一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑的制備方法，該方法，將飼用枯草芽孢桿菌活化、擴(kuò)大培養(yǎng)，得種子液；取葛根、黃精和飯麥?zhǔn)?，超微粉碎，滅菌，得滅菌后中藥粉A；將種子液接種到培養(yǎng)液中，培養(yǎng)8h，得到菌液；在菌液中加入滅菌后中藥粉A，繼續(xù)培養(yǎng)，得到二級(jí)種子液；取陳皮、魚(yú)腥草和山楂，超微粉碎，滅菌，得到滅菌后中藥粉B；將二級(jí)種子液接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，得發(fā)酵液；在發(fā)酵液中添加滅菌后中藥粉B，繼續(xù)發(fā)酵10?15h，得最終發(fā)酵液；將最終發(fā)酵液真空濃縮、霧化、熱空氣進(jìn)行并流干燥，干燥物料經(jīng)旋風(fēng)分離器引出、回收，制備出枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑。所添加劑含水量小，活菌數(shù)7000?18000億/g，菌種活性高，具有廣闊的市場(chǎng)前景。
【專利說(shuō)明】
一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種菌粉的制備方法，具體的說(shuō)是一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑 的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 枯草芽孢作為一種微生物制劑中的常用菌，枯草芽孢桿菌以芽孢形態(tài)進(jìn)入動(dòng)物腸 道后，可迅速?gòu)男菝郀顟B(tài)重新萌發(fā)，作為一種需氧菌，枯草芽孢桿菌在萌發(fā)、生長(zhǎng)過(guò)程中可 迅速、大量地消耗消化道中的游離氧，造成缺氧環(huán)境;而有害菌一般多為好氧菌，故其生長(zhǎng) 受到抑制，厭氧有益菌群成為優(yōu)勢(shì)菌群。同時(shí)，枯草芽孢桿菌還具有較強(qiáng)的蛋白酶、淀粉酶 和脂肪酶活性，可將體內(nèi)酶原激活為有活性的酶，還可分泌一系列胞外酶系，如果膠酶、葡 聚糖酶、纖維素酶等，可幫助分解植物飼料中非淀粉多糖等物質(zhì)，改善飼料利用率;且酸性 腸道環(huán)境可刺激動(dòng)物的腸道蠕動(dòng)，促進(jìn)消化吸收。此外，枯草芽孢桿菌本身作為非特異性免 疫因子，可通過(guò)菌體或細(xì)胞壁成分刺激宿主細(xì)胞，從而激活巨噬細(xì)胞，或可作為非特異性免 疫反應(yīng)的免疫佐劑;也可使IgA等免疫球蛋白分泌增強(qiáng)，提高免疫識(shí)別力；刺激抗原呈遞細(xì) 胞(APC)，誘導(dǎo)T細(xì)胞、B細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，通過(guò)淋巴活化全身免疫系統(tǒng)。同時(shí)，枯草芽孢桿 菌在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中能合成B族維生素，以及維生素 E、K，可參與動(dòng)物機(jī)體的新陳代謝，有促 進(jìn)鈣、磷吸收、抗氧化、促凝血等作用。目前市場(chǎng)上的枯草芽孢生產(chǎn)企業(yè)很多，但多數(shù)是小 規(guī)模企業(yè)，作坊式生產(chǎn)，設(shè)備工藝落后，草芽孢桿菌質(zhì)量參差不齊，產(chǎn)品中的成分構(gòu)成不科 學(xué)，有些雖然含菌數(shù)多，但雜菌率高，效果不好。因此開(kāi)發(fā)一種高密度培養(yǎng)和高活力回收的 芽孢桿菌生產(chǎn)工藝，制備具有穩(wěn)定活性的芽孢桿菌菌粉或者制劑，對(duì)推動(dòng)生態(tài)綠色養(yǎng)殖，減 少抗生素使用，提高動(dòng)物性食品源頭安全尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明目的是為解決上述技術(shù)問(wèn)題的不足，提供一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加 劑的制備方法，所制備的枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑含水量小于6%，活菌數(shù)在7000-18000億/g，添加劑保存兩年，其中的枯草芽孢桿菌仍然能保存95%菌種活性。
