS中涂布，于37°C生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(每個稀釋度做3個平行)記錄計算平 板上的菌數(shù)個數(shù)。結(jié)果見表2?？芍摼谀扄}濃度為1 %處理4h后菌的生長量依然達到 0.51 ±0.92 X107(cfu/ml)，有很好的耐膽鹽能力，而采用添加有中草藥成分的培養(yǎng)基，其 耐膽鹽能力有效提尚。
[0158] 表2耐膽鹽能力檢測（X107cfu/ml)
[0159]
[0160] 4、耐酸實驗
[0161] 步驟1中分別以發(fā)酵培養(yǎng)基①和③為發(fā)酵培養(yǎng)基完成發(fā)酵后，分別取lml發(fā)酵液離 心并用無菌水洗滌2遍后重懸于lml無菌水中，分別接種于不同pH值(pH梯度為1.5、2.0、 2.5、3.0、3.5、4.0)的10mL MRS液體培養(yǎng)基，置于37°C下分別培養(yǎng)0、2、4h，每一處理3個重 復(fù)。各取lml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋溶液，取0. lml稀釋液于MRS中涂布， 于37°C生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(每個稀釋度做3個平行)記錄平板上的菌落個數(shù)。結(jié) 果見表3。說明該菌具有很強的耐酸能力，且添加有中草藥成份的培養(yǎng)基能有效提高該菌的 耐酸性。
[0162] 表3耐酸能力檢測（X107cfu/ml)
[0163]
[0164] 5、亞硝酸鹽分解實驗
[0165]步驟1中以①培養(yǎng)基，發(fā)酵過程中根據(jù)亞硝酸鹽的消耗速率流加20g/L的亞硝酸鈉 溶液，培養(yǎng)2-3天。發(fā)酵結(jié)束后，計算發(fā)酵過程植物乳桿菌CGMCCN0.11763對亞硝酸鈉的降解 速率。結(jié)果發(fā)現(xiàn):在該條件下，CGMCC從).11763對亞硝酸鈉的降解速率可以達到65311^/11/1。 [0 166] 6、黏附能力測定
[0167] 培養(yǎng)CGMCC NO. 11763(MRS液體培養(yǎng)基）、大腸桿菌DH5a(LB液體培養(yǎng)基)24h得發(fā)酵 液，分別置于3000r/min、4°C下離心10min，收集菌泥，分別用pH = 7.0的無菌磷酸鹽緩沖液 (PBS)洗滌菌泥2次（即在菌落中加入PBS，震蕩混合均勻后，置于3000r/min、4°C下離心 lOmin，收集菌體）。自凝集率（％ :用無菌的roS將菌泥CGMCC NO. 11763制成在波長600nm處 的吸光值為〇. 4±0.1 (A0)的懸浮菌液及菌懸液，靜置24h后測定吸光值A(chǔ)24，自凝集率（％ ) 公式為(A0 - A24)/A0。測定結(jié)果見表5，可知CGMCCN0.11763的自凝集率為95.71 %，有很強 的黏附能力。
[0168] 表5黏附能力表
[0170] 實施例5本發(fā)明的益生性試驗
[0171] 將本發(fā)明實施例3制備的產(chǎn)品，用無菌水制備成活菌數(shù)為2X101()CFU/mL的益生菌 溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0172] 1、模擬胃液及腸液的耐受試驗：
[0173] 取100g/L的鹽酸16.4mL加蒸餾水稀釋，使pH值分別為1.5、2.5和3.5,取100mL稀鹽 酸溶液，分別加入lg胃蛋白酶，使其充分溶解，得模擬胃液，微孔濾膜除菌(〇.22μπι)備用。
[0174] 取磷酸二氫鉀6.8g，加水500mL使溶解，用0.1 moL/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8; 另取胰蛋白酶l〇g，加水100mL使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml，得模擬腸液，微孔 濾膜除菌(〇·22μπι)備用。
