本發(fā)明涉及卷煙
技術(shù)領域：
，更具體地，涉及一種醒酒卷煙及其制備方法。
背景技術(shù)：
：酒在祖國醫(yī)學中是被極其重視的，中醫(yī)學很早就發(fā)現(xiàn)酒能通血脈、行藥勢，不但用來炮制藥物，更把酒作為方劑中常用之品。在祖國醫(yī)學文獻中，有關(guān)酒的記載比比皆是，其中不少本草書籍更是從利弊兩方面對酒作了詳細闡述。古人言“酒乃水米造作，本應無害。然必由曲糵醞釀，或水火蒸熬，濕從燥化，故大熱有毒”。實際上，用來釀酒的谷物和水果經(jīng)發(fā)酵后，會轉(zhuǎn)變成乙醇、甲醇、醇油、氰化物、鉛、錳等物質(zhì)，其中醇油、甲醇、氰化物對人的身體危害很大，所以說酒是一把“雙刃劍”，飲酒可謂既有利于健康又有害于健康。日常生活中，酒確實是人們平常生活中不可或缺的，喜歡飲酒者眾。但隨著生活水平的不斷提高，人們的健康意識將越來越強，“酒與健康”問題已引起了廣泛的關(guān)注，過量飲酒有害健康是一個不可否認的事實。醉酒指的是急性乙醇中毒，因為乙醇在進入人體后將在2～3小時內(nèi)被人體全部吸收、由于過量飲酒、使乙醇在體內(nèi)吸收率大于其在肝臟內(nèi)氧化代謝率、因而大量的乙醇經(jīng)血液循環(huán)進入人體的大腦內(nèi)、作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、從而產(chǎn)生醉酒(張維嘉，2001)。人在短時間大量飲酒，可致急性中毒。輕者可見煩躁多語，惡心嘔吐，或失去自制。重者可見昏迷，面色蒼白，呼吸緩慢，體溫下降，有可能因呼吸衰竭而死亡(劉健等，2000)。長期持續(xù)過量飲酒，引起慢性酒精中毒，會引發(fā)多種軀體疾病，其中消化道潰瘍最普遍，其次是肝臟疾病，腦血管意外，小腦共濟失調(diào)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)病變。有資料表明食道癌、肝癌發(fā)病率的升高似乎也與飲酒有關(guān)?？梢?，過量次酒，對人體器官有著廣泛的刺激性并產(chǎn)生危害性。中國擁有極其豐富的中草藥資源，又擁有完善的祖國醫(yī)學理論體系，所以應該充分利用這一得天獨厚的資源優(yōu)勢和中醫(yī)獨一無二的理論體系，探索研究中草藥在保護飲酒人士健康方面的重要作用。煙草本身是一種藥用植物，是茄科植物煙草(Nicotianatabacum)的全草。中國古代吸煙最早始于防治疾病，后來才演變?yōu)橐环N嗜好?！侗静輩R言》載:“煙草，通利九竅之藥也，能御霜露風雨之寒，辟山蠱鬼邪之氣……如氣滯、寒滯、飲滯，一切寒凝不通之病，吸此即通”；正因為煙草屬于藥用植物，故包含中草藥在內(nèi)的藥用植物與煙草對人體的效應存在兼容、互補之處，如：1990年2月9日的《山西日報》載：“大寧縣曲峨中心醫(yī)院醫(yī)生黨清泉，將中草藥與煙絲混合，治療時，點燃配方吸上幾口，每日5次治療頸淋巴結(jié)核病，效果顯著，治愈率95％以上”。在《景岳全書》載：“煙草，味辛氣溫，性微熱?！錃馍闲校瑒t溫心、肺，下行則溫肝、脾、腎。煙草用以治表，善逐一切陰邪寒毒，山嵐瘴氣風濕，邪閉膝理，筋骨疼痛，誠頃刻取效之神劑；用以治里，善壯胃氣、進飲食、祛寒滯陰濁、消膨脹宿食、止嘔吐霍亂、除積諸蟲、解郁結(jié)、止疼痛”。豆科葛根(RadixPuerariae)味甘辛涼，入脾，胃經(jīng)，其氣輕清，升陽解肌，生津除煩止渴，降逆止嘔，有很強的解酒作用。葛根中的解酒成份為異黃酮類葛根素及大豆甙元等，是乙醇代謝的增強劑，可以提高人體對乙醇的耐受量，降低血中乙醇含量。另有學者對大鼠連用乙醇(8g/kg·d)30、60及90d后的多項生理指標進行檢驗，發(fā)現(xiàn)其肝臟指數(shù)增大，肝細胞勻漿中的ADH、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GSTs)活性降低，病理學檢驗發(fā)現(xiàn)乙醇使肝細胞出現(xiàn)脂肪變性、片狀顆粒變性及點狀細胞壞死，服用葛根水提液可以對抗上述現(xiàn)象的發(fā)生。豆科葛花(FlosPuerariae)歷代多被作為解酒之專藥而極少用于其他疾病的治療。國內(nèi)學者對葛花醇提物進行了實驗。探討了葛花醇提物對大鼠酒精性肝損傷的預防作用研究，結(jié)果顯示大鼠的肝組織脂肪變性和炎性浸潤均較模型組有所減輕，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)較模型組顯著降低，總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量較模型組顯著升高，肝組織超氧化物歧化酶(SOD)活性較模型組顯著升高，丙二醛(MDA)含量顯著低于模型組，谷胱甘肽(GSH)含量較模型組也明顯升高。研究表明，葛花醇提物具有明顯預防酒精性肝損傷的作用。鼠李科枳椇子(Hoveniadulcis)味甘酸性平，入心、脾經(jīng)，除煩止渴止嘔，也是傳統(tǒng)的解酒藥物。研究表明，枳椇子提取物可降低酒后血中乙醇濃度，增強肝中乙醇脫氫酶ADH活性，其機制可能是抑制了消化道對乙醇的吸收，加強乙醇在胃腸道的首過效應，從而降低血中乙醇濃度，減輕乙醇對人體神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等損害，起到有效的降醇解酒作用?，F(xiàn)有技術(shù)通常將枳椇子、葛花、葛根中的一種、兩種或三種與其他中草藥相配合得到解酒組合物。未見將且只將枳椇子、葛花、葛根三味藥材君臣為伍的相關(guān)解酒應用的研究報道?！皩е兴幦霟?，不失煙之本”，是為藥用植物用于卷煙減害提供了一條在世界范圍內(nèi)獨具特色的新途徑，將成為中式卷煙的特色，可充分發(fā)揮本草特色、低害特色、中國特色。中國有至少3.5億以上的煙民，其中不少又同時是飲酒愛好者。如何將煙草結(jié)合現(xiàn)有中草藥，發(fā)揮煙劑作為中藥治病的一種有效形式的內(nèi)涵，在不失煙草特色和良好吸味、吃味等本質(zhì)前提下，結(jié)合中草藥在解酒醒酒方面有效運用，是目前面臨的技術(shù)難題。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對煙草結(jié)合中草藥尤其是枳椇子、葛花、葛根在解酒方面聯(lián)合應用的技術(shù)不足，提供一種醒酒卷煙。本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問題是提供所述醒酒卷煙的制備方法。