[0004] -種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟： 步驟一、將飼用枯草芽孢桿菌接種在斜面種子培養(yǎng)基上，35-37 °C培養(yǎng)48h;所述斜面種 子培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為：葡萄糖〇 . 5-1.5%，蛋白胨0.2-2%，牛肉膏0.5-1.5%，酵母膏0.5-1.5%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.5-2%，余量為水； 步驟二、從培養(yǎng)的新鮮斜面上挑取2-4環(huán)菌苔接種于裝有50ml液體擴(kuò)大培養(yǎng)基的250ml 三角瓶中，35-37°C，180-240rpm搖床振蕩培養(yǎng)16-24h，得到種子液，備用； 所述液體擴(kuò)大培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖〇. 5-1.5%，蛋白胨0.2-2%， 牛肉膏0.5-1.5%，酵母膏0.5-1.5%，氯化鈉0.5%，余量為水； 步驟三、按照質(zhì)量比為2:1:0.2的比例取葛根、黃精和飯麥?zhǔn)?，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行 超微粉碎，過(guò)60-80目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉 A，備用； 步驟四、將上述培養(yǎng)的種子液接種到裝有3L培養(yǎng)液的5L發(fā)酵罐中，接種量為培養(yǎng)液體 積的5-15%;接種結(jié)束后，于150-250rpm，1:1通風(fēng)量，pH6.5-7.0，35-37°C條件下培養(yǎng)8h后， 得到菌液；在菌液中加入其重量6%-7%的滅菌后中藥粉A，攪拌均勻后，繼續(xù)在于150_ 250rpm，1:1通風(fēng)量，pH6.5-7.0，35-37 °C條件下培養(yǎng)8-12h，得到二級(jí)種子液，備用； 所述培養(yǎng)液中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖0.5-1.5%，豆餅粉0.5-2.0%，蛋白胨 0 · 5-2 · 5%，硫酸銨0 · 25-1 · 5%，磷酸氫二鈉 0 · 05-0 · 20%，磷酸二氫鈉0 · 05-0 · 20%，硫酸鎂 0 · 05-0 · 5%，氯化鈣0 · 01 -0 · 10%，余量為水； 步驟五、按質(zhì)量比為5:2:1的比例取陳皮、魚(yú)腥草和山楂，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行超微 粉碎，過(guò)60-80目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉B，備 用； 步驟六、將培養(yǎng)的二級(jí)種子液接種于裝有30-35L液體發(fā)酵培養(yǎng)基的50L發(fā)酵罐中，接種 量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5-15%;接種結(jié)束后按1:0.6-0.75通風(fēng)量，150-220rpm，pH6.5-7.0， 35-37 °C培養(yǎng)20-25h，得到發(fā)酵液;在發(fā)酵液中添加其質(zhì)量2%的滅菌后中藥粉B，在1:0.6-0.75通風(fēng)量，150-220rpm，pH6.5-7.0，35-37°C繼續(xù)發(fā)酵10_15h得到最終發(fā)酵液，備用； 所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖1.0-3.0%，淀粉0.5-2.0%， 豆餅粉0.5-2.0%，蛋白胨0.2-2%，硫酸銨0.25-1.5%;碳酸鈣0.01-0.05%，磷酸氫二鉀0.0ΙΟ. 05% ， 磷酸錳0.01 -0.05% ， 氯化鈣0.01 -0.05% ， 余量為水； 步驟七、將所得最終發(fā)酵液用栗輸送至兩效真空濃縮設(shè)備中，一效溫度75-80°C，真空 度0.05-0.0551〇^，二效50-55°(：，真空度0.058-0.0651〇^，濃縮比為3-4:1，濃縮結(jié)束后按 10-20%比例加入淀粉混合均勻，用栗將物料輸送至噴霧干燥塔頂部，由離心式霧化器在 15000-18000rpm下進(jìn)行霧化，用進(jìn)口溫度為140-155 °C的熱空氣進(jìn)行并流干燥，干燥物料經(jīng) 旋風(fēng)分離器引出后從接料桶中回收，即制備出枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑。
