蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液，由以下組分組成：蛹蟲草粗多糖18～22%，蔗糖4～6%，松茸菌酵素18～22%，檸檬酸0.1～0.3%，羧甲基纖維素鈉0.2～0.5%，山梨酸鉀0.005～0.015%，余量為水，以重量百分比計。本發(fā)明的飲液含有多種多糖、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、維生素和高濃度的鋅、硒、鎂等微量元素混合物。針對野生冬蟲夏草越來越少的狀況，以較容易獲得的材料配制出與野生冬蟲夏草的營養(yǎng)成分十分相仿且人體較易吸收的飲液。本發(fā)明的飲液長期服用具有增強(qiáng)免疫力的功效。
【專利說明】
蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種用藥食同源的蛹蟲草等原料配制成的營養(yǎng)蛹蟲草多糖松茸菌酵 素復(fù)方飲液及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 冬蟲夏草為麥角科真菌冬蟲夏草[cordyceps inensis(Berk. )sacc·]寄生在蝙蝠 科昆蟲幼蟲的子座復(fù)合體。我國是世界上冬蟲夏草資源分布最多最廣的國家。冬蟲夏草主 要分布在中國青海、西藏、四川、云南等地海拔3000~5100m的高寒草甸區(qū)。
[0003] 隨著人們生活水平的提高，人們的健康意識也隨著逐步提高，越來越重視對健康 的投資，所以市場上出現(xiàn)了大量的保健產(chǎn)品，但是蟲草類保健產(chǎn)品的大量生產(chǎn)，使得人們對 野生天然蟲草的盜挖、采挖現(xiàn)象愈演愈烈，與此同時，蟲草天然的繁殖生長環(huán)境的遭到極具 破壞，自然產(chǎn)量隨之驟減，日趨枯竭野生資源使得相關(guān)市場需求產(chǎn)生很大缺口。通過接種從 天然冬蟲夏草中分離出的菌株感染蜂蛹產(chǎn)生子實體，能夠于某些程度上彌補(bǔ)因野生蟲草不 足而造成的資源缺口。大量相關(guān)藥理、藥化及臨床應(yīng)用表明：蛹蟲草和天然冬蟲夏草具有相 似的化學(xué)成分、藥理作用和臨床療效。兩者都含有的蛋白質(zhì)、脂肪、多種無機(jī)元素和維生素、 氨基酸、蟲草酸含量相近，并且蛹蟲草中蟲草素含量，特別是多糖大大高于冬蟲夏草。
[0004]蛹蟲草多糖的功效佳，但是直接服用有很大的腥味，很多人接受不了，且人體能吸 收的僅僅只有小部分。把蛹蟲草打成粉末，提取其中的多糖，配制成口服液?？梢詮浹a(bǔ)直接 服用的不足。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為克服直接服用蛹蟲草的有腥味及其多糖的吸收效果，本發(fā)明研制蛹蟲草多糖松 茸菌酵素復(fù)方飲液及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過以下措施實現(xiàn)的：
[0007] -種蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液，由以下組分組成:蛹蟲草粗多糖18~22%， 蔗糖4~6%，松茸菌酵素18~22%，檸檬酸0.1~0.3%，羧甲基纖維素鈉0.2~0.5%，山梨 酸鉀0.005~0.015%，余量為水，以重量百分比計。
[0008] 上述松茸菌酵素的制備方法為:選取松茸菌4~8份，去雜，切成片狀，加入1~3份 蜂蜜，于121°C高溫高壓條件下滅菌15min，在無菌操作條件下，接種10wt%復(fù)合發(fā)酵菌液， 進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時間200天，發(fā)酵結(jié)束后于121°C高溫高壓條件下滅菌15min殺滅發(fā)酵菌，過 濾后液體為果蔬酵素。
[0009] 上述復(fù)合發(fā)酵菌液是將乳酸菌、酵母菌、干酪乳桿菌的菌種活化培養(yǎng)制備成發(fā)酵 菌液。具體包括以下步驟：（1)將乳酸菌、酵母菌、干酪乳桿菌分別在LB平板上劃線接種，放 入30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至長滿菌絲；（2)挑取平板上的菌落分別接入裝有50ml培養(yǎng)液的三角 培養(yǎng)瓶中，置于搖床，轉(zhuǎn)速200rpm，溫度30°C，恒溫培養(yǎng)48~72小時，得到三種菌液；（3)將三 種菌液按乳酸菌:酵母菌:干酪乳桿菌=1:1:1比例配成濃度為每毫升含2.5 X 107個孢子的 菌液，作為發(fā)酵液。
