一種真菌提取物益生菌功能性食品的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于保健食品領(lǐng)域，具體涉及一種真菌多糖提取物益生菌功能性食品。該功能性食品由以下重量份數(shù)的原料組成：靈芝提取物30?80份，猴頭菇提取物20?50份，灰樹(shù)花多糖5?10份，低聚果糖2?10份，小麥纖維2?10份，大豆纖維2?5份，茶多酚0.01?0.03份，麥精10?50份，植物乳桿菌粉劑10?20份。本發(fā)明所提供的多糖提取方法使得多糖提取率得到提高，使產(chǎn)品具有較好的提高免疫力的效果，并且獲得的產(chǎn)品具有較好的降解膽固醇的功效。CGMCC NO.1176320151130
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種真菌提取物益生菌功能性食品
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001] 本發(fā)明屬于營(yíng)養(yǎng)保健食品領(lǐng)域，具體涉及一種真菌提取物益生菌功能性食品。
【背景技術(shù)】：
[0002] 真菌多糖又稱(chēng)多聚糖，是生物有機(jī)體內(nèi)普遍存在的一類(lèi)生物大分子，不僅參與組 織細(xì)胞骨架的構(gòu)成，而且是多種內(nèi)源性生物活性分子的重要組成成分。有一定的調(diào)節(jié)機(jī)體 免疫功能的作用，其作用是多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)的，如促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖與分化，分泌各 種淋巴因子，調(diào)節(jié)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)(·Μ)的平衡等。
[0003] 真菌多糖對(duì)細(xì)胞有著極強(qiáng)的修復(fù)作用。服用真菌多糖保健食品，能及時(shí)補(bǔ)充細(xì)胞 間質(zhì)中缺乏的多糖等物質(zhì)，使受損的細(xì)胞得到及時(shí)的修復(fù)，達(dá)到保持細(xì)胞健康、延長(zhǎng)細(xì)胞壽 命、從而實(shí)現(xiàn)人體健康的目的。上海醫(yī)科大學(xué)李瑞等試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，真菌多糖能顯著提高細(xì)胞膜 的流動(dòng)性和封閉度，衰老的細(xì)胞用真菌多糖培養(yǎng)后，封閉度提高11 %，流動(dòng)性提高32%，細(xì) 胞膜流動(dòng)性、封閉性的提高，表明細(xì)胞生理功能得到提高。
[0004] 現(xiàn)代科技表明，真菌多糖是食用菌中所含的最重要的藥效成分。是一種β-型的多 糖，具有廣泛的藥理活性。靈芝、冬蟲(chóng)夏草、木耳、銀耳、香菇、猴頭菇、白靈菇、竹黃、云芝、雞 腿蘑、松茸、桑黃等食用菌，都含有真菌多糖。
[0005] 中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利201110407414.2公布了一種具有保健作用的真菌營(yíng)養(yǎng)液，該營(yíng)養(yǎng)液 以香菇、灰樹(shù)花、猴頭菇、云芝等真菌為主要原料，輔以低聚木糖、異麥芽酮糖醇、?；撬?、賴(lài) 氨酸、維生素 Ε、黃原膠和水等營(yíng)養(yǎng)素加工而成，原料配伍科學(xué)，協(xié)同作用，具有提高人體免 疫力和促進(jìn)機(jī)體胃粘膜損傷修復(fù)雙功能保健作用。
[0006] 益生菌，是一類(lèi)對(duì)宿主有益的活性微生物，是定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn) 生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱(chēng)。其廣 泛應(yīng)用于生物工程、工農(nóng)業(yè)、食品安全以及生命健康領(lǐng)域。
[0007] 調(diào)節(jié)腸胃功能紊亂是益生菌最廣為人知的功能之一，除此之外，益生菌還具有產(chǎn) 生營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、抵抗細(xì)菌病毒的感染以及預(yù)防治療某些疾病的功能。本發(fā)明將提供一種添加 有益生菌的復(fù)合真菌多糖組合物，兼具真菌及多糖提高免疫力的功能以及益生菌的保健功 效，改善目前保健品效果單一、復(fù)合功能不理想的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0008] 為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種真菌提取物益生菌功能性食品，由以下重量 份數(shù)的原料組成：
[0009] 靈芝提取物30-80份，猴頭菇提取物20-50份，灰樹(shù)花多糖5-10份，低聚果糖2-10 份，小麥纖維2-10份，大豆纖維2-5份，茶多酚0.01-0.03份，麥精10-50份，植物乳桿菌粉劑 10-20 份。
[0010]所述靈芝提取物制備方法如下：
[0011] 靈芝粉碎，過(guò)40-50目篩后，添加靈芝3-6倍重量無(wú)水乙醇浸漬提取，控制溫度30- 45°C，2-4小時(shí)后調(diào)整溫度為55-60°C 1-2小時(shí)，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提 取后的靈芝殘?jiān)刑砑?5-85 °C熱水，熱水添加量為靈芝殘?jiān)亓康?-4倍，處理時(shí)間30-50 分鐘，連續(xù)提取2-3次，將提取液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物 和熱水提取物合并粉碎，過(guò)60目篩，即得靈芝提取物；
[0012] 所述猴頭菇提取物的制備方法如下：
[0013] (1)取猴頭菇子實(shí)體，裝入有0.3-0.5%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、 40KHz清洗5-10min，然后于-21--25°C冷凍10_30min，立即進(jìn)行粉碎；
[0014] (2)粉碎后的猴頭菇與水以1: 3-5 (m: v)的比例混合，調(diào)整溫度為40-60 °C，pH為 5.0-7.0，加入猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量0.1-0.3%的纖維素酶酶解1-2.5小時(shí)后調(diào)整溫度到80-95 °C保持2-5分鐘，調(diào)整溫度到50°C、隨后添加猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量0.1-0.3%風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行 酶解，酶解溫度40-50°C、pH值6-7，酶解時(shí)間1-2小時(shí)，離心分離獲得上清液；
[0015] (3)上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得猴頭菇提取物；