[0005] 有益效果是： 本發(fā)明枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑，針對(duì)飼用枯草芽孢桿菌的特點(diǎn)，對(duì)其進(jìn)行分級(jí) 培養(yǎng)，結(jié)合各步驟中中藥成分的添加，可增加菌種活性，延長(zhǎng)其保持活性的周期，使所制備 的菌粉活菌數(shù)在7000-18000億/g，保存兩年仍然能保存95%菌種活性。本發(fā)明工藝中各步驟 的有機(jī)結(jié)合，保證采用的原料中藥與飼用枯草芽孢桿菌相互作用，最終使所制備的飼料添 加劑適用于各種動(dòng)物，包括家禽，家畜等，可促進(jìn)動(dòng)物腸胃對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，可促進(jìn)動(dòng)物 健康快速生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明飼料添加劑在飼料中添加后，可明顯提高動(dòng)物機(jī)體的抗病 性，加快動(dòng)物生長(zhǎng)速度。且本發(fā)明飼料添加劑不含防腐劑，對(duì)畜體無(wú)損害，具有廣闊的市場(chǎng) 應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0006] 實(shí)施例1 一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟： 步驟一、將飼用枯草芽孢桿菌接種在斜面種子培養(yǎng)基上，35°C培養(yǎng)48h;所述斜面種子 培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖〇. 5%，蛋白胨0.2%，牛肉膏0.5%，酵母膏0.5%， 氯化鈉0.5%，瓊脂1.5%，余量為水； 步驟二、從培養(yǎng)的新鮮斜面上挑取2-4環(huán)菌苔接種于裝有50ml液體擴(kuò)大培養(yǎng)基的250ml 三角瓶中，35°C，240rpm搖床振蕩培養(yǎng)16h，得到種子液，備用； 所述液體擴(kuò)大培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖0.5%，蛋白胨0.2%，牛肉膏 0.5%，酵母膏0.5%，氯化鈉0.5%，余量為水； 步驟三、按照質(zhì)量比為2:1:0.2的比例取葛根、黃精和飯麥?zhǔn)?，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行 超微粉碎，過(guò)60目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉A， 備用； 步驟四、將上述培養(yǎng)的種子液接種到裝有3L培養(yǎng)液的5L發(fā)酵罐中，接種量為培養(yǎng)液體 積的5%;接種結(jié)束后，于150rpm，1:1通風(fēng)量，pH6.5，35°C條件下培養(yǎng)8h后，得到菌液;在菌液 中加入其重量6%的滅菌后中藥粉A，攪拌均勻后，繼續(xù)在于150rpm，l:l通風(fēng)量，pH6.5,35°C 條件下培養(yǎng)8h，得到二級(jí)種子液，備用； 所述培養(yǎng)液中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖0.5%，豆餅粉0.5%，蛋白胨0.5%，硫 酸銨0.25%，磷酸氫二鈉0.05%，磷酸二氫鈉0.05%，硫酸鎂0.05%，氯化鈣0.01%，余量為水； 步驟五、按質(zhì)量比為5:2:1的比例取陳皮、魚(yú)腥草和山楂，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行超微 粉碎，過(guò)60目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉B，備用； 步驟六、將培養(yǎng)的二級(jí)種子液接種于裝有30L液體發(fā)酵培養(yǎng)基的50L發(fā)酵罐中，接種量 