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：提供一種醒酒卷煙，是在煙絲中添加葛花、葛根和/或枳椇子絲；或者在煙絲中添加葛花、葛根和/或枳椇子乙醇提取物制得。優(yōu)選地，所述醒酒卷煙是在煙絲中添加葛花、葛根和枳椇子絲；或者在煙絲中添加葛花、葛根和枳椇子乙醇提取物制得。進一步優(yōu)選地，本發(fā)明醒酒卷煙是在煙絲中添加葛花、葛根和枳椇子乙醇提取物制得。更優(yōu)選地，所述葛花、葛根和枳椇子絲的質(zhì)量比例為1:1:1。更優(yōu)選地，所述枳椇子的乙醇提取物、葛花的乙醇提取物和葛根的乙醇提取物的質(zhì)量比例為1:1:1。優(yōu)選地，所述葛花、葛根和/或枳椇子絲的添加量為煙絲質(zhì)量的20％～55％確定。進一步優(yōu)選地，所述葛花、葛根和/或枳椇子絲的粗細按照確定。優(yōu)選地，所述葛花、葛根和/或枳椇子乙醇提取物的添加量為煙絲質(zhì)量的1‰～2‰確定。優(yōu)選地，所述枳椇子的乙醇提取物是用乙醇經(jīng)索式提取器回流提取枳椇子，4個小時得到提取液，提取溫度為90℃；將提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至膏狀，再加入無水乙醇將水分帶出，濃縮至粉末得到。所述粉末4℃保存。進一步優(yōu)選地，所述枳椇子經(jīng)65℃烘干后粉碎，過50目篩再用乙醇提取。優(yōu)選地，所述葛花的乙醇提取物是用乙醇經(jīng)索式提取器回流提取葛花4個小時，得到提取液，提取溫度為90℃；將提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至膏狀，再加入無水乙醇將水分帶出，濃縮至粉末得到。所述粉末4℃保存。進一步優(yōu)選地，所述葛花經(jīng)65℃烘干后粉碎，過50目篩再用乙醇提取。優(yōu)選地，所述葛根的乙醇提取物是用乙醇經(jīng)索式提取器回流提取葛根4個小時，得到提取液，提取溫度為90℃；將提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至膏狀，再加入無水乙醇將水分帶出，濃縮至粉末得到。所述粉末4℃保存。進一步優(yōu)選地，所述葛根經(jīng)65℃烘干后粉碎，過50目篩再用乙醇提取。優(yōu)選地，所述乙醇提取采用的乙醇的體積比濃度為75％。優(yōu)選地，所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮條件均為60rpm下，濃縮操作溫度為50℃。優(yōu)選地，所述再加入無水乙醇將水分帶出是加入少量的無水乙醇，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀再60rpm、溫度為50℃的濃縮條件下濃縮，帶出水分。本發(fā)明同時提供所述醒酒卷煙的應用，所述醒酒卷煙于喝酒前或喝酒后使用，可降低飲酒者全血乙醇濃度，顯著縮短醉酒時間。本發(fā)明同時提供了所述醒酒卷煙的制備方法，包括以下步驟：S1.準備葛花、葛根和/或枳椇子絲或其乙醇提取物粉；將煙葉切絲；S2.將葛花、葛根和/或枳椇子絲與煙絲混合，卷制而成醒酒卷煙；或?qū)⒏鸹?、葛根?或枳椇子的乙醇提取物粉用去離子水溶解后噴灑在煙絲上，烘干，卷制而成醒酒卷煙。優(yōu)選地，步驟S2所述去離子水的用量按照20g枳椇子、葛花和/或葛根的乙醇提取物粉用3mL去離子水溶解。本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明以枳椇子、葛花和/或葛根與煙絲為伍，獲得了顯著、穩(wěn)定的醒酒應用技術(shù)效果，“導中藥入煙，不失煙之本”，尤其適合于“煙酒不分家”的消費者。本發(fā)明優(yōu)選將三種中草藥按照特定比例與煙絲相配。本發(fā)明從藥物的效果相關(guān)性及功能仔細研究，以“上下分消其濕”立法，以葛花為君藥，其性辛甘平，入脾胃二經(jīng)，功能解表化濕、并取“火郁發(fā)之”之意，以化郁熱，枳椇子為君藥，其性甘平，入心、脾經(jīng)，利尿祛濕，除煩止渴，最能解酒毒；葛花、枳椇子為君藥，一個解表化濕，一個利水祛濕，發(fā)汗與利尿并舉，與李東垣“上下分消其濕”的解酒大法相合，也與方劑統(tǒng)計的結(jié)果相吻合，并且在現(xiàn)代的藥理研究中，這二味藥物皆有明確的解酒作用，本發(fā)明將它們作為君藥是合適的；葛根甘辛涼，助葛花發(fā)汗解酒，并能健脾益氣，預防酒毒傷脾，用以做臣藥。在此基礎上，本發(fā)明進一步將三者按科學的比例進行提取處理后精確配伍，發(fā)揮協(xié)同作用，產(chǎn)生了“1+1>2”的顯著增效作用，成功獲得了組分簡單明了、技術(shù)效果優(yōu)良的醒酒卷煙。綜上所述，本發(fā)明創(chuàng)造性地在卷煙中加入具有醒酒功能的葛花、葛根和/或枳椇子，選定的中草藥與煙草結(jié)合應用后在醒酒方面具有顯著的效果。但是本發(fā)明進一步要解決的技術(shù)關(guān)鍵是顏色、吃味、香氣等方面的問題，使本發(fā)明卷煙不是用藥味取代卷煙香氣。因此在研制過程中，盡管所選定添加的中草藥結(jié)合煙絲有顯著的醒酒醫(yī)療效果，但由于葛花、葛根和/或枳椇子葉片小，與煙葉混合在顏色、吃味方面都有較多的問題需要解決，實施起來比較復雜。經(jīng)過反復試驗，本發(fā)明提供最優(yōu)選的技術(shù)方案是采取將中草藥原料經(jīng)乙醇提取后濃縮成浸膏乃至粉末，再用到配方中去的辦法。這樣一方面可以控制加入藥液的濃度和比例，達到醫(yī)療效果，另一方面也可以改進吃味，協(xié)調(diào)香氣，達到了卷煙的品質(zhì)要求。附圖說明圖1HPLC測定葛根素標準品中葛根素含量的結(jié)果。圖2HPLC測定本發(fā)明葛根提取物粉末中葛根素含量的結(jié)果。圖3HPLC測定鳶尾苷標準品中鳶尾苷含量的結(jié)果。圖4HPLC測定本發(fā)明葛花提取物粉末中鳶尾苷含量結(jié)果。圖5HPLC測定槲皮素標準品中槲皮素含量的結(jié)果。圖6HPLC測定本發(fā)明枳椇子提取物粉末中槲皮素含量結(jié)果。圖7不同配比解酒組合物對小鼠耐受時間的影響結(jié)果(圖中*表示與陰性對照相比，P<0.05)。圖8不同配比解酒組合物對小鼠醉酒時間的影響結(jié)果。圖9不同配比解酒組合物對小鼠耐受時間的影響結(jié)果(圖中*表示與陰性對照相比，P<0.05)。圖10不同配比解酒組合物對小鼠醉酒時間的影響結(jié)果。圖11不同配比解酒組合物對小鼠耐受時間的影響結(jié)果。圖12不同配比解酒組合物對小鼠醉酒時間的影響結(jié)果。