金錢草多糖、提取純化方法及其作為煙草保潤劑的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金錢草多糖及其提取純化方法，具體為：將粉碎過的干燥金錢草用乙醚索氏提取后，殘渣揮干再用沸水進行提取，沸水提取液濃縮、離心，取上清液醇沉靜置，再次離心收集沉淀物，洗滌后用蒸餾水溶解，再加入1－2‰的木瓜蛋白酶于50±5℃水浴中放置2－4h，采用Sevage法脫除蛋白，活性炭脫色后減壓濃縮，冷卻后進行流水透析，透析結束后再次醇沉靜置，沉淀于60－70℃干燥得粗多糖。試驗證明：本發(fā)明金錢草多糖對卷煙具有很好的物理和感官保潤作用，并且可以降低卷煙的刺激性和雜氣，提高卷煙煙氣的圓潤感和舒適性，可作為一種性能優(yōu)良的煙草保潤劑在卷煙中應用。
【專利說明】金錢草多糖、提取純化方法及其作為煙草保潤劑的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于保潤劑【技術領域】，具體涉及一種金錢草多糖、提取純化方法及其作為煙草保潤劑的應用。
【背景技術】
[0002]當前，我國卷煙工業(yè)中主要采用甘油、丙二醇、山梨醇等多羥基物質作為保潤劑，使用此類保潤劑的主要目的在于維持加工過程中煙絲的含水率，提高煙絲的耐加工性，但上述保潤劑對成品卷煙含水率的維持和吸食舒適度的改善效果并不理想。
[0003]多糖是由大量單糖聚合而成，其大量的羥基與水分子形成氫鍵，可以使其具有較強的持水能力。目前，國內外尚未有將金錢草多糖作為煙草保潤劑在卷煙中應用的相關報道。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明目的在于提供一種金錢草多糖、提取純化方法及其作為煙草保潤劑的應用。
[0005]為實現上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案:
一種金錢草多糖的提取純 化方法，包括下述步驟:將粉碎過的干燥金錢草用乙醚索氏提取(一般按料液比Ig:5 - 8ml添加乙醚)后，殘渣揮干再用沸水進行提取，沸水提取液濃縮、離心，取上清液醇沉靜置，再次離心收集沉淀物，沉淀物洗滌后用蒸餾水溶解，再加入沉淀物重量I 一 2%。的木瓜蛋白酶于50±5°C水浴中放置2 — 4h，采用Sevage法脫除蛋白，活性炭脫色后減壓濃縮，冷卻后進行流水透析用以除去小分子雜質，透析結束后再次醇沉靜置，沉淀于60 - 70°C干燥得土黃色粗多糖。
[0006]進一步優(yōu)選，將粗多糖層析分離純化兩次，獲得精制多糖；兩次分離純化所用洗脫液分別為 0.5 mol/L NaCl 溶液和 0.05 mol/L NH4HCO3 溶液。
[0007]利用上述提取純化方法制備所得的金錢草多糖。
[0008]利用上述提取純化方法制備所得金錢草多糖作為煙草保潤劑的應用。
[0009]金錢草:原名馬蹄金，別名:過路黃、鏡面草、翠屏草、荷苞草、肉餛飩草、金鎖匙、連錢草等。本發(fā)明通過提取純化獲得了高純度的精制金錢草多糖，并將其進行物理保潤性能測試和內在感官質量評價，發(fā)現其對卷煙具有很好的物理和感官保潤作用，并且可以降低卷煙的刺激性和雜氣，提高卷煙煙氣的圓潤感和舒適性，可以作為一種性能優(yōu)良的煙草保潤劑在卷煙中應用，并確定了其在卷煙中的適宜用量。