為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5%;接種結(jié)束后按1:0.6通風(fēng)量，150rpm，pH6.5，35°C培養(yǎng)20h，得到發(fā) 酵液;在發(fā)酵液中添加其質(zhì)量2%的滅菌后中藥粉B，在1:0.6通風(fēng)量，150rpm，pH6.5，35 °C繼 續(xù)發(fā)酵IOh得到最終發(fā)酵液，備用； 所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為：葡萄糖1.0%，淀粉0.5%，豆餅粉 0.5%，蛋白胨0.2%，硫酸銨0.25%;碳酸鈣0.01%，磷酸氫二鉀0.01%，磷酸錳0.01%，氯化鈣 0.01%，余量為水； 步驟七、將所得最終發(fā)酵液用栗輸送至兩效真空濃縮設(shè)備中，一效溫度75°C，真空度 0.05MPa，二效50°C，真空度0.058MPa，濃縮比為3:1，濃縮結(jié)束后按10%比例加入淀粉混合均 勻，用栗將物料輸送至噴霧干燥塔頂部，由離心式霧化器在15000rpm下進(jìn)行霧化，用進(jìn)口溫 度為140°C的熱空氣進(jìn)行并流干燥，干燥物料經(jīng)旋風(fēng)分離器引出后從接料桶中回收，即制備 出枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑。所制備的枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑含水量小于6%， 活菌數(shù)在7000億/g，添加劑保存兩年，其中的枯草芽孢桿菌仍然能保存95%菌種活性。
[0007] 本實(shí)施例中所述飼用枯草芽孢桿菌購(gòu)買自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院，菌種編 號(hào)為 BNCC189983。
[0008] 實(shí)施例2 一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟： 步驟一、將飼用枯草芽孢桿菌接種在斜面種子培養(yǎng)基上，37 °C培養(yǎng)48h;所述斜面種子 培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖1.5%，蛋白胨2%，牛肉霄1.5%，酵母霄1.5%，氯 化鈉0.5%，瓊脂2%，余量為水； 步驟二、從培養(yǎng)的新鮮斜面上挑取2-4環(huán)菌苔接種于裝有50ml液體擴(kuò)大培養(yǎng)基的250ml 三角瓶中，37°C，240rpm搖床振蕩培養(yǎng)24h，得到種子液，備用； 所述液體擴(kuò)大培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為：葡萄糖1.5%，蛋白胨2%，牛肉膏 1.5%，酵母膏1.5%，氯化鈉0.5%，余量為水； 步驟三、按照質(zhì)量比為2:1:0.2的比例取葛根、黃精和飯麥?zhǔn)?，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行 超微粉碎，過(guò)80目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉A， 備用； 步驟四、將上述培養(yǎng)的種子液接種到裝有3L培養(yǎng)液的5L發(fā)酵罐中，接種量為培養(yǎng)液體 積的15%;接種結(jié)束后，于250rpm，1:1通風(fēng)量，pH7.0，37°C條件下培養(yǎng)8h后，得到菌液;在菌 液中加入其重量7%的滅菌后中藥粉A，攪拌均勻后，繼續(xù)在于250rpm，l:l通風(fēng)量，pH7.0, 37 °C條件下培養(yǎng)12h，得到二級(jí)種子液，備用； 所述培養(yǎng)液中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖1.5%，豆餅粉2.0%，蛋白胨2.5%，硫 酸銨1.5%，磷酸氫二鈉0.20%，磷酸二氫鈉0.20%，硫酸鎂0.5%，氯化鈣0.10%，余量為水； 步驟五、按質(zhì)量比為5:2:1的比例取陳皮、魚(yú)腥草和山楂，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行超微 粉碎，過(guò)80目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉B，備用； 