一種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)棕櫚仁粕蛋白飼料的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)棕櫚仁粕蛋白飼料的方法，該方法棕櫚仁粕為原料，該方法采用微生物混合菌種經(jīng)過固態(tài)發(fā)酵來降解棕櫚仁粕，最終得到棕櫚仁粕蛋白飼料；所述的微生物混合菌種為芽孢桿菌、產(chǎn)元假絲酵母菌和黑曲霉菌的混合菌種。本發(fā)明采用多菌種混合培養(yǎng)，把霉菌和酵母菌對培養(yǎng)基進行混合培養(yǎng)，霉菌可利分解纖維素和淀粉，而酵母菌主要利用糖源，利用菌種的協(xié)同作用提高對底物的利用效率，提高產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量和營養(yǎng)功能?；炀囵B(yǎng)可多達4～5種，可擴大對原料底物的適應(yīng)性和防雜菌的能力。
【專利說明】
一種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)棕櫚仁粕蛋白飼料的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于飼料制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及棕櫚仁柏蛋白飼料，具體涉及一種固態(tài)發(fā)酵 生產(chǎn)棕櫚仁柏蛋白飼料的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 棕櫚仁柏是棕櫚籽經(jīng)榨油后的廢渣經(jīng)分析，棕櫚仁柏中還含有豐富的營養(yǎng)成分， 其形狀、顏色與菜子柏相似，略有巧克力氣味。棕櫚仁柏視其脫殼程度和加工工藝的不同， 品質(zhì)相差很大。其纖維含量高，粗蛋白含量低，賴氨酸、蛋氨酸以色氨酸均缺乏。
[0003] 表1棕櫚仁柏的主要組成成分
[0004]
[0005]棕櫚仁柏價格低廉，無霉性和副作用，因其粗脂肪含量較高，在具體使用中可將其 歸為能量飼料，可按一定的比例替代部分玉米或麩皮，特別適用于反芻動物如牛、羊、馬、鹿 等的飼料。使用棕櫚仁柏替代部分玉米或豆柏等飼料，最直接的表現(xiàn)是:飼料成本大幅降 低，但飼養(yǎng)效果不變，從而使飼料企業(yè)、畜牧企業(yè)的經(jīng)濟效益顯著提高，在同行中的競爭力 大大增強。
[0006] 雖然棕櫚仁柏已經(jīng)在規(guī)模化運作的歐洲、韓國等地區(qū)廣為使用，但由于原產(chǎn)國用 戶對棕櫚仁柏發(fā)酵產(chǎn)品相對還不熟悉，目前還較少使用，這也說明棕櫚仁柏在馬國具有很 大的商業(yè)開發(fā)價值。
[0007] 影響棕櫚仁柏作為飼料使用的原因不僅僅在于其粗纖維含量較高，更主要的是因 為棕櫚仁柏中含有大量的木質(zhì)素和抗營養(yǎng)因子~甘露聚糖。資~甘露聚糖包括甘露聚 糖、半乳甘露聚糖、葡甘聚糖等。如何采用有效的方法來降解甘露聚糖并使之轉(zhuǎn)為可為動物 利用的營養(yǎng)物質(zhì)，已成為飼料行業(yè)一個亟待解決的問題。
[0008] 目前，主要通過物理、化學和生物學途徑來鈍化和滅活飼料中的抗營養(yǎng)因子，這些 方法都能在一定程度上降低木質(zhì)素等抗營養(yǎng)因子的含量。相比物理和化學法，采用生物技 術(shù)方法處理原料中的抗營養(yǎng)因子已越來越受到人們的重視，不僅使用效果好，而且成本低， 已經(jīng)成為該領(lǐng)域的研究重點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 基于現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提出了一種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)棕櫚仁柏蛋白飼料 的方法，解決棕櫚仁柏作為飼料使用含有大量的抗營養(yǎng)因子的問題，以及木質(zhì)素含量高 (14.6%)的問題，提高棕櫚仁柏作為飼料的營養(yǎng)價值，不產(chǎn)生大量廢棄物的利用微生物固 態(tài)發(fā)酵處理棕櫚仁柏的方法，適用于規(guī)?；a(chǎn)。
[0010]為了解決上述技術(shù)問題，本申請采用如下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：
[0011] -種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)棕櫚仁柏蛋白飼料的方法，該方法棕櫚仁柏為原料，該方法采 用微生物混合菌種經(jīng)過固態(tài)發(fā)酵來降解棕櫚仁柏，最終得到棕櫚仁柏蛋白飼料；