[0016] 所述猴頭菇子實(shí)體粉碎至粒徑在0.5_以下；
[0017]所述灰樹(shù)花多糖提取方法如下：
[0018] (1)取市售的灰樹(shù)花子實(shí)體烘干粉碎后過(guò)80目篩；
[0019] (2)超聲熱水浸提:按過(guò)篩后的灰樹(shù)花子實(shí)體與水質(zhì)量體積比1-3: 20的比例加入 純凈水，在PH7條件下，400W超聲波，105 °C水浴浸提0.5h;
[0020] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12?Γ，5π?η;
[0021 ] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0022] (5)離心分離獲得上清液；
[0023] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95%乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無(wú)水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥，即得灰樹(shù)花多糖。
[0024] 所述植物乳桿菌粉劑由植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)tlj_2015制備， 該菌已于2015年11月30日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（簡(jiǎn)稱(chēng) 06110：)，保藏號(hào)為0610：^).11763，保藏地址為 ：中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中 國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101;
[0025] 所述植物乳桿菌粉劑中活菌含量為:7 X 1012_9 X 1012cfu/g;
[0026] 所述植物乳桿菌粉劑的制備方法如下：
[0027] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC N0.11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無(wú)瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12-16h，使菌體處于 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期；
[0028] (2)將對(duì)數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為10-15 %，35-38 °C下100_200rpm 培養(yǎng)8-12小時(shí)，溶氧控制10 % (通氣0.5L/min)，之后再厭氧培養(yǎng)60-70小時(shí);發(fā)酵完畢發(fā)酵 液靜置沉淀、離心得到沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50 °C流化床干燥 即得植物乳桿菌粉劑，載體重量份數(shù)組成為:酸奶粉25份，糊精12份。
[0029]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下：蛋白胨10_12g，牛肉膏10-12g，酵母膏5-8g，檸檬酸氫 二銨2-4g，葡萄糖20-25g，吐溫80 l-2mL，乙酸鈉5-7g，磷酸氫二鉀2-3g，硫酸鎂0· 58-0.6g， 硫酸猛0.25-0.38，膽固醇100-12011^，中草藥粉劑5-88，蒸餾水10001111^，口!16.2~6.6;
[0030]所述膽固醇的添加方法為：先用無(wú)水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為10-12mg/mL的 膽固醇溶液，然后按一定比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為100-120yg/mL;
[0031 ]所述中草藥粉劑的制備方法如下：
[0032] 稱(chēng)取五味子10-20份;黨參10-15份；山楂10-20份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑 為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度45-60°C保持2~4h， 加入混合酶制劑進(jìn)行酶解，調(diào)節(jié)pH值為6-7，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇 和丙醇的混合物，110W功率下超聲萃取0.5~1.5h，過(guò)濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中 草藥粉劑；
[0033] 所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10% ;
[0034] 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶15-20份，β-淀粉酶10-15份，果膠酶ΙΟ-? 5份， 酸性蛋白酶10-15份 ，酸性磷酸酶 5-10份；
[0035]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-2。
[0036]所述真菌提取物益生菌功能性食品的制備方法為：按本領(lǐng)域常規(guī)方法加工為片 劑、粉劑、顆粒劑、軟膠囊、硬膠囊等，直接服用，也可以作為食品原料使用。
[0037] 有益效果：
[0038] 1、本發(fā)明所提供的真菌提取物益生菌功能性食品中除含有靈芝、猴頭菇提取物、 灰樹(shù)花多糖外還含有植物乳桿菌CGMCC NO. 11763，該菌株①降解亞硝酸鹽速度快，分解能 力達(dá)到10.9mg/h/kg，可有效的分解人們由于飲食不當(dāng)而攝入的亞硝酸鹽;②該菌對(duì)膽固醇 降解率高，可達(dá)到64.76%，尤其適用于肥胖人群及三高患者;③該菌黏附能力高，測(cè)定的自 凝集率為95.71 %，可有效地定植于胃腸道系統(tǒng)中，充分發(fā)揮其生理活性作用。
[0039] 2、本發(fā)明所提供的植物乳桿菌培養(yǎng)方法中，發(fā)酵培養(yǎng)基中添加有中藥成分五味 子、黨參和山楂，這三種重要成分的添加可有效提高植物乳桿菌的耐酸耐膽鹽能力，從而提 高其在人體腸道中發(fā)揮的作用。
[0040] 3、本發(fā)明所提供的植物乳桿菌培養(yǎng)方法中，發(fā)酵培養(yǎng)基中以可溶性形式添加有膽 固醇，發(fā)酵完成后可有效提高菌株降解膽固醇的能力。由于本發(fā)明提供的產(chǎn)品中添加有所 述植物乳桿菌，使得本發(fā)明除了具有提高人體免疫力能力外，還具有較好的降解膽固醇的 能力。
【具體實(shí)施方式】：
[0041 ]實(shí)施例1: 一種真菌提取物益生菌功能性食品
[0042] -種真菌提取物益生菌功能性食品，由以下重量份數(shù)的原料組成：
