專利名稱：香菇多糖單體衍生物、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用化合物香菇多糖的單體衍生物，還涉及該香菇多糖單體衍生物的合成方法及該香菇多糖的單體衍生物的應(yīng)用。
香菇多糖(lentinan)是從傘菇科真菌香菇(lentinus edodes)的子實體中提取、分離、純化而獲得的多糖物質(zhì)。經(jīng)測定研究，這種天然香菇多糖物質(zhì)公認(rèn)的重復(fù)結(jié)構(gòu)單元為每5個β-1，3-葡萄糖主鏈上連接有2個β-1，6-葡萄糖側(cè)鏈。將這樣的一個重復(fù)單元定義為香菇多糖的一個單體。
目前，在中國和日本都已將這種天然香菇多糖用于胃癌、直腸癌、結(jié)腸癌和乳腺癌等疾病的治療，常與化療藥物合并使用，且多為靜脈途徑給藥。臨床研究結(jié)果表明香菇多糖可延長患者的生存時間達(dá)50％，特別適用于不能手術(shù)或術(shù)后復(fù)發(fā)的胃癌患者，具有療效好，副作用小等優(yōu)點。近年來香菇多糖在臨床治療中的使用量和需求量已越來越大，但從天然香菇子實體中提取該多糖物質(zhì)對工藝的要求極高，產(chǎn)品的質(zhì)量重復(fù)性難以保證，使得產(chǎn)品成本也就居高不下。從另一方面講，由于天然多糖是大分子物質(zhì)，平均分子量約為40～80萬，水溶性差，制成如針劑或口服液等液體劑型時難度較大，不易于實現(xiàn)質(zhì)量的穩(wěn)定控制，給使用帶來不便。
所以，本發(fā)明的第一個目的是提供香菇多糖單體的衍生物結(jié)構(gòu)，作為合成產(chǎn)物，其具有與天然香菇多糖相似的結(jié)構(gòu)單元，而分子量的大小可按照要求控制，可取代天然產(chǎn)品用于制藥和保健品領(lǐng)域。
本發(fā)明的第二個目的是提供上述香菇多糖單體衍生物的合成方法。
本發(fā)明的第三個目的是提出上述合成產(chǎn)物在制藥及保健食品中的應(yīng)用。
本發(fā)明再一個目的是提出了以該合成產(chǎn)物為有效活性成份的藥物組合物，其用于治療慢性肝炎、癡呆癥、皰疹和用于抗腫瘤、抗愛滋病等疾病。
首先，本發(fā)明公開的香菇多糖單體及其衍生物為一種具有通式(I)的葡聚寡糖類化
其中，R20代表氫、C1-C12的烷基、C3-C12的1-烯基、C2-C8的亞胺酯基、或單糖。
根據(jù)本發(fā)明提出的化合物及其衍生物，其還原端單元的R20的構(gòu)型可以是α構(gòu)型，也可是β構(gòu)型。當(dāng)R20為氫，如式(II)，則為基本的香菇多糖單體衍生物結(jié)構(gòu)。作為該結(jié)構(gòu)的不同衍生物，R20還可以是C1-C12的烷基如甲基；當(dāng)R20為C3-C12的1-烯基時，優(yōu)選地如1-烯丙基或1-戊烯基；作為一類有用的單體衍生物，R20也可以是C2-C8的亞胺酯基，優(yōu)選為2，2，2，-三氯乙酰亞胺酯基；此外，R20還可以是選自葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖或阿拉伯糖的單糖，例如，若R20是葡萄糖，且與前述母體六糖是β-1，3-連接方式，則該結(jié)構(gòu)表示天然香菇多糖的一個標(biāo)準(zhǔn)單體。
本發(fā)明化合物可以是單體化合物，也可以是若干個單體結(jié)構(gòu)通過適當(dāng)合成過程得到的大分子化合物，但從應(yīng)用角度考慮，本發(fā)明化合物的分子量應(yīng)不大于5400，所以與大分子的天然多糖物質(zhì)相比，具有水溶性好，制備重復(fù)性好，質(zhì)量易于控制的優(yōu)點。
根據(jù)本發(fā)明的第二個目的，還提供了上述化合物(I)的合成制備方法，其過程包括以三糖化合物A和B作為反應(yīng)物，在非質(zhì)子有機溶劑中，使用路易斯酸作催化劑經(jīng)0℃以下的低溫合成反應(yīng)，得到化合物(I)，即
其中R20表示基團(tuán)與上述相同，而R1-R19代表?；蛲榛?，并且，化合物A中的離去基團(tuán)L代表鹵素如氟、氯、溴、碘；酯基如鹵代乙酸酯(三氟乙酯、三氯乙酯等)；1-烯基如1-烯丙基、1-烯丁基、1-烯戊基等；或亞胺酯基如2，2，2，-三氯乙酰亞胺酯基，或結(jié)構(gòu)為OP(OZ)2的磷酸酯基，其中Z為芐基或C1～3的烷基。