圖13不同配比解酒組合物對小鼠耐受時間的影響結(jié)果。圖14不同配比解酒組合物對小鼠醉酒時間的影響結(jié)果(圖中*表示與陰性對照相比，P<0.05)。圖15不同配比解酒組合物對小鼠醉酒時間的影響結(jié)果。圖16不同配比解酒組合物對小鼠醉酒時間的影響結(jié)果(*表示與陰性對照相比，P<0.05；**表示與陰性對照相比，P<0.01)。圖17解酒組合物不同劑量對小鼠耐受時間和醉酒時間的影響結(jié)果(*表示與陰性對照相比，P<0.05)。圖18標準品樣品色譜圖。圖19待測樣品的色譜圖。圖20各組小鼠血中乙醇濃度—時間曲線圖。圖21各組小鼠肝中乙醇脫氫酶活性變化曲線圖。圖22實驗小鼠的肝組織切片圖。圖23酒精性肝損傷小鼠的死亡情況。圖24醒酒煙劑先酒后煙對小鼠耐受時間和醉酒時間的影響結(jié)果。圖25醒酒煙劑先煙后酒對小鼠耐受時間和醉酒時間的影響結(jié)果。圖26標準品的氣相色譜圖。圖27實施例5待測樣品的氣相色譜圖。圖28各組小鼠血中乙醇濃度—時間曲線。圖29自制卷煙對小鼠血中乙醇脫氫酶—時間曲線。圖30不同劑量中草藥醒酒煙劑先酒后煙對小鼠耐受時間和醉酒時間的影響結(jié)果(*表示與對照組相比，P<0.05；**表示與對照組相比，P<0.01)。圖31不同劑量中草藥醒酒煙劑先煙后酒對小鼠耐受時間和醉酒時間的影響結(jié)果(*表示與對照組相比，P<0.05；**表示與對照組相比，P<0.01)。圖32標準品的氣相色譜圖。圖33實施例6待測樣品的氣相色譜圖。圖34各組小鼠血中乙醇濃度—時間曲線。圖35各組小鼠血中乙醇脫氫酶—時間曲線。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例進一步說明本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明實施例采用的方法均為本領域常規(guī)方法。本發(fā)明擬在中藥解酒組合物(由葛花、葛根、枳椇子提取物組成)的工作基礎上，利用動物醉酒模型研究該中草藥提取物的解酒特性。實施例1動物醉酒實驗模型建立為使動物醉酒及解酒實驗的結(jié)果具有科學性和重復性，本建立實驗用酒劑量與動物醉酒現(xiàn)象關(guān)系的動物醉酒實驗模型，用于對解酒物質(zhì)的研究與評價。所建模型的具體內(nèi)容主要是確定適宜的小鼠醉酒灌胃劑量和確定小鼠致死灌胃劑量。1實驗材料SPF級昆明小鼠，體重20～25g，雄性，上海斯萊克實驗動物有限責任公司(購于第二軍醫(yī)大學實驗動物中心)。2主要試劑與儀器56°紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)，小鼠灌胃器，一毫升注射器，計時器，每小格1cm的鐵絲網(wǎng)(用于攀附實驗)。3實驗方法3.1實驗動物小鼠購得后，先在動物房適應3天。動物室溫度25℃，濕度為60％，通風良好。小鼠采用分籠詞養(yǎng)，每天早晚各喂食(飼料)一次，自由進食和飲水。3天后開始正式實驗。3.2觀察指標及判斷方法以如下觀察指標來判斷小鼠醉酒狀態(tài)，建立動物醉酒模型，并確定最佳灌胃濃度：(1)醉酒指標：以小鼠爬行不穩(wěn)、后腹拖地、毛松散、閉眼不動為醉酒指標(2)醒酒指標：以小鼠活動自如、靈活、精神、毛滑順為醒酒指標。(3)睡眠潛伏期：又稱耐受時間，指從灌酒至入睡的時間。(4)睡眠(醉酒)時間：又稱維持時間，指從入睡到蘇醒的時間。(5)攀附時間：即小鼠攀附在網(wǎng)上的時間，指將小鼠放在網(wǎng)上到小鼠從網(wǎng)上掉落的時間段。其中通過翻正反射判斷小鼠是否醉酒，正常小鼠是不能接受翻轉(zhuǎn)的，但醉酒的小鼠可以將其任意翻轉(zhuǎn)。據(jù)此，可用來判斷小鼠是否醉酒。故，實驗用小鼠是否醉酒以翻正反射是否消失為標準。小鼠灌酒后，將其輕輕放在動物箱內(nèi)，若小鼠保持背向下的姿勢30s以上，則認為其醉酒，醉酒后如果翻正反射恢復即為醒酒。3.3動物醉酒模型的建立70只昆明小鼠，實驗前將動物禁食12h，將小鼠隨機分為7組，每組10只，分別按0.13mL/10g、0.14mL/10g、0.15mL/10g、0.16mL/10g、0.17mL/10g、0.18mL/10g、0.19mL/10g灌胃。灌胃后小鼠立即放在垂直的鐵絲網(wǎng)上，記錄攀附時間，耐受時間，醉酒時間，醉酒只數(shù)，死亡只數(shù)。4實驗結(jié)果與分析將小鼠分7組，分別灌胃0.13mL-0.19mL白酒/10g體重，考察小鼠攀附時間、耐受時間、醉酒時間、醉酒率、死亡率與醉酒灌胃劑量的關(guān)系，結(jié)果見表1。表1不同劑量酒精灌胃對小鼠的影響綜合以上指標：白酒灌胃量達到0.18mL/10g以上劑量即有小鼠發(fā)生急性酒精中毒死亡，0.19mL/10g組醉酒致死率較高，而其他指標與0.17～0.18mL/10g組相比不明顯；在0.13～0.18mL/10g范圍內(nèi)，隨著灌胃體積的增加，小鼠的醉酒時間，醉酒率和死亡率都明顯增高；耐受時間降低。而攀附時間與灌胃劑量不成相關(guān)性。根據(jù)醉酒模型和后續(xù)實驗的需要，選擇0.17mL/10g組作為后續(xù)實驗的灌胃體積，該組的耐受時間和醉酒時間作為后續(xù)實驗的參考時間。實施例2枳椇子、葛花、葛根提取物的制備2.1中草藥原料葛根、葛花、枳椇子，分別購自上海雷允上北區(qū)藥業(yè)股份有限公司中達大藥房。2.2主要試劑與儀器無水乙醇(國藥集團化學試劑有限公司)、75％乙醇、去離子水(MiliQ純水)、乙腈、甲醇、0.1％磷酸、粉碎機、50目篩、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、索式提取器、65℃烘箱。葛根素標準品制備：精密稱取葛根素標準品(購自上海源葉生物科技有限公司)1.97mg，60℃干燥8h，用30％乙醇稀釋至2mL，取1mL定容于10mL量瓶中，即得0.0985mg/mL葛根素對照品溶液。鳶尾苷標準品制備：精密稱取鳶尾苷標準品(購自上海源葉生物科技有限公司)1.03mg，60℃干燥8h，用80％乙醇稀釋至2mL，即得0.515mg/mL鳶尾苷對照品溶液。槲皮素標準品制備：精密稱取槲皮素標準品(購自上海源葉生物科技有限公司)1.025mg，60℃干燥8h，用30％乙醇稀釋至1mL，即得1.025mg/mL葛根素對照品溶液。2.3實驗方法2.3.1中草藥復方活性物質(zhì)的提取：(1)粉碎：葛花、葛根、枳椇子65℃烘干，用粉碎機粉碎。(2)葛花有效成分的提?。悍Q取過50目篩的葛花粉末約20g，精密稱定；用75％乙醇或水索式提取器回流提取四個小時，溫度為90℃。