[0010]上述蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液的制備方法，包括以下步驟：
[0011] (1)蛹蟲草粉以物料重量比為1:15加蒸餾水，超聲30min，在100°C下油浴提取2h， 離心得提取液，將提取液濃縮，加入3-5倍無水乙醇進(jìn)行醇沉過夜；
[0012] (2)離心并用無水乙醇洗沉淀，得到粗多糖，將蛹蟲草粗多糖進(jìn)行冷凍干燥，得到 蛹蟲草多糖粉；
[0013] (3)取粗多糖20%，蔗糖5%，松茸菌酵素20%，檸檬酸0.2%，羧甲基纖維素鈉 0.3 %，山梨酸鉀0.01 %，去離子水加至100 %混合，均質(zhì)、瞬時滅菌，滅菌溫度在100-120°C， 時間在30-60分鐘，灌裝封口。
[0014] 有益效果
[0015] 1.本發(fā)明針對野生冬蟲夏草越來越少的狀況，以較容易獲得的材料配制出與野生 冬蟲夏草的營養(yǎng)成分十分相仿且人體較易吸收的飲液。本發(fā)明的飲液長期服用具有增強(qiáng)免 疫力的功效。
[0016] 2.在蛹蟲草多糖飲液的加工制備中，有效成分的生物活性易削弱或喪失，且多糖 是大分子物質(zhì)，其生物利用度極低。而本發(fā)明不僅能夠改善腸胃消化系統(tǒng)功能，加速多糖的 吸收，而且能夠提高多糖的生物利用度，使得產(chǎn)品在水解吸收過程中產(chǎn)生更多的寡糖、低聚 糖，利于與體內(nèi)免疫系統(tǒng)發(fā)生作用，例如與粘膜上的細(xì)胞受體結(jié)合，從而激活一些信號通 路、引起免疫反應(yīng)，不但可以增多功效，而且還可以提高藥理作用和臨床療效。
[0017] 3.本發(fā)明的飲液含有多種多糖、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、維生素和高濃度的鋅、硒、鎂等微 量元素混合物。把松茸菌制成酵素，配制成蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液，不但可以增多 功效，而且還可以提高藥理作用和臨床療效。
【具體實施方式】
[0018] 下面對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。以下實施例僅限于說明本發(fā)明而不用于限制本 發(fā)明的范圍。
[0019] 實施例1
[0020] -種蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液，由以下組分組成:蛹蟲草粗多糖20%，蔗糖 5%，松茸菌酵素20%，檸檬酸0.2%，羧甲基纖維素鈉0.3%，山梨酸鉀0.01 %，去離子水加 至100 %混合，以重量百分比計。
[0021] 上述蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液的制備方法，包括以下步驟：
[0022] (1)蛹蟲草粉以物料重量比為1:15加蒸餾水，超聲30min，在100°C下油浴提取2h， 離心得提取液，將提取液濃縮，加入3-5倍無水乙醇進(jìn)行醇沉過夜;離心并用無水乙醇洗沉 淀，得到粗多糖，將蛹蟲草粗多糖進(jìn)行冷凍干燥，得到蛹蟲草多糖粉；
[0023] (2)選取松茸菌原料5份，去雜，切成片狀，加入2份蜂蜜，于121°C高溫高壓條件下 滅菌15min，在無菌操作條件下，加入10wt%復(fù)合發(fā)酵菌液，發(fā)酵，121°C高溫高壓條件下滅 菌15min殺滅發(fā)酵菌，終止發(fā)酵，過濾后液體為酵素；
[0024] 上述復(fù)合發(fā)酵菌液是將乳酸菌、酵母菌、干酪乳桿菌的菌種活化培養(yǎng)制備成發(fā)酵 菌液。具體包括以下步驟:①將乳酸菌、酵母菌、干酪乳桿菌分別在LB平板上劃線接種，放入 30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至長滿菌絲;②挑取平板上的菌落分別接入裝有50ml培養(yǎng)液的三角培養(yǎng) 瓶中，置于搖床，轉(zhuǎn)速200rpm，溫度30°C，恒溫培養(yǎng)48~72小時，得到三種菌液;③將三種菌 液按乳酸菌:酵母菌:干酪乳桿菌=1:1:1比例配成濃度為每毫升含2.5 X 107個孢子的菌 液，作為復(fù)合發(fā)酵液。
