專利名稱：處理皮膚色素沉著的方法
本案系美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)09／110，409(Attorney Docket No．JBP 430)的部份繼續(xù)申請(qǐng)案，其并于本文供參考。
本發(fā)明系關(guān)于使皮膚產(chǎn)生色素沉著及／或造成皮膚除色之方法及組合物，更確定地說(shuō)，本發(fā)明系關(guān)于一種化合物其可影響黑色素生成且可作為去色素劑或作為使皮膚變黑的藥劑使用。
多年以來(lái)人類一值都關(guān)心皮膚的顏色，尤其是去除色素沉著過(guò)度的能力，例如發(fā)現(xiàn)在老人斑、雀斑、或一般性的老化皮膚，是要求均勻膚色之個(gè)人有興趣之處，在地球上的某些地區(qū)，普遍希望身體能白化，也有色素沉著不足及色素沉著過(guò)度疾病需要治療，同樣地，能產(chǎn)生黃褐色外觀而不會(huì)因?yàn)樘?yáng)輻射造成無(wú)法醫(yī)治的光照傷害對(duì)許多人很重要，曾經(jīng)提出許多方法以完成去除色素，以及完成使皮膚變黑，例如曲酸、氫醌、視黃醛及曾經(jīng)用于去除色素的其他化學(xué)物質(zhì)，曾經(jīng)利用二羥基丙酮等化合物在不暴露于陽(yáng)光的情況下使皮膚變成黃褐色的能力。
許多這些先前的解決方法不曾發(fā)現(xiàn)可以接受，在使用這些先前組合物的皮膚區(qū)域之間，經(jīng)常有明顯的分界線，因此需要精確地使用全部這些化合物以便達(dá)到所要的結(jié)果，許多這些化合物被發(fā)現(xiàn)對(duì)皮膚相當(dāng)刺激因此不希望使用。
對(duì)黑色素生成化學(xué)及酶原理的了解，在文獻(xiàn)中有許多記載，黑色素細(xì)胞從胚胎神經(jīng)管突觸轉(zhuǎn)移至皮膚內(nèi)，造成分泌粒、色素顆粒而產(chǎn)生黑色素，黑色素生成發(fā)生在色素顆粒內(nèi)，且黑色素隨后經(jīng)由黑色素細(xì)胞樹(shù)狀突分布至角質(zhì)形成細(xì)胞，黑色素生成的關(guān)鍵酶是酪氨酸酶，其引發(fā)級(jí)聯(lián)反應(yīng)將酪氨酸轉(zhuǎn)化成生物聚合物黑色素，兩種已知的與酪氨酸酶相關(guān)的蛋白質(zhì)(TRP’s)是TRP-1及TRP-2，這些蛋白質(zhì)與酪氨酸酶共有約40％之同源性且在黑色素生成中具有催化活性以及調(diào)節(jié)作用，TRP-1在黑色素細(xì)胞中是最多的糖蛋白。
雖然事實(shí)上黑色素生成之化學(xué)及酶學(xué)原理有完善的記錄，其在細(xì)胞水平的調(diào)節(jié)只有部份了解，酪氨酸酶及TRP’s與溶酶體相關(guān)的膜蛋白質(zhì)(LAMP)基因族共有結(jié)構(gòu)及生物性質(zhì)，因此其靶至色素顆粒膜可引發(fā)其活化，這些蛋白質(zhì)在胞漿尾之磷酸化作用／去磷酸化作用可牽涉調(diào)節(jié)黑色素生成，蛋白質(zhì)激酶C(PKC)族之β異構(gòu)物形式經(jīng)證明可經(jīng)由酪氨酸酶活化作用調(diào)節(jié)人類的黑色素生成，酪氨酸酶、TRP-1及TRP-2之基因釋出經(jīng)協(xié)調(diào)，全部三種酶在人類的表皮釋出，在黑色素細(xì)胞與角質(zhì)形成細(xì)胞共同培養(yǎng)時(shí)，這些轉(zhuǎn)錄物分別在45∶45∶10之比率下釋出，在單獨(dú)培養(yǎng)黑色素細(xì)胞時(shí)，只存在TRP-1轉(zhuǎn)錄物，表示角質(zhì)形成細(xì)胞衍生的訊號(hào)牽涉協(xié)調(diào)釋出這些基因，角質(zhì)形成細(xì)胞-黑色素細(xì)胞相互作用之調(diào)節(jié)及色素顆粒轉(zhuǎn)移至角質(zhì)形成細(xì)胞之機(jī)制尚未了解。