[0010]和現有技術相比，本發(fā)明的有益效果:1)在金錢草多糖的提取過程中，利用醇沉、蛋白酶水解、Sevage除蛋白和透析除小分子相結合的方法，有效地降低了金錢草多糖中的雜質，為進一步的分離純化奠定基礎。2)采用凝膠色譜柱層析分離純化兩次，獲得高純度的精制金錢草多糖。整個提取純化過程操作簡便，使用的原料和試劑價廉易得。3)經試驗證明，本發(fā)明金錢草多糖對煙草制品的保潤效果明顯，因此具有顯著的工業(yè)應用價值和廣闊的推廣應用前景。
【具體實施方式】
[0011]以下通過實施例對本發(fā)明做進一步的說明，但本發(fā)明的保護范圍不限于此。
[0012]試驗所用的主要試劑和儀器:
乙醚、乙醇、丙酮(中國宿州化學試劑有限公司，分析純)，DEAE-Celluose和SephadexG200凝膠(美國sigma公司)，實驗用水為蒸餾水。
[0013]BS200SWE1型電子天平(感量:0.0OOlg，北京賽多麗絲天平有限公司)；R_215型旋轉蒸發(fā)儀(瑞士 BUCHI公司)；V-700真空泵(瑞士 BUCHI公司);DLSB-20/60°C低溫冷卻循環(huán)泵(上海美強儀器設備有限公司);KDM型調溫電熱套(山東華魯電熱儀器有限公司);85-2型恒溫磁力攪拌器(上海司樂儀器廠)、ZK-82B型電熱真空干燥箱(上海申光儀器儀表有限公司)，CHRIST凍干機(瑞士BUCHI公司)，TSKGEL G2000 PW高效凝膠色譜柱(美國Sigma公司)，Agilent LCllOO型高效液相儀及示差折光檢測儀(美國Agilent公司)。
[0014]實施例1
一種金錢草多糖的提取純化方法，包括下述步驟:將粉碎過的300g干燥金錢草用1800ml乙醚索氏提取2h用以除去油脂，殘渣揮干。揮干后的殘渣再用750ml沸水提取3次，合并3次所得的沸水提取液，濃縮、離心，取上清液，加上清液3倍體積量的無水乙醇進行醇沉，靜置過夜(12h)，再次離心收集沉淀物。沉淀物依次用300ml乙醇、300ml丙酮洗滌3次后用蒸餾水溶解，再加入沉 淀物重量1%。的木瓜蛋白酶于50°C水浴中放置2h，采用Sevage法脫除蛋白。加入Sg活性炭置于70°C水浴中加熱3h，過濾除去活性炭，減壓濃縮，自然冷卻后裝入透析袋中流水透析48h用以除去小分子雜質，透析結束后，再次加入透析后多糖溶液體積3倍量的無水乙醇進行醇沉，靜置過夜(12h)，沉淀于70°C干燥得17.6g粗多糖，收率為5.86%ο
[0015]取1.5g粗多糖用蒸懼水溶解后，用DEAE-CelIuose凝膠色譜柱層析分離(5.0 X 50cm)，以0.5mol/L NaCl溶液為流動相(即洗脫液)，流速為2.5ml/min，采用硫酸苯酚法對層析液顯色，收集主要色譜峰，凍干。然后將凍干所得固體用0.05mol/L NH4HCO3溶液溶解，用S印hadex G200凝膠色譜柱再次層析分離(5.0 X 50cm)，以0.05mol/L NH4HCO3溶液為流動相(即洗脫液)，流速為2.0ml/min，采用硫酸苯酚法對層析液顯色，收集主要色譜峰，凍干，即得355mg精制金錢草多糖固體，收率23.7%，經檢測LTl糖含量為95%。
[0016]實施例2