反應(yīng)物A在上述反應(yīng)中作為非還原端三糖供體，可以由多種方法得到，例如Yamada，H.，Harada，T.，TaKahashi，T.著于J.Am.Chem.Soc.1994，Vol.116，P7919；Yamada，H.，Kato，T.，Takahashi，T.著于Tetrahedron.lett.1999，Vol.40，P4581；以及Hong，N.，Ogawa，T.著于Tetrahedron.lett.1990，Vol.31，P3179，等，其中均對該化合物A或與其同類化合物的合成路線及方法進(jìn)行了公開闡述，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員參照這些報道完全能比較容易地實現(xiàn)該化合物的合成制備，而本發(fā)明在此僅將其作為參考文獻(xiàn)。
根據(jù)本發(fā)明的制備方法，上述合成反應(yīng)中的反應(yīng)物B作為三糖受體，其制備可以包括下述過程(1)首先以丙酮化的葡萄糖衍生物為原料，以保護(hù)基X取代3-位羥基中的氫后，擴環(huán)并?；溆?個取代基團(tuán)，其中保護(hù)基團(tuán)X為任何可區(qū)分于其余位置上的?；谋Ｗo(hù)基團(tuán)，優(yōu)選如芐基、烯丙基、乙酰氯、對甲氧基芐基(PMB)或這四種基團(tuán)的衍生物；(2)上述?；a(chǎn)物與氨氣反應(yīng)后，并經(jīng)進(jìn)一步合成反應(yīng)得到3-位上帶有保護(hù)基、1-位上是可離去基團(tuán)，其余三個位置上被?；钠咸烟茄苌?，其中該1-位上可離去基團(tuán)M代表鹵素、酯基或1-烯基或亞胺酯基；(3)從上述葡萄糖衍生物經(jīng)任何可行糖基化過程制備三糖受體化合物B。
根據(jù)本發(fā)明提供的方法，合成化合物(I)的反應(yīng)進(jìn)程可由薄層色譜(TLC)在乙酸乙酯-石油醚體系中展開來檢測，溶劑比例可以為1∶4～2∶1，該檢測方法是本領(lǐng)域的常規(guī)檢測方法，不再詳述。一般技術(shù)人員依據(jù)該檢測過程即可找到合成操作的條件，如反應(yīng)的物料比，反應(yīng)時間的確定等，其中，三糖化合物A與B反應(yīng)的摩爾比優(yōu)選為0.5∶1～2∶1，而最佳比例可以是1.2∶1。
反應(yīng)使用路易斯酸作催化劑，包括銀鹽例如三氟甲磺酸銀(AgOTf)、2價汞鹽例如氰化汞(Hg(CN)2)、三甲基硅基三氟甲磺酸酯(TMSOTf)、三乙基硅基三氟甲磺酸酯(Et3SiOTf)、N-碘代琥珀酰亞胺(NIS)、三氟化硼乙醚(BF3·Et2O)等。
本發(fā)明方法用的非質(zhì)子有機溶劑可以包括二氯烷(二氯甲烷、1，2-二氯乙烷)、乙氰(CH3CN)、乙醚、苯或甲苯等。
在制備三糖供體B時用到的原料即丙酮化的葡萄糖衍生物，通?？捎墒惺鄣玫?，亦可通過常規(guī)的方法自行制備，例如結(jié)構(gòu)式1的化合物，過程中涉及到的?；疤腔磻?yīng)，本領(lǐng)域的技術(shù)人員均能夠完成。例如以結(jié)構(gòu)式1的具體化合物，先以芐基取代3-位成為保護(hù)基，得到結(jié)構(gòu)式為2的化合物，再進(jìn)一步擴環(huán)并?；?如乙?；?和通入氨氣反應(yīng)成為中間化合物3及4，進(jìn)而合成出所述3-位上帶有保護(hù)基、1-位上是可離去基團(tuán)，其余三個位置上被酰化的葡萄糖衍生物103B，它是制備三糖受體B的較重要的中間產(chǎn)物之一，該過程可用下列路線表示
根據(jù)本發(fā)明方法的一個優(yōu)選的實施方案，其還包括如下過程(1)以D-葡萄糖作原料，經(jīng)過2，3，4-位?；钠咸烟擒眨謩e合成出化合物102A和化合物103A，化合物102A中T4為?；?，T1～T3可為任何適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基，包括?；腿〈蓟?，T為可離去基團(tuán)；(2)化合物102A和103A以路易斯酸為催化劑，在氮氣氛圍進(jìn)行糖基化反應(yīng)，再經(jīng)普通?；磻?yīng)，可制備出三糖供體化合物A；(3)具結(jié)構(gòu)式101B與102B的化合物在無水有機溶劑中，反應(yīng)溫度-30℃～-78℃，以路易斯酸作催化劑經(jīng)糖基化反應(yīng)制備通式為104B的二糖化合物，其中，P為可離去基團(tuán)(如硫苯基-SPh)；(4)化合物104B與化合物103B在無水有機溶劑中，以路易斯酸作催化劑進(jìn)行糖基化反應(yīng)，得到的三糖經(jīng)?；磻?yīng)、催化氫化反應(yīng)，制備出通式為B的三糖受體化合物。
