專利名稱：一種牛膝糖肽制劑及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥提取物制劑及制備方法，具體涉及一種牛膝糖肽制劑及制備方法。
中藥牛膝作為“補肝腎，逐瘀通經(jīng)，引血下行”的傳統(tǒng)中藥已載入藥典。近年研究發(fā)現(xiàn)，糖肽(肽多糖)是牛膝中含量較高的一類物質，它是糖復合物中的一種，是多肽與聚糖(多糖或寡糖)形成的共價結合物。《藥學學報》199025(7)《牛膝多糖的化學研究》一文首次揭示牛膝中存在一種具有免疫活性的肽多糖(糖肽)，分子量2.3×104其糖鏈是由葡萄糖酸、半乳糖酸、阿拉伯糖、鼠李糖組成的聚糖。糖肽用于口服時易于為人體吸收，小分子糖肽較大分子糖肽更易為人體吸收。但目前從牛膝中提取平均分子量小于5000的糖肽并制成醫(yī)學上可接受的制劑尚未見報道。因此研究從牛膝中提取小分子糖肽是必要的。另外，由于提取糖復合物時，通常采用易燃且有毒性的有機溶劑，去除脂質及糖肽的分離純化，使生產(chǎn)的安全性降低，污染嚴重。又由于擔心在高溫下干燥會破壞其活性，通常采用效率低下且干燥不徹底的冷凍干燥，使糖復合物的提取成本大增加。
本發(fā)明的目的是要克服上述現(xiàn)有技術缺點，提供一種安全、療效確切、價廉的從牛膝中提取的小分子糖肽制成的口服制劑。
本發(fā)明的牛膝糖肽口服制劑是由0.1～100％牛膝糖肽提取物和0～99.9％藥用輔料組成的醫(yī)學上可接受的口服制劑。其中牛膝糖肽提取物中含牛膝糖肽65～95％，分子量為2000～3000；牛膝糖肽中糖肽=8.8～9.5∶1.2～0.5。
本發(fā)明另一目的是要提供上述牛膝糖肽口服制劑的制備方法。
本發(fā)明公開的牛膝糖肽口服制劑是通過下述方法制得的1、牛膝糖肽提取物的制備取1份中藥牛膝切碎與0.003～0.2份堿式鹽拌和予處理，用3～14份1～32℃水攪拌浸泡1～4次，每次浸泡3～36小時，合并浸泡液，過濾，濾液離心、干燥后即得含牛膝糖肽65～95％的牛膝糖肽提取物。
2、牛膝糖肽口服制劑的制備取處方量0.1～100％牛膝糖肽提取物和0～99.9％藥用輔料相混合，按常規(guī)方法制成片劑、膠囊劑、顆粒劑和口服液。
本發(fā)明牛膝糖肽提取物制備中所用的堿式鹽是指不溶于水或微溶于水的堿性鹽，如碳酸鹽、硅酸鹽和磷酸鹽等。
本發(fā)明牛膝糖肽口服制劑的制備中所用的藥用輔料為常用的藥用增量劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。
本發(fā)明為了制得高純度的小分子牛膝糖肽，在糖肽提取過程中采用了堿式鹽拌和予處理的方法，所用的堿式鹽最好是粉末狀的，這樣可和切碎的牛膝充分混合，有利于去除生藥中的雜質，并防止浸泡過程中糖肽的分解。堿式鹽的用量最好是浸泡牛膝水量的0.1～1.3％。為了提高浸出率，本發(fā)明采用多次浸泡的方法，浸泡的水溫最好在1～32℃，這樣可獲得平均分子量在2000～3000左右的小分子糖肽。為保證牛膝糖肽在干燥過程中不被破壞，最好采用噴霧干燥、減壓濃縮干燥或冷凍干燥。
在牛膝浸泡提取液中，含有許多小分子雜質及少量單糖、雙糖和其他大分子雜質，為了獲得更高純度的產(chǎn)品，也可將浸泡液進行透析和超濾后再干燥。
用本發(fā)明方法提取牛膝糖肽，提取率可達牛膝重量的10～25％。
用本發(fā)明方法獲得的牛膝糖肽提取物，其外觀為白色至類白色。使用美國HP公司的HP3DCE儀，用50μm直徑、有效柱長40cm的泡狀毛細管柱，在操作電壓25kv，緩沖溶液為濃度20mM的硼酸溶液(pH8.5)，以及檢測器為二級管陳列檢測(DAD)條件下，其高效毛細管電泳(HPCE)圖譜如(