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮提取液至膏狀，加入無水乙醇將水分帶出，濃縮至粉末，4℃保存。(3)葛根有效成分的提?。悍Q取過50目篩的葛根粉末約20g，精密稱定；用75％乙醇或水加熱回流提取四個小時，溫度為90℃。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮提取液至膏狀，加入無水乙醇將水分帶出，濃縮至粉末，4℃保存。(4)枳椇子有效成分的提?。悍Q取過50目篩的枳椇子粉末約20g，精密稱定；用75％乙醇或水加熱回流提取四個小時，溫度為90℃。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮提取液至膏狀，加入無水乙醇將水分帶出，濃縮至粉末，4℃保存。2.3.2高效液相色譜測定有效成分:⑴葛根素提取物有效成分的測定①色譜條件:固定相：K.romasilC18鍵合硅膠柱(250mm×4.6mm，5m)，流動相：甲醇一水(25:75)，流速：1.0mL/min，溫度：30℃，波長：250nm。②樣品溶液的制備：精密稱取葛根提取物1.91mg，用30％乙醇稀釋至2mL，得到樣品溶液。③樣品測定：分別精密吸取葛根素標準品溶液和樣品溶液各30ul，外標法計算有效成分的含量。⑵葛花提取物有效成分的測定①色譜條件:固定相：K.romasilC18鍵合硅膠柱(250mm×4.6mm，5m)，流動相：乙腈一水(0min，15:85；30min，50：50；35min，50:50；36min，15:85)，流速：1.0mL/min，溫度：30℃，波長：265nm。②樣品溶液的制備：精密稱取葛花提取物6.38mg，用80％乙醇稀釋至2mL，得到樣品溶液。③樣品測定：分別精密吸取鳶尾苷標準品溶液和樣品溶液各30ul，外標法計算有效成分的含量。⑶枳椇子提取物有效成分的測定①色譜條件:固定相：K.romasilC18鍵合硅膠柱(250mm×4.6mm，5m)，流動相：乙腈—0.1％磷酸(50:50)，流速：1.0mL/min，溫度：30℃，波長：370nm。②樣品溶液的制備：精密稱取枳椇子提取物5.023mg，用30％乙醇稀釋至1mL，得到樣品溶液。③樣品測定：分別精密吸取槲皮素標準品溶液和樣品溶液各30ul，外標法計算有效成分的含量。3測定結(jié)果及分析3.1提取溶劑的選擇和比較葛根中的有效成份主要是異黃酮類如葛根素、大豆苷、大豆苷元等，其中還含有蛋白質(zhì)、生物堿以及大量的纖維素、淀粉、果膠等多糖物質(zhì)，它們與異黃酮類物質(zhì)在水、乙醇、甲醇、丙酮等有機溶劑溶解度有所不同。但從經(jīng)濟、安全等因素考慮，本次實驗選擇水和75％濃度的乙醇作為溶劑。表2溶劑對葛根、葛花和枳椇子浸提效果的影響由表2可以看出水作為溶劑對葛根、葛花及枳椇子進行總異黃酮的提取率較低，且固液分離比較困難，費時費力，原因是藥物中的蛋白質(zhì)、生物堿、淀粉、纖維素、果膠等在水中有一定溶解度，造成溶液黏稠，分離困難，雜質(zhì)增多。用一定濃度的乙醇作為溶劑，可以使葛根中的非異黃酮類成分(雜質(zhì))部分沉淀，所以醇提法葛根、葛花及枳椇子總黃酮的提取率相對較高，其固液分離也容易很多，并且乙醇作為溶劑成本低，安全性大，利于食品及藥品工業(yè)生產(chǎn)。因此醇提法是較好的一種方法，乙醇也就成為首選提取溶劑。3.2總黃酮粗提物中有效成分測定(1)葛根提取物有效成分的測定：見圖2所示，20g葛根中得到1.1395g提取物粉末，葛根素的含量為0.2237g；每g葛根中葛根素的含量為1.12％，每g提取物粉末中葛根素含量19.63％。標準品中葛根素測定結(jié)果見圖1所示。(2)葛花提取物有效成分的測定：見圖4所示，20g葛花中得到提取物粉末2.6278g，鳶尾苷的含量為0.2880g；每g葛花中鳶尾苷的含量為1.44％，每g提取物粉末中鳶尾苷含量為10.96％。標準品中鳶尾苷測定結(jié)果見圖3所示。(3)枳椇子提取物有效成分測定：見見圖6所示，20g枳椇子得到提取物粉末1.4708g，槲皮素的含量為3.6476mg；每g枳椇子中槲皮素含量0.0182％，每g提取物粉末中槲皮素含量為0.2480％。標準品中槲皮素測定結(jié)果見圖5所示。經(jīng)過3次(重復)提取及有效成分的HPLC含量測定，結(jié)果穩(wěn)定，并建立了葛根、葛花、枳椇子最佳的、效果最穩(wěn)定的提取工藝為：65℃烘干，粉碎機粉碎→50目篩過篩→稱量→75％乙醇，索式提取器回流提取，4h，90℃→旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，60rpm，50℃→膏狀→少量無水乙醇，多次→旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，60rpm，50℃→粉末狀提取物有效成分，4℃保存。實施例3最佳增效配比實驗1供試材料昆明小鼠(KM小鼠)，體重20～25g，雄性，上海斯萊克實驗動物有限責任公司(購于第二軍醫(yī)大學實驗動物中心)。56度紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)、去離子水、小鼠灌胃器、一毫升注射器、EP管、移液槍，槍頭。陽性對照品玉米肽溶液的制備：取玉米肽0.9g溶于3mL去離子水中，得到0.3g/mL的玉米肽溶液；陽性對照品海王金樽溶液的制備：取海王金樽3片(上海德康醫(yī)藥商店)，粉碎，溶于4mL去離子水中，得到0.75g/mL的海王金樽溶液。2動物及其管理小鼠購得后，先在動物房適應3天。動物室溫度25℃，濕度為60％，通風良好。小鼠采用分籠詞養(yǎng)，每天早晚各添加飼料一次，自由進食和飲水。3天后開始正式:實驗。3中草藥解酒組合物的配比將20g枳椇子、葛花、葛根提取物粉末分別用3mL去離子水溶解，按所需不同配比制成不同實驗組溶液：(1)葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)：用移液槍各取1mL置于5mLEP管里，充分混勻即得；(2)葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶2)：用移液槍取葛花0.5mL，葛根枳椇子各1mL置于5mLEP管里，充分混勻即得；(3)葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶1)：用移液槍取葛根1mL，葛根、枳椇子各0.5mL置于5mLEP管里，充分混勻即得；(4)葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶2)：用移液槍取枳椇子1mL，葛根、葛花各0.5mL置于5mLEP管里，充分混勻即得；(5)葛根∶枳椇子(1∶1)的制備：用移液槍取葛根和枳椇子各1mL，置于5mLEP管里，充分混勻即得；(6)葛根∶葛花(1∶1)的制備：用移液槍取葛根和葛花各1mL，葛根置于5mLEP管里，充分混勻即得。