根據(jù)該優(yōu)選實施方案，過程(1)所提到的原料D-葡萄糖101A為商購原料，亦可使用五乙?；腄-葡萄糖苷來制備化合物102A，從這兩種原料制備通式化合物102A和103A，均采用的是基本有機合成方法，為本領(lǐng)域的常識，只要給出路徑，普通技術(shù)人員均可自行完成。
化合物102A與103A制備三糖供體A的過程，需要在干燥的有機溶劑中實現(xiàn)，優(yōu)選非質(zhì)子有機溶劑，如包括二氯烷(二氯甲烷、1，2-二氯乙烷)、乙氰(CH3CN)、乙醚、苯或甲苯等；使用路易斯酸作催化劑，優(yōu)選的路易斯酸如三甲基硅基三氟甲磺酸酯(TMSOTf)、三氟化硼、二丁基硼基三氟甲磺酸酯(Bu2BOTf)、對甲苯磺酸(TsOH)、樟腦磺酸(CAS)等，反應(yīng)完成后可用堿中和為中性～弱減性，通常使用有機堿，例如使用三乙基胺等。
根據(jù)實際情況和需要，化合物101B可以商購得到，也可從D-葡萄糖101A得到，化合物102可以是帶有取代基R20的D-葡萄糖苷，該化合物的選擇和確定主要取決于目的化合物中的R20，反應(yīng)條件要求在干燥無水的有機溶劑如硝基甲烷或二氯甲烷中，低溫完成，使用的路易斯酸除以上所列外，還可包括三氟甲磺酸(TfOH)、N-碘代琥珀酰亞胺(NIS)或其混合物等，反應(yīng)完成后可用例如三乙基胺等有機堿調(diào)整反應(yīng)物料在中性～弱減性，制備得到的二糖化合物104B與化合物103B可在類似條件，通常也是用路易斯酸如TMSOTf催化下，經(jīng)糖基化反應(yīng)合成本發(fā)明所述的三糖受體B，在制備過程中，實際經(jīng)歷了中間化合物B′，化合物B′經(jīng)催化氫化過程制得三糖受體B。或糖基化后的三糖產(chǎn)物經(jīng)脫保護(hù)基反應(yīng)(如脫烯丙基反應(yīng)或脫氯乙酰反應(yīng))，得到三糖受體B。
上述優(yōu)選實施方案的全過程可如以下路線表示
根據(jù)本發(fā)明的上述優(yōu)選實施方案，中間原料化合物103B可通過前面已給出的方法制備得到。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，分別制備出三糖供體A和三糖受體B后，則可進(jìn)一步合成出本發(fā)明的目的產(chǎn)品——香菇多糖單體衍生物。作為有機合成領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，每一步合成產(chǎn)物均經(jīng)提純精制，主要采用的方法包括硅膠柱分離、減壓濃縮及重結(jié)晶等，其操作的條件和步驟均屬常規(guī)，不在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)，故不再詳述。
根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案，三糖供體A的制備也可包括以下過程(1)葡萄糖糖苷化反應(yīng)，以烷基或芳基或其衍生物取代1-位成為1-位保護(hù)的葡萄糖苷；(2)上述葡萄糖苷通過4，6-芐叉化反應(yīng)、區(qū)選的糖基化反應(yīng)、4，6-芐叉的脫除反應(yīng)后，再經(jīng)糖基化過程并脫去上述位于還原端1-位的保護(hù)基團(tuán)，制備出三糖化合物的中間體；(3)該中間體以可離去基團(tuán)L取代后成為三糖供體A。
通過本發(fā)明方法合成得到的香菇多糖單體衍生物經(jīng)結(jié)構(gòu)檢測證明，與天然香菇多糖具有相似或相同的結(jié)構(gòu)單元，并通過人工合成可以容易地控制產(chǎn)品的分子量，作為單體衍生物或小分子量化合物，本發(fā)明化合物與天然產(chǎn)品相比，最突出的優(yōu)點是水溶性好，規(guī)格及質(zhì)量均易于控制。由于具有與天然香菇多糖類似的結(jié)構(gòu)單元，所以本發(fā)明化合物同樣具有很好的藥物用途，如抗腫瘤(可應(yīng)用于胃癌、直腸癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等)，抗愛滋病，治療慢性肝炎、癡呆癥、皰疹等。所以本發(fā)明還提供了通式(I)化合物在制備治療慢性肝炎、癡呆癥、皰疹和用于抗腫瘤、抗愛滋病的藥物中的應(yīng)用。