[0012] 所述的微生物混合菌種為芽孢桿菌、產(chǎn)元假絲酵母菌和黑曲霉菌的混合菌種。
[0013] 本發(fā)明還具有如下區(qū)別技術(shù)特征：
[0014] 該方法采用微生物混合菌種經(jīng)過固態(tài)發(fā)酵來降解棕櫚仁柏中的木質(zhì)素和抗營養(yǎng) 因子。所述的抗營養(yǎng)因子為甘露聚糖。所述的甘露聚糖包括甘露聚糖、半乳甘露聚糖 和葡甘聚糖。
[0015] 如上所述的方法，該方法具體包括以下步驟：
[0016] 步驟一，種子液制備：
[0017] 將芽孢桿菌、產(chǎn)元假絲酵母菌和黑曲霉菌分別進行一級種子培養(yǎng)和二級種子擴 培，一級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為30~40°C，培養(yǎng)時間為24h，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，二級種 子擴培的培養(yǎng)溫度為25~37°C，培養(yǎng)時間均為24~72h，轉(zhuǎn)速均為150~170r/min，分別制備 成芽孢桿菌種子液、酵母菌種子液和黑曲霉種子液；
[0018] 步驟二，物料混合：
[0019] 向粉碎的棕櫚仁柏中加入水后于121°C滅菌15min，然后接入芽孢桿菌種子液、酵 母菌種子液和黑曲霉種子液，芽孢桿菌種子液、酵母菌種子液和黑曲霉種子液的各自的接 入量為棕櫚仁柏質(zhì)量的5~20%，充分混合均勻，得到混合物料，混合物料中的水分控制在 30wt.~60wt. %，所述的芽孢桿菌種子液、酵母菌種子液和黑曲霉種子液的質(zhì)量比為1:1: 0.5；
[0020]步驟三，固態(tài)發(fā)酵：
[0021] 將混合物料置于30~40 °C的溫度下進行發(fā)酵，pH控制在5~7,保溫1天后，加入占 混合物料總量〇. 5wt. %的尿素及占混合物料總量0.03wt. %的有機硒發(fā)酵10~12天，得到 發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵產(chǎn)物干燥或濕法存儲，即得棕櫚仁柏蛋白飼料。
[0022] 步驟一中，芽孢桿菌種子液的制備過程為：
[0023] 步驟1.1，一級種子培養(yǎng):從芽孢桿菌的斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)菌體到裝有10ml種 子培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為170r/min，30~40 °C培養(yǎng)24小時；
[0024] 步驟1.2,二級種子擴培：吸取5ml-級種子培養(yǎng)液到裝有100ml種子培養(yǎng)基的 500ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，37°C培養(yǎng)24小 時，備用。
[0025]所述的芽孢桿菌的斜面培養(yǎng)基為：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，氯化鈉5g/L，瓊脂 20g/L，pH值7.0~7.2，121°C滅菌20min;所述的芽孢桿菌的種子培養(yǎng)基為：牛肉膏3g/L，蛋 白胨 10g/L，氯化鈉 5g/L，pH值7 · 0~7 · 2，121°C 滅菌 20min。
[0026] 步驟一中，酵母菌種子液的制備過程為：
[0027] 步驟2.1，一級種子培養(yǎng):從酵母菌的斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)菌體到裝有10ml種子 培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150r/min，30~40°C 培養(yǎng)24小時；
[0028] 步驟2.2，二級種子擴培：吸取5ml-級種子培養(yǎng)液到裝有100ml種子培養(yǎng)基的 500ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，25~35°C培養(yǎng) 24小時，備用。
[0029]所述的酵母菌的斜面培養(yǎng)基為：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，瓊脂 20g/L，121°C滅菌15min:所述的酵母菌的種子培養(yǎng)基為:葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母 骨 5g/L，121 °C 滅菌15min。
[0030] 步驟一中，黑曲霉種子液的制備過程為：