[0043]靈芝提取物30份，猴頭菇提取物20份，灰樹(shù)花多糖5份，低聚果糖2份，小麥纖維2 份，大豆纖維2份，茶多酚0.01份，麥精10份，植物乳桿菌粉劑10份。
[0044]按照上述配方比例稱(chēng)取各組分，粉碎，過(guò)80目篩，然后混合lOmin，得粉劑。
[0045]所述靈芝提取物制備方法如下：
[0046] 靈芝粉碎，過(guò)40目篩后，添加靈芝3倍重量無(wú)水乙醇浸漬提取，控制溫度30°C，2小 時(shí)后調(diào)整溫度為55°C1小時(shí)，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的靈芝殘?jiān)?添加75°C熱水，熱水添加量為靈芝殘?jiān)亓康?倍，處理時(shí)間30分鐘，連續(xù)提取2次，將提取 液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和熱水提取物合并粉碎，過(guò)60 目篩，即得靈芝提取物；
[0047]所述猴頭菇提取物的制備方法如下：
[0048] (1)取猴頭菇子實(shí)體，裝入有0.3%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、40KHz 清洗5min，然后于-21°C冷凍lOmin，立即進(jìn)行粉碎；
[0049] (2)粉碎后的猴頭菇與水以1:3(m: v)的比例混合，調(diào)整溫度為40°C，pH為5.0，加入 猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量〇. 1 %的纖維素酶酶解1小時(shí)后調(diào)整溫度到80°C保持2分鐘，調(diào)整溫度到 50°C、隨后添加猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量0.1 %風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解溫度40°C、pH值6，酶解 時(shí)間1小時(shí)，離心分離獲得上清液；
[0050] (3)上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得猴頭菇提取物；
[0051 ]所述猴頭菇子實(shí)體粉碎至粒徑在0.5_以下；
[0052]所述灰樹(shù)花多糖提取方法如下：
[0053] (1)取市售的灰樹(shù)花子實(shí)體烘干粉碎后過(guò)80目篩；
[0054] (2)超聲熱水浸提：按過(guò)篩后灰樹(shù)花子實(shí)體與水質(zhì)量體積比1:20的比例加入純凈 水，在pH7條件下，400W超聲波，105 °C水浴浸提0 · 5h;
[0055] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12?Γ，5π?η;
[0056] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0057] (5)離心分離獲得上清液；
[0058] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無(wú)水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥，即得灰樹(shù)花多糖。
[0059] 所述植物乳桿菌粉劑的制備方法如下：
[0060] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC NO. 11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無(wú)瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12h，使菌體處于對(duì) 數(shù)生長(zhǎng)中期；
[0061 ] (2)將對(duì)數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為10%，35°C下lOOrpm培養(yǎng)8小時(shí)， 溶氧控制10% (通氣〇.5L/min)，之后再厭氧培養(yǎng)60小時(shí);發(fā)酵完畢發(fā)酵液靜置沉淀、離心得 到沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50°C流化床干燥即得植物乳桿菌粉 劑，載體重量份數(shù)組成為:酸奶粉25份，糊精12份。
[0062]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下:蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，檸檬酸氫二銨2g，葡 萄糖20g，吐溫80 lmL，乙酸鈉5g，磷酸氫二鉀2g，硫酸鎂0.58g，硫酸猛0.25g，膽固醇100mg， 中草藥粉劑5g，蒸餾水1000mL，pH 6.2;
[0063] 所述膽固醇的添加方法為:先用無(wú)水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為10mg/mL的膽固 醇溶液，然后按一定比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為l〇〇yg/mL;
[0064] 所述中草藥粉劑的制備方法如下：
[0065] 稱(chēng)取五味子10份;黨參10份；山楂10份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以 下，然后于容器中均勻混合并添加3倍重量的水，控制溫度45°C保持2h，加入混合酶制劑進(jìn) 行酶解，調(diào)節(jié)pH值為6，酶解2h，最后添加混合物料0.5倍重量乙醇和丙醇的混合物，110W功 率下超聲萃取〇. 5h，過(guò)濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑；
[0066] 所述混合酶添加量為混合物料總重量的5% ;
[0067]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶15份，β-淀粉酶10份，果膠酶10份，酸性 蛋白酶10份，酸性磷酸酶5份；
[0068]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1。
[0069] 實(shí)施例2 -種真菌提取物益生菌功能性食品
[0070] -種真菌提取物益生菌功能性食品，由以下重量份數(shù)的原料組成：
[0071] 靈芝提取物80份，猴頭菇提取物50份，灰樹(shù)花多糖10份，低聚果糖10份，小麥纖維 10份，大豆纖維5份，茶多酚0.03份，麥精50份，植物乳桿菌粉劑20份。
[0072]按照上述配方比例稱(chēng)取各組分，粉碎，過(guò)80目篩，然后混合lOmin，得粉劑。
[0073]所述靈芝提取物制備方法如下：
[0074] 靈芝粉碎，過(guò)50目篩后，添加靈芝6倍重量無(wú)水乙醇浸漬提取，控制溫度45°C，4小 時(shí)后調(diào)整溫度為60°C 2小時(shí)，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的靈芝殘?jiān)?添加85 °C熱水，熱水添加量為靈芝殘?jiān)亓康?倍，處理時(shí)間50分鐘，連續(xù)提取3次，將提取 液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和熱水提取物合并粉碎，過(guò)60 目篩，即得靈芝提取物；