[0175] 取lmL保存好的益生菌溶液加入到9mL的模擬胃液中（即十倍逐級稀釋），并迅速在 振蕩器上充分混勻，然后置于30-45°C靜置培養(yǎng)2-4h。分別在111、211、311、411的時候取出培養(yǎng) 液并立即計數(shù)殘存活菌數(shù)，與原活菌數(shù)進行比較，結(jié)果表明，活菌存活率為97%。然后取在 人工胃液中消化不同時間的培養(yǎng)液各lmL，分別接種于9mLpH值為6.8的人工腸液中，置于 30-45Γ靜置培養(yǎng)2-4h，并分別在0、3、6、24h取樣，測定其活菌數(shù)，與原活菌數(shù)進行比較，結(jié) 果表明活菌存活率為99 %。
[0176] 2、模擬膽鹽的耐受試驗:用胰液素制成lg/L的溶液，并在溶液中加入0.8%的豬膽 鹽，用10 %的NaOH調(diào)整pH為8.0，然后用0.45μπι微濾膜過濾并除菌。將0.5mL保存好的益生菌 溶液接種到4.5mL模擬膽鹽中，培養(yǎng)24h后得到培養(yǎng)液，計數(shù)殘存的活菌數(shù)。將培養(yǎng)液在滅菌 生理鹽水中十倍逐級稀釋至10-8,并用MRS傾注，然后置于35°C靜置培養(yǎng)24h。
[0177] 結(jié)果表明活菌存活率為99%。
[0178] 以上試驗結(jié)果表明，本發(fā)明營養(yǎng)保健食品中的益生菌益生性(耐pH性、耐膽鹽)較 強，非常適合人體胃腸環(huán)境，在模擬胃腸環(huán)境中存活率大，可有效改善胃腸功能。
[0179]需要說明的是:本發(fā)明實施例1-3制備的營養(yǎng)保健食品同樣具有上述實驗效果，各 實施例之間及與上述實驗效果差異性不大。
[0180] 實施例6本發(fā)明對降膽固醇效果實驗
[0181] 1.實驗材料
[0182] 1.1實驗動物及飼料
[0183] 昆明種小鼠生，體重(20±2)g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供；
[0184] 普通飼料為市售小鼠飼料；高脂飼料由為60 %普通飼料+10 %豬油+ 10 %奶粉+ 10%蛋黃粉+7%白糖+2%花生+0.5%鹽+0.5%麻油；
[0185] 1.2試劑
[0186] 總膽固醇試劑盒(TCH，浙江東歐診斷產(chǎn)品有限公司）
[0187] 飼喂試劑配置：
[0188] 樣品液①:2g實施例3產(chǎn)品加入50mL超純水，振蕩混勻，即得；
[0189] 樣品液②:實施例3產(chǎn)品制備過程中CGMCC NO. 11763發(fā)酵培養(yǎng)基去除膽固醇，其他 條件不變制備的產(chǎn)品2g加入50mL超純水，振蕩混勻，即得
[0190] 對照液:純水；
[0191] 2.方法
[0192] 2.1小鼠的分組與飼養(yǎng)
[0193] 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后，隨機分為2組:空白組、實驗組，每組20只；飼喂75天；
[0194] 空白組:高脂飼料，給純水，體積與樣品液溶液體積相同；
[0?95]實驗組①:高脂飼料，給樣品液①800mg/kg · d;
[0196] 實驗組②:高脂飼料，給樣品液②800mg/kg · d;
[0197] 末次給藥后，禁食不禁水12小時，眼眶取血制備血清，依試劑盒說明書方法測定總 膽固醇(TC);實驗結(jié)果如下：
[0199] 由實驗結(jié)果可知，實驗前后，實驗組和對照組小鼠血清中膽固醇差異顯著，本發(fā)明 所述產(chǎn)品對降低血清中膽固醇含量具有明顯的效果。
[0200] 實施例7本發(fā)明產(chǎn)品提高免疫力的效果實驗
[0201]本產(chǎn)品實施例3產(chǎn)品在冬季選擇北京地區(qū)100位年齡在60-75歲體弱易感冒的老年 人連續(xù)食用1月，每日食用5克，以食用前和食用后效果比較，結(jié)果見表1，結(jié)果表明本產(chǎn)品對 提高老年人抵抗力、增強身體免疫力有明顯效果，產(chǎn)品有良好的食用和營養(yǎng)滋補功效。同時 能夠顯著提高睡眠質(zhì)量，改善率達到70% (以有質(zhì)量睡眠時間為評估依據(jù))許多連續(xù)食用本 產(chǎn)品老人反映久服效果更佳，全年不感冒，身體狀況更好.