[0025] (3)取蛹蟲草粗多糖20%，蔗糖5%，松茸菌酵素20%，檸檬酸0.2%，羧甲基纖維素 鈉0.3%，山梨酸鉀0.01%，去離子水加至100%混合，均質(zhì)、瞬時滅菌，滅菌溫度在100-120 °C，時間在30-60分鐘，灌裝封口。制得的產(chǎn)品效果驗證如下：
[0026] 1.保健功能試驗：
[0027] (1)抗腫瘤作用
[0028]選取20只健康且體重相近（18±2g)的清潔型ICR小鼠，在小鼠背部皮下接種5 X 106個S180細(xì)胞。隨機(jī)分為A(0.9%生理鹽水作為對照組）、B(實施例1作為實驗組)兩組，每 組10只。A組灌入0.4ml生理鹽水，B組灌入0.4ml蛹蟲草多糖液，每天同一時間灌胃1次，連續(xù) 灌胃10天后放血處死，取瘤稱重。實驗組瘤重0.393 ±0.102g，對照組瘤重0.851 ±0.115g。
[0029] 結(jié)論:本產(chǎn)品具有良好的抗腫瘤作用。
[0030] (2)抗氧化作用
[0031 ] 首先配制好9mmo 1 /LFeS〇4、9mmo 1 /L水楊酸乙醇溶液、8.8mmo L/L過氧化氫溶液和 不同濃度梯度的本產(chǎn)品（分別為5mg/mL、1 Omg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL)。取15支試管 分成5組依次做好編號，每組3個平行試驗，每支試管中加入lmL 9mmol/L FeS04、2mL 9mmo 1 /L水楊酸乙醇溶液，按照編號依次加入不同濃度的多糖溶液2mL，再分別加入2mL 8.8mmol/L過氧化氫溶液，室溫下反應(yīng)lh后。蒸餾水空白調(diào)零，在510nm處測定各試管的吸光 度，計算不同濃度本產(chǎn)品對羥自由基的清除率。
[0032] 計算公式:羥自由基清除率（％ ) = (Ao-As)/Ao X 100%
[0033]其中:Ao-一空白對照管的吸光度；
[0034] As--加入樣品后的吸光度
[0035] 結(jié)果表明本產(chǎn)品多糖濃度為20mg/mL時，羥自由基的抑制率達(dá)到最高75%以上，試 驗表明本廣品具有良好的還原能力。
[0036] 結(jié)論:本產(chǎn)品具有良好的體外抗氧化作用。
[0037] (3)降血糖
[0038]選取12只健康且體重相近（18 ± 2g)的清潔型ICR小鼠，以多次低劑量鏈脲霉素 (multiple low-dose streptozotocin，MLD_STZ)方法腹腔注射BALB/c小鼠，成功誘導(dǎo)出糖 尿病小鼠。隨后隨機(jī)分成A、B兩組，每組6只。每天同一時間，分別給A組小鼠注射本產(chǎn)品 300mL/kg、B組小鼠注射飲用蒸餾水，每天注射一次，連續(xù)注射6周，每周斷尾取血，用血糖儀 測定血糖濃度。實驗組血糖濃度由18.18±2.52(mmol/L，n = 6)變成12.14±3.36(mmol/L，n =6)，對照組由 18·06±2· 74(mmol/L，n = 6)變成19·91 ±3·63(mmol/L，n = 6) 〇
[0039] 結(jié)論:本產(chǎn)品對糖尿病小鼠有較好的降糖作用。
[0040] (4)護(hù)肝作用。
[0041] 選取30只健康且體重相近（18±2g)的清潔型ICR小鼠，隨機(jī)分成正常對照組(飼喂 正常飼料）、急性CC14肝損傷模型組(簡稱模型對照組，正常飼料+CC14)、產(chǎn)品組(正常飼料+ CC14+本產(chǎn)品為500mg/kg多糖），每組10只。每天晚上7:00，產(chǎn)品組灌胃0.2mL，正常對照組與 模型對照組灌胃等體積0.2mL生理鹽水，連續(xù)灌胃7天，末次灌胃2小時后，正常對照組注射 0.2m L花生油，其他各組每只鼠腹腔注射0.2%CCl4花生油溶液0.2m L。禁食16h，斷頭取血 約3mL，室溫放置2h，3000r/min離心10min后取血清，-20°C密封保存?zhèn)溆?；取肝左葉用生理 鹽水制成10%的組織勻漿。取肝右葉，用10%甲醛溶液固定，冰凍保存。用考馬斯亮藍(lán)法測 定組織中蛋白含量，采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性。