4實驗方法中草藥醒酒復方不同配比動物實驗(1)取昆明小鼠32只，隨機分為陰性對照組、陽性對照組(0.75g/mL海王金樽溶液)、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶2)，共4組，每組8只，實驗前禁食12h，稱重，記錄重量，陰性對照組灌胃0.1mL去離子水，陽性對照組和給藥組各灌胃相應的藥物0.1mL/只，半小時后每組灌胃56℃紅星二鍋頭0.17mL/10g，觀察并記錄小鼠的耐受時間、醉酒時間、醉酒只數(shù)，死亡只數(shù)。(2)取昆明小鼠24只，隨機分為陰性對照組、葛根∶枳椇子(1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)，共3組，每組8只，實驗前禁食12h，稱重，記錄重量。灌胃量及觀察指標同上。(3)取昆明小鼠40只，隨機分為陰性對照組、葛根∶葛花(1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶2)，共5組，每組8只，實驗前禁食12h，稱重，記錄重量。灌胃量及觀察指標同上。(4)取昆明小鼠40只，隨機分為陰性對照組、陽性對照組(海王金樽)、玉米肽組、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)，每組10只，實驗前禁食12h，稱重，記錄重量，灌胃量及觀察指標同上。(5)取昆明小鼠72只，隨機分為陰性對照組、陽性對照組(海王金樽)、玉米肽組、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)，每組18只，實驗前禁食12h，稱重，記錄重量，灌胃量及觀察指標同上。5實驗結(jié)果及分析中草藥醒酒復方不同配比實驗結(jié)果：采用SPSS中的t檢驗，表示，P<0.05有統(tǒng)計學意義。(1)表3及圖7、圖8得知：葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)、葛根∶葛花∶枳椇子(2∶1∶2)、陽性對照組(海王金樽)與陰性對照組相比，耐受時間均有顯著性差異；醉酒時間無顯著性差異，但有減少趨勢，可能和樣本量有關(guān)。表3不同配比中草藥醒酒復方的解酒效果(2)由圖9、圖10知：葛根∶枳椇子(1∶1)與陰性對照相比，耐受時間與醉酒時間均有顯著性差異；葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)與陰性對照相比，醉酒時間與耐受時間均無顯著性差異。(3)由表4及圖11、圖12知：給藥組與陰性對照相比，耐受時間與醉酒時間均無顯著性差異，但是醉酒時間有減小的趨勢，且1:1:1組醉酒率最低。表4不同配比中草藥醒酒復方的解酒效果(4)由表5及圖13、圖14得知：葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)、陽性對照組(海王金樽)與陰性對照組相比，醉酒時間有顯著性差異；但所有給藥組與陰性對照組相比，耐受時間均無顯著性差異。表5不同配比中草藥醒酒復方的解酒效果(5)由表6及圖15、圖16得知：陽性對照(海王金樽)、玉米肽組、葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)與陰性對照組相比，醉酒時間有顯著性差異，且葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)差異更為顯著(P<0.01)。但是各給藥組的耐受時間與陰性對照相比，均無顯著性差異。表6不同配比中草藥醒酒復方的解酒效果本發(fā)明研究及大量實驗證明，不同配比動物實驗可知，以葛根、葛花、枳椇子三種成分為解酒組成的組合物解酒效果良好；從小鼠醉酒動物模型的耐受時間和醉酒時間觀察，確定最佳配伍為按照質(zhì)量比計，葛根∶葛花∶枳椇子＝1∶1∶1。實施例4應用試驗1材料與儀器1.1供試材料昆明小鼠(KM小鼠)，體重20～25g，雄性，上海斯萊克實驗動物有限責任公司(購于第二軍醫(yī)大學實驗動物中心)。56度紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)、去離子水、小鼠灌胃器、一毫升注射器、5mLEP管、移液槍，槍頭。海王金樽溶液的制備：取海王金樽(上海德康醫(yī)藥商店)，粉碎，溶于去離子水中，得到0.75g/mL的海王金樽溶液。葛根、葛花、枳椇子，分別購自雷允上北區(qū)藥業(yè)股份有限公司中達大藥房。1.2主要試劑與儀器無水乙醇(國藥集團化學試劑有限公司)、75％乙醇、去離子水(MiliQ純水)、粉碎機、50目篩、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、索式提取器、65℃烘箱、56度紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)、去離子水、小鼠灌胃器、一毫升注射器、5mLEP管、移液槍，槍頭、海王金樽。乙醇脫氫酶試劑盒(購自南京建成生物科技有限公司)(其余同乙醇含量測定)ThermoFisherTraceGCUltra氣相色譜儀，AgilentDB-1色譜柱，氣相色譜柱為程序升溫法，在40℃維持1min，以20℃/min的速度升至160℃，在160℃維持3min，程序升溫所需時間為10min；左邊進樣口溫度為150℃，左邊載氣流速2mL/min，右邊進樣口相同。右邊檢測器為火焰離子化檢測器，流速(mL/min)為空氣：燃氣(H2)：尾吹氣＝350：35：30，傳輸線的溫度為250℃，頂空進樣量1mL。2動物及其管理小鼠購得后，先在動物房適應3天。動物室溫度25℃，濕度為60％，通風良好。小鼠采用分籠詞養(yǎng)，每天早晚各添加飼料一次，自由進食和飲水。3天后開始正式實驗。3解酒組合物的配制將20g枳椇子、葛花、葛根提取物粉末分別用3mL去離子水溶解，配成葛根∶葛花∶枳椇子質(zhì)量比為1∶1∶1的混合溶液。4實驗方法4.1中草藥醒酒復方的醒酒效果取昆明小鼠60只，隨機分為模型組、陽性對照組(0.75g/mL海王金樽溶液)、低劑量組，高劑量組，每組15只，實驗前禁食12h，稱重，記錄重量，每組灌胃56℃紅星二鍋頭0.17mL/10g，半小時后，模型組灌胃0.1mL/只，去離子水，陽性對照組給予海王金樽溶液0.1mL，低劑量組和高劑量組分別給予中草藥復方0.1mL/只和0.2mL/只，觀察并記錄小鼠的耐受時間、醉酒時間、醉酒只數(shù)，死亡只數(shù)。