步驟六、將培養(yǎng)的二級(jí)種子液接種于裝有35L液體發(fā)酵培養(yǎng)基的50L發(fā)酵罐中，接種量 為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的15%;接種結(jié)束后按1: 0.75通風(fēng)量，220rpm，pH7.0，37°C培養(yǎng)25h，得到 發(fā)酵液;在發(fā)酵液中添加其質(zhì)量2%的滅菌后中藥粉B，在1: 0.75通風(fēng)量，220rpm，pH7.0，37 °C繼續(xù)發(fā)酵15h得到最終發(fā)酵液，備用； 所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為：葡萄糖3.0%，淀粉2.0%，豆餅粉 2.0%，蛋白胨2%，硫酸銨1.5%;碳酸鈣0.05%，磷酸氫二鉀0.05%，磷酸錳0.05%，氯化鈣0.05%， 余量為水； 步驟七、將所得最終發(fā)酵液用栗輸送至兩效真空濃縮設(shè)備中，一效溫度80°C，真空度 0.055MPa，二效55°C，真空度0.065MPa，濃縮比為4:1，濃縮結(jié)束后按20%比例加入淀粉混合 均勻，用栗將物料輸送至噴霧干燥塔頂部，由離心式霧化器在ISOOOrpm下進(jìn)行霧化，用進(jìn)口 溫度為155°C的熱空氣進(jìn)行并流干燥，干燥物料經(jīng)旋風(fēng)分離器引出后從接料桶中回收，即制 備出枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑。所制備的枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑含水量小于 6%，活菌數(shù)在12000億/g，添加劑保存兩年，其中的枯草芽孢桿菌仍然能保存95%菌種活性。 [0009] 實(shí)施例3 一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟： 步驟一、將飼用枯草芽孢桿菌接種在斜面種子培養(yǎng)基上，36°C培養(yǎng)48h;所述斜面種子 培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖1 .〇%，蛋白胨1.5%，牛肉霄1.0%，酵母霄1.2%， 氯化鈉0.5%，瓊脂1.8%，余量為水； 步驟二、從培養(yǎng)的新鮮斜面上挑取3環(huán)菌苔接種于裝有50ml液體擴(kuò)大培養(yǎng)基的250ml三 角瓶中，36°C，200rpm搖床振蕩培養(yǎng)20h，得到種子液，備用； 所述液體擴(kuò)大培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖1.2%，蛋白胨1.6%，牛肉膏 1.2%，酵母膏1.2%，氯化鈉0.5%，余量為水； 步驟三、按照質(zhì)量比為2:1:0.2的比例取葛根、黃精和飯麥?zhǔn)?，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行 超微粉碎，過(guò)70目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉A， 備用； 步驟四、將上述培養(yǎng)的種子液接種到裝有3L培養(yǎng)液的5L發(fā)酵罐中，接種量為培養(yǎng)液體 積的10%;接種結(jié)束后，于200rpm，1:1通風(fēng)量，pH6.5-7.0，35-37°C條件下培養(yǎng)8h后，得到菌 液;在菌液中加入其重量6.5%的滅菌后中藥粉A，攪拌均勻后，繼續(xù)在于200rpm，1:1通風(fēng)量， pH6.8,36°C條件下培養(yǎng)10h，得到二級(jí)種子液，備用； 所述培養(yǎng)液中各成分的質(zhì)量百分比含量為：葡萄糖1.0%，豆餅粉1.5%，蛋白胨1.3%，硫 酸銨1.3%，磷酸氫二鈉0.15%，磷酸二氫鈉0.15%，硫酸鎂0.35%，氯化鈣0.05%，余量為水； 步驟五、按質(zhì)量比為5:2:1的比例取陳皮、魚(yú)腥草和山楂，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行超微 粉碎，過(guò)70目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉B，備用； 步驟六、將培養(yǎng)的二級(jí)種子液接種于裝有32L液體發(fā)酵培養(yǎng)基的50L發(fā)酵罐中，接種量 