一種鐵皮石斛酸奶的制備方法及應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鐵皮石斛酸奶的制備方法及應用。將全脂奶粉、水和蔗糖，或者鮮奶與蔗糖混合均勻后，進行均質(zhì)處理；再加入鐵皮石斛細粉，進行殺菌處理，再加入由保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌組成的混合菌種，攪拌均勻后，加入到容器中密封，發(fā)酵，冷卻、后熟，即得益生菌活菌數(shù)量高，且包含鐵皮石斛活性組分的鐵皮石斛酸奶；該制備方法具有發(fā)酵周期短，操作簡單，成本低的優(yōu)點，制備的鐵皮石斛酸奶可以應用于制備具有治療脾虛便秘以及治療抗生素相關性腹瀉的食品。
【專利說明】
一種鐵皮石斛酸奶的制備方法及應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種酸奶的制備方法，特別涉及一種鐵皮石斛酸奶的制備方法，以及 鐵皮石斛酸奶在制備具有治療脾虛便秘功效或具有治療抗生素相關性腹瀉功效的食品中 的應用，屬于發(fā)酵奶制品領域。
【背景技術】
[0002] 鐵皮石斛(Dendrobium officinale)是我國傳統(tǒng)名貴中藥，唐開元年間道家經(jīng)典 著作《道藏》記載，中華九大仙草(鐵皮石斛、天山雪蓮、三兩重人參、百二十年首烏、花甲之 茯苓、灰蓉、深山靈芝、海底珍珠、冬蟲夏草），鐵皮石斛因滋陰補虛效果顯著，被列為中華九 大仙草之首位。秦末漢初《神農(nóng)本草經(jīng)》將鐵皮石斛列為上品。鐵皮石斛的主要成分是生物 堿和多糖，富含氨基酸，其中包括7種人體必需氨基酸(除色氨酸外)和3種半必需氨基酸，其 中銫(Se)和鐵(Fe)的含量較高?，F(xiàn)代研究表明，其具有抗衰老、抗腫瘤、降低血糖等作用。中 醫(yī)認為其具有益胃生津，滋陰清熱的作用。用于陰傷津虧，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔， 病后虛熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨痿軟。對治療胃腸道疾病、白內(nèi)障、關節(jié) 炎、血栓閉塞性脈管炎及慢性咽炎等疾病有很好的療效，石斛多糖能促進乳酸菌、雙歧桿菌 等有益菌，并能有效抑制大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和肺炎球菌等的生 長。研究表明，鐵皮石斛能夠調(diào)整腸道微生態(tài)平衡，從而對脾虛便秘有一定的療效。
[0003] 腸道微生物對腸道的健康發(fā)育及腸道功能的實現(xiàn)具有重要意義。人腸道中的微生 物約有1000多種，總重量大約為1.0kg~1.5kg，總數(shù)在10 14個以上，相當于人體所有組織細 胞總數(shù)的10倍。哺乳動物胃腸道中的微生物是胃腸道反應的主要作用者，對宿主的多種生 理功能(尤其是代謝)至關重要，與人體的生理、病理和藥理(毒理)過程密切相關，是人體的 一個重要"器官"。乳酸菌是一類能夠分解多種糖類產(chǎn)生大量乳酸的革蘭氏陽性大桿菌，在 厭氧環(huán)境下生長好，廣泛存在于人體的口腔、泌尿生殖道、胃腸道內(nèi)，是體內(nèi)不可或缺的具 有重要生理功能的益生菌。乳酸菌目前已廣泛應用于一些疾病治療，可用于增強患者的免 疫、預防感染、調(diào)整腸道菌群平衡等。酸奶含有乳酸菌等活性益生菌，乳酸菌可以使蛋白質(zhì) 發(fā)生一定程度的降解而形成預消化狀態(tài)，并且能夠抑制腸道內(nèi)有害菌，解決乳糖不耐癥，促 進有益菌的活動，有抗癌作用，對腸胃功能有調(diào)節(jié)作用。傳統(tǒng)酸奶主要通過乳酸菌的作用體 現(xiàn)其優(yōu)勢和功效，功效難以得到放大。