圖1)。圖1表明用本發(fā)明方法獲得的提取物所含有的牛膝糖肽是不同分子量的糖肽混合物，而不是單糖混合物或多糖混合物或蛋白質混合物。
采用高效液相色譜(HPLC)，固定相為右旋糖酐凝膠柱，示差析光器檢測，流動相為0.02mol/LNaAC溶液，流速為0.02ml/min，測得平均分子量在2500范圍(圖2)。
通過HPCE電化學檢測器檢測，藥物中所含牛膝糖肽的糖鏈，是由葡萄糖、甘露糖和果糖等單糖組成的聚糖，約占糖肽重量的8.8～9.5，多肽由天門冬氨酸、谷氨酸、纈氨酸、異亮氨酸等氨基酸組成，約占糖肽重量的1.2～0.5。
用本發(fā)明方法獲得的藥物，經(jīng)藥效學動物試驗，證明能有效地拮抗化學藥品而引起的白細胞下降作用(見表1)。能明顯防護和促恢復因輻射引起的造血功能的損傷(見表2)。用本發(fā)明方法獲得的牛膝糖肽，經(jīng)毒性試驗，小鼠注射本藥物的MTD大于20克/公斤，給雜種犬以每日4克/kg劑量連續(xù)服用90天，均未見明顯的藥物性毒性反應。
經(jīng)臨床試驗，證明本品可明顯保護化療和放療后外周血白細胞的下降(見表3)；對中性及淋巴細胞也有明顯的改善(見表4)；對肝功能有保護作用(見表5)。經(jīng)對于處于輻射條件下的161人試驗表明，本品可改善受試人員的生活質量，使其體力充沛、發(fā)病率降低、疲勞降低、食欲和睡眠得到改善。因此本發(fā)明的牛膝糖肽制劑不僅可作白細胞下降癥和肝病的治療藥、抗腫瘤的輔助藥物，也可開發(fā)成保健品，用于改善生活質量，提高體能，降低疲勞，改善食欲和睡眠。
表1 牛膝糖肽對化療模型小鼠的升白作用(X‾±S)]]>組別 劑量 WBC 粒細胞 淋巴細胞(g／g) (109/L)大劑量組 2 4.7±1.6*0.327±0.0500.673±0.050中劑量組 1 4.4±1.0** 0.288±0.0260.712±0.026小劑量組 0.53.6±1.0 0.341±0.0510.659±0.051陽性對照組0.625 3.5±1.1 0.354±0.0560.646±0.054模型對照組 - 3.1±1.0 0.352±0.1060.684±0.106空白對照組 - 15.6±7.0** 0.235±0.050** 0.765±0.050*與模型對照組比*P＜0.05**P＜0.01表2 牛膝糖肽對幅射小鼠白細胞計數(shù)的影響(X‾±S)]]>組別 劑量 白細胞(109/L)(g/Kg)D4 D8大劑量組0.832.97±0.882.59±0.76中劑量組0.423.02±1.352.48±0.83小劑量組0.212.69±1.092.47±0.86陽性對照組 0.252.77±0.702.58±0.97模型對照組 - 2.22±1.032.54±0.64空白對照組 - 12.06±2.80** 13.67±3.59**與模型對照組相比 **P＜0.01表3 化療前后白細胞總數(shù)的變化牛膝糖肽(n=187) 安慰劑(n=81)絕對值 相對于 絕對值 相對于化療前％+ 化療前％+化療前6.123±2.440 100％ 6.481±2.108100％化療后1周 5.311±2.760 90.1±41.7 5.616±2.512 92.8±43.12 4.421±3.010 78.5±56.9 4.159±1.760 69.1±31.73 4.466±2.641 79.3±52.7*4.075±1.831 66.9±34.5