4.2小鼠血液中的乙醇含量影響取小鼠96只，將小鼠隨機分為4組(按時間動態(tài)觀察組)，每組24只，再均分為空白組，模型組，中草藥復方低劑量和高劑量組，共4組。實驗前禁食12h，禁食不禁水，稱重，記錄重量。實驗時，空白組和模型組給予蒸餾水0.1mL/只，低劑量組給予葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)藥物0.1mL/只，高劑量組給予葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)藥物0.2mL/只。半小時后，除空白組外均灌胃0.17mL/10g56℃紅星二鍋頭?？瞻捉M給予相應的蒸餾水。于酒后0.5h、1h、2h、3h眼眶取血，取血完畢后，解剖小鼠，取出肝臟，用生理鹽水浸洗，濾紙吸干后取左肝葉邊緣肝臟組織備用(空白組小鼠只摘取肝臟組織備用)。摘除眼球采血：采血時，用左手固定小鼠，左手拇指、食指盡量將動物眼周皮膚往頸后壓，盡量使眼球突出，右手用眼科彎鑷迅速夾住眼球根部，將眼球摘除，將動物頭朝下，提起動物，血液很快從眼眶內(nèi)流入已準備好的容器中。此法一般只適用于一次性采血，由于取血過程中小鼠并未死亡，心臟在不斷跳動，常用于小鼠大量采血。取血完畢后，靜置，4000r/min，離心10min，取血清部分用于頂空氣相色譜法測定血醇濃度。4.3對乙醇脫氫酶的活性影響利用乙醇脫氫酶(ADH)催化氧化型輔酶Ⅰ反應的原理，通過測定340nm處吸光度的變化率得出其酶活性。準確稱取備用肝組織重量，按照重量體積比(克：毫升)1:9的比例加入生理鹽水，制備成10％的勻漿，2500r/min離心10分鐘，取上清進行測定。表7測定過程加入樣本的同時開始計時，充分混勻，15秒后，340nm處，0.5cm光徑，測定OD值A1，迅速將反應液置于37℃水浴鍋中，10分15秒時取出，測定OD值A2。定義：在37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol產(chǎn)物的酶量定義為一個酶活力單位。組織中乙醇脫氫酶計算公式：4.4酒精性肝損傷實驗昆明小鼠80只隨機分為模型組，海王金樽陽性對照組，葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)低劑量組和高劑量組，每組20只，禁食12小時后，稱重，記錄重量。實驗時，模型組給予蒸餾水0.1mL/只，海王金樽組給予海王金樽(0.75g/mL)0.1mL/只，葛根∶葛花∶枳椇子(1∶1∶1)低劑量給予藥物0.1mL/只，高劑量組給予藥物0.2mL/只，半小時后，各組均灌胃0.1mL/10g56℃紅星二鍋頭，每日1次，連續(xù)15日，于末次給酒后2小時自眼眶采血，取血完畢后，解剖小鼠，取出肝臟，用生理鹽水浸洗，濾紙吸干后取左肝葉邊緣肝臟組織，用10％的福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡觀察。5實驗結(jié)果及分析5.1中草藥醒酒復方的醒酒效果將提前禁食12小時的小鼠分組稱重后，按照前述的步驟進行實驗操作，記錄耐受時間和醉酒時間，數(shù)據(jù)統(tǒng)計匯總于表8和圖17。實驗結(jié)果：采用SPSS中的t檢驗(x±s表示，P<0.05有統(tǒng)計學意義)。表8中草藥醒酒復方的醒酒效果結(jié)果分析：陽性對照組(海王金樽)、低劑量組及高劑量組與模型組相比，醉酒時間均有顯著性差異(P<0.05)；耐受時間只有低劑量組有顯著性差異，海王金樽陽性對照組和高劑量組均無顯著性差異。5.2頂空氣相法測定小鼠血液中的乙醇含量。5.2.1氣相色譜檢測結(jié)果及標準品對照見圖18和圖19所示。5.2.2中草藥醒酒復方對小鼠血中乙醇濃度的影響乙醇為低分子脂溶性物質(zhì)，攝入的乙醇可通過濾過和簡單擴散方式從胃腸道吸收。人體攝入含乙醇的飲料后數(shù)分鐘內(nèi)即可在外周血中測得乙醇的存在，急性酒精中毒患者癥狀表現(xiàn)與血中乙醇濃度有直接關(guān)系，血中乙醇濃度升高越快，其反應越嚴重，酒精中毒的程度越深。因此，檢驗血中乙醇濃度是評價治療酒精中毒藥物的重要和客觀指標之一。分別測定小鼠從灌胃酒的時刻開始計時后，分別于30min、60min、90min、120min、180min時測量血液中的乙醇濃度，分析中草藥解酒復方不同劑量對小鼠血中乙醇濃度影響結(jié)果見表9和圖20。表9中草藥不同劑量對小鼠血中乙醇濃度影響(單位：g/mL)注：*為有顯著性差異(P<0.05)結(jié)果分析：酒后0.5h，與模型組比較，低劑量組和高劑量組均無顯著性差異(P>0.05)；酒后1h，與模型組比較，低劑量組和高劑量組乙醇濃度均有下降的趨勢，且高劑量組有顯著性差異(P<0.05)(乙醇濃度下降20％以上)；酒后2h，與模型組比較，低劑量組和高劑量組乙醇濃度均有下降的趨勢，且低劑量組和高劑量組均有顯著性差異(P<0.05)(乙醇濃度下降20％以上)；酒后3h，與模型組比較，低劑量組和高劑量組乙醇濃度均有下降的趨勢。任何一種毒物(或藥物)進入體內(nèi)后，其原形及代謝產(chǎn)物均隨時間不斷運動變化，這些變化很復雜。本發(fā)明在實驗設計時設立了血中乙醇濃度--時間曲線，由曲線的變化趨勢動態(tài)觀察不同劑量的中藥復方提取物對酒后不同時間點血中乙醇濃度的影響，結(jié)果顯示解酒組合物治療組小鼠血中乙醇濃度在所測定的四個時間點均比模型組低，且在1h和2h具有顯著差異(p<0.05)。此外，還顯示小鼠血中乙醇濃度在酒后60分鐘達到吸收高峰，然后進入分解代謝階段。在所觀察的30分鐘～60分鐘內(nèi)，治療組小鼠血中乙醇濃度---時間曲線峰值降低，曲線上升斜率減小。本發(fā)明解酒組合物對急性酒精中毒具有良好的治療作用。5.3乙醇脫氫酶的活性測定實驗已經(jīng)證實本發(fā)明解酒組合物能夠降低急性酒精中毒小鼠血漿中乙醇濃度，為了了解其是否通過增強與酒精代謝相關(guān)的酶活性而達到解酒的效果，本實施例通過檢測肝組織漿上清液中ADH活性變化來探求中草藥水提液對與酒精代謝相關(guān)酶活性的影響，進一步揭示其解酒的機制。小鼠肝中乙醇脫氫酶活性檢測結(jié)果檢表10及圖21所示。酒后0.5h，與模型組比較，低劑量組和高劑量組有升高的趨勢；酒后1h和2h，與模型組比較，低劑量組和高劑量組均有升高的趨勢，且低劑量組有顯著性差異(P＜0.05)；；酒后3h，與模型組比較，低劑量組和高劑量組均有升高的趨勢，且低劑量組和高劑量組有顯著性差異。