[0031] 步驟3.1，一級種子培養(yǎng):從保藏的斜面黑曲霉的菌種挑取一環(huán)菌體到裝有10ml種 子培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150r/min，30~40 °C培養(yǎng)24小時；
[0032] 步驟3.2,二級種子擴培：吸取5ml-級種子培養(yǎng)液到裝有100ml種子培養(yǎng)基的 500ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，30°C培養(yǎng)72小 時，備用。
[0033]所述的黑曲霉菌的斜面培養(yǎng)基為：麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基，0.56kg/cm2，121°C滅菌 30min，或察氏瓊脂培養(yǎng)基，0.56kg/cm2，116°C高壓滅菌20min;所述的黑曲霉菌的種子培養(yǎng) 基為:麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基，〇. 56kg/cm2，121°C滅菌30min，或察氏瓊脂培養(yǎng)基，0.56kg/cm2， 116°C高壓滅菌20min。
[0034] 所述的黑曲霉菌為黑曲霉菌ASP-1。
[0035] 步驟二中，所述的棕櫚仁柏需要經(jīng)過篩選核皮再粉碎至大小為3~4mm，以提高與 菌種的接觸面積，使發(fā)酵過程更加徹底，將原料與菌種混合。
[0036] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益的技術(shù)效果是：
[0037] (I)本發(fā)明采用多菌種混合培養(yǎng)，把霉菌和酵母菌對培養(yǎng)基進行混合培養(yǎng)，霉菌可 利分解纖維素和淀粉，而酵母菌主要利用糖源，利用菌種的協(xié)同作用提高對底物的利用效 率，提高產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量和營養(yǎng)功能。混菌培養(yǎng)可多達4~5種，可擴大對原料底物的適應(yīng) 性和防雜菌的能力。本發(fā)明采用產(chǎn)元假絲酵母、芽孢桿菌和黑曲霉進行混合培養(yǎng)，制備種子 液時，各菌種單獨培養(yǎng)，通過三角瓶液態(tài)菌種培養(yǎng)，將生產(chǎn)所需的菌種制備好，用于一次及 二次發(fā)酵使用。
[0038] (Π )添加混菌制劑一方面可以使飼料中的抗營養(yǎng)因子失活，另一方面可以降解多 種需要降解的底物(抗營養(yǎng)因子或營養(yǎng)成分），將飼料中營養(yǎng)物質(zhì)降解為小分子多肽，有利 于動物機體吸收，能最大限度地提高飼料的營養(yǎng)價值;通過微生物(細菌和真菌)進行發(fā)酵， 從而產(chǎn)生降解酶能使抗營養(yǎng)因子鈍化或降低。
[0039] (ΙΠ )固體發(fā)酵法利用工業(yè)廢棄物生產(chǎn)菌體蛋白飼料是投資少，耗能低，見效快，操 作簡便的生物轉(zhuǎn)換技術(shù)。棕櫚仁柏經(jīng)固體二次發(fā)酵后生產(chǎn)的產(chǎn)品相對原料蛋白質(zhì)含量大大 提高，且產(chǎn)品具有特殊的香味，提高了其營養(yǎng)價值，是一種優(yōu)良的飼料，具有較高的經(jīng)濟效 益和社會效益。
[0040] (IV)本發(fā)明解決棕櫚仁柏中含有大量的木質(zhì)素及抗營養(yǎng)因子，影響棕櫚仁柏作為 飼料使用的問題，使用棕櫚仁柏替代部分玉米或豆柏等飼料，降低飼料成本。緩解飼料工業(yè) 對豆柏、魚粉等飼料原料的依賴性，開辟了新的蛋白飼料資源，緩解對傳統(tǒng)飼料原料短缺的 擔憂問題的有效途徑，同時產(chǎn)生較大的經(jīng)濟效益。
[0041] (V)本發(fā)明采用固態(tài)發(fā)酵能簡化生產(chǎn)工藝，免去液體發(fā)酵需要脫水、收集和干燥 的麻煩程序，有產(chǎn)量高，過程簡易，投資低，能耗少等優(yōu)點，對營養(yǎng)物質(zhì)的損失較少，前景十 分廣闊。本發(fā)明生產(chǎn)過程中不產(chǎn)生大量廢棄物，不污染環(huán)境。
【附圖說明】
[0042] 圖1是本發(fā)明的混菌發(fā)酵工藝流程示意圖。
[0043] 以下結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明的具體內(nèi)容作進一步詳細地說明。
【具體實施方式】