4 5.181±2.675 89.3±43.3** 4.671±1.863 74.6±27.45 5.554±2.531 101.7±44.65.835±2.856 93.1±37.5+以化療前為100％計算的相對值，+與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01表4 化療前后中性粒細胞數(shù)的變化牛膝糖肽(n=187) 安慰劑(n=81)化療前100％100％化療后1周 92.56±55.25 94.97±53.13278.95±67.82 69.77±37.93378.44±62.83*65.45±39.01487.97±50.04** 73.32±33.095104.32±48.5396.46±45.56與安慰劑組比較*P＜0.05 **P＜0.01表5化 療前后淋巴細胞數(shù)的變化牛膝糖肽(n=187) 安慰劑(n=81)化療前100％100％化療后1周 95.65±84.55 89.47±35.23285.74±39.69 79.80±35.82395.78±52.59 86.52±31.274111.14±70.94** 88.67±39.855114.81±72.0699.01±57.22與安慰劑組比較 **P＜0.01本發(fā)明公開的牛膝糖肽口服制劑安全、升白作用顯著，服用方便；所公開的制備方法因不采用任何易燃有毒的有機溶劑而使操作簡便、安全、無污染，適宜于大規(guī)模生產(chǎn)；并由于改變了傳統(tǒng)的糖肽冷凍干燥方法，成功使用噴霧干燥而使成本大大降低。
實施例1、牛膝糖肽提取物制備切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用硅酸鈣7公斤拌和，第一次加水250公斤，水溫30℃，攪拌浸泡9小時后，出浸泡液。第二次加水150公斤，水溫25℃，攪拌浸泡5小時后，出浸泡液。第三次加水150公斤，水溫25℃，攪拌浸泡3小時后，出浸泡液。三次浸泡液合并后過濾去除殘渣、離心去除不溶物，減壓濃縮干燥得干粉12.5公斤，含牛膝糖肽66％。
實施例2、牛膝糖肽提取物制備切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用碳酸鈣2.5公斤拌和，加水700公斤，水溫3℃，攪拌浸泡36小時，過濾、離心，離心液用流動水透析15小時后，進行超濾，對超濾液進行噴霧干燥，得含牛膝糖肽粉末5公斤，純度95％。
實施例3、牛膝糖肽提取物制備切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用磷酸鈣2公斤拌和，第一次加水350公斤，水溫10℃，攪拌浸泡9小時，出浸泡液。第二次加水250公斤，水溫10℃，攪拌浸泡8小時后，出浸泡液。二次浸泡液合并后，過濾去殘渣、離心去不溶物，離心液用流動水透析，透析后超濾，對超濾液進行噴霧干燥，得干粉10公斤，純度約95％。
實施例4、牛膝糖肽膠囊劑制備取實施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g直接灌裝于膠囊中，即得制得牛膝糖肽膠囊劑。
實施例5、牛膝糖肽顆粒劑制備取實施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g，淀粉20g，乳糖15g，硬脂酸鎂2g，過篩，混勻，制粒干燥，按所需劑量分裝，即制得牛膝糖肽顆粒劑。
實施例6、牛膝糖肽片劑制備將實施例5制得的顆粒壓片，即制得牛膝糖肽片劑。
實施例7、牛膝糖肽口服液制備取實施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g，糖粉30g，蜂蜜10g，加蒸餾水至1000ml，溶解，過濾，滅菌，灌裝，即制得口服液。第三次加水150公斤，水溫25℃，攪拌浸泡3小時后，出浸泡液。三次浸泡液合并后過濾去除殘渣、離心去除不溶物，減壓濃縮干燥得干粉12.5公斤，含牛膝糖肽66％。