發(fā)明人應(yīng)用本發(fā)明化合物進(jìn)行了體外活性實驗，結(jié)果表明1、該香菇多糖能促進(jìn)脾臟T細(xì)胞釋放白細(xì)胞介素IL-3，釋放量為空白對照組的5倍，同時還能增加腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素IL-1；2、通常用作化療的抗瘤藥物，不但能殺死癌細(xì)胞，也能殺死大量的正常體細(xì)胞，從而使患者的免疫功能水平大大降低，而本發(fā)明香菇多糖單體衍生物在體外實驗條件下，各類細(xì)胞的存活率達(dá)100％，說明該多糖化合物無細(xì)胞毒素作用，而在體內(nèi)，抗S-180肉瘤的活性幾乎為100％。
本發(fā)明化合物用于抗S-180肉瘤試驗結(jié)果如下試驗用Swiss albino小鼠體重在20克左右，將生長7天的S-180肉瘤以0.5ml劑量注射到小鼠體內(nèi)，一天后，試驗樣品每天注射，連續(xù)十天。五周后分組采樣，結(jié)果如下表
本發(fā)明化合物可以單獨服用或與其它藥物合用，所以根據(jù)本發(fā)明另一目的，本發(fā)明還提供了用于治療慢性肝炎、癡呆癥、皰疹、及抗腫瘤、抗愛滋病的藥物組合物，其中含有治療有效量的上述通式(I)的化合物和藥學(xué)上可接受的藥物輔劑或藥物載體。本發(fā)明提供的藥物組合物可以包括以通式(I)作為活性成份，用通常方法制成的注射制劑或口服制劑劑型。作為注射劑時，可以注射用蒸餾水作溶劑，以生理鹽水或乙醇、病三醇、聚乙二醇、丙二醇等為助溶劑，形成溶媒體系。作為口服制劑時，可以直接服用純品，或與適當(dāng)添加劑如乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉等賦形劑一起，與阿拉伯膠、纖維素等粘合劑、崩解劑、硬脂酸鎂等潤滑劑以及其它的增量劑、潤濕劑、緩沖劑、保藏劑、香料等進(jìn)行適當(dāng)組合制成片劑、散劑、顆粒劑或膠囊劑。
與天然香菇多糖產(chǎn)品一樣，本發(fā)明提供的多糖化合物還可以作為保健食品添加劑使用。
以下通過具體實施例對本發(fā)明加以詳細(xì)說明，以利本專業(yè)技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案和特點，但其不對本發(fā)明實施范圍進(jìn)行任何限定。
實施例1R20為烯丙基的香菇多糖單體衍生物的合成。
(1)、將30克五乙?；疍-葡萄糖苷1溶于150ml四氫呋喃-甲醇(THF-MeOH)的混合溶液中(比例7∶3)，0℃下通入NH3氣10分鐘，密封于室溫下攪拌至原料完全消失(以TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程)，減壓蒸餾，產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析法純化得結(jié)晶產(chǎn)物2，測定m.p.112～114℃，產(chǎn)率80％。
取上述產(chǎn)物20克溶于200ml無水二氯甲烷中，加入10ml三氯乙氰和30克無水碳酸鉀，室溫下攪拌過夜，然后濾去不溶的鹽，取二氯甲烷相減壓濃縮后上硅膠柱分離，得結(jié)構(gòu)式為3的漿狀物純品，得率81％。
(2)15克無水D-葡萄糖4，與200mg樟腦磺酸于室溫下加入120ml 4-戊烯醇中，該混合體系在油浴中攪拌加熱至90～100℃，反應(yīng)16小時，減壓蒸去過量的4-戊烯醇，加入三乙胺0.5ml，上硅膠柱，用純乙酸乙酯淋洗，收集得到19.6克化合物5，產(chǎn)率95％。
(3)分別取10克化合物3和3.6克的化合物5溶于25ml干燥的二氯甲烷中，在冰水浴中并保持氮氣氛圍下加入35μl的三甲基硅基三氟甲磺酸酯(TMSOTf)，攪拌3小時后加入60μl三乙胺(Et3N)中和至微堿性。反應(yīng)物減壓蒸餾，蒸餾產(chǎn)物上硅膠柱分離，得到三糖產(chǎn)物，產(chǎn)率53％，該產(chǎn)物溶于70ml吡啶溶液中，加入13ml乙酸酐，室溫下攪拌過夜，經(jīng)減壓蒸餾得產(chǎn)率100％的三糖供體6。
