一種防治魚病的飼料添加劑及其制備、使用方法
【專利摘要】本發(fā)明的目的是提供一種防治魚病的飼料添加劑及其制備、使用方法。該防治魚病的飼料添加劑是基于有效的防治魚疾病作用效果，以茶莖和/或茶梗作為原料，粉碎成粉末或制備提取物而制成。本發(fā)明利用冬季修剪茶樹獲得的茶莖、茶梗等為質(zhì)量穩(wěn)定、易獲得的原料來制備防治魚病的飼料添加劑，利用了茶莖、茶梗富含茶多酚等抗菌、抗病毒、防霉和抗氧化活性成分，且咖啡因等生物堿含量明顯減少而不具備中樞興奮作用等特點(diǎn)，避免了抗生素藥物的使用，具有成本低、無藥物殘留、無耐藥性、無毒副作用等優(yōu)點(diǎn)，制備時(shí)工藝簡單、耗能低、無污染，非常容易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，為茶農(nóng)的茶園廢料提供了新的用途，具有很好的經(jīng)濟(jì)和社會效益。
【專利說明】
一種防治魚病的飼料添加劑及其制備、使用方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種防治魚病的飼料添加劑及其制 備、使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，隨著人民生活水平的提高，魚的消費(fèi)量也逐年增加，進(jìn)而帶動了國內(nèi)水產(chǎn) 集約化程度的不斷發(fā)展。然而在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，由于水質(zhì)的富營養(yǎng)化、高密度飼養(yǎng)及多種病原 菌引起的水產(chǎn)動物疾病日益嚴(yán)重，危害水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。引起魚類細(xì)菌性疾病的有嗜水氣單胞 菌，弧菌，愛德華氏菌及腸球菌等，引起魚類病毒感染的有口白癥病毒等。
[0003] 目前對魚病的防治主要采用抗生素藥物。由于長期使用或?yàn)E用抗生素，其負(fù)面效 應(yīng)也日益顯露，不僅影響生產(chǎn)，同時(shí)引起細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性和抗生素殘留等問題，造成環(huán)境污 染，人們長期食用有抗生素殘留的制品，容易引起過敏反應(yīng)、毒性反應(yīng)等，危害人們的健康。 盡管疫苗具有一定的作用，但預(yù)防單一，且效果并不穩(wěn)定，難以對應(yīng)病毒的快速變異。因此， 一種安全、高效、無殘留、無耐藥、抗菌、抗病毒及抗感染作用的防治水產(chǎn)養(yǎng)殖動物疾病的新 對策，無論是對于養(yǎng)殖業(yè)自身的可持續(xù)發(fā)展，還是對消費(fèi)者的健康，都是至關(guān)重要，且具有 著巨大的市場空間。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提出一種具有抗菌、抗病毒和抗感染作用的防治魚病的飼料添加 劑及其制備、使用方法，以促進(jìn)集約化魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。
[0005] 在本發(fā)明中，所述的魚病是寄生蟲癥、細(xì)菌及病毒感染癥，本發(fā)明的應(yīng)用對象為 鮭魚類、飩魚類、鯛魚、螄魚類、鱗魚類及鯉魚類等，當(dāng)然本發(fā)明也適用于奸和其他水產(chǎn)養(yǎng)殖 過程中的疾病防治。
[0006] 本發(fā)明的防治魚病的飼料添加劑以茶莖和/或茶梗作為原料，粉碎成粉末或制備 提取物而制成。
[0007] 在本發(fā)明中，上述粉末的粒徑小于0.85 mm，以便于魚消化吸收，并減少對魚消化 系統(tǒng)的損害。
[0008] 進(jìn)一步地，為降低成本，所述茶莖、茶梗是在冬季修剪茶樹時(shí)獲得的。目前冬季修 剪茶樹時(shí)，所修剪下來的茶莖、茶梗均當(dāng)做廢物處理，將其用于防治魚病的飼料添加劑，屬 于廢物利用，成本接近于零，大大提高了市場競爭力。