[0075]所述猴頭菇多糖的制備方法如下：
[0076] (1)取猴頭菇子實(shí)體，裝入有0.5%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、40KHz 清洗5-10min，然后于-25°C冷凍30min，立即進(jìn)行粉碎；
[0077] (2)粉碎后的猴頭菇與水以1:5(m: v)的比例混合，調(diào)整溫度為60°C，pH為7.0，加入 猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量〇. 3 %的纖維素酶酶解2.5小時(shí)后調(diào)整溫度到95°C保持5分鐘，調(diào)整溫度 到50°C、隨后添加猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量0.3%風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解溫度50°C、pH值7,酶 解時(shí)間2小時(shí)，離心分離獲得上清液；
[0078] (3)上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得猴頭菇提取物；
[0079] 所述猴頭菇子實(shí)體粉碎至粒徑在0.5_以下；
[0080] 所述灰樹(shù)花多糖提取方法如下：
[0081 ] (1)取市售的灰樹(shù)花子實(shí)體烘干粉碎后過(guò)80目篩；
[0082] (2)超聲熱水浸提：按過(guò)篩后的灰樹(shù)花子實(shí)體與水質(zhì)量體積比3:20的比例加入純 凈水，在PH7條件下，400W超聲波，105 °C水浴浸提0.5h;
[0083] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12rC，5min;
[0084] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0085] (5)離心分離獲得上清液；
[0086] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無(wú)水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥，即得灰樹(shù)花多糖。
[0087]所述植物乳桿菌粉劑的制備方法如下：
[0088] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC NO. 11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無(wú)瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)16h，使菌體處于對(duì) 數(shù)生長(zhǎng)中期；
[0089] (2)將對(duì)數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為15 %，38 °C下200rpm培養(yǎng)12小 時(shí)，溶氧控制10 % (通氣〇 . 5L/min)，之后再厭氧培養(yǎng)70小時(shí);發(fā)酵完畢發(fā)酵液靜置沉淀、離 心得到沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50°C流化床干燥即得植物乳桿 菌粉劑，載體重量份數(shù)組成為:酸奶粉25份，糊精12份。
[0090] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下:蛋白胨12g，牛肉膏12g，酵母膏8g，檸檬酸氫二銨4g，葡 萄糖25g，吐溫80 2mL，乙酸鈉7g，磷酸氫二鉀3g，硫酸鎂0.6g，硫酸猛0.3g，膽固醇120mg，中 草藥粉劑8g，蒸餾水1000mL，pH 6.6;
[0091] 所述膽固醇的添加方法為:先用無(wú)水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為12mg/mL的膽固 醇溶液，然后按一定比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為WOyg/mL;
[0092] 所述中草藥粉劑的制備方法如下：
[0093]稱(chēng)取五味子20份;黨參15份；山楂20份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以 下，然后于容器中均勻混合并添加6倍重量的水，控制溫度60 °C保持4h，加入混合酶制劑進(jìn) 行酶解，調(diào)節(jié)pH值為7，酶解4h，最后添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物，110W功率 下超聲萃取1.5h，過(guò)濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑；
[0094]所述混合酶添加量為混合物料總重量的10% ;
[0095]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶20份，β-淀粉酶15份，果膠酶15份，酸性 蛋白酶15份，酸性磷酸酶10份；
[0096]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:2。
[0097] 實(shí)施例3: -種真菌提取物益生菌功能性食品
[0098] -種真菌提取物益生菌功能性食品，由以下重量份數(shù)的原料組成：
[0099]靈芝提取物50份，猴頭菇提取物35份，灰樹(shù)花多糖7份，低聚果糖8份，小麥纖維8 份，大豆纖維3份，茶多酚0.02份，麥精30份，植物乳桿菌粉劑15份。
[0100]按照上述配方比例稱(chēng)取各組分，粉碎，過(guò)80目篩，然后混合lOmin，得粉劑。
[0101 ]所述靈芝提取物制備方法如下：
[0102] 靈芝粉碎，過(guò)45目篩后，添加靈芝5倍重量無(wú)水乙醇浸漬提取，控制溫度40°C，3小 時(shí)后調(diào)整溫度為60°C1.5小時(shí)，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的靈芝殘?jiān)?中添加80°C熱水，熱水添加量為靈芝殘?jiān)亓康?倍，處理時(shí)間40分鐘，連續(xù)提取3次，將提 取液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和熱水提取物合并粉碎，過(guò) 60目篩，即得靈芝提取物；
[0103] 所述猴頭菇提取物的制備方法如下：
[0104] (1)取猴頭菇子實(shí)體，裝入有0.4%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、40KHz 清洗5-10min，然后于-23°C冷凍20min，立即進(jìn)行粉碎；