實施例2、牛膝糖肽提取物制備切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用碳酸鈣2.5公斤拌和，加水700公斤，水溫3℃，攪拌浸泡36小時，過濾、離心，離心液用流動水透析15小時后，進行超濾，對超濾液進行噴霧干燥，得含牛膝糖肽粉末5公斤，純度95％。
實施例3、牛膝糖肽提取物制備切成段(1-8厘米)的牛膝50公斤，用磷酸鈣2公斤拌和，第一次加水350公斤，水溫10℃，攪拌浸泡9小時，出浸泡液。第二次加水250公斤，水溫10℃，攪拌浸泡8小時后，出浸泡液。二次浸泡液合并后，過濾去殘渣、離心去不溶物，離心液用流動水透析，透析后超濾，對超濾液進行噴霧干燥，得干粉10公斤，純度約95％。
實施例4、牛膝糖肽膠囊劑制備取實施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g直接灌裝于膠囊中，即得制得牛膝糖肽膠囊劑。
實施例5、牛膝糖肽顆粒劑制備取實施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g，淀粉20g，乳糖15g，硬脂酸鎂2g，過篩，混勻，制粒干燥，按所需劑量分裝，即制得牛膝糖肽顆粒劑。
實施例6、牛膝糖肽片劑制備將實施例5制得的顆粒壓片，即制得牛膝糖肽片劑。
實施例7、牛膝糖肽口服液制備取實施例1～3制得的牛膝糖肽提取物100g，糖粉30g，蜂蜜10g，加蒸餾水至1000ml，溶解，過濾，滅菌，灌裝，即制得口服液。
權利要求
1.一種牛膝糖肽制劑，其特征在于該制劑是由0.1～100％牛膝糖肽提取物和0～99.9％藥用輔料組成的醫(yī)學上可接受的口服制劑；其中牛膝糖肽提取物中含牛膝糖肽65～95％，分子量為2000～3000；牛膝糖肽中糖∶肽=8.8～9.5∶1.2～0.5。
2.一種如權利要求1所述的牛膝糖肽制劑，其特征在于其中所述的牛膝糖肽中的糖鏈是由葡萄糖、甘露糖和果糖等單糖組成的聚糖。
3.一種如權利要求1所述的牛膝糖肽制劑，其特征在于其中所述的牛膝糖肽中的肽鏈是由天門冬氨酸、谷氨酸、纈氨酸和異亮氨酸組成的。
4.一種如權利要求1所述的牛膝糖肽制劑的制備方法，其特征在于該制劑是通過下列步驟制得(1)牛膝糖肽提取物的制備取1份中藥牛膝切碎與0.003～0.2份堿式鹽拌和予處理，用3～14份1～32℃水攪拌浸泡1～4次，每次浸泡3～36小時，合并浸泡液，過濾，濾液離心、干燥后即得含牛膝糖肽65～95％的牛膝糖肽提取物；(2)牛膝糖肽口服制劑的制備取處方量0.1～100％牛膝糖肽提取物和0～99.9％藥用輔料相混合，分別按常規(guī)方法制成片劑、膠囊劑、顆粒劑和口服液。
5.一種如權利要求1所述的牛膝糖肽制劑的制備方法，其特征在于其中所述的堿式鹽為不溶于水或微溶于水的堿性鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種牛膝糖肽制劑及制備方法,該制劑是由0.1～100%牛膝糖肽提取物和0～99.9%藥用輔料組成的醫(yī)學上可接受的口服制劑。其中牛膝糖肽提取物中含牛膝糖肽65～95%,分子量為2000～3000;牛膝糖肽中糖:肽=8.8～9.5:1.2～0.5。該制劑可用于白細胞下降癥的治療和抗腫瘤的輔助治療。本發(fā)明還公開了牛膝糖肽口服制劑的制備方法,該方法不采用任何易燃有毒的有機溶劑而使操作簡便、安全、無污染,大大降低了成本,適宜于大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號A61P1/16GK1287008SQ00119518
公開日2001年3月14日 申請日期2000年7月27日 優(yōu)先權日2000年7月27日
發(fā)明者高佐群, 陶艷艷 申請人:上海隆?？萍紝崢I(yè)公司