[0009] 本發(fā)明的防治魚病的飼料添加劑的機(jī)理如下： 近年來，隨著機(jī)械化采茶和制茶的廣泛普及，使得茶葉的采集和生產(chǎn)過程中產(chǎn)生大量 茶莖、茶梗等茶葉廢棄物。至今為止的研究證明，茶莖、茶梗等富含茶多酚類化合物，其中表 兒茶素(EC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)、表沒食子兒茶素(EGC)和表沒食子兒茶素沒食子 酸酯(EGCG)占兒茶素總量的70%左右，具有顯著的抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化及抗突變等多 種生物活性。此外，茶葉中的咖啡因等嘌呤類生物堿雖然具有促進(jìn)消化等作用，但由于該類 化合物具有較強(qiáng)的中樞神經(jīng)興奮作用而不適合用于飼料添加劑。與茶葉相比茶梗和茶莖中 的咖啡因等生物堿含有少，而富含茶多酚和纖維，因此有益于制備用于防治魚病的飼料添 加劑。
[0010] 下面為茶莖、茶梗及茶樹葉提取物的制備與成分分析： 茶莖、茶梗及芽茶由貴州宏鑫茶業(yè)開發(fā)有限公司提供。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取干燥茶莖、茶梗及 芽茶各500g，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后回收細(xì)粉，加入10倍量的水溶液，加熱提取30分鐘，提取液經(jīng) 紗布過濾后，濾餅再用相同條件提取1次，紗布過濾，合并兩次濾液。濾液濃縮后，經(jīng)冷凍干 燥得提取物用于本研究。鑒于茶莖、茶梗及茶提取物是以飼料添加劑作為最終產(chǎn)品開發(fā)，故 從安全性角度考慮提取溶劑盡量選擇水、乙醇或含水乙醇為宜。提取時(shí)茶莖、茶梗及茶與溶 劑的比率沒有特定限制，但一般茶莖、茶梗及茶與溶劑的比例5:1~50范圍為宜。本發(fā)明對 提取溫度沒有特定限制，從室溫到溶劑沸點(diǎn)范圍都可適用。當(dāng)然室溫、常壓及在溶劑沸點(diǎn)范 圍內(nèi)提取最為理想。提取方法可以采用加熱提取、超聲提取、微波提取等，也可多種方法結(jié) 合起來應(yīng)用。提取時(shí)間從30分鐘到24小時(shí)范圍均可以。 本實(shí)驗(yàn)采用的分析方法為高效液相色譜法。DIONEX液相分析儀為Ultimate 3000型，電 子天平為Sartorius BP21ID十萬分之一型，恒溫干燥箱為德國Memmert型，超純水儀為 Merck miIlipore公司，小型粉碎機(jī)為杭州熊火科技有限公司，乙腈為Fisher(色譜純），甲 酸為廣州化學(xué)試劑廠（分析純）。對照品咖啡因（Caffeine，Caff)，可可堿(Theobromine， Tb)，沒食子兒茶素沒食子酸酯（（-)-Gall〇CateChin gallate，GCG)，表沒食子兒茶素沒食 子酸酯（（-)-Epigallocatechingallate，EGCG)購自日本和光純藥株式會社 ；沒食子酸 (Gallic acid，GA)，兒茶素（（+)_Catechin，C)購自美國Sigma公司；沒食子兒茶素（（-)-Gallocatechin，GC)，表沒食子兒茶素（Epigallocatechin，EGC)，表兒茶素 (Epicatechin，EC)購自日本栗田工業(yè)株式會社；表兒茶素沒食子酸酯（（-)-Epicatechin-3-gallate，ECG)購自上海晶純生化科技股份有限公司。
[0011] 色譜條件，色譜柱為C0SM0SIL 5C18-AR-II (4.6*250 mm，5 μπι，Nacalai tesque. Inc·，Japan)，流速為I ml / min，定量檢測波長為231 nm，柱溫為35 °C，進(jìn)樣量 為20 μL。流動相A: H20(含0.1%甲酸）；流動相B: CH3CN(含0.1%甲酸）。供試樣品經(jīng)蒸餾水溶 解后離心，經(jīng)0.45μπι水膜過濾后進(jìn)HPLC分析，樣品中各成分含量見表1。
一：未檢測出。