[0004] 隨著中國綜合國力的提高，中醫(yī)藥治療技術得到了迅速的推廣，但是，基礎研究不 足，治療缺乏客觀數(shù)據(jù)支持仍然是制約中醫(yī)藥走向國際化的瓶頸。應用現(xiàn)代生物學、儀器分 析及信息學等技術研究中醫(yī)藥的藥效、藥理、產(chǎn)品等科學問題具有極其重要的意義。鐵皮石 斛是一種名貴中藥材，是多年生草本植物，又稱黑節(jié)草(云南、貴州）、鐵皮蘭(通稱），為蘭科 石斛屬多年生附生草本植物的全草，是九大仙草之一，國家重點保護藥物，有"除痹下氣，補 五臟虛勞贏瘦，強陰，久服厚腸胃輕身延年"之效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對現(xiàn)有技術存在的缺陷，本發(fā)明的目的是在于提供一種益生菌活菌數(shù)量高且包 含鐵皮石斛活性組分的鐵皮石斛酸奶的制備方法，該制備方法具有發(fā)酵周期短，操作簡單， 成本低的優(yōu)點。
[0006] 本發(fā)明的另一個目的是在于提供所述鐵皮石斛酸奶的應用，所述的鐵皮石斛酸奶 對動物體內(nèi)腸道微生物及腸道酶活性具有較好的調(diào)節(jié)作用，對脾虛便秘及抗生素相關性腹 瀉治療方面具有很好的應用前景。
[0007] 為了實現(xiàn)上述技術目的，本發(fā)明提供了一種鐵皮石斛酸奶的制備方法，該方法包 括以下步驟：
[0008] 1)將全脂奶粉、水與蔗糖，或者鮮奶與蔗糖混合均勻，得到混合物I;
[0009] 2)所述混合物I置于20MPa~30MPa壓力條件下進行均質(zhì)處理，得到混合物II;
[0010] 3)在所述混合物II中加入所述混合物II質(zhì)量0.5 %~2 %的鐵皮石斛細粉，殺菌處 理，得到混合物III;
[0011] 4)將所述混合物III調(diào)節(jié)溫度至40~45°C后，加入由保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球 菌組成的混合菌種，攪拌均勻，加入到容器中密封，置于40~45°C下發(fā)酵3~4小時，再置于0 ~5 °C溫度下保溫10~12小時，冷卻、后熟，即得。
[0012] 優(yōu)選的方案，所述全脂奶粉與水的質(zhì)量比為1: (7~10)，所述蔗糖質(zhì)量為全脂奶粉 和水總質(zhì)量的8~12%。
[0013] 優(yōu)選的方案，所述鮮奶與蔗糖的質(zhì)量比為100: (8~12)。
[0014]優(yōu)選的方案，殺菌處理采用的溫度為90~100°C，殺菌處理的時間為8~20分鐘。 [0015]優(yōu)選的方案，保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌按等質(zhì)量比組合成混合菌種。
[0016] 較優(yōu)選的方案，所述混合菌種在所述混合物III中的加入量為所述混合物III質(zhì)量 的1%~2%〇
[0017] 進一步優(yōu)選的方案，所述混合菌種在所述混合物III中的接種量以保加利亞乳桿 菌和嗜熱鏈球菌總量為1.0 X 1〇6~9.9 X 106CFU/mL計量。