取甲醛固定的肝右葉組織，常規(guī)石 蠟切片，HE染色、20X 10倍光鏡鏡檢。正常對照組SOD活性31.03±4.16(U/mg pro)，MDA含量 2.73±0.26(腦〇1/11^?『〇)，??？含量64.97±6.71(11^/1111^?『〇) ;模型對照組500活性14.88 ±4.50(11/11^卩1'〇)，]\?八含量8.88±2.45(11111〇1/11^。1'〇)，??？含量57.11±7.34(11^/1111^ pro);產(chǎn)品組SOD活性26 · 01 ±6 · 93U/mg pro)，MDA含量3 · 58±0 · 59(nmol/mg pro)，TP含量 60.32±8.03(mg/m L pro)。
[0042] 結(jié)論:模型對照組SOD水平顯著低于正常對照組(P<0.01)，說明肝細(xì)胞已受到破 壞。產(chǎn)品組S0D水平顯著高于模型對照組(P<0.01)，表明產(chǎn)品組起到了抑制S0D降低的作 用。模型對照組MDA含量顯著高于正常對照組(P<0.01)，說明CC1 4誘導(dǎo)的急性肝損傷模型 成功。產(chǎn)品組MDA水平顯著低于模型對照組(P<0.01)，表明本產(chǎn)品起到了抑制MDA升高的作 用。因此，本產(chǎn)品具有護(hù)肝作用。
[0043] (5)保護(hù)腎功能
[0044] 健康witsra大鼠12只，雌、雄各半，50天齡，雌性體重160~180g，雄性體重170~ 200g，隨機(jī)分成三組，正常對照組、模型組對照組、產(chǎn)品組，每組4只。模型對照組、產(chǎn)品組分 別在水合氯醛麻醉下行左側(cè)腎臟2/3切除術(shù)。術(shù)后大鼠單獨(dú)飼養(yǎng)3天后分組置飼養(yǎng)籠群養(yǎng)。 第三天開始進(jìn)行千預(yù)治療：（A)產(chǎn)品組，4只，每天給予本產(chǎn)品500mg/kg灌胃；（B)模型對照 組，4只，（C)正常對照組，4只。模型組和正常對照組每大給予等量的飲用水灌胃，大鼠自山 飲水、進(jìn)食。次術(shù)后4周各組分別處死大鼠2只。術(shù)后9周處死剩余的2只。開放腎臟靜脈，用4 °C預(yù)冷的生理鹽水沖洗腎臟直至變白，摘下腎臟，將其剖開，取部分腎組織(兼顧皮、髓質(zhì)） 置10%福爾馬林固定液固定24小時，流水沖洗2小時，常規(guī)剃度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟 包埋，3pm厚連續(xù)切片，用HE染色、PSA染色，檢查腎小球硬化指數(shù)。采用半定量方法評估腎小 球硬化程度，每張切片均觀察20個完整腎小球。4周時腎小球硬化指數(shù)，正常對照組2.47土 1.16、模型對照組27.87 ± 4.21、蛹蟲草多糖組24.73 ± 4.11，9周時腎小球硬化指數(shù)，正常對 照組2.77 ± 1.15、模型對照組43.96 ± 9.85、產(chǎn)品組31.14 ± 7.31。
[0045] 結(jié)論:模型對照組腎小球硬化指數(shù)顯著低于正常對照組(P<0.01 )，說明腎小球已 受到破壞。產(chǎn)品組腎小球硬化指數(shù)顯著低于模型對照組(P<〇.01)，表明產(chǎn)品組對腎小球起 到了保護(hù)作用。模型對照組腎小球硬化指數(shù)顯著高于正常對照組(P<〇.01)，說明腎小球損 傷模型成功。因此，本產(chǎn)品具有能保護(hù)腎功能。
[0046] (6)改善腸胃消化系統(tǒng)
[0047] 選取20只健康且體重相近（18±2g)的清潔型ICR小鼠，禁食20-24小時，隨機(jī)分為2 組，即產(chǎn)品組（20.0ml/kg灌胃），對照組（等量生理鹽水灌胃），每組10只動物，用苦味酸標(biāo) 記。90分鐘后各組給予0.3ml墨汁液灌胃。20分鐘后，頸椎脫臼處死，打開腹腔分離腸膜，上 端至幽門、下端至回盲部剪取腸管，置于托盤上。輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度作為 小腸總長度。從幽門至墨汁前沿的距離作為"墨汁在腸內(nèi)推進(jìn)距離"。用公式計算墨汁推進(jìn) 百分率。墨汁推進(jìn)率（％ )=墨汁在腸內(nèi)推進(jìn)距離（cm)/小腸全長(cm) X 100%。各組小鼠小 腸推動功能。正常對照組推進(jìn)率63.916±7.849%，產(chǎn)品組推進(jìn)率83.936±9.026%。