[0013] 表1為茶莖、茶梗及茶葉提取物中的兒茶素和咖啡因的含量，茶莖、茶梗提取物中 的咖啡因含量顯著低于茶葉提取物，能夠明顯減少對魚的中樞興奮作用，同時(shí)其富含的兒 茶素等多酚類抗菌、抗病毒活性成分，有利于飼料在飼料添加劑上的應(yīng)用。
[0014] 下面繼續(xù)測試及分析茶莖及茶梗提取物的抗病原菌作用： 實(shí)驗(yàn)使用兀101，了?3-30,001201，18101和41118301等五種最常見的魚類致病嗜水氣單 胞菌，LB培養(yǎng)基是由酵母膏5. 0 g/L，蛋白胨10. 0 g/L，氯化鈉10. 0 g/L，固體培養(yǎng) 基加2%的瓊脂制備而成。實(shí)驗(yàn)將菌株活化后用接種于固體培養(yǎng)基上37°C條件下培養(yǎng)24 小時(shí)后，接種到液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)15小時(shí)。采用麥?zhǔn)媳葷岱▽⒕河靡后w培養(yǎng)基稀釋 到106 CFU/mL濃度用于本實(shí)驗(yàn)?；钚栽u價(jià)采用瓊脂擴(kuò)散法，即將6 mm濾紙片經(jīng)滅菌后，分別 浸入50%乙醇配成0.5 g/mL濃度的茶莖及茶梗提取物，無菌條件下貼在涂有菌液的LB固 體培養(yǎng)基上，并用EGCG和50%乙醇為對照，37 °C條件下培養(yǎng)24小時(shí)后檢測抑菌圈直徑，每 種提取物5次重復(fù)。抑菌圈多20 mm為顯效；10-19 mm為有效；10 mm以下為無抑菌活性。實(shí) 驗(yàn)結(jié)果如表2所示，茶莖及茶梗提取物和微粉都具有顯著的抑菌活性。
[0015] 表2.茶莖及茶梗提取物對嗜水氣單胞菌的抑菌圈的測定結(jié)果(n=5/抑菌圈直徑
從表2中可以看出，茶莖、茶梗的提取物對五種最常見的魚類致病嗜水氣單胞菌均顯示 出較強(qiáng)的抑菌活性，因此可用由于上述病菌造成的魚病的防治。
[0016] 下面測試及分析茶莖/茶梗飼料添加劑對鯽魚生產(chǎn)性能的影響： 基礎(chǔ)飼料組成為，魚粉10%、豆柏20%、麩皮30%、米糠35%、酵母粉2%、礦物質(zhì)添加劑 1.5%、維生素添加劑1%及無機(jī)鹽0.5%。懸浮魚飼料制備為，以基礎(chǔ)飼料為載體，分別添加 5%的茶莖/茶梗提取物或微粉，在攪拌機(jī)內(nèi)充分混勻后制粒，以噴油用量控制在0.05%的蜂 蠟飽和脂肪酸經(jīng)噴流床對飼料噴涂色膜后熱風(fēng)干燥，用于本實(shí)驗(yàn)。飼料添加劑對魚生產(chǎn)性 能使用效果實(shí)驗(yàn)選用平均體重32克左右規(guī)格一致的鯽魚150尾，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析體重?zé)o顯著差 異，用3%食鹽水溶液消毒后，隨機(jī)分組，每組50尾，放入1.0m X 1.0m X 1.0m水槽中放養(yǎng)。 每天9:00和16:00投食，投食量為平均體重的5%，每兩天排污換水一次，溶解氧保存在5mg/L 以上。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間水溫保持25-26°C，實(shí)驗(yàn)持續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，魚體稱重和計(jì)算增重率。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示，茶莖/茶梗飼料添加劑能夠提高魚增重，降低飼料比分，促進(jìn)養(yǎng)殖效 益。
[0017]