[0044] 本發(fā)明是利用棕櫚仁柏為固態(tài)碳源，選用黑曲霉、產(chǎn)元假絲酵母和白地霉作為發(fā) 酵菌種，黑曲霉具有多種活性較強的酶系，如Cx酶、淀粉酶、酸性蛋白酶等。黑曲霉在以棕櫚 仁柏為基礎(chǔ)碳源的培養(yǎng)基上生長時，產(chǎn)生的纖維素酶和果膠酶可將基料中的大分子化合 物，如纖維素、果膠等，降解轉(zhuǎn)化為動物易消化利用的養(yǎng)分，而黑曲霉、產(chǎn)元假絲酵母菌可以 利用這些低分子糖為碳源產(chǎn)生大量菌體蛋白，從而提高發(fā)酵基料中蛋白質(zhì)的含量。黑曲霉 在分解纖維素、果膠的過程中，會受到其分解產(chǎn)物的阻遏或抑制作用，若加入酵母進行混菌 發(fā)酵，酵母就可利用上述分解產(chǎn)物合成菌體蛋白，這就起到了解除阻遏或抑制的作用，而且 使纖維素和果膠的分解總量增加。此外，混菌發(fā)酵還可以延遲霉菌生孢子的時間，這也提高 了蛋白質(zhì)的含量。從試驗的結(jié)果可見，棕櫚仁柏經(jīng)混菌共生發(fā)酵后蛋白質(zhì)含量達到34%以 上，粗纖維含量降低8.12 %。棕櫚仁柏經(jīng)混菌共生發(fā)酵后，蛋白質(zhì)含量比玉米、小麥高許多， 而且混菌發(fā)酵后，棕櫚仁柏中粗纖維的含量大大降低，用作飼料非常有利于動物的消化吸 收。
[0045] 遵從上述技術(shù)方案，以下給出本發(fā)明的具體實施例，需要說明的是本發(fā)明并不局 限于以下具體實施例，凡在本申請技術(shù)方案基礎(chǔ)上做的等同變換均落入本發(fā)明的保護范 圍。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明。
[0046] 實施例1:
[0047]本實施例給出一種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)棕櫚仁柏蛋白飼料的方法，如圖1所示，該方法具 體包括以下步驟：
[0048] 步驟一，種子液制備：
[0049] 將芽孢桿菌、產(chǎn)元假絲酵母菌和黑曲霉菌分別進行一級種子培養(yǎng)和二級種子擴 培，一級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為30~40°C，培養(yǎng)時間為24h，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，二級種 子擴培的培養(yǎng)溫度為25~37°C，培養(yǎng)時間均為24~72h，轉(zhuǎn)速均為150~170r/min，分別制備 成芽孢桿菌種子液、酵母菌種子液和黑曲霉種子液；
[0050] 所述的黑曲霉菌為黑曲霉菌ASP-1。
[0051 ]步驟一中，芽孢桿菌種子液的制備過程為：
[0052]步驟1.1，一級種子培養(yǎng):從芽孢桿菌的斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)菌體到裝有10ml種 子培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為170r/min，30~40 °C培養(yǎng)24小時;所述的芽孢桿菌的斜面培養(yǎng)基為：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，氯化鈉5g/L， 瓊脂20g/L，pH值7.0~7.2，121°C滅菌20min;所述的芽孢桿菌的種子培養(yǎng)基為：牛肉膏3g/ L，蛋白胨 10g/L，氯化鈉 5g/L，pH值7.0~7.2，121°C 滅菌 20min。
[0053] 步驟1.2,二級種子擴培：吸取5ml-級種子培養(yǎng)液到裝有100ml種子培養(yǎng)基的 500ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，37°C培養(yǎng)24小 時，備用。
[0054]步驟一中，酵母菌種子液的制備過程為：
[0055] 步驟2.1，一級種子培養(yǎng):從酵母菌的斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)菌體到裝有10ml種子 培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150r/min，30~40°C 培養(yǎng)24小時;所述的酵母菌的斜面培養(yǎng)基為:葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，瓊脂 20g/L，121°C滅菌15min;所述的酵母菌的種子培養(yǎng)基為:葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母 骨 5g/L，121 °C 滅菌15min。
[0056] 步驟2.2，二級種子擴培：吸取5ml-級種子培養(yǎng)液到裝有100ml種子培養(yǎng)基的 500ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，25~35°C培養(yǎng) 24小時，備用。