[0018] 優(yōu)選的方案，所述的鐵皮石斛細粉粒度為50~200微米。
[0019]優(yōu)選的方案，發(fā)酵終止酸度為70° T~75° T。
[0020] 本發(fā)明還提供了一種所述鐵皮石斛酸奶的應用，將所述鐵皮石斛應用于制備具有 治療脾虛便秘功效的藥膳食品。
[0021] 或者，將所述鐵皮石斛應用于制備具有治療抗生素相關性腹瀉功效的藥膳食品。
[0022] 本發(fā)明的技術方案主要是在酸奶制備過程中加入了適當濃度的鐵皮石斛，鐵皮石 斛在酸奶制備過程中所起的作用主要有兩方面，一方面作用于乳酸菌，對乳酸菌的新陳代 謝具有明顯的促進作用，能夠大大縮短酸奶制備過程中的發(fā)酵時間，提高酸奶中的益生菌 活菌數(shù)量，節(jié)約生產(chǎn)成本;另一方面，鐵皮石斛包含一些對人體有益成分，與鮮奶一起發(fā)酵， 乳酸菌與鐵皮石斛進行復配后，優(yōu)勢、功效協(xié)同增強;具有一定的保健功能，對動物腸道微 生物及動物腸道酶活性具有調(diào)節(jié)作用，特別是能夠與乳酸菌協(xié)同放大其功效，對動物脾虛 便秘以及抗生素相關性腹瀉等腸胃疾病具有較好的治療作用。
[0023] 相對現(xiàn)有技術，本發(fā)明的技術方案帶來的有益技術效果：
[0024] 1)本發(fā)明的鐵皮石斛酸奶的制備過程發(fā)酵周期短，操作簡單，成本低，且制得的鐵 皮石斛酸奶中益生菌活菌數(shù)量比傳統(tǒng)發(fā)酵方法制得的酸奶高1~3個數(shù)量級，可達到10 7~ 101()CFU/mL，且包含了鐵皮石斛的有效活性成分，具有保健功效。本發(fā)明的技術方案增加了 酸奶新品種，滿足廣大消費者不斷增加的需求。
[0025] 2)本發(fā)明的方法制備的鐵皮石斛酸奶益生菌活菌含量高，同時包含鐵皮石斛活性 成分，兩者具有協(xié)同增效作用，使其保健功能得以放大，對動物腸道微生物及動物腸道酶活 性具有調(diào)節(jié)作用，特別是對動物脾虛便秘及抗生素相關性腹瀉等腸胃疾病有較好的治療功 能；同時，減少了鐵皮石斛的用量，為消費者節(jié)約開支。
[0026] 3)本發(fā)明的鐵皮石斛酸奶在制備具有治療動物脾虛便秘及抗生素相關性腹瀉等 功效的食品方面，鐵皮石斛的用量少，相對單獨使用鐵皮石斛效果顯著，大大降低了鐵皮石 斛的使用成本。
【具體實施方式】
[0027] 以下實施例旨在進一步說明本
【發(fā)明內(nèi)容】
，而不是限制本發(fā)明權利要求的保護范 圍。
[0028] 實施例1
[0029] (1)在全脂奶粉中加入其8倍質(zhì)量的水，并加入占奶粉與水總質(zhì)量10 %的蔗糖，攪 拌均勻；
[0030] (2)將第（1)步的混合物在22MPa壓力下均質(zhì)處理；
[0031] (3)均質(zhì)處理后的混合物中加入0.8%鐵皮石斛細粉(50-200微米），在95°C下殺菌 10分鐘；
[0032] (4)殺菌后的混合物冷卻至45°C后加入1%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌（質(zhì)量比 約為1:1)混合菌種，其中保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的接種量為4.0 X 106CFU/mL，攪拌 后用無菌灌裝封口；
[0033] (5)在42°C溫度下發(fā)酵3小時，酸度為701~751時，終止發(fā)酵；
[0034] (6)再置于4°C下保溫10小時，冷卻后熟即可。