(P＜0.05)。表10各組小鼠肝中乙醇脫氫酶活性比較(單位：U/mL)時間/h模型組低劑量組高劑量組0.5180.6±39.3216.9±68.6192±36.61191.2±28.7253.3±37*211.8±34.62177.5±34.7237.9±38.1*220.2±53.833140.9±49.4233.4±33.7*212.4±38.8*注：*為有顯著性差異(P＜0.05)實驗證明，炎性細胞浸潤可能是酒精性肝病最早期的病理改變，隨著時間的延長會發(fā)展為脂肪變性。低劑量組和高劑量組灌胃小鼠肝組織和空白對照小鼠肝組織相差無幾，說明本發(fā)明解酒組合物本身對肝臟無毒害作用，并對于小鼠有一定的保護作用。在灌胃過程中，統(tǒng)計了因肝損傷而死亡的小鼠數(shù)量，結(jié)果見表11和圖23。由表11及圖23可知，在15天之內(nèi)，與模型組相比，海王金樽組，低劑量組，高劑量組小鼠死亡率均降低，且高劑量組更加明顯。表11酒精性肝損傷小鼠的死亡情況分組只數(shù)死亡數(shù)死亡率模型組171270.6％海王金樽組181055.5％低劑量組19842.1％高劑量組19631.5％實施例5醒酒卷煙實驗材料與動物管理參照前述實施例。1.中草藥醒酒煙劑制備實驗所用煙劑分為兩種：①號受試煙劑和自制卷煙。其中，自制卷煙組為將20g枳椇子、葛花和葛根的醇提粉末分別用3mL去離子水溶解，配成葛根∶葛花∶枳椇子＝1∶1∶1的中草藥醒酒復方，按小鼠的灌胃劑量噴灑在煙絲上，烘干，用虎牌拉煙機制成的卷煙。①號受試煙劑為純煙絲(與自制卷煙采用的煙絲相同)，由廣東中煙工業(yè)有限責任公司提供。2.主要儀器與設備動物氣體染毒儀、單通道智能吸煙機、56度紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)、計時器、小鼠灌胃器、一毫升注射器、EP管、移液槍、槍頭。3.實驗方法取昆明小鼠40只，隨機分為先酒后煙組和先煙后酒組，每組20只，再將每組隨機分為①號受試煙組和自制卷煙組。每組10只，實驗前禁食12h，稱重，記錄重量。實驗開始時，先酒后煙組，先按0.17mL/10g給予56℃紅星二鍋頭，再立即置于動物氣體染毒儀的暴露腔內(nèi)暴露一小時，控制腔內(nèi)煙霧濃度為45％～55％，稀釋流量20L/min。先煙后酒組先煙霧暴露一小時(條件同上)，半小時后，按0.17mL/10g給予56℃紅星二鍋頭。觀察并記錄小鼠的耐受時間、醉酒時間、醉酒只數(shù)，死亡只數(shù)。4.實驗結(jié)果及分析：表12醒酒煙劑先酒后煙醒酒效果組別平均耐受時間(min)平均醉酒時間(min)醉酒率死亡率①號受試煙組46.4±42.4889.6±217.3100％20％自制卷煙組46.3±42.2576.8±79.4*70％20％表13醒酒煙劑先煙后酒醒酒效果組別平均耐受時間(min)平均醉酒時間(min)醉酒率死亡率①號受試煙組17.7±24.91076.0±282.8100％0自制卷煙組55.6±23.9*575.6±310.1*100％10％由表12及圖24得知：自制卷煙組和①號受試煙組相比，耐受時間沒有明顯變化，醉酒時間顯著下降且有顯著性差異(P＜0.05)；由表13及圖25得知：自制卷煙組和①號受試煙組相比，耐受時間有顯著升高，醉酒時間有顯著下降，且耐受時間和醉酒時間都有顯著性差異(P＜0.05)。5.頂空氣相法測定小鼠血液中的乙醇含量實驗材料：動物氣體染毒儀、單通道智能吸煙機、56度紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)、計時器、小鼠灌胃器、一毫升注射器、5mLEP管、移液槍、槍頭、丙酮、乙醇、①號受試煙組和自制卷煙組。儀器及色譜條件：ThermoFisherTraceGCUltra氣相色譜儀，AgilentDB-1色譜柱，氣相色譜柱為程序升溫法，在40℃維持1min，以20℃/min的速度升至160℃，在160℃維持3min，程序升溫所需時間為10min；左邊進樣口溫度為150℃，左邊載氣流速2mL/min，右邊進樣口相同。右邊檢測器為火焰離子化檢測器，流速(mL/min)為空氣∶燃氣(H2)∶尾吹氣＝350∶35∶30，傳輸線的溫度為250℃，頂空進樣量1mL。丙酮為內(nèi)參。實驗方法：取小鼠80只，將小鼠隨機分為5組(按時間動態(tài)觀察組)，每組16只，再均分為①號煙組及自制卷煙組。實驗前禁食12h，禁食不禁水，稱重，記錄重量。均置于動物氣體染毒儀的暴露腔內(nèi)，控制腔內(nèi)煙霧濃度為45％～55％，稀釋流量20L/min，煙霧暴露處理半小時。半小時后，均灌胃0.17mL/10g56℃紅星二鍋頭。于酒后0.5h、1h、3h，5h眼眶取血，取血完畢后，解剖小鼠，取出肝臟，用生理鹽水浸洗，濾紙吸干后取左肝葉邊緣肝臟組織備用(空白組小鼠只摘取肝臟組織備用)。實驗結(jié)果及分析：見表14和圖28所示，酒后0.5h，與①號受試煙組比較，自制煙組血醇濃度有下降的趨勢且有顯著性差異(P<0.05)；酒后1h，與①號受試煙組比較，自制煙組有下降的趨勢但無顯著性差異(P>0.05)；酒后3h，與①號受試煙組比較，自制煙組血醇濃度有下降的趨勢且有顯著性差異(P<0.05)；酒后5h，與①號受試煙組比較，自制煙組無顯著性差異(P>0.05)。表14中草藥自制卷煙對小鼠血醇濃度的影響分組①號受試煙組自制卷煙組0.5329.7±61.0236.1±80.6*1388.8±71.3348.8±82.53398.7±45.5353.5±29.9*5338.9±39.6344.1±45.86.乙醇脫氫酶的活性測定(實驗方法同前述實施例)乙醇脫氫酶試劑盒(購自南京建成生物科技有限公司)(其余同乙醇含量測定)。利用乙醇脫氫酶(ADH)催化氧化型輔酶Ⅰ反應的原理，通過測定340nm處吸光度的變化率得出其酶活性。準確稱取備用肝組織重量，按照重量體積比(克：毫升)1:9的比例加入生理鹽水，制備成10％的勻漿，2500r/min離心10分鐘，取上清進行測定。見表15所示：表15加入樣本的同時開始計時，充分混勻，15秒后，340nm處，0.5cm光徑，測定OD值A1，迅速將反應液置于37℃水浴鍋中，10分15秒時取出，測定OD值A2。定義：在37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol產(chǎn)物的酶量定義為一個酶活力單位。組織中乙醇脫氫酶計算公式：實驗結(jié)果及分析：表16和圖29可知：酒后0.5h，1h，2h，自制煙絲與①號受試煙組比較，沒有顯著性差異；3h，5h，AHD活性顯著升高且有顯著性差異。