專利名稱：治療艾滋病的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療艾滋病的藥物組合物。
許多病毒性疾病仍嚴(yán)重威脅著人類的生命安全，其中艾滋病病毒(HIV)引起的艾滋病(AIDS)是一種傳染性強(qiáng)且危害性極大的傳染病，其致病性和致死性非常強(qiáng)，目前尚無(wú)有效的治療藥物。目前，全世界有4000萬(wàn)感染者，我國(guó)現(xiàn)有感染者50萬(wàn)人，如果控制不當(dāng)，本世紀(jì)末可能達(dá)到100萬(wàn)人，到2010年會(huì)達(dá)到1000萬(wàn)人。現(xiàn)用于AIDS治療的藥物大多為化學(xué)藥物，雖然可以有效地緩解癥狀，延長(zhǎng)病程，但仍存在很多問(wèn)題不能徹底清除體內(nèi)病毒，停藥反彈，易產(chǎn)生耐藥性，副作用大及每療程10余萬(wàn)元的昂貴費(fèi)用，使得這些藥物的應(yīng)用受到很大限制。所以低毒、有效和價(jià)廉的天然藥物重新被人們所推崇，充分利用國(guó)內(nèi)的自然資源，積極發(fā)展抗艾滋病的藥物將有利于中國(guó)和廣大發(fā)展中國(guó)家(擁有全球90％以上的HIV感染者)HIV感染者的生存。
現(xiàn)代藥用海藻多達(dá)百余種，具有清熱解毒、利水消腫、補(bǔ)腎養(yǎng)心、活血化淤和消食驅(qū)蟲(chóng)等功效。海藻中含有多種有效成分，其中，硫酸酯多糖是研究較為深入，同時(shí)也是最賦有實(shí)用價(jià)值的成分。海藻多糖是一種具有特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)合糖，含有硫酸酯基團(tuán)的蛋白多糖。以糖類為基礎(chǔ)的藥物研究有巨大的潛力，糖類分子在細(xì)胞識(shí)別、信號(hào)傳遞、細(xì)胞間相互作用等方面起重要作用，糖部分決定了整個(gè)分子的功能。糖類藥物在抗感染，抗癌，抗病毒及抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等方面均有不同程度的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用。多糖中的結(jié)合蛋白組分發(fā)揮抑制病毒繁殖和殺滅病毒作用，是多位點(diǎn)抗病毒的分子基礎(chǔ)。
對(duì)海藻硫酸多糖的抗HIV病毒作用，國(guó)內(nèi)外已有報(bào)道(鄭永唐，賁昆龍，金善煒，17種植物中蛋白質(zhì)提取物的抗HIV活性，中國(guó)病毒學(xué)，1998；13:312-24;Witvrouw M and De Clercq E. Sulfated polysaccharides extractedfrom sea algae as potential antiviral drugs. Gen Pharmacol,1997; 29:497-511;Witvrouw M,Este JA,Mateu MQ,et al.Activity of a sulfated polysaccharidesextracted from the red seaweed aghardhiella tenera against humanimmunodeficiency virus and enveloped viruses. Antiviral chemistry &chemotherapy,1994;5:297-303)。但是，對(duì)其抗病毒作用及其藥理藥效，尚無(wú)完整和深入的研究，缺乏確鑿的實(shí)驗(yàn)資料。
疊氮脫氧胸苷(Zidovudine，AZT)是美國(guó)FDA批準(zhǔn)的第一個(gè)用于治療艾滋病的藥物。用AZT后，雖可在一定程度上提高患者的生活質(zhì)量，但總的療效還不理想，嚴(yán)重副作用較多。
本發(fā)明的發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)海藻硫酸多糖與AZT聯(lián)合用藥具有意想不到的顯著的抗HIV協(xié)同作用。
本發(fā)明的目的是提供一種對(duì)艾滋病具有明顯療效、毒副作用較少的藥物組合物。
本發(fā)明的目的藥物組合物包含有效量的海藻硫酸多糖和AZT，其中海藻硫酸多糖與AZT的重量比為70∶15。
本發(fā)明的海藻硫酸多糖(Sulfated polysaccharides from seaweeds，SPS)是從褐藻中提取的一種含硫酸酯基團(tuán)的蛋白質(zhì)多糖，主要理化特征為易溶于水，溶解度≥30％，白色或黃色多晶粉末，具特有的香味；SO42-含量為20±5％，巖藻糖含量為20±5％，蛋白質(zhì)含量10-18％。
本發(fā)明的海藻硫酸多糖提取工藝是由本發(fā)明的發(fā)明人獨(dú)立研究開(kāi)發(fā)的，它包括以下步驟1．料可選國(guó)產(chǎn)優(yōu)質(zhì)淡干海藻(也可使用巨藻)，主要產(chǎn)地，我國(guó)北方海域；2．浸泡和清洗常溫下浸泡并清洗，嚴(yán)格控制浸泡和清洗的時(shí)間；3．粉碎；