[0035]藥物鐵皮石斛常規(guī)細粉(50-200微米）由湖南龍石山鐵皮石斛基地有限公司提供。
[0036] 鐵皮石斛添加量對鐵皮石斛酸奶的影響如表1。
[0037] 表1鐵皮石斛添加量對鐵皮石斛酸奶的影響
[0038]
[0039] 實施例2
[0040] (1)在鮮牛奶中加入10%質(zhì)量的蔗糖，攪拌均勻；
[0041 ] (2)將第(1)步的混合物在30MPa壓力下均質(zhì)處理；
[0042] (3)均質(zhì)處理后的混合物中加入0.8%鐵皮石斛細粉(50-200微米），在100°C下殺 菌10分鐘；
[0043] (4)殺菌后的混合物冷卻至40°C后加入1%保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌（質(zhì)量比 約為1:1)混合菌種，其中保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的接種量為3.0 X 106CFU/mL，攪拌 后用無菌灌裝封口；
[0044] (5)在43°C溫度下發(fā)酵3.5小時，酸度為70° T~75° T時，終止發(fā)酵；
[0045] (6)再置于4°C下保溫11小時，冷卻后熟即可。
[0046] 藥物鐵皮石斛常規(guī)細粉(50-200微米)由湖南龍石山鐵皮石斛基地有限公司提供。
[0047] 鐵皮石斛添加量對鐵皮石斛酸奶的影響如表2。
[0048] 表2鐵皮石斛添加量對鐵皮石斛酸奶的影響
[0049]
[0051 ] 實施例3
[0052] 1、動物
[0053]清潔型昆明小鼠36只，雌雄各半，體質(zhì)量20± 2g，購自上海斯萊克斯實驗動物有限 公司。
[0054] 2、藥物及產(chǎn)品
[0055] 取番瀉葉（購于湖南中醫(yī)藥大學附屬一醫(yī)院，產(chǎn)自云南)500g，加10倍量沸水浸泡 1 Omin，濾過，將濾液在75 °C水浴中蒸發(fā)濃縮成100 % (1 g/mL生藥)的水煎液。4 °C冰箱保存?zhèn)?用。
[0056] 鐵皮石斛常規(guī)細粉(50-200微米）由湖南龍石山鐵皮石斛基地有限公司提供。稱取 適量鐵皮石斛常規(guī)細粉(50-200微米），加入100倍體積的水，按常規(guī)方法先煎煮后濃縮，制 備成鐵皮石斛傳統(tǒng)湯藥，濃度為〇. 1 g/mL，4 °C冰箱保存?zhèn)溆谩?br>[0057] 酸奶為湖南光明派派乳業(yè)有限公司生產(chǎn)，從市場購買。
[0058] 鐵皮石斛酸奶1為本發(fā)明利用全脂奶粉溶解后加鐵皮石斛進行生產(chǎn)(實施例1);
[0059] 鐵皮石斛酸奶2為本發(fā)明利用鮮牛奶加鐵皮石斛進行生產(chǎn)(實施例2)。
[0060] 3、培養(yǎng)基
[0061 ]細菌總數(shù):牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。大腸桿菌:EC肉湯固體培養(yǎng)基。乳酸菌:MRS瓊脂 培養(yǎng)基。雙歧桿菌:BBL培養(yǎng)基。
[0062] 4、動物分組
[0063] 36只清潔型昆明小鼠在適宜的環(huán)境下（室溫23°C-25°C，相對濕度50 %-70 %，清潔 安靜)適應性飼養(yǎng)2d后隨機分成6組，即正常組(6只）、模型組(6只）、鐵皮石斛藥組(6只）、酸 奶組(6只）、鐵皮石斛酸奶1組(6只）、鐵皮石斛酸奶2組(6只），雌雄各半。