[0057]步驟一中，黑曲霉種子液的制備過程為：
[0058]步驟3.1，一級種子培養(yǎng):從保藏的斜面黑曲霉的菌種挑取一環(huán)菌體到裝有10ml種 子培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150r/min，30~40 °C培養(yǎng)24小時;所述的黑曲霉菌的斜面培養(yǎng)基為:麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基，0.56kg/cm2，121°C滅 菌30min，或察氏瓊脂培養(yǎng)基，0.56kg/cm 2，116°C高壓滅菌20min;所述的黑曲霉菌的種子培 養(yǎng)基為:麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基，〇. 56kg/cm2，121°C滅菌30min，或察氏瓊脂培養(yǎng)基，0.56kg/cm2， 116°C高壓滅菌20min。
[0059] 步驟3.2,二級種子擴培：吸取5ml-級種子培養(yǎng)液到裝有100ml種子培養(yǎng)基的 500ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，30°C培養(yǎng)72小 時，備用。
[0060] 步驟二，物料混合：
[0061] 原料采用棕櫚仁柏，先將棕櫚仁柏粉碎，棕櫚仁柏需要經(jīng)過篩選核皮再粉碎至大 小為3~4mm，以提高與菌種的接觸面積，使發(fā)酵過程更加徹底，將原料與菌種混合。準備棕 櫚仁柏原料300g，向粉碎的棕櫚仁柏中加入90mL水后攪拌均勻，并于121°C滅菌15min，然后 分別接入芽孢桿菌二級種子培養(yǎng)液30g和產(chǎn)元假絲酵母菌二級種子培養(yǎng)液30g，黑曲霉二級 種子液15g充分混合均勾，制成混合物料，混合物料中的水分控制在30wt.~60wt. %。
[0062]步驟三，固態(tài)發(fā)酵：
[0063]將混合物料物料置于30 °C的溫度下進行發(fā)酵，pH控制在7，保溫1天后，加入占混合 物料總量0.5wt. %的尿素及占混合物料總量0.03wt. %的有機硒發(fā)酵12天，得到發(fā)酵產(chǎn)物， 發(fā)酵產(chǎn)物干燥或濕法存儲，即得棕櫚仁柏蛋白飼料。
[0064] 實施例2:
[0065] 本實施例給出一種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)棕櫚仁柏蛋白飼料的方法，如圖1所示，該方法具 體包括以下步驟：
[0066] 步驟一，種子液制備:與實施例1相同。
[0067] 步驟二，物料混合：
[0068]原料采用棕櫚仁柏，先將棕櫚仁柏粉碎，棕櫚仁柏需要經(jīng)過篩選核皮再粉碎至大 小為3~4mm，以提高與菌種的接觸面積，使發(fā)酵過程更加徹底，將原料與菌種混合。準備棕 櫚仁柏原料l〇〇kg，向粉碎的棕櫚仁柏中加入30L水后攪拌均勻，并于121°C滅菌15min，然后 分別接入芽孢桿菌二級種子培養(yǎng)液l〇kg和產(chǎn)元假絲酵母菌二級種子培養(yǎng)液10kg，黑曲霉二 級種子液5kg充分混合均勾，制成混合物料，混合物料中的水分控制在30wt.~60wt. %。 [0069]步驟三，固態(tài)發(fā)酵：
[0070]將混合物料置于40 °C的溫度下進行發(fā)酵，pH控制在5，保溫1天后，加入占混合物料 總量0.5wt. %的尿素及占混合物料總量0.03wt. %的有機硒發(fā)酵10天，得到發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵 產(chǎn)物干燥或濕法存儲，即得棕櫚仁柏蛋白飼料。
[0071] 實施例3:
[0072] 本實施例給出一種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)棕櫚仁柏蛋白飼料的方法，如圖1所示，該方法具 體包括以下步驟：
[0073]步驟一，種子液制備:與實施例1相同。
[0074] 步驟二，物料混合：
[0075]原料采用棕櫚仁柏，先將棕櫚仁柏粉碎，棕櫚仁柏需要經(jīng)過篩選核皮再粉碎至大 小為3~4mm，以提高與菌種的接觸面積，使發(fā)酵過程更加徹底，將原料與菌種混合。準備棕 櫚仁柏原料100kg，向粉碎的棕櫚仁柏中加入10L水后攪拌均勻，并于121°C滅菌15min，然后 分別接入芽孢桿菌二級種子培養(yǎng)液20kg和產(chǎn)元假絲酵母菌二級種子培養(yǎng)液20kg，黑曲霉二 級種子液l〇kg充分混合均勾，制成混合物料，混合物料中的水分控制在30wt.~60wt. %。 [0076]步驟三，固態(tài)發(fā)酵：