4．水提；5．低濃度醇沉；6．高濃度醇沉，獲得粗產(chǎn)品；7．純化，獲得精制產(chǎn)品。
該制備方法條件溫和，不破壞海藻藻體所含的各種天然營(yíng)養(yǎng)成份，操作簡(jiǎn)單，提高了海藻綜合利用程度，產(chǎn)率較高(2％)，成本較低，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的藥物組合物可制成片劑、丸劑、針劑和膠囊(軟、硬)。該藥品每劑含海藻硫酸多糖250mg，遵醫(yī)囑口服。每日用量750mg～1500mg，可分三次給予，每次250mg～500mg。
參照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15193.3-94、GB15193.5-94、GB15193.8-94、GB15193.7-94、GB15193.4-94、GB15193.14-94和GB15193.13-94，進(jìn)行大鼠急性毒性試驗(yàn)、小鼠急性毒性試驗(yàn)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)(雄性)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)(雌性)、小鼠精子畸形試驗(yàn)、小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn)、Ames試驗(yàn)、大鼠系統(tǒng)致畸試驗(yàn)和大鼠30天喂養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)果顯示大、小鼠LD50＞21.50g/kg；膠囊實(shí)驗(yàn)組與溶劑組比較，小鼠骨髓細(xì)胞微核率無(wú)顯著差異；膠囊實(shí)驗(yàn)組與溶劑組比較，小鼠精子畸形率無(wú)顯著性差異；膠囊實(shí)驗(yàn)組與溶劑組比較，小鼠初級(jí)精母細(xì)胞染色體畸變率，無(wú)顯著差異；Ames試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組回變菌落數(shù)小于或等于自然回變菌落數(shù)2倍；大鼠致畸試驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組與溶劑組比較，孕鼠孕期體重增重和生殖胚胎檢查、胎鼠生長(zhǎng)發(fā)育和骨骼畸形檢查等指標(biāo)差異不顯著；大鼠30天喂養(yǎng)，與基礎(chǔ)飼料對(duì)照組比較，臨床檢查臟器稱量、血液生化學(xué)檢查、血液學(xué)檢查、病理組織學(xué)檢查，均無(wú)顯著性差異。該結(jié)果表明海藻硫酸多糖屬無(wú)毒，無(wú)遺傳毒性和無(wú)致畸作用物質(zhì)。
大鼠口服海藻硫酸多糖膠囊(4000mg/kg)，一天2次，連服10天，在清醒狀態(tài)下觀察其精神神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)，結(jié)果均無(wú)異常表現(xiàn)。
經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室科技人員和志愿受試者工30人試服，海藻硫酸多糖對(duì)消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及循環(huán)系統(tǒng)均不引起不良變化，多數(shù)人反映精力旺盛，食欲增加。5例身體虛弱、易患感冒的受試者反映感冒次數(shù)明顯減少下面用實(shí)施例來(lái)詳細(xì)描述本發(fā)明，但這些實(shí)施例不得理解為任何意義上的對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1海藻硫酸多糖的制備100kg海藻，經(jīng)浸泡、清洗、粉碎，加水800kg，90-100℃萃取3次，3.5h。取上清液減壓濃縮到25L，在30％的乙醇條件下沉淀，再取上清液，減壓蒸發(fā)至10L，加入85L 95％的乙醇中，過(guò)濾，得粗產(chǎn)品。60℃干燥，純化，100目粉碎。
實(shí)施例2抗HIV海藻硫酸多糖組合物的制備該組合物包括海藻硫酸多糖70％AZT 15％維生素C 15％制備方法取海藻硫酸多糖250公斤、AZT 50公斤、維生素C AZT 50公斤，采用本技術(shù)領(lǐng)域中的常規(guī)技術(shù)制成100萬(wàn)顆片劑和膠囊。其中，膠囊350mg/粒、350mg／片，一天2粒(片)。