[0064] 5、造模方法
[0065]模型組(6只）、鐵皮石斛藥組(6只）、酸奶組(6只）、鐵皮石斛酸奶1組(6只）、鐵皮石 斛酸奶2組(6只），首先進行造模，即連續(xù)7d灌胃番瀉葉水煎液0.4mL/(只*次），每天2次，正 常飲水喂食，造成脾虛模型;第8天起停用番瀉葉水煎液，控制飲食，采用饑飽失常方法延續(xù) 脾虛狀態(tài)，隔天喂低纖維飼料生大米4-8g，自由飲水1次，0.5h，連續(xù)8天;造模時間共15天。 正常組給予生理鹽水0.4mL/(只*次)灌胃7天后，正常飲水喂食飼養(yǎng)8天。
[0066] 6、治療方法
[0067]造模完成后，鐵皮石斛組、鐵皮石斛皮酸奶1組、鐵皮石斛酸奶2組和酸奶組分別灌 胃藥物或?qū)a(chǎn)品〇.25mL/(只?次），正常組和模型組分別灌胃等量的無菌水，每天2次，連 續(xù)7天。
[0068] 7、腸道內(nèi)容物的提取
[0069] 治療完成后，將小鼠頸椎脫臼處死后立即放于超凈工作臺上，無菌采集收集同組 小鼠小腸腸道內(nèi)容物通過無菌操作進行混勻。備用。
[0070] 8、小鼠腸道微生物的測定
[0071] 按組分別無菌操作稱取一定量的腸道內(nèi)容物放入裝有玻璃珠和無菌水的三角瓶 中，120rpm搖床振搖30min使微生物充分分散，選擇合適的稀釋度，采用混菌法和涂布法接 種到相應的培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細菌及大腸桿菌在培養(yǎng)24h后計數(shù)菌落，乳酸菌、 雙歧桿菌培養(yǎng)48h后計數(shù)菌落，每一個稀釋度重復3次，計算出每克腸道內(nèi)容物所含的菌數(shù)。 [0072] 9、小鼠腸道酶活性的測定
[0073]按組分別無菌操作稱取一定量的腸道內(nèi)容物放入離心管中，加適量蒸餾水稀釋 后，搖床120rpm振搖30min使腸道酶蛋白充分溶出，4000r/min離心5min，收集上清液即為粗 酶液，采用DNS比色法測定纖維素酶活、淀粉酶活和木聚糖酶活纖維素酶活性，蛋白酶活采 用福林酚法進行測定。纖維素酶活性以lg腸道內(nèi)容物在46°C作用30min生成lmg還原糖定義 為一個酶活單位U，淀粉酶活性以lg腸道內(nèi)容物在37°C作用60min生成lmg還原糖定義為一 個酶活單位U，木聚糖酶活以lg腸道內(nèi)容物在46°C作用60min生成lmg還原糖定義為一個酶 活單位U，蛋白酶活性以lg腸道內(nèi)容物在37°C作用40min生成lmg氨基酸定義為一個酶活單 位U。
[0074] 10、統(tǒng)計學分析
[0075]各分組所得計量數(shù)據(jù)采用平均值土標準差（i±s)表示，用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計 學分析。
[0076] 11、結(jié)果
[0077] 由表3可知，鐵皮石斛酸奶能夠提高小鼠體重變化及體重變化率，優(yōu)于酸奶和鐵皮 石斛。
[0078] 表3超微鐵皮石斛對脾虛便秘小鼠體重的影響
[0079]
[0080] 小鼠治療前后糞便的情況見表4。小鼠治療前后糞便的形狀大小、排便量的多少及 糞便的干硬度均發(fā)生了改變。造模前，各組小鼠排便量正常，糞便干燥呈褐色。造模后，正常 組小鼠糞便無變化，造模小鼠排便量減少，糞便顏色較深，呈黑色，糞便變小，接近米粒大 小，糞便干且硬。治療后，鐵皮石斛酸奶組小鼠的排便量及糞便情況均非常接近正常組，優(yōu) 于酸奶組和鐵皮石斛組，說明鐵皮石斛酸奶的功效強于傳統(tǒng)酸奶和鐵皮石斛單用。