[0077]將混合物料置于40 °C的溫度下進行發(fā)酵，pH控制在5，保溫1天后，加入占混合物料 總量0.5wt. %的尿素及占混合物料總量0.03wt. %的有機硒發(fā)酵12天，得到發(fā)酵產(chǎn)物，發(fā)酵 產(chǎn)物干燥或濕法存儲，即得棕櫚仁柏蛋白飼料。
[0078] 實施例1至3所制備的發(fā)酵棕櫚仁柏樣品中粗蛋白的含量，參見表2。
[0079] 表2棕櫚仁柏固體發(fā)酵前后成分對比
[0080]
[0081]本發(fā)明混菌發(fā)酵還可以延遲霉菌生孢子的時間，這也提高了蛋白質(zhì)的含量。如表2 所示，從試驗的結(jié)果可見，棕櫚仁柏經(jīng)混菌共生發(fā)酵后蛋白質(zhì)含量達到34.74%，粗纖維含 量降低到8.12%。棕櫚仁柏經(jīng)混菌共生發(fā)酵后，蛋白質(zhì)含量比玉米、小麥高許多，而且混菌 發(fā)酵后，棕櫚仁柏中粗纖維的含量大大降低，用作飼料非常有利于動物的消化吸收。
[0082] 本發(fā)明采用混菌發(fā)酵較單菌發(fā)酵效果好，其優(yōu)勢在于多個菌種之間可以互相補償 自身的缺陷，進行協(xié)同發(fā)酵。
[0083] 本發(fā)明采用固態(tài)發(fā)酵能簡化生產(chǎn)工藝，免去液體發(fā)酵需要脫水、收集和干燥的麻 煩程序，有產(chǎn)量高，過程簡易，投資低，能耗少等優(yōu)點，對營養(yǎng)物質(zhì)的損失較少，前景十分廣 闊。
[0084] 本發(fā)明由棕櫚仁柏生產(chǎn)菌體蛋白，用二次發(fā)酵法高效經(jīng)濟。在一般設(shè)備條件下就 可以進行生產(chǎn)，得到大量高純度的產(chǎn)品以供飼料工業(yè)的需求。所選的黑曲霉、產(chǎn)元假絲酵 母，芽孢桿菌生長繁殖快、無毒、蛋白含量高，發(fā)酵后收獲容易，可進行工業(yè)化大生產(chǎn)。該蛋 白除可作飼料外，亦可作為酶制劑的氮源。固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)的蛋白飼料全部被利用，后處理簡 單，成本低，無二次污染。
[0085] 本發(fā)明固體發(fā)酵法具有投資少、效益高、工藝較簡單、成本低，適合大規(guī)模生產(chǎn)等 優(yōu)點，為我國生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)蛋白飼料提供了一個新的途徑。
【主權(quán)項】
1. 一種固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)棕櫚仁柏蛋白飼料的方法，該方法棕櫚仁柏為原料，其特征在于： 該方法采用微生物混合菌種經(jīng)過固態(tài)發(fā)酵來降解棕櫚仁柏，最終得到棕櫚仁柏蛋白飼料； 所述的微生物混合菌種為芽孢桿菌、產(chǎn)元假絲酵母菌和黑曲霉菌的混合菌種。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:該方法具體包括以下步驟： 步驟一，種子液制備： 將芽孢桿菌、產(chǎn)元假絲酵母菌和黑曲霉菌分別進行一級種子培養(yǎng)和二級種子擴培，一 級種子培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為30~40°C，培養(yǎng)時間為24h，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，二級種子擴培 的培養(yǎng)溫度為25~37°C，培養(yǎng)時間均為24~72h，轉(zhuǎn)速均為150~170r/min，分別制備成芽孢 桿菌種子液、酵母菌種子液和黑曲霉種子液； 步驟二，物料混合： 向粉碎的棕櫚仁柏中加入水后于121°C滅菌15min，然后接入芽孢桿菌種子液、酵母菌 種子液和黑曲霉種子液，芽孢桿菌種子液、酵母菌種子液和黑曲霉種子液的各自的接入量 為棕櫚仁柏質(zhì)量的5~20%，充分混合均勻，得到混合物料，混合物料中的水分控制在30wt. ~60wt. %，所述的芽孢桿菌種子液、酵母菌種子液和黑曲霉種子液的質(zhì)量比為1:1:0.5; 步驟三，固態(tài)發(fā)酵： 將混合物料置于30~40°C的溫度下進行發(fā)酵，pH控制在5~7,保溫1天后，加入占混合 物料總量0.5wt. %的尿素及占混合物料總量0.03wt. %的有機硒發(fā)酵10~12天，得到發(fā)酵 產(chǎn)物，發(fā)酵產(chǎn)物干燥或濕法存儲，即得棕櫚仁柏蛋白飼料。