實(shí)施例3海藻硫酸多糖組合物抗HIV作用1．海藻硫酸多糖抗HIV作用SPS對(duì)MT-4細(xì)胞的毒性試驗(yàn)SPS用培養(yǎng)液配制成20mg／ml溶液，倍比稀釋后加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每濃度3孔，每3天換同濃度藥液，設(shè)無(wú)藥物細(xì)胞對(duì)照組。將細(xì)胞與藥物在37℃培養(yǎng)一周，用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率。
SPS對(duì)病毒吸附的抑制作用在病毒感染細(xì)胞的同時(shí)加入SPS，設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照，4℃放置1小時(shí)，洗凈，去除未吸附的病毒和SPS，將細(xì)胞再懸浮于培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)一周，觀察細(xì)胞病變，測(cè)定細(xì)胞活性，收集上清測(cè)定P24抗原。
SPS對(duì)HIV逆轉(zhuǎn)錄酶活性的抑制作用分離HIV-1病毒顆粒，取20ul，加入10ul病毒裂解液(0.5％Triton X-100，0.8M NaCl，0.5M苯甲磺酰氟，20％(v/v)甘油，50mM Tris-HCl pH7.8)，以裂解上清中病毒顆粒，釋放出其中的逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)。在4℃冰浴條件下，加入20LSPS(20、4、0.8、0.16、0.032、0.0064mg／ml)，然后加入801的反應(yīng)混合物，反應(yīng)混合物的配法如下0.05M Tris-HCl(pH8.4)，2mM DTT，100mM KCl，10mM MgCl2，0.1％TritonX-100，1.5g Poly[dA]-[dT]12-18，1.5Ci 3H-dTTP。將上述反應(yīng)體系置37℃反應(yīng)2小時(shí)，則RT的活性可通過(guò)3H-dTTP摻入PolyA-oligodT12-18模板引物的多少來(lái)表示。反應(yīng)結(jié)束后，加入3ml冰冷的10％三氯乙酸沉淀DNA，沉淀的DNA收于玻璃纖維素膜上，然后以5％的三氯乙酸及70％的乙醇洗膜，將膜烘干，加入8ml閃爍液(含0.5％PPO，0.015％POPOP的二甲苯溶液)液閃計(jì)數(shù)儀測(cè)定cpm，計(jì)算抑制率。
SPS對(duì)病毒復(fù)制的抑制作用以200TCID50HIV-1(SF33)感染MT-4細(xì)胞(6×105/ml)，細(xì)胞與病毒容積比為1∶1，37℃，孵育2小時(shí)，洗凈，棄上清，將感染細(xì)胞再懸浮于培養(yǎng)基，在SPS或SPS+AZT存在下培養(yǎng)1周或4周，進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)。
SPS與AZT聯(lián)合用藥對(duì)HIV的抑制作用
權(quán)利要求
1．一種治療艾滋病的藥物組合物，包括有效量的海藻硫酸多糖和疊氮脫氧胸苷，其中海藻硫酸多糖和疊氮脫氧胸苷的重量百分比為70∶15。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所說(shuō)的海藻硫酸多糖為褐藻硫酸多糖。
3．根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所說(shuō)的海藻硫酸多糖水溶解度大于或等于30％，為白色或黃色多晶，有芳香味，SO42-含量為20±5％，巖藻糖含量為20±5％，蛋白質(zhì)含量為10-18％。
4．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物以片劑形式給予。
5．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物以膠囊形式給予。
6．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物以丸劑形式給予。
7．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物以針劑形式給予。
8．根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物還包括維生素C。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種抗艾滋病病毒的藥物組合物。它包括有效量的海藻硫酸多糖和AZT。該藥物組合物對(duì)艾滋病有顯著的療效,且副作用少。
文檔編號(hào)A61P31/18GK1284334SQ0012087
公開(kāi)日2001年2月21日 申請(qǐng)日期2000年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月4日
發(fā)明者孫存普, 魏文青, 叢建波, 吳可, 先宏, 張建中 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所