[0081] 表4鐵皮石斛酸奶對脾虛便秘小鼠的療效
[0082]
[0083]注：" "表示排便量多少；"一"表示糞便的形狀大??；"+"表示糞便干且硬。
[0084] 鐵皮石斛酸奶對脾虛便秘小鼠腸道微生物的影響如表5。鐵皮石斛酸奶對腸道微 生物的影響優(yōu)于鐵皮石斛和傳統(tǒng)酸奶。
[0085] 表5鐵皮石斛酸奶對脾虛便秘小鼠腸道微生物的影響
[0086]
[0087] 鐵皮石斛酸奶對脾虛便秘小鼠腸道酶活性的影響如表6。鐵皮石斛酸奶對腸道酶 活性的影響優(yōu)于鐵皮石斛和傳統(tǒng)酸奶。
[0088] 表6鐵皮石斛酸奶對脾虛便秘小鼠腸道酶活性的影響
[0089]
[0090] 鐵皮石斛酸奶對脾虛便秘有較好的治療效果，優(yōu)于鐵皮石斛和傳統(tǒng)酸奶，通過調(diào) 整腸道微生物和酶活性來治療脾虛便秘。
[0091] 實施例4
[0092] 1、動物
[0093]清潔型昆明小鼠36只，雌雄各半，體質(zhì)量20±2g，購自上海斯萊克斯實驗動物有限 公司。
[0094] 2、藥物及產(chǎn)品
[0095] 抗生素混合溶液:硫酸慶大霉素注射液(2mL: 8萬單位/支，批號為5120106 )、頭孢 拉定膠囊(〇.25g/粒，批號為110804)，將硫酸慶大霉素注射液和頭孢拉定膠囊用無菌生理 鹽水配成濃度為62.5g/L的抗生素混合液（即6支慶大霉素與3粒頭孢拉定膠囊配制成混合 液），4°C冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>[0096]鐵皮石斛常規(guī)細粉(50-200微米）由湖南龍石山鐵皮石斛基地有限公司提供。稱取 適量鐵皮石斛常規(guī)細粉(50-200微米），加入100倍體積的水，按常規(guī)方法先煎煮后濃縮，制 備成鐵皮石斛傳統(tǒng)湯藥，濃度為〇. 1 g/mL，4 °C冰箱保存?zhèn)溆谩?br>[0097] 酸奶為湖南光明派派乳業(yè)有限公司生產(chǎn)，從市場購買。
[0098] 鐵皮石斛酸奶1為本發(fā)明利用全脂奶粉溶解后加鐵皮石斛進行生產(chǎn)(實施例1);
[0099] 鐵皮石斛酸奶2為本發(fā)明利用鮮牛奶加鐵皮石斛進行生產(chǎn)(實施例2)。
[0100] 3、培養(yǎng)基
[01 01 ]細菌總數(shù):牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。大腸桿菌:EC肉湯固體培養(yǎng)基。乳酸菌:MRS瓊脂 培養(yǎng)基。雙歧桿菌:BBL培養(yǎng)基。
[0102] 4、動物分組
[0103] 36只清潔型昆明小鼠在適宜的環(huán)境下（室溫23°C-25°C，相對濕度50 %-70 %，清潔 安靜)適應性飼養(yǎng)2d后隨機分成6組，即正常組(6只）、模型組(6只）、鐵皮石斛藥組(6只）、酸 奶組(6只）、鐵皮石斛酸奶1組(6只）、鐵皮石斛酸奶2組(6只），雌雄性各半。
[0104] 5、造模方法
[0105] 模型組(6只）、鐵皮石斛藥組(6只）、酸奶組(6只）、鐵皮石斛酸奶1組(6只）、鐵皮石 斛酸奶2組(6只），首先進行造模，參照文獻"譚周進，張華玲，周賽男，等.菌群失調(diào)小鼠腹瀉 造模及超微中藥干預過程中腸道微生物的變化.應用與環(huán)境生物學報，2013,19(3) :449-453"進行，即采用抗生素混合液每只每次0.35mL灌胃，每天2次，連續(xù)5d，糞便稀濕即可，正 常組給予無菌生理鹽水每只每次0.35mL灌胃。