[0105] (2)粉碎后的猴頭菇與水以1:4(m: v)的比例混合，調(diào)整溫度為50°C，pH為6.0，加入 猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量〇. 2%的纖維素酶酶解1.5小時(shí)后調(diào)整溫度到85°C保持3分鐘，調(diào)整溫度 到50°C、隨后添加猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量0.2%風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解溫度45°C、pH值6.5， 酶解時(shí)間1.5小時(shí)，離心分離獲得上清液；
[0106] (3)上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得猴頭菇提取物；
[0107] 所述猴頭菇子實(shí)體粉碎至粒徑在0.5mm以下；
[0108] 所述灰樹(shù)花多糖提取方法如下：
[0109] (1)取市售的灰樹(shù)花子實(shí)體烘干粉碎后過(guò)80目篩；
[011 0] (2)超聲熱水浸提:按過(guò)篩后的灰樹(shù)花子實(shí)體與水質(zhì)量體積比2:20的比例加入純 凈水，在PH7條件下，400W超聲波，105 °C水浴浸提0.5h;
[0111] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12?Γ，5π?η;
[0112] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0113] (5)離心分離獲得上清液；
[0114] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無(wú)水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥，即得灰樹(shù)花多糖。
[0115] 所述植物乳桿菌粉劑的制備方法如下：
[0116] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC NO. 11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無(wú)瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12-16h，使菌體處于 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期；
[0117] (2)將對(duì)數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為12 %，37 °C下150rpm培養(yǎng)10小 時(shí)，溶氧控制10 % (通氣〇 . 5L/min)，之后再厭氧培養(yǎng)65小時(shí);發(fā)酵完畢發(fā)酵液靜置沉淀、離 心得到沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50°C流化床干燥即得植物乳桿 菌粉劑，載體重量組份數(shù)成為:酸奶粉25份，糊精12份。
[0118] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下:蛋白胨llg，牛肉膏l(xiāng)lg，酵母膏6g，檸檬酸氫二銨3g，葡 萄糖22g，吐溫80 1.5mL，乙酸鈉6g，磷酸氫二鉀2.5g，硫酸鎂0.6g，硫酸錳0.25g，膽固醇 110mg，中草藥粉劑6g，蒸餾水1000mL，pH 6 · 5;
[0119] 所述膽固醇的添加方法為:先用無(wú)水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為Ilmg/mL的膽固 醇溶液，然后按一定比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為1 l〇yg/mL;
[0120] 所述中草藥粉劑的制備方法如下：
[0121] 稱(chēng)取五味子15份;黨參12份；山楂15份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以 下，然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度50°C保持3h，加入混合酶制劑進(jìn) 行酶解，調(diào)節(jié)pH值為6.5，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，110W功 率下超聲萃取lh，過(guò)濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥粉劑；
[0122] 所述混合酶添加量為混合物料總重量的8% ;
[0123] 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶18份，β-淀粉酶12份，果膠酶12份，酸性 蛋白酶12份，酸性磷酸酶8份；
[0124] 所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1.5。
[0125] 實(shí)施例4效果實(shí)驗(yàn)
[0126] 1、植物乳桿菌061〇：從).11763的培養(yǎng)
[0127] (1)取斜面上的植物乳桿菌CGMCC Ν0.11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS(無(wú)瓊 脂）（葡萄糖濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12h左右，使菌體處 于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期。
[0128] (2)將對(duì)數(shù)期的菌種接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中。接種量為10%，37°C下 lOOrprn培養(yǎng)8小時(shí)，對(duì)數(shù)前期溶氧控制10% (通氣0.5L/min)，后期厭氧培養(yǎng)63小時(shí)。
[0129] 發(fā)酵培養(yǎng)基：
[0130]①：蛋白胨llg，牛肉膏l(xiāng)lg，酵母膏6g，檸檬酸氫二銨3g，葡萄糖22g，吐溫80 1.5mL，乙酸鈉6g，磷酸氫二鉀2.5g，硫酸鎂0.6g，硫酸錳0.25g，膽固醇110mg，中草藥粉劑 6g，蒸饋水 1000mL，pH 6.5;
[0131] ②:刪去①中的膽固醇；
[0132] ③:刪去①中的中草藥粉劑；
[0133] 2、降解膽固醇能力測(cè)定
[0134] 步驟1中分別以發(fā)酵培養(yǎng)基①和②為發(fā)酵培養(yǎng)基完成發(fā)酵后，分別取lml發(fā)酵液離 心并用無(wú)菌水洗滌2遍后重懸于lml無(wú)菌水中，分別接種于10mL的MRS膽固醇液體培養(yǎng)基(膽 固醇含量0.1mg/ml，pH 6.2)中，37°C的恒溫靜置分別培養(yǎng)20h、40h、60h備用，取以上培養(yǎng)不 同時(shí)間的菌液樣品各11111，900(^/ 1^11，4°(：下離心101^11，得到發(fā)酵上清液，鄰苯二甲醛法測(cè) 定上清液中膽固醇含量(具體為:取各上清液0. lml于相應(yīng)的試管中，加冰醋酸0.3ml，lmg/ ml的鄰苯二甲醛0.15ml，緩緩加入濃硫酸1.0ml，混合均勻。室溫靜置lOmin，于550nm下測(cè)吸 光值）。每一處理3個(gè)重復(fù)，以同樣方法制作膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算上清液中膽固醇含量及降 解率，結(jié)果見(jiàn)表1?？芍?，CGMCC NO. 11763對(duì)膽固醇有很好的降解作用，60h小時(shí)后，降解率可 達(dá)到64.76 %。并且，添加有膽固醇的培養(yǎng)基所培養(yǎng)出的CGMCC NO. 11763降解膽固醇的能力 顯者提尚。