[0202]表6食用效果對照表
[0204]實施例8枸杞多糖提取效果對比試驗
[0205]方法1:枸杞多糖提取方法如下：
[0206] (1)取市售的枸杞烘干粉碎后過80目篩；
[0207] (2)超聲熱水浸提:按3:20的比例加入純凈水，在pH7條件下，400W超聲波，105 °C水 浴浸提〇.5h;
[0208] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12?Γ，5π?η;
[0209] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0210] (5)離心分離獲得上清液；
[0211] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥稱重，即得枸杞多糖。
[0212] 方法2:枸杞多糖提取方法如下：
[0213] (1)取市售的枸杞烘干粉碎后過80目篩；
[0214] (2)超聲熱水浸提:按3:20的比例加入純凈水，在pH7條件下，400W超聲波，105 °C水 浴浸提140min;
[0215] (3)離心分離獲得上清液；
[0216] (4)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥稱重，即得枸杞多糖。
[0217]枸杞多糖粗提取率（％ )=(粗多糖干重/枸杞烘干后干重）X 100 [0218]根據(jù)上述公式計算上述兩種提取方法對枸杞多糖粗提取率的影響，方法1枸杞多 糖粗提取率為11.56%，方法1枸杞多糖粗提取率為9.23%，可見，間歇熱蒸汽浸提能有效提 尚超聲熱水浸提對枸祀多糖的粗提取率。
【主權(quán)項】
1. 一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，由以下重量份數(shù)的原料組成： 羊肚菌酶解粉60-80份，靈芝提取物50-70份，松茸多糖20-40份，枸杞多糖20-40份，低聚果 糖5-10份，小麥纖維5-10份，大豆纖維5-8份，茶多酚0.01-0.03份，麥精10-50份，植物乳桿 菌粉劑10-20份； 所述植物乳桿菌粉劑由植物乳桿菌(LactobaciIlus plantarum)tlj-2015制備，保藏 號為CGMCC NO .11763。2. 如權(quán)利要求1所述的所述的一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，其 特征在于，所述羊肚菌酶解粉的制備方法如下： (1) 羊肚菌子實體干燥粉碎； (2) 水溶均質(zhì):將粉碎后的羊肚菌子實體加入不銹鋼筒中，加入子實體質(zhì)量3-6倍的水， 浸泡3-5小時，然后將此羊肚菌子實體液通過膠體磨，膠體磨操作條件為：調(diào)整膠體磨定子 與轉(zhuǎn)子的間隙為〇. 5-1微米，膠體磨流量為0.4-1噸/小時； (3) 升溫酶解:將經(jīng)過膠體磨處理的羊肚菌子實體液轉(zhuǎn)移到不銹鋼酶解罐中加熱到50-60°C，調(diào)整pH到4.5-6.0，加入羊肚菌子實體重量0.05-0.1 %的纖維素酶、0.01-0.1 %的β-葡聚糖酶、0.01-0.1%的蛋白酶，保溫酶解0.5-1.5小時，酶解過程中不斷攪拌； (4) 干燥:酶解后的醪液過濾后干燥獲得羊肚菌酶解粉； 所述靈芝提取物制備方法如下： 靈芝粉碎，過40-50目篩后，添加靈芝3-6倍重量無水乙醇浸漬提取，控制溫度30-45Γ， 2-4小時后調(diào)整溫度為55-60°Cl-2小時，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的 靈芝殘渣中添加75-85°C熱水，熱水添加量為靈芝殘渣重量的2-4倍，處理時間30-50分鐘， 連續(xù)提取2-3次，將提取液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和熱 水提取物合并粉碎，過60目篩，即得靈芝提取物。3. 如權(quán)利要求1所述的所述的一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，其 特征在于，所述枸杞多糖提取方法如下： (1) 取市售的枸杞烘干粉碎后過80目篩； (2) 超聲熱水浸提：按枸杞與水質(zhì)量體積比1-3 : 20的比例加入純凈水，在pH7條件下， 400W超聲波，105 °C水浴浸提0.5h; (3) 熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，121°C，5min; (4) 循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次； (5) 離心分離獲得上清液； (6) 上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄去上 清液，再加入與初始濃縮液等體積的無水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3次，噴 霧干燥，即得枸杞多糖； 所述松茸多糖的制備方法如下： (1) 取松茸，裝入有0.3-0.5%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于2001、401(他清洗5-IOmin，然后于-21 25°C冷凍10_30min，立即進彳丁粉碎； (2) 粉碎后的松茸與水以1:3-5(m: V)的比例混合，調(diào)整溫度為40-60°C，pH為5.0-7.0， 加入松茸質(zhì)量0.1-0.3%的纖維素酶酶解1-2.5小時后調(diào)整溫度到80-95°C保持2-5分鐘，調(diào) 整溫度到50 °C、隨后添加松茸質(zhì)量0.1-0.3 %風(fēng)味蛋白酶進行酶解，酶解溫度40-50 °C、pH值 6-7，酶解時間1-2小時，離心分離獲得上清液； (3)上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得松茸多糖提取物； 所述松鸞粉碎至粒徑在〇. 