[0106] 6、治療方法
[0107] 造模完成后，鐵皮石斛組、鐵皮石斛皮酸奶1組、鐵皮石斛酸奶2組和酸奶組分別灌 胃藥物或?qū)a(chǎn)品〇.25mL/(只?次），正常組和模型組分別灌胃等量的無菌水，每天2次，連 續(xù)7天。
[0108] 7、腸道內(nèi)容物的提取
[0109] 治療完成后，將小鼠頸椎脫臼處死后立即放于超凈工作臺上，無菌采集收集同組 小鼠小腸腸道內(nèi)容物通過無菌操作進行混勻。備用。
[0110] 8、小鼠腸道微生物的測定
[0111] 按組分別無菌操作稱取一定量的腸道內(nèi)容物放入裝有玻璃珠和無菌水的三角瓶 中，120rpm搖床振搖30min使微生物充分分散，選擇合適的稀釋度，采用混菌法和涂布法接 種到相應的培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細菌及大腸桿菌在培養(yǎng)24h后計數(shù)菌落，乳酸菌、 雙歧桿菌培養(yǎng)48h后計數(shù)菌落，每一個稀釋度重復3次，計算出每克腸道內(nèi)容物所含的菌數(shù)。
[0112] 9、小鼠腸道酶活性的測定
[0113] 按組分別無菌操作稱取一定量的腸道內(nèi)容物放入離心管中，加適量蒸餾水稀釋 后，搖床120rpm振搖30min使腸道酶蛋白充分溶出，4000r/min離心5min，收集上清液即為粗 酶液，采用DNS比色法測定纖維素酶活、淀粉酶活和木聚糖酶活纖維素酶活性，蛋白酶活采 用福林酚法進行測定。纖維素酶活性以lg腸道內(nèi)容物在46°C作用30min生成lmg還原糖定義 為一個酶活單位U，淀粉酶活性以lg腸道內(nèi)容物在37°C作用60min生成lmg還原糖定義為一 個酶活單位U，木聚糖酶活以lg腸道內(nèi)容物在46°C作用60min生成lmg還原糖定義為一個酶 活單位U，蛋白酶活性以lg腸道內(nèi)容物在37°C作用40min生成lmg氨基酸定義為一個酶活單 位U。
[0114] 10、統(tǒng)計學分析
[0115] 各分組所得計量數(shù)據(jù)采用平均值土標準差（i±s)表示，用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計 學分析。
[0116] 11、結(jié)果
[0117] 小鼠治療前后糞便的情況見表7。小鼠治療前后糞便顏色、含水量、黏度等均發(fā)生 變化。造模前，各組小鼠糞便干燥呈黑褐色，造模后，對照組糞便呈土黃色粒狀，用力擠壓時 仍黏在一起，糞便被壓扁卻未被壓碎、不粘手。造模小鼠糞便雖呈粒狀，但"稀濕"，水分含量 相對較多，顏色較深，黑色，可被輕易捏碎，易粘手。治療后，鐵皮石斛酸奶組小鼠糞便轉(zhuǎn)干， 顏色變淡，均接近正常組，優(yōu)于酸奶組和鐵皮石斛組，說明鐵皮石斛酸奶對抗生素相關性腹 瀉的功效強于傳統(tǒng)酸奶和鐵皮石斛單用。
[0118] 表7鐵皮石斛酸奶對抗生素相關性腹瀉小鼠的療效
[0119]
[0120] 注:+表示糞便干燥，一表示糞便稀濕。
[0121] 鐵皮石斛酸奶對抗生素相關性腹瀉小鼠腸道微生物的影響如表8。鐵皮石斛酸奶 對腸道微生物的影響優(yōu)于鐵皮石斛和傳統(tǒng)酸奶。
[0122] 表8鐵皮石斛酸奶對抗生素相關性腹瀉小鼠腸道微生物的影響
[0123]