為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的12%;接種結(jié)束后按1:0.70通風(fēng)量，200rpm，pH6.8，36°C培養(yǎng)22h，得到 發(fā)酵液;在發(fā)酵液中添加其質(zhì)量2%的滅菌后中藥粉B，在1:0.65通風(fēng)量，200rpm，pH6.8，36°C 繼續(xù)發(fā)酵12h得到最終發(fā)酵液，備用； 所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為：葡萄糖2.0%，淀粉1.8%，豆餅粉 1.5%，蛋白胨1.5%，硫酸銨1.3%;碳酸鈣0.03%，磷酸氫二鉀0.03%，磷酸錳0.04%，氯化鈣 0.04%，余量為水； 步驟七、將所得最終發(fā)酵液用栗輸送至兩效真空濃縮設(shè)備中，一效溫度78°C，真空度 0.052MPa，二效52°C，真空度0.062MPa，濃縮比為3.5:1，濃縮結(jié)束后按15%比例加入淀粉混 合均勻，用栗將物料輸送至噴霧干燥塔頂部，由離心式霧化器在17000rpm下進(jìn)行霧化，用進(jìn) 口溫度為150°C的熱空氣進(jìn)行并流干燥，干燥物料經(jīng)旋風(fēng)分離器引出后從接料桶中回收，即 制備出枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑。
[0010]所制備的枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑含水量小于6%，活菌數(shù)在18000億/g，添加 劑保存兩年，其中的枯草芽孢桿菌仍然能保存95%菌種活性。
[0011] 實(shí)施例4 一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟： 步驟一、將飼用枯草芽孢桿菌接種在斜面種子培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)48h;所述斜面種子 培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖1.3%，蛋白胨1.8%，牛肉霄1.3%，酵母霄1.9%， 氯化鈉0.5%，瓊脂1.8%，余量為水； 步驟二、從培養(yǎng)的新鮮斜面上挑取4環(huán)菌苔接種于裝有50ml液體擴(kuò)大培養(yǎng)基的250ml三 角瓶中，36°C，190rpm搖床振蕩培養(yǎng)22h，得到種子液，備用； 所述液體擴(kuò)大培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖1.4%，蛋白胨1.7%，牛肉膏 1.2%，酵母膏1.3%，氯化鈉0.5%，余量為水； 步驟三、按照質(zhì)量比為2:1:0.2的比例取葛根、黃精和飯麥?zhǔn)?，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行 超微粉碎，過(guò)77目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉A， 備用； 步驟四、將上述培養(yǎng)的種子液接種到裝有3L培養(yǎng)液的5L發(fā)酵罐中，接種量為培養(yǎng)液體 積的13%;接種結(jié)束后，于190rpm，1:1通風(fēng)量，pH 6.9，35-37°C條件下培養(yǎng)8h后，得到菌液； 在菌液中加入其重量6.7的滅菌后中藥粉A，攪拌均勻后，繼續(xù)在于230rpm，1:1通風(fēng)量， pH6.8,36°C條件下培養(yǎng)llh，得到二級(jí)種子液，備用； 所述培養(yǎng)液中各成分的質(zhì)量百分比含量為：葡萄糖1.3%，豆餅粉1.7%，蛋白胨2.3%，硫 酸銨1.08%，磷酸氫二鈉0.13%，磷酸二氫鈉0.13%，硫酸鎂0.58%，氯化鈣0.07%，余量為水； 步驟五、按質(zhì)量比為5:2:1的比例取陳皮、魚(yú)腥草和山楂，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行超微 粉碎，過(guò)77目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉B，備用； 步驟六、將培養(yǎng)的二級(jí)種子液接種于裝有33L液體發(fā)酵培養(yǎng)基的50L發(fā)酵罐中，接種量 