[0048]結(jié)論:本產(chǎn)品能改善腸胃消化系統(tǒng)。
[0049] 2.吸收率試驗驗證：
[0050]選取20只健康且體重相近（18±2g)的清潔型ICR小鼠，隨機(jī)分2組，即本專利產(chǎn)品 組(簡稱實驗組，本產(chǎn)品20.0ml/kg灌胃），對照組(等量生理鹽水灌胃），每組10只動物，10分 鐘后每只小鼠灌入〇.4mL2%葡聚糖藍(lán)2000溶液，30分鐘后頸椎脫臼處死動物，開腹取出全 部胃腸，自幽門括約肌處取胃，將其內(nèi)殘留的葡聚糖藍(lán)2000充分溶2mL去離子水中，3500rpm 離心15分鐘，取上清液，濾液用723型分光光度計，在620nm處測定吸光度，為胃內(nèi)葡聚糖藍(lán) 2000殘留量，并求出實驗組均值。以對照組均值為100%，得實驗組相對胃內(nèi)色素殘留率 51.1%〇
[0051 ]結(jié)論:本產(chǎn)品有助于機(jī)體對對營養(yǎng)的吸收。
[0052] 3.感官評定試驗選擇20名專業(yè)評判人員，對本產(chǎn)品進(jìn)行感官評價。表1為本產(chǎn)品感 官評價指標(biāo)，表2為評價結(jié)果。
[0053]表1蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液感官評分標(biāo)準(zhǔn)
[0054]
[0055] 表2蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液感官評價結(jié)果
[0056]
[0057] 由表2可以看出，本發(fā)明蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液酸甜味適中，基本無苦 味，不含不溶性顆粒，澄清度較好，黏稠度適中，整體口感好，滿足消費(fèi)者需求。
【主權(quán)項】
1. 一種蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液，由以下組分組成：蛹蟲草粗多糖18~22%，蔗 糖4~6%，松茸菌酵素18~22%，檸檬酸0.1~0.3%，羧甲基纖維素鈉0.2~0.5%，山梨酸鉀 0.005~0.015%，余量為水，以重量百分比計。2. 如權(quán)利要求1所述蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液，所述的酵素的原料為4~6份松 茸菌，1~3份蜂蜜，以重量份數(shù)計。3. 如權(quán)利要求1所述蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液，所述的酵素制備方法包括以下 步驟:選取松茸菌原料5份，去雜，切成片狀，加入2份蜂蜜，于121Γ高溫高壓條件下滅菌 15min，在無菌操作條件下，接種10wt%復(fù)合發(fā)酵菌液，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時間200天，然后121°C 高溫高壓條件下滅菌15min殺滅發(fā)酵菌，過濾后液體為果蔬酵素。4. 如權(quán)利要求1~3分宜所述蛹蟲草多糖松茸菌酵素復(fù)方飲液的制備方法，包括以下步 驟： (1) 蛹蟲草粉以物料重量比為1:15加蒸餾水，超聲30min，在100°C下油浴提取2h，離心 得提取液，將提取液濃縮，加入3-5倍無水乙醇進(jìn)行醇沉過夜； (2) 離心并用無水乙醇洗沉淀，得到粗多糖，將蛹蟲草粗多糖進(jìn)行冷凍干燥，得到蛹蟲 草多糖粉； (3) 取蟲草粗多糖20%，蔗糖5%，松茸菌酵素20%，檸檬酸0.2%，羧甲基纖維素鈉0.3%，山 梨酸鉀0.01%，用去離子水加至100%混合，均質(zhì)、瞬時滅菌，滅菌溫度在100-120°C，時間在 30-60分鐘，灌裝封口。
【文檔編號】A23L33/10GK106036308SQ201610304454
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月10日
【發(fā)明人】肖艷文
【申請人】香格里拉東旺生物科技有限公司