[0124] 鐵皮石斛酸奶對抗生素相關性腹瀉小鼠腸道酶活性的影響如表9。鐵皮石斛酸奶 對腸道酶活性的影響優(yōu)于鐵皮石斛和傳統(tǒng)酸奶。
[0125] 表9鐵皮石斛酸奶對抗生素相關性腹瀉小鼠腸道酶活性的影響
[0126]
[0128]鐵皮石斛酸奶對抗生素相關性腹瀉有較好的治療效果，優(yōu)于鐵皮石斛和傳統(tǒng)酸 奶，通過調(diào)整腸道微生物和酶活性來治療抗生素相關性腹瀉。
【主權項】
1. 一種鐵皮石斛酸奶的制備方法，其特征在于:包括以下步驟： 1) 將全脂奶粉、水與蔗糖，或者鮮奶與蔗糖混合均勻，得到混合物I; 2) 所述混合物I置于20MPa~30MPa壓力條件下進行均質(zhì)處理，得到混合物II; 3) 在所述混合物II中加入所述混合物II質(zhì)量0.5%~2%的鐵皮石斛細粉，殺菌處理， 得到混合物III; 4) 將所述混合物III調(diào)節(jié)溫度至40~45°C后，加入由保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌組 成的混合菌種，攪拌均勾，加入到容器中密封，置于40~45 °C下發(fā)酵3~4小時，再置于0~5 °C溫度下保溫10~12小時，冷卻、后熟，即得。2. 根據(jù)權利要求1所述的鐵皮石斛酸奶的制備方法，其特征在于:所述全脂奶粉與水的 質(zhì)量比為1: (7~10)，所述蔗糖質(zhì)量為全脂奶粉和水總質(zhì)量的8~12% ;所述鮮奶與蔗糖的 質(zhì)量比為100:(8~12)。3. 根據(jù)權利要求1所述的鐵皮石斛酸奶的制備方法，其特征在于:所述殺菌處理采用的 溫度為90~100°C，殺菌處理的時間為8~20分鐘。4. 根據(jù)權利要求1所述的鐵皮石斛酸奶的制備方法，其特征在于:所述保加利亞乳桿菌 和嗜熱鏈球菌按等質(zhì)量比組合成混合菌種。5. 根據(jù)權利要求1~4任一項所述的鐵皮石斛酸奶的制備方法，其特征在于:所述混合 菌種在所述混合物ΠI中的加入量為所述混合物III質(zhì)量的1 %~2%。6. 根據(jù)權利要求5所述的鐵皮石斛酸奶的制備方法，其特征在于:所述混合菌種在所述 混合物III中的接種量以保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌總量為1.0 X 1〇6~9.9 X 106CFU/mL 計量。7. 根據(jù)權利要求1所述的鐵皮石斛酸奶的制備方法，其特征在于:發(fā)酵終止酸度為70° T ~75。T〇8. 根據(jù)權利要求1所述的鐵皮石斛酸奶的制備方法，其特征在于:所述的鐵皮石斛細粉 粒度為50~200微米。9. 權利要求1~8任一項所述制備方法制得的鐵皮石斛酸奶的應用，其特征在于:應用 于制備具有治療脾虛便秘功效的食品。10. 權利要求1~8任一項所述制備方法制得的鐵皮石斛酸奶的應用，其特征在于:應用 于制備具有治療抗生素相關性腹瀉功效的食品。
【文檔編號】A23C9/13GK106070609SQ201610388422
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月2日 公開號201610388422.X, CN 106070609 A, CN 106070609A, CN 201610388422, CN-A-106070609, CN106070609 A, CN106070609A, CN201610388422, CN201610388422.X
【發(fā)明人】譚愷
【申請人】譚愷