3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟一中，芽孢桿菌種子液的制備過程為： 步驟1.1，一級種子培養(yǎng):從芽孢桿菌的斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)菌體到裝有l(wèi)〇ml種子培 養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為170r/min，30~40°C培 養(yǎng)24小時； 步驟1.2，二級種子擴培：吸取5ml-級種子培養(yǎng)液到裝有100ml種子培養(yǎng)基的500ml三 角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，37 °C培養(yǎng)24小時，備 用。4. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于:所述的芽孢桿菌的斜面培養(yǎng)基為:牛肉膏3g/ L，蛋白胨10g/L，氯化鈉5g/L，瓊脂20g/L，pH值7 · 0~7 · 2，121°C滅菌20min;所述的芽孢桿菌 的種子培養(yǎng)基為:牛肉膏3g/L，蛋白胨1 Og/L，氯化鈉5g/L，pH值7.0~7.2，121°C滅菌20min。5. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟一中，酵母菌種子液的制備過程為： 步驟2.1，一級種子培養(yǎng):從酵母菌的斜面培養(yǎng)基上挑取一環(huán)菌體到裝有10ml種子培養(yǎng) 基的250ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150r/min，30~40°C培養(yǎng) 24小時； 步驟2.2，二級種子擴培：吸取5ml-級種子培養(yǎng)液到裝有100ml種子培養(yǎng)基的500ml三 角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，25~35°C培養(yǎng)24小時， 備用。6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于:所述的酵母菌的斜面培養(yǎng)基為：葡萄糖20g/ L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，瓊脂20g/L，121°C滅菌15min;所述的酵母菌的種子培養(yǎng)基為： 葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母骨5g/L，121°C滅菌15min。7. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟一中，黑曲霉種子液的制備過程為： 步驟3.1，一級種子培養(yǎng):從保藏的斜面黑曲霉的菌種挑取一環(huán)菌體到裝有10ml種子培 養(yǎng)基的250ml三角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150r/min，30~40°C培 養(yǎng)24小時； 步驟3.2，二級種子擴培：吸取5ml-級種子培養(yǎng)液到裝有100ml種子培養(yǎng)基的500ml三 角瓶中，置于恒溫調(diào)速搖床中進行菌體培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為150~170r/min，30°C培養(yǎng)72小時，備 用。8. 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于:所述的黑曲霉菌的斜面培養(yǎng)基為:麥芽汁瓊 脂培養(yǎng)基，〇 · 56kg/cm2，121°C滅菌30min，或察氏瓊脂培養(yǎng)基，0 · 56kg/cm2，116°C高壓滅菌 20min ;所述的黑曲霉菌的種子培養(yǎng)基為：麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基，0.56kg/cm2，121°C滅菌 30min，或察氏瓊脂培養(yǎng)基，0.56kg/cm 2,116°C高壓滅菌20min。9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述的黑曲霉菌為黑曲霉菌ASP-1。10. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于:步驟二中，所述的棕櫚仁柏需要經(jīng)過篩選核 皮再粉碎至大小為3~4mm，以提高與菌種的接觸面積，使發(fā)酵過程更加徹底，將原料與菌種 混合。
【文檔編號】A23K10/37GK105995044SQ201610415463
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月13日
【發(fā)明人】邊靜
【申請人】陜西中馬環(huán)?？萍加邢薰?br>