[0135] 表1對(duì)膽固醇的降解情況。
[0136]
[0137] 3、耐膽鹽實(shí)驗(yàn)
[0138] 步驟1中分別以發(fā)酵培養(yǎng)基①和③為發(fā)酵培養(yǎng)基完成發(fā)酵后，分別取lml發(fā)酵液離 心并用無(wú)菌水洗滌2遍后重懸于lml無(wú)菌水中，分別接種于含有不同膽鹽（含量梯度為 0.0%、0.4%、0.6%、1%)的1011^]\?5液體培養(yǎng)基化!1=6.4)，置于37°(：下分別培養(yǎng)0、2、411， 每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。各取lml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋度溶液，取0.1ml稀釋 液于MRS中涂布，于37°C生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)(每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行)記錄計(jì)算平 板上的菌數(shù)個(gè)數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表2。可知該菌在膽鹽濃度為1 %處理4h后菌的生長(zhǎng)量依然達(dá)到 0.51 ±0.92 X107(cfu/ml)，有很好的耐膽鹽能力，而采用添加有中草藥成分的培養(yǎng)基，其 耐膽鹽能力有效提尚。
[0139] 表2耐膽鹽能力檢測(cè)（X107cfu/ml)
[0140]
[0141]
[0142] 4、耐酸實(shí)驗(yàn)
[0143] 步驟1中分別以發(fā)酵培養(yǎng)基①和③為發(fā)酵培養(yǎng)基完成發(fā)酵后，分別取lml發(fā)酵液離 心并用無(wú)菌水洗滌2遍后重懸于lml無(wú)菌水中，分別接種于不同pH值(pH梯度為1.5、2.0、 2.5、3.0、3.5、4.0)的10mL MRS液體培養(yǎng)基，置于37°C下分別培養(yǎng)0、2、4h，每一處理3個(gè)重 復(fù)。各取lml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋溶液，取0. lml稀釋液于MRS中涂布， 于37°C生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)(每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行)記錄平板上的菌落個(gè)數(shù)。結(jié) 果見(jiàn)表3。說(shuō)明該菌具有很強(qiáng)的耐酸能力，且添加有中草藥成份的培養(yǎng)基能有效提高該菌的 耐酸性。
[0144] 表3耐酸能力檢測(cè)（X107cfu/ml)
[0145]
[0146] 5、亞硝酸鹽分解實(shí)驗(yàn)
[0147] 步驟1中以①培養(yǎng)基，發(fā)酵過(guò)程中根據(jù)亞硝酸鹽的消耗速率流加20g/L的亞硝酸鈉 溶液，培養(yǎng)2-3天。發(fā)酵結(jié)束后，計(jì)算發(fā)酵過(guò)程植物乳桿菌CGMCCN0.11763對(duì)亞硝酸鈉的降解 速率。結(jié)果發(fā)現(xiàn):在該條件下，CGMCC從).11763對(duì)亞硝酸鈉的降解速率可以達(dá)到65311^/11/1。 [0148] 6、黏附能力測(cè)定
[0149] 培養(yǎng)CGMCC NO. 11763(MRS液體培養(yǎng)基）、大腸桿菌DH5a(LB液體培養(yǎng)基)24h得發(fā)酵 液，分別置于3000r/min、4°C下離心10min，收集菌泥，分別用pH = 7.0的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液 (PBS)洗滌菌泥2次（即在菌落中加入PBS，震蕩混合均勻后，置于3000r/min、4°C下離心 lOmin，收集菌體）。自凝集率（％ :用無(wú)菌的roS將菌泥CGMCC NO. 11763制成在波長(zhǎng)600nm處 的吸光值為0.4 ±0.1 (A 0)的懸浮菌液及菌懸液，靜置24h后測(cè)定吸光值A(chǔ) 24,自凝集率 (%)公式為（4 0-厶24)/^0。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5，可知061(^_.11763的自凝集率為 95.71%，有很強(qiáng)的黏附能力。
[0150] 表5黏附能力表
[0152] 實(shí)施例5本發(fā)明的益生性試驗(yàn)
[0153] 將本發(fā)明實(shí)施例3制備的產(chǎn)品，用無(wú)菌水制備成活菌數(shù)為2X101()CFU/mL的益生菌 溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0154] 1、模擬胃液及腸液的耐受試驗(yàn)：
[0155] 取100g/L的鹽酸16 · 4mL加蒸餾水稀釋?zhuān)筽H值分別為1 · 5、2 · 5和3 · 5，取100mL稀鹽 酸溶液，分別加入lg胃蛋白酶，使其充分溶解，得模擬胃液，微孔濾膜除菌(〇.22μπι)備用。
[0156] 取磷酸二氫鉀6.8g，加水500mL使溶解，用0.1 moL/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8; 另取胰蛋白酶l〇g，加水100mL使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至1000ml，得模擬腸液，微孔 濾膜除菌(〇·22μπι)備用。
[0157] 取lmL保存好的益生菌溶液加入到9mL的模擬胃液中（即十倍逐級(jí)稀釋?zhuān)⒀杆僭?振蕩器上充分混勻，然后置于30-45°C靜置培養(yǎng)2-4h。分別在111、211、311、411的時(shí)候取出培養(yǎng) 液并立即計(jì)數(shù)殘存活菌數(shù)，與原活菌數(shù)進(jìn)行比較，結(jié)果表明，活菌存活率為97%。然后取在 人工胃液中消化不同時(shí)間的培養(yǎng)液各lmL，分別接種于9mL pH值為6.8的人工腸液中，置于 30-45Γ靜置培養(yǎng)2-4h，并分別在0、3、6、24h取樣，測(cè)定其活菌數(shù)，與原活菌數(shù)進(jìn)行比較，結(jié) 果表明活菌存活率為99 %。
