一種貝類免疫增強(qiáng)劑及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種貝類免疫增強(qiáng)劑，其由以下組分及其質(zhì)量份數(shù)組成：卡拉膠寡糖?金屬離子配合物18～25份，瓊膠寡糖?金屬離子配合物15～22份，蝦青素8～12份，L?精氨酸10～15份，魚油5～7份，輔酶Q10 4～7份；同時(shí)還涉及該貝類免疫增強(qiáng)劑的制備方法和其在貝類養(yǎng)殖中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的貝類免疫增強(qiáng)劑中以卡拉膠寡糖?金屬離子配合物和瓊膠寡糖?金屬離子配合物為主要組分，同時(shí)組配蝦青素、L?精氨酸、魚油以及輔酶Q10等組分，該貝類免疫增強(qiáng)劑制備方法簡(jiǎn)單，各組分能協(xié)調(diào)增效，顯著提高貽貝類機(jī)體的免疫功能，促進(jìn)貽貝生長(zhǎng)與代謝，降低死亡率。
【專利說明】
一種貝類免疫増強(qiáng)劑及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及水產(chǎn)品養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種貝類免疫增強(qiáng)劑及其制備方法和 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來(lái)，圍涂養(yǎng)殖貝類得到大規(guī)模發(fā)展，例如縊蟶、泥蚶、文蛤、貽貝、扇貝和牡蠣 等貝類的高密度集約化養(yǎng)殖。我國(guó)沿海貝類養(yǎng)殖中利用低值魚蝦經(jīng)絞碎或不經(jīng)處理直接投 于貝類養(yǎng)殖涂上，在混養(yǎng)對(duì)蝦的情況下，通過蝦體的排泄物作為貝類的餌料，單養(yǎng)時(shí)，經(jīng)自 然腐敗、分解后，作為貝類的餌料，或者用于肥水，促進(jìn)單細(xì)胞藻類的生長(zhǎng)，豐富貝類的餌 料。這種養(yǎng)殖方式，容易導(dǎo)致貝類缺氧、免疫力劑抗病力下降，甚至導(dǎo)致貝類大面積死亡。
[0003] 免疫是機(jī)體對(duì)病原微生物侵襲的防衛(wèi)功能及維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定一一清除衰老、死 亡、受傷細(xì)胞和監(jiān)視、清除突變細(xì)胞的功能。免疫增強(qiáng)劑指單獨(dú)或同時(shí)與抗原使用均能增強(qiáng) 機(jī)體免疫應(yīng)答的物質(zhì)?？梢?，通過研究使用于貝類養(yǎng)殖的免疫增強(qiáng)劑來(lái)提高貝類的非特異 性免疫功能以及特異性免疫功能，從而增強(qiáng)水產(chǎn)貝類的抗疾病感染能力，是防御貝類病害、 保障貝類產(chǎn)品安全的有效途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)而提供一種能有效提高貝類 自身免疫功能的貝類免疫增強(qiáng)劑。
[0005] 本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)而提供一種上述貝類免疫增 強(qiáng)劑的制備方法。
[0006] 本發(fā)明所要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)而提供一種上述貝類免疫增 強(qiáng)劑在貝類養(yǎng)殖中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明解決上述第一個(gè)技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:一種貝類免疫增強(qiáng)劑，其 特征在于，其由以下組分及其質(zhì)量份數(shù)組成:卡拉膠寡糖-金屬離子配合物18~25份，瓊膠 寡糖-金屬離子配合物15~22份，奸青素8~12份，L-精氨酸10~15份，魚油5~7份，輔酶Q10 4~7份。
[0008] -般情況下，寡糖類物質(zhì)在生物體內(nèi)具有較好的生物活性，如:提高體內(nèi)抗氧化酶 活性、抵抗一些氧化應(yīng)激效應(yīng)等，而單純金屬鹽類，在水體中容易沉淀析出，上述方案中將 金屬離子與寡糖(卡拉膠寡糖、瓊膠寡糖)結(jié)合，可使寡糖作為載體攜帶金屬離子進(jìn)入貝類 體內(nèi)，可使金屬離子在貝類體內(nèi)發(fā)揮拮抗、抵御重金屬脅迫及危害的作用，從而保證貝類健 康生長(zhǎng);輔酶Q10又稱泛釀，是生命活動(dòng)中重要的傳遞物質(zhì)，是線粒體呼吸鏈限速反應(yīng)的關(guān) 鍵性物質(zhì)，在細(xì)胞能力生成，增強(qiáng)生物活力方面發(fā)揮重要作用;L-精氨酸是一種天然蛋白質(zhì) 合成的氨基酸，其在機(jī)體內(nèi)可轉(zhuǎn)化為一氧化氮(N0)，而一氧化氮作為信號(hào)分子，可以使血管 擴(kuò)張而幫助控制血液流向人體的各個(gè)部位，可促進(jìn)血液循環(huán)并增加內(nèi)皮細(xì)胞的活性;蝦青 素是一種天然的抗氧化劑，能有效清除細(xì)胞內(nèi)的氧自由基，增強(qiáng)細(xì)胞再生能力，維持機(jī)體平 衡和減少衰老細(xì)胞的堆積，由內(nèi)而外保護(hù)細(xì)胞和DNA健康。
[0009]作為優(yōu)選，所述金屬離子為Zn2+、Fe2+、或Ca2+中的至少兩種。
[0010] 進(jìn)一步，所述金屬離子為Zn2+和Fe2+，且其質(zhì)量比為1~2:1。