為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的12%;接種結(jié)束后按1: 0.68通風(fēng)量，21Orpm，pH6.7，35-37°C培養(yǎng)23h，得 到發(fā)酵液;在發(fā)酵液中添加其質(zhì)量2%的滅菌后中藥粉B，在1:0.69通風(fēng)量，210rpm，pH6.8， 35-37Γ繼續(xù)發(fā)酵12h得到最終發(fā)酵液，備用； 所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為：葡萄糖2.4%，淀粉1.8%，豆餅粉 1.7%，蛋白胨1.7%，硫酸銨1.8%;碳酸鈣0.03%，磷酸氫二鉀0.04%，磷酸錳0.04%，氯化鈣 0.04%，余量為水； 步驟七、將所得最終發(fā)酵液用栗輸送至兩效真空濃縮設(shè)備中，一效溫度77°C，真空度 0.053MPa，二效53 °C，真空度0.062MPa，濃縮比為3.7:1，濃縮結(jié)束后按18%比例加入淀粉混 合均勻，用栗將物料輸送至噴霧干燥塔頂部，由離心式霧化器在17000rpm下進(jìn)行霧化，用進(jìn) 口溫度為145°C的熱空氣進(jìn)行并流干燥，干燥物料經(jīng)旋風(fēng)分離器引出后從接料桶中回收，即 制備出枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑。
[0012]所制備的枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑含水量小于6%，活菌數(shù)在14000億/g，添加 劑保存兩年，其中的枯草芽孢桿菌仍然能保存95%菌種活性。
[0013] 相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 采用由本發(fā)明中的嗜酸乳桿菌飼料添加劑，對(duì)其效果進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。選300只剛斷 奶的仔羊，平均分成三組，每組100只，分別為試驗(yàn)組、對(duì)照組和空白組，三組飼喂不同的嗜 酸乳桿菌飼料添加劑，試驗(yàn)組在斷奶后飼喂的添加本發(fā)明所制備的嗜酸乳桿菌飼料添加劑 的飼料，對(duì)照組飼喂的飼料中添加普通飼料添加劑，空白組飼喂的羊飼料中不添加飼料添 加劑?？瞻捉M、試驗(yàn)組和對(duì)照組飼喂斷奶仔羊在其他條件完全相同的環(huán)境中讓仔羊盡可能 高性能生長(zhǎng)，統(tǒng)計(jì)斷奶后6周的生長(zhǎng)過(guò)程中斷奶仔羊的平均日采食量、平均日增重和平均生 病率，其中平均生病率為一組仔羊6周所有生病次數(shù)與仔羊數(shù)量的比值。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表1 所示：
由以上數(shù)據(jù)可知，試驗(yàn)組的仔羊的平均日采食量和平均日增重均較對(duì)照組和空白組 高，平均生病率明顯較低，本發(fā)明制備的嗜酸乳桿菌飼料添加劑可明顯增加動(dòng)物體重，提高 免疫力，有效減輕食欲不振、消化不良、飼料利用率低、抗病力下降、生長(zhǎng)緩慢、甚至死亡等 問(wèn)題，從而提高仔羊的生長(zhǎng)性能。對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)，具有明顯的促進(jìn)作用。
[0014] 本發(fā)明中所述飼用枯草芽孢桿菌為普通菌株，可通過(guò)市場(chǎng)購(gòu)買得到。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑的制備方法，其特征在于:包括以下步驟： 步驟一、將飼用枯草芽孢桿菌接種在斜面種子培養(yǎng)基上，35-37 tC培養(yǎng)48h;所述斜面種 子培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為：葡萄糖〇 . 5-1.5%，蛋白胨O . 2-2%，牛肉膏O . 5-1.5%，酵母膏0.5-1.5%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.5-2%，余量為水； 步驟二、從培養(yǎng)的新鮮斜面上挑取2-4環(huán)菌苔接種于裝有50ml液體擴(kuò)大培養(yǎng)基的250ml 三角瓶中，35-37°C，180-240rpm搖床振蕩培養(yǎng)16-24h，得到種子液，備用； 所述液體擴(kuò)大培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖〇. 5-1.5%，蛋白胨0.2-2%， 牛肉膏0.5-1.5%，酵母膏0.5-1.5%，氯化鈉0.5%，余量為水； 步驟三、按照質(zhì)量比為2:1:0.2的比例取葛根、黃精和飯麥?zhǔn)?