[0158] 2、模擬膽鹽的耐受試驗(yàn):用胰液素制成lg/L的溶液，并在溶液中加入0.8%的豬膽 鹽，用10 %的NaOH調(diào)整pH為8.0，然后用0.45μπι微濾膜過(guò)濾并除菌。將0.5mL保存好的益生菌 溶液接種到4.5mL模擬膽鹽中，培養(yǎng)24h后得到培養(yǎng)液，計(jì)數(shù)殘存的活菌數(shù)。將培養(yǎng)液在滅菌 生理鹽水中十倍逐級(jí)稀釋至10-8,并用MRS傾注，然后置于35°C靜置培養(yǎng)24h。
[0159] 結(jié)果表明活菌存活率為99%。
[0160] 以上試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明營(yíng)養(yǎng)保健食品中的益生菌益生性(耐pH性、耐膽鹽)較 強(qiáng)，非常適合人體胃腸環(huán)境，在模擬胃腸環(huán)境中存活率大，可有效改善胃腸功能。
[0161]需要說(shuō)明的是:本發(fā)明實(shí)施例1-3制備的營(yíng)養(yǎng)保健食品同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效果，各 實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
[0162] 實(shí)施例6本發(fā)明對(duì)降膽固醇效果實(shí)驗(yàn)
[0163] 1.實(shí)驗(yàn)材料
[0164] 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料
[0165] 昆明種小鼠生，體重(20±2)g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；
[0166] 普通飼料為市售小鼠飼料；高脂飼料由為60 %普通飼料+10 %豬油+ 10 %奶粉+ 10%蛋黃粉+7%白糖+2%花生+0.5%鹽+0.5%麻油；
[0167] 1.2 試劑
[0168] 總膽固醇試劑盒(TCH，浙江東歐診斷產(chǎn)品有限公司）
[0169] 飼喂試劑配置：
[0170] 樣品液①:2g實(shí)施例3產(chǎn)品加入50mL超純水，振蕩混勻，即得；
[0171] 樣品液②:實(shí)施例3產(chǎn)品制備過(guò)程中CGMCC NO. 11763發(fā)酵培養(yǎng)基去除膽固醇，其他 條件不變制備的產(chǎn)品2g加入50mL超純水，振蕩混勻，即得
[0172] 對(duì)照液:純水；
[0173] 2.方法
[0174] 2.1小鼠的分組與飼養(yǎng)
[0175] 小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后，隨機(jī)分為2組:空白組、實(shí)驗(yàn)組，每組20只；飼喂75天；
[0176] 空白組:高脂飼料，給純水，體積與樣品液溶液體積相同；
[0?77]實(shí)驗(yàn)組①:高脂飼料，給樣品液①800mg/kg · d;
[0178]實(shí)驗(yàn)組②:高脂飼料，給樣品液②800mg/kg. d;末次給藥后，禁食不禁水12小時(shí)，眼 眶取血制備血清，依試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定總膽固醇(TC);實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
[0181] 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，實(shí)驗(yàn)前后，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠血清中膽固醇差異顯著，本發(fā)明 所述產(chǎn)品對(duì)降低血清中膽固醇含量具有明顯的效果。
[0182] 實(shí)施例7本發(fā)明產(chǎn)品提高免疫力的效果實(shí)驗(yàn)
[0183] 本產(chǎn)品實(shí)施例3產(chǎn)品在冬季選擇北京地區(qū)100位年齡在60-75歲體弱易感冒的老年 人連續(xù)食用1月，每日食用5克，以食用前和食用后效果比較，結(jié)果見(jiàn)表1，結(jié)果表明本產(chǎn)品對(duì) 提高老年人抵抗力、增強(qiáng)身體免疫力有明顯效果，產(chǎn)品有良好的食用和營(yíng)養(yǎng)滋補(bǔ)功效。同時(shí) 能夠顯著提高睡眠質(zhì)量，改善率達(dá)到70% (以有質(zhì)量睡眠時(shí)間為評(píng)估依據(jù))許多連續(xù)食用本 產(chǎn)品老人反映久服效果更佳，全年不感冒，身體狀況更好.
[0184] 表6食用效果對(duì)照表
[0186] 實(shí)施例8灰樹(shù)花多糖提取效果對(duì)比試驗(yàn)
[0187] 方法1:灰樹(shù)花多糖提取方法如下：
[0188] (1)取市售的灰樹(shù)花子實(shí)體烘干粉碎后過(guò)80目篩；
[0189] (2)超聲熱水浸提:按質(zhì)量體積比3:20的比例加入純凈水，在pH7條件下，400W超聲 波，105°C水浴浸提0.5h;
[0190] (3)熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，12rC，5min;
[0191] (4)循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次；
[0192] (5)離心分離獲得上清液；
[0193] (6)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95%乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無(wú)水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥稱(chēng)重，即得灰樹(shù)花多糖。
[0194] 方法2:灰樹(shù)花多糖提取方法如下：
[0195] (1)取市售的灰樹(shù)花子實(shí)體烘干粉碎后過(guò)80目篩；
[0196] (2)超聲熱水浸提:按質(zhì)量體積比3:20的比例加入純凈水，在pH7條件下，400W超聲 波，105 °C水浴浸提140min;
[0197] (3)離心分離獲得上清液；
[0198] (4)上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄 去上清液，再加入與初始濃縮液等體積的無(wú)水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3 次，噴霧干燥稱(chēng)重，即得灰樹(shù)花多糖。
[0199] 灰樹(shù)花多糖粗提取率（％ )=(粗多糖干重/灰樹(shù)花子實(shí)體烘干后干重）X 100