[0011] 作為優(yōu)選，所述卡拉膠寡糖為K型，聚合度為2~6,純度大于98%;所述瓊膠寡糖的 聚合度為2~10,純度大于98%。
[0012] 本發(fā)明解決第二個(gè)技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:上述貝類免疫增強(qiáng)劑通過以下 步驟制備：（1)卡拉膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將卡拉膠寡糖溶于水后制得濃度為20 ~30g/L卡拉膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至3.0~4.4，向該卡拉膠寡糖溶液中加入濃度為5.0~ 6. Og/L的金屬離子溶液，30~40°C恒溫條件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)4~5h，螯合反應(yīng)結(jié) 束后，離心得上清液，將該上清液真空濃縮、冷凍干燥后即得卡拉膠寡糖-金屬離子配合物；
[0013] (2)瓊膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將瓊膠寡糖溶于水后制得濃度為15~25g/ L瓊膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至3.5~4.5，向該瓊膠寡糖溶液中加入濃度為5.0~6. Og/L的金 屬離子溶液，30~40°C恒溫條件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)5~6.5h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心 得上清液，將該上清液真空濃縮、冷凍干燥后即得瓊膠寡糖-金屬離子配合物；
[0014] (3)將制得的卡拉膠寡糖-金屬離子配合物、瓊膠寡糖-金屬離子配合物按上述質(zhì) 量份數(shù)與蝦青素、L-精氨酸、輔酶Q10以及魚油混合均勻，即得所需的貝類免疫增強(qiáng)劑。
[0015] 本發(fā)明解決第三個(gè)技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:將上述貝類免疫增強(qiáng)劑以飼料 添加劑的形式加入到貝類飼料中，其中每kg貝類飼料中加入1.5~3g上述貝類免疫增強(qiáng)劑。
[0016] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明的貝類免疫增強(qiáng)劑中以卡拉膠寡糖-金屬離子配合物和瓊膠寡糖-金屬離子配合物為主要組分，協(xié)同發(fā)揮抗氧化以及抵御重金 屬脅迫及危害的作用，同時(shí)組配蝦青素、L-精氨酸、魚油以及輔酶Q10等組分，該貝類免疫增 強(qiáng)劑制備方法簡(jiǎn)單，各組分能協(xié)調(diào)增效，顯著提高貽貝類機(jī)體的免疫功能，促進(jìn)貽貝生長(zhǎng)與 代謝，降低死亡率。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0018] 實(shí)施例1:貝類免疫增強(qiáng)劑制備方法
[0019] (1)卡拉膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將卡拉膠寡糖溶于水后制得濃度為20g/ L卡拉膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至3.0，向該卡拉膠寡糖溶液中加入濃度為5 . Og/L的金屬離子 溶液，該金屬離子溶液為Zn2+溶液和Fe2+溶液的混合液，且兩者的質(zhì)量比為1:1。30°(：恒溫條 件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)4h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心得上清液，將該上清液真空濃縮、冷 凍干燥后即得卡拉膠寡糖-金屬離子配合物。
[0020] (2)瓊膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將瓊膠寡糖溶于水后制得濃度為15g/L瓊 膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至3.5，向該瓊膠寡糖溶液中加入濃度為5 . Og/L的金屬離子溶液，30 °C恒溫條件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)5h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心得上清液，將該上清液真 空濃縮、冷凍干燥后即得瓊膠寡糖-金屬離子配合物。
[0021] (3)將制得的18份卡拉膠寡糖-金屬離子配合物、15份瓊膠寡糖-金屬離子配合物 按與8份蝦青素、10份L-精氨酸、4份輔酶Q10以及5份魚油混合均勻，即得所需的貝類免疫增 強(qiáng)劑。
[0022] 實(shí)施例2:貝類免疫增強(qiáng)劑制備方法
[0023] (1)卡拉膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將卡拉膠寡糖溶于水后制得濃度為30g/ L卡拉膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至4.4，向該卡拉膠寡糖溶液中加入濃度為6 . Og/L的金屬離子 溶液，該金屬離子溶液為Zn2+溶液和Fe2+溶液的混合液，且兩者的質(zhì)量比為2:1。40°(：恒溫條 件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)5h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心得上清液，將該上清液真空濃縮、冷 凍干燥后即得卡拉膠寡糖-金屬離子配合物。
