專利名稱：一種用于煙梗處理的枯草芽孢桿菌制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于煙用添加劑的技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，本發(fā)明涉及一種微生物制劑。同時(shí)還涉及所述微生物制劑的制備方法及其在煙草工業(yè)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著我國(guó)卷煙工藝技術(shù)水平的提高和煙草行業(yè)減害降焦工作的持續(xù)開展，膨脹梗絲在卷煙配方中的應(yīng)用更加廣泛。在配方中加入膨脹梗絲后，由于其填充值較高，可以減少卷煙煙絲用量，不僅節(jié)約卷煙成本，也可以起到降低卷煙焦油量的作用。然而，目前對(duì)煙梗資源綜合利用的技術(shù)水平較為落后，閑置煙梗浪費(fèi)大，梗絲在卷煙配方中的摻兌比例低，對(duì)煙葉的依存度高，卷煙配方成本較高，還未能更好地發(fā)揮其在卷煙產(chǎn)品中提質(zhì)降耗、減害降焦的效果。因此，改善梗絲質(zhì)量，提高梗絲的綜合利用率，對(duì)卷煙減害降焦工作和降低制造成本具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。另一方面，煙梗的主要成分是細(xì)胞壁物質(zhì)，約占40%以上，其包括木質(zhì)素、纖維素、 半纖維素和果膠等。這類物質(zhì)的熱裂解產(chǎn)物具有強(qiáng)烈的刺激性，雜氣重、嗆咳、澀口、香氣量少，嚴(yán)重影響了卷煙的吸味品質(zhì)，直接限制了梗絲在葉組配方中所占的比例。因此，降低梗絲燃燒產(chǎn)生的不良?xì)庀?，提高梗絲吸味是提高梗絲綜合利用率的關(guān)鍵問題。近期研究表明，通過微生物或生物酶處理具有明顯消除煙葉的青雜氣，減輕刺激性的作用，對(duì)煙葉香氣質(zhì)量的改善也有一定的幫助。利用木質(zhì)素降解菌和降解酶對(duì)煙梗進(jìn)行處理能減輕梗絲的木質(zhì)氣、刺激性。但現(xiàn)有技術(shù)中，關(guān)于添加微生物制劑直接作用于梗絲并提高梗絲抽吸品質(zhì)的研究鮮見報(bào)道。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，尚未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明內(nèi)容相同的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有梗絲處理技術(shù)的不足，提供一種新的微生物制劑。本發(fā)明的另一目的是提供所述微生物制劑的制備方法。本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供所述微生物制劑在梗絲處理中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。*除非另有說明，本發(fā)明所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。A.本發(fā)明提供了一種新的微生物制劑，該微生物制劑是采用下述方法制備獲得 取從烤煙葉面上分離得到細(xì)菌Van3的液體菌種，按照0. 的接種量接種于200ml的LB 液體培養(yǎng)基中，在37°C搖床，轉(zhuǎn)速180r/min振蕩培養(yǎng)至OD值=1. 5 ；3500rpm/min離心 lOmin，用無(wú)菌水洗滌沉淀，離心，最后用20mL無(wú)菌水振蕩均勻，使用時(shí)稀釋10倍即為所需的微生物制劑；其中，所述的細(xì)菌Van3的液體菌種，經(jīng)鑒定屬于枯草芽孢桿菌，該菌株命名為 Bacillus subtilis。B.本發(fā)明提供了一種所述微生物制劑的制備方法，該方法采用下述步驟(1)烤煙葉面上分離得到細(xì)菌Van3的液體菌種；(2)取液體菌種，按照0. 1 %的接種量接種于200ml的LB液體培養(yǎng)基中；
(3)在 37 "C 搖床，轉(zhuǎn)速 180r/min 振蕩培養(yǎng)至 OD 值=1. 5 ； 3500rpm/min 離心 IOmin ；(4)用無(wú)菌水洗滌沉淀，離心，然后用20mL無(wú)菌水振蕩均勻，使用時(shí)稀釋10倍即為菌劑。C.本發(fā)明提供了所述微生物制劑在梗絲處理中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下突出的優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明提供的微生物制劑能明顯提高梗絲的香氣量、愉悅性等品質(zhì)，雜氣、刺激性等下降，煙氣濃度和勁頭減少，余味變得舒適。(2)本發(fā)明成本低、可控性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單，便于實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。保藏牛物材料的說明本發(fā)明涉及的枯草芽孢桿菌Van3的菌株已經(jīng)保存在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；地址中國(guó).北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)；保藏日期2010年 08月16日；保藏號(hào)為CGMCC No. 4091。