(4)取3.5克化合物7，1.0克化合物8(均可直接購到或經(jīng)簡單合成過程得到)溶于無水干燥的硝基甲烷中，加入2克3A活化的分子篩，攪拌30分鐘后降溫至-45℃，加入1.2個當(dāng)量的NIS和0.1個當(dāng)量的TfOH，攪拌4小時后加入Et3N中和至基本中性，減壓濃縮后上硅膠柱分離，收集得二糖化合物9，產(chǎn)率61％。
(5)取化合物101 10克溶于15ml N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入2當(dāng)量的NaH和1.1當(dāng)量的溴化芐(BnBr)，反應(yīng)4小時后倒入冰水中，用二氯甲烷萃取，所得有機相蒸餾除去溶劑后溶于25.0ml 90％的三氟乙酸中，室溫下攪拌2小時，蒸干后直接溶于50ml吡啶中，同時加入25ml乙酸酐，6小時后減壓蒸去溶劑，產(chǎn)物上硅膠柱分離得到產(chǎn)物103，產(chǎn)率47％，其溶于7∶3的THF-MeOH混合溶液中，通氨氣(NH3)10分鐘后，室溫下攪拌2小時，減壓蒸去溶劑，上硅膠柱分離，得到產(chǎn)物104，得率65％。該產(chǎn)物溶于二氯甲烷中，加入0.15ml三氯乙腈和0.15ml 1，8-二氮雙環(huán)[5，4，0]-十一-7-烯(1，8-Diazbicyclo[5，4，0]undec-7-ene，DBU)，在室溫下攪拌2小時，之后減壓濃縮，上硅膠柱分離，得到化合物10，得率77％。
(6)取5.5克化合物10和5克化合物9溶于100ml干燥的二氯甲烷中，在0℃冰水浴中加入TMSOTf 25μl，攪拌1小時后加入三乙胺中和，經(jīng)減壓濃縮及上硅膠柱分離出三糖產(chǎn)品，將其溶于50ml吡啶-10ml乙酸酐溶液中，攪拌過夜，再經(jīng)減壓濃縮和硅膠柱分離得到三糖化合物11，產(chǎn)率78％。
取該三糖化合物2克溶于20ml甲醇-5ml乙酸乙酯-0.1ml冰乙酸的混合體系中，加入500mg催化劑鈀/碳(Pd/C)，常壓下通入氫氣約1小時，過濾，濾液加碳酸氫鈉中和至弱堿性，以水-乙酸乙酯兩相萃取，干燥乙酸乙酯相，經(jīng)硅膠柱分離后得三糖受體12，產(chǎn)率89％。
(7)分別取1.2克化合物6和1克的化合物12，溶于15ml干燥二氯甲烷中，加入1.2當(dāng)量的NIS，然后加入0.2當(dāng)量的三乙基硅基三氟甲磺酸酯，20分鐘后以TLC檢測六糖化合物13的生成，反應(yīng)完成后用10％的硫代硫酸鈉水溶液洗二氯甲烷相，經(jīng)干燥后上硅膠柱分離得63％的全乙?；牧?3。
1克該化合物13溶于30ml無水甲醇中，滴加0.5N的甲醇鈉-甲醇溶液至反應(yīng)溶液的pH9～10，在室溫下攪拌過夜，然后用Dowex50wx200(H+)樹脂中和至中性，濃縮后在甲醇-二氯甲烷中重結(jié)晶，得目的化合物14。
其核磁共振數(shù)據(jù)為13CNMR(D2O)133.1，126.2，101.5，101.3，100.8，100.7，100.3，94.8，85.2，85.1，77.1，76.8，76.5，76.4，76.4，75.8，74.9，74.6，73.8，72.6，72.6，72.4，72.0，71.9，71.7，71.5，69.7，69.5，68.4，68.4，68.0，67.9，67.7，67.2，63.1，62.9，62.9，61.9，61.2。
上述全部過程可以如下路線顯示
實施例2R20為甲基的香菇多糖單體衍生物的合成化合物101a與化合物100(均商購得到)以1∶1.2比例溶于乙腈中，-15℃下加入路易斯酸AgOTf，攪拌2小時，TLC檢測糖基化反應(yīng)完成，經(jīng)硅膠柱分離后，得雙糖，以此雙糖產(chǎn)物取代實施例1的(6)中化合物9，然后同樣過程經(jīng)化合物11a制備出化合物12a，以該化合物12a取代實施例1的(7)中化合物12，同實施例1，與化合物6反應(yīng)，合成本實施例化合物14a，產(chǎn)率94％。
通過如下過程完成