[0200] 根據(jù)上述公式計(jì)算上述兩種提取方法對(duì)灰樹(shù)花多糖粗提取率的影響，方法1灰樹(shù) 花多糖粗提取率為10.22%，方法1灰樹(shù)花多糖粗提取率為8.37%，可見(jiàn)，間歇熱蒸汽浸提能 有效提1?超聲熱水浸提對(duì)灰樹(shù)花多糖的粗提取率。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種真菌提取物益生菌功能性食品，由以下重量份數(shù)的原料組成:靈芝提取物30-80 份，猴頭菇提取物20-50份，灰樹(shù)花多糖5-10份，低聚果糖2-10份，小麥纖維2-10份，大豆纖 維2-5份，茶多酚0.01-0.03份，麥精10-50份，植物乳桿菌粉劑10-20份； 所述植物乳桿菌粉劑由植物乳桿菌(LactobaciIlus plantarum)tlj-2015制備，保藏 號(hào)為CGMCC NO .11763。2. 如權(quán)利要求1所述的一種真菌提取物益生菌功能性食品，其特征在于， 所述靈芝提取物制備方法如下： 靈芝粉碎，過(guò)40-50目篩后，添加靈芝3-6倍重量無(wú)水乙醇浸漬提取，控制溫度30-45Γ， 2-4小時(shí)后調(diào)整溫度為55-60°Cl-2小時(shí)，提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物；乙醇提取后的 靈芝殘?jiān)刑砑?5-85°C熱水，熱水添加量為靈芝殘?jiān)亓康?-4倍，處理時(shí)間30-50分鐘， 連續(xù)提取2-3次，將提取液真空濃縮后噴霧干燥，得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和熱 水提取物合并粉碎，過(guò)60目篩，即得靈芝提取物； 所述猴頭菇提取物的制備方法如下： (1) 取猴頭菇子實(shí)體，裝入有〇. 3-0.5%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于2001、401(他 清洗5-10min，然后于-21--25°C冷凍10_30min，立即進(jìn)行粉碎； (2) 粉碎后的猴頭菇與水以1: 3-5 (m: V)的比例混合，調(diào)整溫度為40-60°C，pH為5.0-7.0，加入猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量0.1-0.3 %的纖維素酶酶解1-2.5小時(shí)后調(diào)整溫度到80-95 °C保 持2-5分鐘，調(diào)整溫度到50°C、隨后添加猴頭菇子實(shí)體質(zhì)量0.1-0.3%風(fēng)味蛋白酶進(jìn)行酶解， 酶解溫度40-50°C、pH值6-7，酶解時(shí)間1-2小時(shí)，離心分離獲得上清液； (3) 上清液減壓濃縮得濃縮液，噴霧干燥，即得猴頭菇提取物； 所述猴頭菇子實(shí)體粉碎至粒徑在〇. 5mm以下。3. 如權(quán)利要求1所述的一種真菌提取物益生菌功能性食品，其特征在于， 所述灰樹(shù)花多糖提取方法如下： (1) 取市售的灰樹(shù)花子實(shí)體烘干粉碎后過(guò)80目篩； (2) 超聲熱水浸提:按過(guò)篩后的灰樹(shù)花子實(shí)體與水質(zhì)量體積比1-3 :20的比例加入純凈 水，在pH7條件下，400W超聲波，105 °C水浴浸提0 · 5h; (3) 熱蒸汽浸提:將上述提取體系置于滅菌鍋，121°C，5min; (4) 循環(huán)重復(fù)步驟(2)、（3)4次； (5) 離心分離獲得上清液； (6) 上清液減壓濃縮得濃縮液，添加濃縮液3倍體積的95 %乙醇，4°C下醇析24h，棄去上 清液，再加入與初始濃縮液等體積的無(wú)水乙醇靜置30min后，棄去上清液，沉淀洗滌3次，噴 霧干燥，即得灰樹(shù)花多糖。4. 如權(quán)利要求1所述的一種真菌提取物益生菌功能性食品，其特征在于，所述植物乳桿 菌粉劑中活菌含量為:7xl012-9xl0 12Cfu/g。5. 如權(quán)利要求1所述的一種真菌提取物益生菌功能性食品，其特征在于，所述植物乳桿 菌粉劑的制備方法如下： (1) 取斜面上的植物乳桿菌CGMCC NO. 11763-環(huán)，接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS培養(yǎng)基的 250mL三角瓶中，200rpm，37°C培養(yǎng)12-16h，使菌體處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期； (2) 將對(duì)數(shù)期的菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為10-15 %，35-38 °C下100_200rpm培養(yǎng) 8-12小時(shí)，溶氧控制10 %，之后再厭氧培養(yǎng)60-70小時(shí);發(fā)酵完畢發(fā)酵液靜置沉淀、離心得到 沉淀物，然后添加沉淀物質(zhì)量1倍的載體，混合均勻，50°C流化床干燥即得植物乳桿菌粉劑， 載體重量份數(shù)組成為:酸奶粉25份，糊精12份。6. 如權(quán)利要求5所述的一種真菌提取物益生菌功能性食品，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng) 基組成如下：蛋白胨l〇_12g，牛肉膏10-12g，酵母膏5-8g，檸檬酸氫二銨2-4g，葡萄糖20-25g，吐溫80 l-2mL，乙酸鈉5-7g，磷酸氫二鉀2-3g，硫酸鎂0.58-0.6g，硫酸錳0.25-0.3g，膽 固醇100-120mg，中草藥粉劑5_8g，蒸饋水I 000mL，pH 6.2~6.6。7. 如權(quán)利要求6所述的一種真菌提取物益生菌功能性食品，其特征在于，所述膽固醇的 添加方法為:先用無(wú)水乙醇溶解膽固醇，配制濃度為10-12mg/mL的膽固醇溶液，然后按一定 比例添加到培養(yǎng)基中，使膽固醇最終濃度為100-120yg/mL。8. 如權(quán)利要求6所述的一種真菌提取物益生菌功能性食品，其特征在于，所述中草藥粉 劑的制備方法如下： 稱(chēng)取五味子10-20份;黨參10-15份；山楂10-20份;分別將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫 米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度45-60°C保持2~4h，加入 混合酶制劑進(jìn)行酶解，調(diào)節(jié)PH值為6-7，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙 醇的混合物，IIOW功率下超聲萃取0.5~1.5h，過(guò)濾;濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得中草藥 粉劑； 所述混合酶添加量為混合物料總重量的5-10 % ; 所述混合酶的重量份數(shù)組成為:木聚糖酶15-20份，β-淀粉酶10-15份，果膠酶10-15份， 酸性蛋白酶10-15份，酸性磷酸酶5-10份； 所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-2。9. 如權(quán)利要求1所述的一種真菌提取物益生菌功能性食品，其特征在于，由以下重量份 數(shù)的原料組成:靈芝提取物50份，猴頭菇提取物35份，灰樹(shù)花多糖7份，低聚果糖8份，小麥纖 維8份，大豆纖維3份，茶多酚0.02份，麥精30份，植物乳桿菌粉劑15份。10. 權(quán)利要求1所述一種真菌提取物益生菌功能性食品在保健領(lǐng)域的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A23L33/135GK105901697SQ201610235464
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月15日
【發(fā)明人】邵素英
【申請(qǐng)人】邵素英