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下通過實(shí)施例及試驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā)明， 并不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1——試管斜面培養(yǎng)采用Luria-Bertani(LB)培養(yǎng)基，配方為蛋白胨10g，氯化鈉10g，酵母提取物 5g，瓊脂20g，蒸餾水定容到1000ml。121°C滅菌25分鐘，擺成斜面。接種Van35，28°C培養(yǎng) Mh，獲得試管種。實(shí)施例2——種子培養(yǎng)采用Luria-Bertani(LB)培養(yǎng)基，配方為蛋白胨10g，氯化鈉10g，酵母提取物 5g，蒸餾水定容到1000ml。121°C滅菌25分鐘。接種Van35試管種，培養(yǎng)12h，獲得液體菌種。實(shí)施例3——制備微生物制劑取液體菌種，按照0. 1 %的接種量接種于200ml的LB液體培養(yǎng)基中，在37°C搖床， 轉(zhuǎn)速180r/min振蕩培養(yǎng)至OD值=1. 5。3500rpm/min離心lOmin，用無(wú)菌水洗滌沉淀，離心，然后用20mL無(wú)菌水振蕩均勻，使用時(shí)稀釋10倍即為菌劑。應(yīng)用實(shí)施例——微生物制劑對(duì)梗絲的作用用制備好的微生物制劑對(duì)梗絲進(jìn)行處理，具體實(shí)驗(yàn)步驟如下1)稱取含水率在11% -13%的梗絲100g。2)取菌劑20ml，用小型噴霧器將其均勻地噴灑到IOOg梗絲上，密封，以防止水分蒸發(fā)。3)直接噴灑等量的無(wú)菌水作為對(duì)照。4)將樣品封入密封袋，以防止水分蒸發(fā)，30°C恒溫乩。5)將梗絲置于120°C烘箱中烘干，使含水率達(dá)到11^-13 ^
6)將梗絲于22°C相對(duì)濕度為60 %的恒溫恒濕箱平衡48h。7)取出部分煙絲，檢測(cè)主要化學(xué)成分含量和致香物質(zhì)。8)將剩余的煙絲手工卷制成煙支，樣品和對(duì)照隨機(jī)編號(hào)，由評(píng)吸專家組成的評(píng)吸小組進(jìn)行感官評(píng)吸。常規(guī)化學(xué)成分的檢測(cè)結(jié)果表明經(jīng)所述的微生物制劑處理后，梗絲的生物大分子化合物的含量發(fā)生了較大的改變，其中還原糖和總糖的含量顯著提高，煙堿含量下降。致香成分檢測(cè)結(jié)果表明經(jīng)微生物制劑處理后，梗絲的致香成分，包括β-大馬酮、香葉丙酮、苯甲醇、苯乙醇、糠醛、二氫獼猴桃內(nèi)酯、香蘭素等的含量較對(duì)照顯著提高。感官評(píng)吸結(jié)果表明梗絲經(jīng)微生物制劑處理后，雜氣、刺激性等下降，香氣量、愉悅性較對(duì)照顯著提升，煙氣濃度和勁頭減少，余味變得舒適。試驗(yàn)結(jié)果表明，該發(fā)明的微生物制劑具有明顯降低梗絲刺激性、掩蓋雜氣、細(xì)膩醇和煙氣的效果，能夠達(dá)到提高梗絲抽吸品質(zhì)，提高梗絲在卷煙中的摻配量的目的。
權(quán)利要求
1.一種微生物制劑，其特征在于，該微生物制劑是采用下述方法制備獲得取從烤煙葉面上分離得到細(xì)菌Van3的液體菌種為原料，按照0. 1 %的接種量接種于200ml的LB液體培養(yǎng)基中，在37°C搖床，轉(zhuǎn)速180r/min振蕩培養(yǎng)至OD值=1.5 ；3500rpm/min離心IOmin, 用無(wú)菌水洗滌沉淀，離心，然后用20mL無(wú)菌水振蕩均勻，使用時(shí)稀釋10倍即為所需的微生物制劑；其中，所述的細(xì)菌Van3的液體菌種，經(jīng)鑒定屬于枯草芽孢桿菌，該菌株命名為 Bacillus subtilis。
2.—種權(quán)利要求1所述的微生物制劑的制備方法，該方法采用下述步驟(1)烤煙葉面上分離得到細(xì)菌Van3的液體菌種；(2)取液體菌種，按照0.的接種量接種于200ml的LB液體培養(yǎng)基中；(3)在37°C搖床，轉(zhuǎn)速 180r/min 振蕩培養(yǎng)至 OD 值=1. 5 ；3500rpm/min 離心 IOmin ；(4)用無(wú)菌水洗滌沉淀，離心，最后用20mL無(wú)菌水振蕩均勻，使用時(shí)稀釋10倍即為所需菌劑。
3.一種權(quán)利要求1所述的微生物制劑在梗絲處理中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙用微生物制劑及其制備方法和應(yīng)用，屬于煙用添加劑的技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用生產(chǎn)菌株液體發(fā)酵培養(yǎng)后得到相應(yīng)的微生物制劑。所述生產(chǎn)菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis.Van3)，該菌株已于2010年8月16日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC No.4091。本發(fā)明的微生物制劑，能夠明顯提高梗絲的香氣量、愉悅性等品質(zhì)，雜氣、刺激性等下降，煙氣濃度和勁頭減少，余味變得舒適，從而進(jìn)一步提高梗絲在卷煙中的摻配量，達(dá)到減害降焦、降低卷煙生產(chǎn)成本的目的。
文檔編號(hào)A24B15/20GK102250812SQ201110199168
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月17日
發(fā)明者何靚, 唐麗, 廖頭根, 曾曉鷹, 段焰青, 王堅(jiān), 王家俊, 陳興, 黃立斌 申請(qǐng)人:紅云紅河煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司