[0024] (2)瓊膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將瓊膠寡糖溶于水后制得濃度為25g/L瓊 膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至4.5，向該瓊膠寡糖溶液中加入濃度為6. Og/L的金屬離子溶液，40 °C恒溫條件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)6.5h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心得上清液，將該上清液 真空濃縮、冷凍干燥后即得瓊膠寡糖-金屬離子配合物。
[0025] (3)將制得的25份卡拉膠寡糖-金屬離子配合物、22份瓊膠寡糖-金屬離子配合物 按與12份蝦青素、15份L-精氨酸、7份輔酶Q10以及7份魚油混合均勻，即得所需的貝類免疫 增強(qiáng)劑。
[0026] 實(shí)施例3:貝類免疫增強(qiáng)劑制備方法
[0027] (1)卡拉膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將卡拉膠寡糖溶于水后制得濃度為25g/ L卡拉膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至4.0，向該卡拉膠寡糖溶液中加入濃度為5.5g/L的金屬離子 溶液，該金屬離子溶液為Zn 2+溶液和Fe2+溶液的混合液，且兩者的質(zhì)量比為1.5:1。35°(：恒溫 條件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)4.5h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心得上清液，將該上清液真空濃 縮、冷凍干燥后即得卡拉膠寡糖-金屬離子配合物；
[0028] (2)瓊膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將瓊膠寡糖溶于水后制得濃度為20g/L瓊 膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至4.0，向該瓊膠寡糖溶液中加入濃度為5.5g/L的金屬離子溶液，35 °C恒溫條件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)6h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心得上清液，將該上清液真 空濃縮、冷凍干燥后即得瓊膠寡糖-金屬離子配合物；
[0029] (3)將制得的20份卡拉膠寡糖-金屬離子配合物、20份瓊膠寡糖-金屬離子配合物 按與10份蝦青素、12份L-精氨酸、5份輔酶Q10以及6份魚油混合均勻，即得所需的貝類免疫 增強(qiáng)劑。
[0030] 實(shí)施例4:貝類免疫增強(qiáng)劑制備方法
[0031] (1)卡拉膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將卡拉膠寡糖溶于水后制得濃度為22g/ L卡拉膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至3.7，向該卡拉膠寡糖溶液中加入濃度為5.7g/L的金屬離子 溶液，該金屬離子溶液為Zn 2+溶液和Ca2+溶液的混合液，且兩者的質(zhì)量比為1:1。37°(：恒溫條 件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)4.6h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心得上清液，將該上清液真空濃縮、 冷凍干燥后即得卡拉膠寡糖-金屬離子配合物；
[0032] (2)瓊膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將瓊膠寡糖溶于水后制得濃度為18g/L瓊 膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至3.7，向該瓊膠寡糖溶液中加入濃度為5 . Og/L的金屬離子溶液，37 °C恒溫條件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)6.3h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心得上清液，將該上清液 真空濃縮、冷凍干燥后即得瓊膠寡糖-金屬離子配合物；
[0033] (3)將制得的22份卡拉膠寡糖-金屬離子配合物、17份瓊膠寡糖-金屬離子配合物 按與9份蝦青素、12份L-精氨酸、6份輔酶Q10以及5份魚油混合均勻，即得所需的貝類免疫增 強(qiáng)劑。
[0034]實(shí)施例5:貝類免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用試驗(yàn)
[0035]試驗(yàn)組:任取實(shí)施例1~4中制備的貝類免疫增強(qiáng)劑與貝類飼料以1.5~3.Og/kg的 比例混合用于紫貽貝養(yǎng)殖過程中的日常飼料，具體包括試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2以及試驗(yàn)組3,其 中試驗(yàn)組1中免疫增強(qiáng)劑與貝類暫養(yǎng)飼料的混合比例為1.5g/kg，試驗(yàn)組2中免疫增強(qiáng)劑與 貝類暫養(yǎng)飼料的混合比例為2.Og/kg，試驗(yàn)組3中免疫增強(qiáng)劑與貝類暫養(yǎng)飼料的混合比例為 3.Og/kg；