下面測試及分析茶莖/茶梗詞料添加劑對鯽魚病原菌感染的保護(hù)作用： 將上述茶莖/茶梗飼料添加劑喂養(yǎng)8周鯽魚用于病原菌感染實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)將致病性嗜水氣 單胞菌TPS-30株活化后以無菌生理鹽水稀釋致濃度為2 X 108CUP/mL。按每100 g魚重腹腔 注射菌液1.0 mL后，放入1.0m X 1.0m X 1.0m水槽中放養(yǎng)。每天9:00和16:00投食，投食量 為平均體重的5%，每兩天排污換水一次，溶解氧保存在5mg/L以上。整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間水溫保持 25-26° C，每天觀察魚體死亡情況，觀察一周，統(tǒng)計(jì)死亡率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示，茶莖/茶梗 飼料添加劑喂養(yǎng)8周后提高了鯽魚對嗜水氣單胞菌的抗感染能力。顯著降低了死亡率，對嗜 水氣單胞菌感染有較強(qiáng)保護(hù)作用。
[0018] 表4.茶莖/茶梗飼料添加劑對鯽魚病原菌感染的保護(hù)作用
本發(fā)明中提到的茶莖、茶梗提取物的制備方法有以下兩種： 1、將原料粉碎成粉末并投入到溶劑中形成溶液，將溶液通過加熱提取、微波提取或者 超聲提取得到提取物;所述粉末與溶劑的重量比為5:1~50;所述溶劑為水或者乙醇或者含 水乙醇。
[0019] 2、將原料粉碎成粉末并投入到水中形成一次溶液，將一次溶液加熱預(yù)定時(shí)間后， 將一次溶液進(jìn)行過濾得到一次濾渣和一次濾液;將一次濾渣再次投入水中形成二次溶液， 將二次溶液加熱預(yù)定時(shí)間后，將二次溶液進(jìn)行過濾得到二次濾渣和二次濾液，將一次濾液、 二次濾液混合后，進(jìn)行濃縮、冷凍、干燥得到提取物。
[0020] 上述兩種提取物的制備方法均可將茶莖、茶梗中的有效成分析出。
[0021 ]上述防治魚病的飼料添加劑的使用方法如下：當(dāng)防治魚病的飼料添加劑為粉末狀 時(shí)，將防治魚病的飼料添加劑混合入飼料中并攪拌均勻，所述防治魚病的飼料添加劑與飼 料的重量比為1~5:1000;當(dāng)防治魚病的飼料添加劑為液態(tài)提取物時(shí)，先將防治魚病的飼料 添加劑稀釋到體積倍數(shù)的40倍后，再灑入飼料中并攪拌均勻，所述防治魚病的飼料添加劑 與飼料的重量比為0.5~2:1000。
[0022] 本發(fā)明利用冬季修剪茶樹獲得的茶莖、茶梗等為質(zhì)量穩(wěn)定、易獲得的原料來制備 防治魚病的飼料添加劑，利用了茶莖、茶梗富含茶多酚等抗菌抗病毒活性成分，且咖啡因等 生物堿含量明顯減少的特點(diǎn)，避免了抗生素藥物的使用，具有成本低、無藥物殘留、無耐藥 性、無毒副作用的優(yōu)點(diǎn)，制備時(shí)工藝簡單、耗能低、無污染，非常容易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，為茶農(nóng)的 茶園廢料提供了新的用途，具有很好的經(jīng)濟(jì)和社會效益。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面通過對實(shí)施實(shí)例的描述，對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】如所涉及的各構(gòu)件的形 狀、構(gòu)造、各部分之間的相互位置及連接關(guān)系、各部分的作用及工作原理等作進(jìn)一步的詳細(xì) 說明。
[0024] 實(shí)施例1: 本實(shí)施例的防治魚病的飼料添加劑以在冬季修剪茶樹時(shí)獲得的茶莖和茶梗作為原料， 經(jīng)過粉碎成粉末而制成，粉末的粒徑小于0.85mm(20目），以便于牲畜消化吸收，并減少對牲 畜消化系統(tǒng)的損害。
[0025] 在使用時(shí)，將粉末狀的防治魚病的飼料添加劑混合入飼料中并攪拌均勻，所述防 治魚病的飼料添加劑與飼料的重量比為1~5:1000W/W。