5mm以下。4. 如權(quán)利要求1所述的所述的一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，其 特征在于，所述植物乳桿菌粉劑中活菌含量為:7xl0 12-9xl012cfu/g。5. 如權(quán)利要求1所述的所述的一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，其 特征在于，所述植物乳桿菌粉劑的制備方法如下： (1) 取斜面上的植物乳桿菌CGMCC NO. 11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS培養(yǎng)基的 250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12-16h，使菌體處于對數(shù)生長中期； (2) 將對數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為10-15 %，35-38 °C下100_200rpm培養(yǎng) 8-12小時，溶氧控制10 %，之后再厭氧培養(yǎng)60-70小時;發(fā)酵完畢發(fā)酵液靜置沉淀、離心得到 沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50°C流化床干燥即得植物乳桿菌粉劑， 載體重量組成為:酸奶粉25份，糊精12份。6. 如權(quán)利要求5所述的一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，其特征在 于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下:蛋白胨l〇_12g，牛肉膏10-12g，酵母膏5-8g，檸檬酸氫二銨2-4g，葡萄糖20-25g，吐溫80 l-2mL，乙酸鈉5-7g，磷酸氫二鉀2-3g，硫酸鎂0.58-0.6g，硫酸錳 0.25_0.3g，膽固醇 100_120mg，中草藥粉劑5_8g，蒸饋水I 000mL，pH 6.2~6.6。7. 如權(quán)利要求6所述的一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，其特征在 于，所述膽固醇的添加方法為:先用無水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為10-12mg/mL的膽固醇 溶液，然后按一定比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為lOO-WOyg/mL。8. 如權(quán)利要求6所述的一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，其特征在 于，所述中草藥粉劑的制備方法如下： 稱取五味子10-20份;黨參10-15份；山楂10-20份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫 米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度45-60°C保持2~4h，加入 混合酶制劑進行酶解，調(diào)節(jié)PH值為6-7，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙 醇的混合物，IIOW功率下超聲萃取0.5~1.5h，過濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥 粉劑； 所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10 % ; 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶15-20份，β-淀粉酶10-15份，果膠酶10-15份， 酸性蛋白酶10-15份，酸性磷酸酶5-10份； 所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-2。9. 如權(quán)利要求1所述的所述的一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品，其 特征在于，由以下重量份數(shù)的原料組成:羊肚菌酶解粉70份，靈芝提取物60份，松茸多糖30 份，枸杞多糖30份，低聚果糖8份，小麥纖維8份，大豆纖維5份，茶多酚0.02份，麥精30份，植 物乳桿菌粉劑15份。10. 權(quán)利要求1所述一種真菌提取物及多糖與益生菌的復(fù)合功能性食品在保健領(lǐng)域的 應(yīng)用。
【文檔編號】A23L33/135GK105901679SQ201610235478
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月15日
【發(fā)明人】邵素英
【申請人】邵素英