實施例3R20為H的香菇多糖合成實施例1中的化合物13，500毫克溶于10ml 90％醋酸水溶液中，加入2個當(dāng)量的氯化鈀和4個當(dāng)量的醋酸鈉，室溫下反應(yīng)過夜，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和至中性，以乙酸乙酯萃取，分出有機相，經(jīng)干燥、過濾，減壓蒸餾后，上普通硅膠柱分離，得到化合物150，產(chǎn)率65％。
1克該化合物150溶于30ml無水甲醇中，滴加0.5N的甲醇鈉-甲醇溶液至反應(yīng)溶液的pH9～10，在室溫下攪拌過夜，然后用Dowex50wx200(H+)樹脂中和至中性，濃縮后在甲醇-二氯甲烷中重結(jié)晶，得目的化合物151，得率95％。
實施例4R20為2，2，2-三氯乙酰亞胺的香菇多糖合成如實施例3制備的化合物150，其600mg溶于5ml二氯甲烷中，加入三個當(dāng)量的三氯乙腈，再加入2個當(dāng)量的DBU，室溫下攪拌2小時，經(jīng)減壓蒸餾、硅膠柱分離，得到化合物152，產(chǎn)率54％。
同樣參照實施例1中由化合物13制備化合物14的過程，制備出化合物153，產(chǎn)率78％
實施例5三糖供體化合物A的合成實例之一。
將D-葡萄糖4加入到含有0.6M鹽酸氣的丙烯醇溶液中，加熱回流下攪拌24小時，然后減壓蒸干，以1∶2～1∶5的甲醇-乙酸乙酯混合液為淋洗液，使反應(yīng)產(chǎn)物在硅膠柱上分離，得葡萄糖的烯丙基苷，結(jié)構(gòu)式為99，得率64％。
取該烯丙基苷10克，甲醛20ml，原甲酸三乙酯5ml，按順序加到100～150ml干燥的二甲基甲酰胺中，加熱80℃下攪拌6小時，以TLC檢測反應(yīng)完成，之后將反應(yīng)液冷卻至室溫，倒入約300ml冷水中，用二氯甲烷萃取，收集有機相減壓濃縮，所得濃縮產(chǎn)物上硅膠柱分離，得到4，6-芐叉化的葡萄糖烯丙基苷，結(jié)構(gòu)式101，產(chǎn)率55％。
商購化合物100與上述化合物101以1.2∶1的比例混合溶于無水二氯甲烷中，-15℃下加入路易斯酸AgOTf，攪拌4～8小時進(jìn)行糖基化反應(yīng)，期間以TLC檢測反應(yīng)的完成，經(jīng)硅膠柱分離后，得雙糖，結(jié)構(gòu)式102，得率79％。
該化合物102溶于吡啶溶液中，加入乙酸酐，室溫下攪拌4小時，減壓蒸餾得到一漿狀物，此漿狀物溶于有機溶劑1，4-二氧六環(huán)中，加1N鹽酸處理可得雙糖化合物106，產(chǎn)率約70％。
商購化合物100與制得的化合物106重復(fù)上述化合物102的糖基化過程，得到三糖107，得率56％。該產(chǎn)物5克溶于20ml吡啶溶液中，加入10ml乙酸酐，室溫下攪拌乙?；?小時，減壓蒸餾收集三糖108，產(chǎn)率95％。
上述三糖108與氯化鈀(PdCl2)以1∶2的摩爾比混合，溶于甲醇中，在室溫下攪拌4～8小時，脫去1-位上的保護(hù)基(烯丙基)，經(jīng)TLC檢測反應(yīng)完成后過濾，用碳酸氫鈉溶液中和濾液至中性，用乙酸乙酯對反應(yīng)液萃取，減壓濃縮有機相，在經(jīng)硅膠柱分離，得到化合物109，產(chǎn)率88％。
上述產(chǎn)物109 1.5克，與2當(dāng)量的三氟化二乙胺基硫(DAST)在二氯甲烷中反應(yīng)約2小時，以TLC檢測反應(yīng)完成后，用硅膠柱分離，得到三糖供體化合物110，產(chǎn)率57％。
上述合成過程的實現(xiàn)可參照以下路線
實施例6三糖供體化合物A的合成實例之二。
實施例5中制備的4，6-芐叉化的葡萄糖烯丙基苷(結(jié)構(gòu)式101)5克與化合物103(可商購)以1∶1.2的摩爾比混合，溶于二氯甲烷中，-15℃下加入2個當(dāng)量的路易斯酸NIS和1個當(dāng)量的三氟乙酸，攪拌1小時后，加入三乙胺中和至弱堿性，經(jīng)硅膠柱分離后得到純產(chǎn)品102，產(chǎn)率71％。
同實施例5，以102制備化合物106，有機溶劑選用1，4-二氧六環(huán)?；衔?03與化合物106同實施例5過程制備三糖中間體108，產(chǎn)率70％，同實施例5脫去保護(hù)基生成三糖109。
將化合物109、溴(Br2)、Ph3P以1∶2∶4的比例混合后加入二氯甲烷中，反應(yīng)6小時，倒入水中，以二氯甲烷萃取，有機相經(jīng)濃縮、硅膠柱分離純化后，得到三糖供體化合物112，產(chǎn)率51％。