[0036] 比較組:與試驗(yàn)組不同的是，該組采用市售貝類免疫增強(qiáng)劑(殼寡糖），具體包括比 較組1、比較組2以及比較組3,其中比較組1中市售貝類免疫增強(qiáng)劑與貝類飼料的混合比例 為1.5g/kg，比較組2中市售免疫增強(qiáng)劑與貝類暫養(yǎng)飼料的混合比例為2.Og/kg，比較組3中 市售免疫增強(qiáng)劑與貝類暫養(yǎng)飼料的混合比例為3. Og/kg，其他養(yǎng)殖條件均與試驗(yàn)組相同；
[0037] 對(duì)照組:該組采用基礎(chǔ)飼料進(jìn)行喂食，其他養(yǎng)殖條件均與試驗(yàn)組相同。
[0038]各組均于相同大小的養(yǎng)殖池進(jìn)行試驗(yàn)，并且各組均重復(fù)設(shè)置三個(gè)相同的養(yǎng)殖池， 各養(yǎng)殖池均投放相同量的紫貽貝。試驗(yàn)周期為8周，水溫為15~20°C，每天分早晚投食兩次， 試驗(yàn)組和比較組中連續(xù)投食含貝類免疫增強(qiáng)劑的飼料四天后改用基礎(chǔ)飼料進(jìn)行喂食三天， 以此模式循環(huán)喂養(yǎng)直至試驗(yàn)結(jié)束。
[0039] 養(yǎng)殖8周后，計(jì)算各養(yǎng)殖池中的紫貽貝數(shù)，計(jì)算成活率，同時(shí)對(duì)各養(yǎng)殖池中的所有 紫貽貝稱重，計(jì)算增重率，其中試驗(yàn)組的增重率均大于比較組，而比較組的增重率均大于對(duì) 照組。免疫保護(hù)率=(1-實(shí)驗(yàn)組死亡率/對(duì)照組死亡率)*1〇〇。試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
[0040] 表1各組紫貽貝成活率和免疫保護(hù)率
[0041]
[0042] 由表1的試驗(yàn)結(jié)果可見，本發(fā)明中的免疫增強(qiáng)劑能提高紫貽貝的成活率和生長(zhǎng)速 度，提高其機(jī)體免疫功能。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種貝類免疫增強(qiáng)劑，其特征在于，其由以下組分及其質(zhì)量份數(shù)組成：卡拉膠寡糖-金屬離子配合物18~25份，瓊膠寡糖-金屬離子配合物15~22份，蝦青素8~12份，L-精氨酸 10~15份，魚油5~7份，輔酶Q10 4~7份。2. 如權(quán)利要求1所述的貝類免疫增強(qiáng)劑，其特征在于，所述金屬離子為Zn2+、Fe2+、或Ca 2+ 中的至少兩種。3. 如權(quán)利要求2所述的貝類免疫增強(qiáng)劑，其特征在于，所述金屬離子為Zn2+和Fe2+，且其 質(zhì)量比為1~2:1。4. 如權(quán)利要求1所述的貝類免疫增強(qiáng)劑，其特征在于，所述卡拉膠寡糖為κ型，聚合度為 2~6;所述瓊膠寡糖的聚合度為2~10。5. -種如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的貝類免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于包括以 下步驟： (1) 卡拉膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將卡拉膠寡糖溶于水后制得濃度為20~30g/ L卡拉膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至3.0~4.4，向該卡拉膠寡糖溶液中加入濃度為5.0~6.Og/L 的金屬離子溶液，30~40°C恒溫條件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)4~5h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離 心得上清液，將該上清液真空濃縮、冷凍干燥后即得卡拉膠寡糖-金屬離子配合物； (2) 瓊膠寡糖-金屬離子配合物的制備:將瓊膠寡糖溶于水后制得濃度為15~25g/L瓊 膠寡糖溶液，調(diào)節(jié)pH值至3.5~4.5，向該瓊膠寡糖溶液中加入濃度為5.0~6. Og/L的金屬離 子溶液，30~40°C恒溫條件下進(jìn)行水浴振蕩，螯合反應(yīng)5~6.5h，螯合反應(yīng)結(jié)束后，離心得上 清液，將該上清液真空濃縮、冷凍干燥后即得瓊膠寡糖-金屬離子配合物； (3) 將制得的卡拉膠寡糖-金屬離子配合物、瓊膠寡糖-金屬離子配合物按上述質(zhì)量份 數(shù)與蝦青素、L-精氨酸、輔酶Q10以及魚油混合均勻，即得所需的貝類免疫增強(qiáng)劑。6. -種如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的貝類免疫增強(qiáng)劑的應(yīng)用，其特征在于，將上述貝 類免疫增強(qiáng)劑以飼料添加劑的形式加入到貝類飼料中，其中每kg貝類飼料中加入1.5~ 3.0g上述貝類免疫增強(qiáng)劑。
【文檔編號(hào)】A23K20/142GK106036234SQ201610524127
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年6月29日
【發(fā)明人】張賓, 史周榮, 鄧尚貴
【申請(qǐng)人】浙江海洋大學(xué)