，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行 超微粉碎，過(guò)60-80目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉 A，備用； 步驟四、將上述培養(yǎng)的種子液接種到裝有3L培養(yǎng)液的5L發(fā)酵罐中，接種量為培養(yǎng)液體 積的5-15%;接種結(jié)束后，于150-250rpm，1:1通風(fēng)量，pH6.5-7.0，35-37°C條件下培養(yǎng)8h后， 得到菌液;在菌液中加入其重量6%-7%的滅菌后中藥粉，攪拌均勻后，繼續(xù)在于150-250rpm， 1:1通風(fēng)量，pH6.5-7.0，35-37 °C條件下培養(yǎng)8-12h，得到二級(jí)種子液，備用； 所述培養(yǎng)液中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖0.5-1.5%，豆餅粉0.5-2.0%，蛋白胨 0 · 5-2 · 5%，硫酸銨0 · 25-1 · 5%，磷酸氫二鈉 0 · 05-0 · 20%，磷酸二氫鈉0 · 05-0 · 20%，硫酸鎂 0 · 05-0 · 5%，氯化鈣0 · 01 -0 · 10%，余量為水； 步驟五、按質(zhì)量比為5:2:1的比例取陳皮、魚(yú)腥草和山楂，置于超微粉碎機(jī)中進(jìn)行超微 粉碎，過(guò)60-80目篩，將所得中藥粉進(jìn)行高溫濕熱滅菌，冷卻至室溫，得到滅菌后中藥粉B，備 用； 步驟六、將培養(yǎng)的二級(jí)種子液接種于裝有30-35L液體發(fā)酵培養(yǎng)基的50L發(fā)酵罐中，接種 量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5-15%;接種結(jié)束后按1:0.6-0.75通風(fēng)量，150-220rpm，pH6.5-7.0， 35-37 °C培養(yǎng)20-25h，得到發(fā)酵液;在發(fā)酵液中添加其質(zhì)量2%的滅菌后中藥粉B，在1:0.6- 0.75通風(fēng)量，150-220rpm，pH6.5-7.0，35-37°C繼續(xù)發(fā)酵10_15h得到最終發(fā)酵液，備用； 所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各成分的質(zhì)量百分比含量為:葡萄糖1.0-3.0%，淀粉0.5-2.0%， 豆餅粉0.5-2.0%，蛋白胨0.2-2%，硫酸銨0.25-1.5%;碳酸鈣0.01-0.05%，磷酸氫二鉀0.0ΙΟ. 05% ， 磷酸錳0.01 -0.05% ， 氯化鈣0.01 -0.05% ， 余量為水； 步驟七、將所得最終發(fā)酵液用栗輸送至兩效真空濃縮設(shè)備中，一效溫度75-80°C，真空 度0.05-0.0551〇^，二效50-55°(：，真空度0.058-0.0651〇^，濃縮比為3-4:1，濃縮結(jié)束后按 10-20%比例加入淀粉混合均勻，用栗將物料輸送至噴霧干燥塔頂部，由離心式霧化器在 15000-18000rpm下進(jìn)行霧化，用進(jìn)口溫度為140-155 °C的熱空氣進(jìn)行并流干燥，干燥物料經(jīng) 旋風(fēng)分離器引出后從接料桶中回收，即制備出枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑。2. 如權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌中藥飼料添加劑所的制備方法所制備的枯草芽孢桿 菌中藥飼料添加劑，其特征在于:含水量小于6%，活菌數(shù)為10000-18000億/g。
【文檔編號(hào)】A23K10/18GK105941835SQ201610500906
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年6月30日
【發(fā)明人】岳占州, 王新昌, 安建軍, 楊雪蓮, 岳朝鵬, 張亞飛
【申請(qǐng)人】河南省岳氏精忠科技有限公司