表16各組小鼠肝中乙醇脫氫酶活性比較(單位：U/mgprot)注：*為有顯著性差異(P<0.05)時間/h①號受試煙組自制卷煙組0.52.51±1.492.89±1.0112.23±1.362.11±1.3031.49±0.546.45±1.96*52.33±1.387.23±1.24*實施例6中藥材的添加比例實驗1.本實施例以葛花單獨切絲，與煙絲混合，制成藥煙。添加比例分別為20％，55％。②號受試煙為純煙絲，③號受試藥煙為添加20％葛花絲，④號受試藥煙為添加55％葛花絲，手工卷制。實驗動物和儀器等同實施例5。取昆明小鼠80只，隨機分為先酒后煙組和先煙后酒組，每組40只，再將每組隨機分為模型組(A組)，復方組(葛根：葛花：枳椇子＝1:1:1，B組)，②號受試煙組(C組)，③號受試煙組(D組)，④號受試煙組(E組)。每組8只，實驗前禁食12h，稱重，記錄重量。實驗開始時，先酒后煙組，先按0.17mL/10g給予56℃紅星二鍋頭，再立即置于動物氣體染毒儀的暴露腔內(nèi)暴露一小時，控制腔內(nèi)煙霧濃度為45％～55％，稀釋流量20L/min。先煙后酒組先煙霧暴露一小時(條件同上)，半小時后，按0.17mL/10g給予56℃紅星二鍋頭。觀察并記錄小鼠的耐受時間、醉酒時間、醉酒只數(shù)，死亡只數(shù)。取小鼠120只，將小鼠隨機分為5組(按時間動態(tài)觀察組)，每組24只，再均分為②號受試煙組(C組)，③號受試煙組(D組)，④號受試煙組(E組)。實驗前禁食12h，禁食不禁水，稱重，記錄重量。均置于動物氣體染毒儀的暴露腔內(nèi)，控制腔內(nèi)煙霧濃度為45％～55％，稀釋流量20L/min，煙霧暴露處理1小時。1小時后，均灌胃0.17mL/10g56℃紅星二鍋頭。于酒后0.5h、1h、2h、3h，5h眼眶取血，取血完畢后，解剖小鼠，取出肝臟，用生理鹽水浸洗，濾紙吸干后取左肝葉邊緣肝臟組織備用(空白組小鼠只摘取肝臟組織備用)。實驗結(jié)果及分析：實驗結(jié)果采用SPSS中的t檢驗(x±s表示，P<0.05有統(tǒng)計學意義)。結(jié)果分析：由圖30、圖31(*表示與陰性對照相比，P<0.05)、表17和表8可知，醒酒復方組與模型組相比，耐受時間與醉酒時間均有顯著性差異(P<0.05)。④號受試煙劑與②號受試煙劑相比，耐受時間與醉酒時間均有顯著性差異(P<0.05)，③號受試煙劑均無顯著性差異。復方組與模型組相比，耐受時間有增長的趨勢，醉酒時間有下降的趨勢。由于方差較大，故沒有顯著性差異。③號受試煙劑與②號受試煙劑相比，耐受時間有增長的趨勢，醉酒時間有下降的趨勢且有顯著性差異。④號受試煙劑耐受及醉酒時間與②號受試煙劑相比均有顯著性差異。表17中草藥醒酒煙劑先酒后煙的醒酒效果組別平均耐受時間(min)平均醉酒時間(min)A組50.8±15.9429±79.9B組75.2±12.5323.7±73.5*C組29.9±10.1460.1±71.1D組30.5±9.6451±79.4E組40.6±13.2*373.8±69.3*表18不同劑量中草藥醒酒煙劑先煙后酒的醒酒效果組別平均耐受時間(min)平均醉酒時間(min)醉酒率A組49.2±38.6369.5±108.268.7％B組70.9±51.3307.3±77.162.5％C組36.5±25.6461.4±101.893.7％D組45±25.3379.6±70.493.7％E組66.6±37.4354.7±122.475％2.頂空氣相法測定小鼠血液中的乙醇含量(檢測方法和試驗方法同實施例5)表19不同劑量中草藥煙劑對小鼠血醇濃度的影響分組C組D組E組0.5378.2±90.5317.2±106.1327.9±86.21439.6±61.1425.8±66.0437.0±55.82505.1±66.9439.1±28.62*432.2±50.1*3458.7±50.6430.5±47.5395.1±42.2*5395.3±12.1324.3±50.3*312.1±73.5*結(jié)果分析：由表19和圖34可見，酒后0.5h，與①號受試煙組比較，②號受試煙組及③號受試煙組血醇濃度有下降的趨勢但各組均無顯著性差異(P＞0.05)；酒后1h，與①號受試煙組比較，②號受試煙組有下降的趨勢但無顯著性差異(P＞0.05)，③號受試煙組無明顯變化；酒后2h，與①號受試煙組比較，②號受試煙組及③號受試煙組血醇濃度均有下降的趨勢，且有顯著性差異(P＜0.05)；酒后3h，與①號受試煙組比較，②號受試煙組及③號受試煙組血醇濃度有下降的趨勢且③號受試煙組有顯著性差異；酒后5h，與①號受試煙組比較，②號受試煙組及③號受試煙組血醇濃度有下降的趨勢，且有顯著性差異(P＜0.05)。3.乙醇脫氫酶的活性測定(檢測方法和試驗方法同實施例5)表20各組小鼠肝中乙醇脫氫酶活性比較(單位：U/mgprot)分組C組D組E組00000.55.19±1.454.89±0.9211.3±2.3*15.61±1.506.93±1.7411.8±0.92*28.23±2.557.85±2.3510.53±2.2036.93±1.547.14±2.5012.1±3.10*53.85±1.226.78±3.815.85±3.17注：*為有顯著性差異(P＜0.05)由表20和圖35可見，④號受試煙組與②號受試煙組比較，酒后乙醇脫氫酶的活性沒有明顯，分析認為為樣本量太小且方差過大導致沒有統(tǒng)計學意義。③號受試煙組與②號受試煙組比較，酒后乙醇脫氫酶的活性有上升的趨勢且0.5h，1h，3h均有顯著性差異(P＜0.05)；實施例7醒酒卷煙的評吸試驗選用兩種不同的市售卷煙煙絲，由廣東中煙工業(yè)有限責任公司提供，其中1#、3#號受試煙為空白煙絲，2#、4#號受試煙分別為1#、3#號噴加解酒中草藥提取物，提取物與煙絲的重量比均為1‰。將1#、2#、3#、4#號受試煙組交由十名專業(yè)評吸員經(jīng)行評吸。評吸結(jié)果如下：1#號受試煙組：光澤油潤(5.0)，香氣充足(28.0)，較諧調(diào)(5.0)，微有雜氣(10.5)，口腔略有刺激性(17.5)，余味較純凈舒適(22.0)。2#號受試煙組：光澤油潤(5.0)，香氣充足(28.3)，較諧調(diào)(5.0)，微有雜氣(10.3)，口腔略有刺激性(17.5)，余味較純凈舒適(22.1)。3#號受試煙組：光澤油潤(5.0)，香氣充足(28.5)，較諧調(diào)(5.0)，微有雜氣(10.5)，口腔略有刺激性(17.5)，余味較純凈舒適(22.0)。4#號受試煙組：光澤油潤(5.0)，香氣充足(28.7)，較諧調(diào)(5.0)，微有雜氣(10.6)，口腔略有刺激性(17.6)，余味較純凈舒適(22.1)。當前第1頁1 2 3