實施例7三糖供體化合物A的合成實例之三。
用化合物104、105的混合物(或各自純產(chǎn)品)代替實施例5中的化合物100或?qū)嵤├?中的化合物103，與化合物101反應(yīng)如實施例5方法制備化合物102，進(jìn)而制備二糖106、107、108和109。該109與三氟乙酸酐以1∶2的比例混溶于吡啶溶液中，反應(yīng)30分鐘后，將反應(yīng)液倒入冰水浴中，用二氯甲烷萃取，有機相經(jīng)濃縮、硅膠柱分離后，得三糖供體113。
實施例8三糖供體化合物A的合成實例之四。
同實施例7制備出化合物109，取3克溶于10ml二氯甲烷中，加入1ml三氯乙腈和0.15ml DBU，室溫下攪拌2小時，反應(yīng)物減壓濃縮后上硅膠柱分離，得到三糖供體115。
實施例9三糖受體B的制備按實施例1方法制備化合物10，參照實施例5的方法，以化合物10取代其中的化合物100，經(jīng)一系列糖基化反應(yīng)過程，制備與三糖108相同的中間體120。
將該中間體120和氯化鈀以1∶2的摩爾比混合溶于甲醇∶乙酸乙酯∶乙酸＝10∶2∶1的混合體系中，常壓下通入氫氣約50分鐘，經(jīng)TLC法檢測反應(yīng)完全，經(jīng)過濾、減壓濃縮后上硅膠柱分離，得到三糖受體121，產(chǎn)率89％。
實施例10香菇六糖的制備實施例6得到的三糖供體110與實施例9中得到的三糖受體121以1.05∶1的摩爾比混合溶于二氯甲烷中，-15℃下加入1.1當(dāng)量的三氟甲磺酸銀，體系在暗室中反應(yīng)8～10個小時后，以三乙胺中和至中性，經(jīng)過濾、減壓濃縮和硅膠柱分離，得到六糖化合物13，按實施例1中方法，制備六糖14(結(jié)構(gòu)式見實施例1)。
實施例11香菇六糖的制備實施例9制備得到三糖供體121與實施例8制備得到的三糖受體115以1∶1的摩爾比混合溶于無水二氯甲烷中，-10℃下加入0.2個當(dāng)量的TMSOTf，反應(yīng)1小時后，以三乙胺中和至中性，經(jīng)過濾、減壓濃縮和硅膠柱分離，得到六糖化合物，按實施例1中方法，制備六糖14(結(jié)構(gòu)式見實施例1)。
權(quán)利要求
1.具有下述通式(I)的化合物
其中，R20代表氫、C1-C12的烷基、C3-C12的1-烯基、C2-C8的亞胺酯基、或單糖。
2.如權(quán)利要求1的化合物，其中，R20為氫。
3.如權(quán)利要求1的化合物，其中，R20為1-烯丙基或1-戊烯基。
4.如權(quán)利要求1的化合物，其中，R20為2，2，2，-三氯乙酰亞胺酯基。
5.如權(quán)利要求1的化合物，其中R20為選自葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖或阿拉伯糖的單糖。
6.權(quán)利要求1至5任一項所述化合物的制備方法，其過程包括以三糖化合物A和B作為反應(yīng)物，在非質(zhì)子有機溶劑中，以路易斯酸作催化劑經(jīng)0℃以下的低溫合成，得到化合物(I)，
其中R20代表的基團(tuán)與權(quán)利要求1、2、3、4或5所述相同，而R1-R19代表?；蛲榛⑶?，三糖化合物A中的離去基團(tuán)L代表鹵素、酯基、1-烯基或亞胺酯基或磷酸酯基；上述合成反應(yīng)中的還原端三糖B的制備包括下述過程(1)首先以丙酮化的葡萄糖衍生物為原料，以保護(hù)基X取代3-位羥基中的氫后，擴環(huán)并?；溆?個取代基團(tuán)，其中保護(hù)基團(tuán)X為任何可區(qū)分于其余位置上的?；谋Ｗo(hù)基團(tuán)；(2)上述?；a(chǎn)物與氨氣反應(yīng)后，并經(jīng)進(jìn)一步合成反應(yīng)得到3-位上帶有可區(qū)分的保護(hù)基、1-位上是可離去基團(tuán)，其余三個位置上被?；钠咸烟茄苌?，其中該1-位上可離去基團(tuán)代表鹵素、酯基或1-烯基或亞胺酯基；(3)從上述葡萄糖衍生物經(jīng)任何可行糖基化過程制備出三糖受體化合物B。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中，三糖化合物A中的離去基團(tuán)L為三氟乙酯、三氯乙酯、1-戊烯基、2，2，2，-三氯乙酰亞胺酯基、或結(jié)構(gòu)為OP(OZ)2的磷酸酯基，其中Z為芐基或C1～3的烷基。