一種金錢草多糖的提取純化方法，包括下述步驟:將粉碎過的300g干燥金錢草用2000ml乙醚索氏提取4h用以除去油脂，殘渣揮干。揮干后的殘渣再用750ml沸水提取3次，合并3次所得的沸水提取液，濃縮、離心，取上清液，加上清液3倍體積量的無水乙醇進行醇沉，靜置12h，再次離心收集沉淀物。沉淀物依次用300ml乙醇、300ml丙酮洗滌3次后用蒸餾水溶解，再加入沉淀物重量2%。的木瓜蛋白酶于50°C水浴中放置4h，采用Sevage法脫除蛋白。加入Sg活性炭置于70°C水浴中加熱4h，過濾除去活性炭，減壓濃縮，自然冷卻后裝入透析袋中流水透析48h用以除去小分子雜質，透析結束后，再次加入透析后多糖溶液體積3倍量的無水乙醇(透析后溶液體積的3倍)進行醇沉，靜置過夜，沉淀于70°C干燥得16.8g粗多糖，收率為5.6%。[0017]取1.5g粗多糖用蒸餾水溶解后，用DEAE-CelIuose凝膠色譜柱層析分離(5.0 X 50cm)，以0.5mol/L NaCl溶液為流動相(即洗脫液)，流速為2.5ml/min，采用硫酸苯酚法對層析液顯色，收集主要色譜峰，凍干。然后將凍干所得固體用0.05mol/L NH4HCO3溶液溶解，用S印hadex G200凝膠色譜柱再次層析分離(5.0 X 50cm)，以0.05mol/L NH4HCO3溶液為流動相(即洗脫液)，流速為2.0ml/min，采用硫酸苯酚法對層析液顯色，收集主要色譜峰，凍干，即得349mg精制金錢草多糖固體，收率23.3%，經檢測LTl糖含量為94.2%。
[0018]應用試驗:實施例1制備所得精制金錢草多糖作為煙草保潤劑的應用研究
1、物理保潤性能測試
為考察金錢草多糖對卷煙的物理保潤性能，以黃金葉(大金圓)空白卷煙煙絲為載體，將金錢草多糖同甘油、丙二醇和山梨醇一起分別進行物理保潤性能對比測試研究，分別配制質量分數為5%的上述化合物水溶液。先將100g混勻的空白卷煙煙絲置于溫度22 ± I °C、相對濕度60±2%環(huán)境中平衡48h。然后等量稱取五份煙絲，每份100g，分別向煙絲中均勻施加4g上述化合物水溶液，對照空白樣為煙絲均勻施加4g水。然后將五份煙絲分別置于22± 1°C、相對濕度40±2%的環(huán)境下考察其解濕過程，并對即時含水率的變化進行分析，考察其物理保潤效果(即添加不同樣品后煙絲72h內的干基含水率變化)，結果見表1。
[0019]表1、金錢草多糖、甘油、丙二醇和山梨醇的物理保潤效果對比
【權利要求】
1.一種金錢草多糖的提取純化方法，其特征在于，包括下述步驟:將粉碎過的干燥金錢草用乙醚索氏提取后，殘渣揮干再用沸水進行提取，沸水提取液濃縮、離心，取上清液醇沉靜置，再次離心收集沉淀物，沉淀物洗滌后用蒸餾水溶解，再加入I 一 2%。的木瓜蛋白酶于50±5°C水浴中放置2 — 4h，采用Sevage法脫除蛋白，活性炭脫色后減壓濃縮，冷卻后進行流水透析，透析結束后再次醇沉靜置，沉淀于60 - 70°C干燥得粗多糖。
2.如權利要求1所述的金錢草多糖的提取純化方法，其特征在于，將粗多糖層析分離純化兩次，獲得精制多糖；兩次分離純化所用洗脫液分別為0.5 mol/L NaCl溶液和0.05mo I/L NH4HCO3 溶液。
3.利用權利要求1或2所述提取純化方法制備所得的金錢草多糖。
4.權利 要求3所述金錢草多糖作為煙草保潤劑的應用。
【文檔編號】A24B15/40GK104031161SQ201410292814
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月26日 優(yōu)先權日:2014年6月26日
【發(fā)明者】陳芝飛, 孫志濤, 蘆昶彤, 劉強, 郝輝, 趙永振, 周浩 申請人:河南中煙工業(yè)有限責任公司