[0026] 實(shí)施例2: 本實(shí)施例的防治魚病的飼料添加劑以在冬季修剪茶樹時(shí)獲得的茶莖和茶梗作為原料， 制備提取物而制成，具體的制備方法有以下兩種： 1、將原料粉碎成粉末并投入到溶劑中形成溶液，將溶液通過加熱提取、微波提取或者 超聲提取得到提取物;所述粉末與溶劑的重量比為5:1~50;所述溶劑為水或者乙醇或者含 水乙醇。本專利實(shí)施具體例為，將原料粉碎成粗粉，取IOkg茶莖和茶梗的粗粉，置提取罐中， 加10倍量水回流提取，保持沸騰2小時(shí)，過濾，濾渣再加入10倍量水回流提取，保持沸騰1小 時(shí)，過濾，合并兩次濾液。濾液置濃縮罐中60°C減壓濃縮至相對密度為1.2左右的流浸膏，流 浸膏取出裝入托盤，保持I cm左右厚度，置烘箱中60 °C減壓干燥，制成提取物2.28kg。
[0027] 2、將原料粉碎成粉末并投入到水或含水乙醇溶液中形成一次溶液，將一次溶液加 熱預(yù)定時(shí)間后，將一次溶液進(jìn)行過濾得到一次濾渣和一次濾液;將一次濾渣再次投入水或 含水乙醇溶液中形成二次溶液，將二次溶液加熱預(yù)定時(shí)間后，將二次溶液進(jìn)行過濾得到二 次濾渣和二次濾液，將一次濾液、二次濾液混合后，進(jìn)行濃縮、干燥得到提取物。本實(shí)施具體 例為，防治魚病的飼料添加劑以在冬季修剪茶樹時(shí)獲得的茶莖和茶梗作為原料，將原料粉 碎成粗粉，取IOkg茶莖和茶梗的粗粉，置提取罐中，加10倍量50%乙醇回流提取，保持沸騰2 小時(shí)，過濾，濾渣再加入10倍量50%乙醇回流提取，保持沸騰1小時(shí)，過濾，合并兩次濾液。濾 液置濃縮罐中60°C減壓濃縮至相對密度為1.0左右的流浸膏，流浸膏直接噴霧干燥，制成提 取物 2.13kg。
[0028] 在使用時(shí)，先將防治魚病的飼料添加劑稀釋到體積倍數(shù)的40倍后，再灑入飼料中 并攪拌均勻，所述防治魚病的飼料添加劑與飼料的重量比為0.5~2:1000 W/W。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種防治魚病的飼料添加劑，其特征在于以茶莖和/或茶梗作為原料，粉碎成粉末或 制備提取物而制成。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治魚病的飼料添加劑，其特征在于所述粉末的粒徑小于 0.85 mm〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治魚病的飼料添加劑，其特征在于所述茶莖、茶梗是在冬季 修剪茶樹時(shí)獲得的。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治魚病的飼料添加劑的制備方法，其特征在于所述提取物 的制備過程如下:將原料粉碎成粉末并投入到溶劑中形成溶液，將溶液通過加熱提取、微波 提取或者超聲提取得到提取物;所述粉末與溶劑的重量比為5:1~50;所述溶劑為水或者乙 醇或者含水乙醇。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治魚病的飼料添加劑的制備方法，其特征在于所述提取物 的制備過程如下：將原料粉碎成粉末并投入到水中形成一次溶液，將一次溶液加熱預(yù)定時(shí) 間后，將一次溶液進(jìn)行過濾得到一次濾渣和一次濾液;將一次濾渣再次投入水中形成二次 溶液，將二次溶液加熱預(yù)定時(shí)間后，將二次溶液進(jìn)行過濾得到二次濾渣和二次濾液，將一次 濾液、二次濾液混合后，進(jìn)行濃縮、冷凍、干燥得到提取物。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治魚病的飼料添加劑的使用方法，其特征在于當(dāng)防治魚病 的飼料添加劑為粉末狀時(shí)，將防治魚病的飼料添加劑混合入飼料中并攪拌均勻，所述防治 魚病的飼料添加劑與飼料的重量比為1~5:1000;當(dāng)防治魚病的飼料添加劑為液態(tài)提取物 時(shí)，先將防治魚病的飼料添加劑稀釋到體積倍數(shù)的40倍后，再灑入飼料中并攪拌均勻，所述 防治魚病的飼料添加劑與飼料的重量比為0.5~2:1000。
【文檔編號】A23K40/00GK105961912SQ201610304192
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月10日
【發(fā)明人】李怡芳, 栗原博, 何蓉蓉, 梁其佳, 沈永強(qiáng)
【申請人】信宜市金方子生物科技有限公司