8.權(quán)利要求6所述的方法，其中，三糖化合物B中的保護(hù)基團(tuán)X是芐基、烯丙基、乙酰氯、對甲氧基芐基(PMB)或這四種基團(tuán)的衍生物。
9.權(quán)利要求6所述方法，其中，該三糖化合物A與B反應(yīng)的摩爾比為0.5∶1～2∶1。
10.權(quán)利要求6所述方法，其中，反應(yīng)催化劑路易斯酸包括銀鹽、2價汞鹽或三甲基硅基三氟甲磺酸酯(TMSOTf)、三氟化硼乙醚。
11.權(quán)利要求6所述方法，其中的非質(zhì)子有機溶劑包括二氯烷、乙腈、乙醚、苯或甲苯。
12.權(quán)利要求6所述方法，合成化合物(I)的反應(yīng)進(jìn)程由薄層色譜在乙酸乙酯-石油醚體系中展開來檢測。
13.權(quán)利要求6所述的方法，其還包括如下過程(1)以D-葡萄糖作原料，經(jīng)過2，3，4-位酰化的葡萄糖苷，分別合成出化合物102A和化合物103A，化合物102A中T4為酰基，T1～T3可為任何適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基，包括?；腿〈蓟琓為可離去基團(tuán)；(2)化合物102A和103A以路易斯酸為催化劑，在氮氣氛圍進(jìn)行糖基化反應(yīng)，再經(jīng)普通?；磻?yīng)，可制備出三糖供體化合物A；(3)具結(jié)構(gòu)式101B與102B的化合物在無水有機溶劑中，反應(yīng)溫度-30℃～-78℃，以路易斯酸作催化劑經(jīng)糖基化反應(yīng)制備通式為104B的二糖化合物，其中，P為可離去基團(tuán)；(4)化合物104B與化合物103B在無水有機溶劑中，以路易斯酸作催化劑進(jìn)行糖基化反應(yīng)，得到的三糖經(jīng)?；磻?yīng)、催化氫化反應(yīng)，制備出通式為B的三糖受體化合物，其中，化合物103B為所說的3-位上帶有可區(qū)分的保護(hù)基、1-位上是可離去基團(tuán)，其余三個位置上被?；钠咸烟茄苌?。
14.權(quán)利要求6所述的方法，其中，非還原端三糖化合物A的制備包括以下過程(1)葡萄糖糖苷化反應(yīng)，以烷基或芳基或其衍生物取代1-位成為1-位保護(hù)的葡萄糖苷；(2)上述葡萄糖苷通過4，6-芐叉化反應(yīng)、區(qū)選的糖基化反應(yīng)、4，6-芐叉的脫除反應(yīng)后，再經(jīng)糖基化過程并脫去上述位于還原端1-位的保護(hù)基團(tuán)，制備出三糖化合物的中間體；(3)該中間體以可離去基團(tuán)L取代后成為三糖供體A。
15.權(quán)利要求6或13所述的方法，其中，三糖化合物A與B反應(yīng)先得到一個全?；牧侵虚g產(chǎn)物，該產(chǎn)物在pH9～10的有機溶劑中室溫反應(yīng)，經(jīng)中和、濃縮、重結(jié)晶得到香菇六糖化合物。
16.權(quán)利要求1～5的化合物在制備治療慢性肝炎、癡呆癥、皰疹和用于抗腫瘤、抗愛滋病的藥物中的應(yīng)用。
17.權(quán)利要求1～5的化合物作為保健食品添加劑的應(yīng)用。
18.用于治療慢性肝炎、癡呆癥、皰疹、及抗腫瘤、抗愛滋病的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1～5的化合物和藥學(xué)上可接受的藥物輔劑或藥物載體。
19.權(quán)利要求18的藥物組合物，其包括注射制劑或口服制劑劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有通式(Ⅰ)的香菇多糖單體及其衍生物,并提供了其合成方法,包括以三糖化合物A和B作為反應(yīng)物,在非質(zhì)子有機溶劑中,以路易斯酸作催化劑經(jīng)0℃以下的低溫合成過程。本發(fā)明制備得到的產(chǎn)物與天然香菇多糖具有相似的結(jié)構(gòu)單元,但分子量遠(yuǎn)小于天然提取產(chǎn)物,故而可取代天然產(chǎn)品用于制藥和保健品領(lǐng)域。
文檔編號A61K31/716GK1264711SQ00103320
公開日2000年8月30日 申請日期2000年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月2日
發(fā)明者吳忠 申請人:吳忠