蛋白酶活化的受體-2(PAR-2)是一種七個(gè)跨膜G-蛋白質(zhì)偶聯(lián)的受體，其系相關(guān)但明顯不同于凝血酶受體(TR，也稱為PAR-1，及PAR-3)之序列，兩種受體經(jīng)由在細(xì)胞外區(qū)域分解的精氨酸-絲氨酸蛋白水解性活化，然后新產(chǎn)生的N-末端活化這些受體如栓系配位體，兩種受體可經(jīng)由胰蛋白酶活化，但是只有TRs經(jīng)由凝血酶活化，只有PAR-2經(jīng)由巨噬細(xì)胞類胰蛋白酶活化，兩種受體也可經(jīng)由相當(dāng)于其新N-末端與受體分解無(wú)關(guān)的肽活化，小白鼠PAR-2活化肽之SLIGRL可等勢(shì)性地活化人類受體，雖然TR之功能經(jīng)詳細(xì)記載，PAR-2之生物學(xué)尚未完全證明，PAR-2活化作用在抑制角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)及分化之角色最近經(jīng)揭示(Derian等，“新的一族蛋白酶激活受體對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的差向調(diào)節(jié)”，Cell Growth&Differentiation，Vol．8，pp．743-749，July 1997)。
根據(jù)本發(fā)明，我們發(fā)現(xiàn)一種影響哺乳動(dòng)物皮膚色素沉著變化的方法，包括將可影響PAR-2途徑的化合物給哺乳動(dòng)物皮膚局部用藥，本發(fā)明組合物可含一或多種作為胰蛋白酶、類胰蛋白酶、絲氨酸蛋白酶或PAR-2刺激劑之化合物用于增加色素沉著，或者是，其可含一或多種作為絲氨酸蛋白酶抑制劑、胰蛋白酶抑制劑、凝血酶抑制劑、類胰蛋白酶抑制劑、PAR-2途徑抑制劑或PAR-2拮抗劑之化合物用于減低色素沉著或″去除色素″。
在本文中使用時(shí)，″哺乳動(dòng)物″根據(jù)Webster’s Medical Desk Dictionary 407(1986)之定義，系指包括″哺乳動(dòng)物″綱之較高等脊椎動(dòng)物之任何成員，且包括但不限于人類。在本文中使用時(shí)，″受體″將包括細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外的受體且系指可接受及轉(zhuǎn)導(dǎo)訊號(hào)之分子，名詞PAR-2系指蛋白酶活化的受體-2或相關(guān)的蛋白酶活化受體，蛋白酶活化的受體-2(以下稱為″PAR-2″)是一種絲氨酸-蛋白酶活化受體，其可在多種組織中釋出，包括角質(zhì)形成細(xì)胞及纖維組織母細(xì)胞，凝血酶受體(也稱為PAR-1，以下稱為″TR″)是一種絲氨酸-蛋白酶活化受體，其可在多種組織中釋出，包括角質(zhì)形成細(xì)胞，PAR-2及TR在皮膚中的生物學(xué)作用尚未完全了解，但是我們發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞及黑色素細(xì)胞經(jīng)由PAR-2途徑之相互作用影響黑色素生成，我們發(fā)現(xiàn)凝血酶抑制劑及／或類胰蛋白酶抑制劑及／或胰蛋白酶抑制劑及PAR-2拮抗劑可作為去色素劑使用而不會(huì)刺激皮膚，PAR-2刺激劑及絲氨酸蛋白酶例如胰蛋白酶及類胰蛋白酶可作為皮膚黑化劑使用，而且PAR-2可作為靶用于皮膚白化及黑化劑。
我們還發(fā)現(xiàn)Bowman-Birk型抑制劑之BBI也可作為活性去色素劑使用，在美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)09／110，409中建議作為去色素劑使用的得自大豆的萃取物及混合物含STI及BBI，我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)單獨(dú)BBI可影響皮膚除色，在本申請(qǐng)案中陳述的全部調(diào)制物及組合物中，可使用與STI相同濃度范圍的BBI。


圖1顯示含非洲人-美洲人供體黑色素細(xì)胞的表皮同等物，經(jīng)由從同等物上方觀察顯示沒(méi)有色素沉著，證明用BBI處理可降低色素沉積在這些同等物中。
圖2顯示含非洲人-美洲人供體黑色素細(xì)胞的表皮同等物，經(jīng)由這些同等物組織學(xué)切片的Fontana-Mason色素沉著法，證明用BBI處理可降低色素沉積在這些同等物中。
圖3顯示含非洲人-美洲人供體黑色素細(xì)胞的表皮同等物，經(jīng)由這些同等物組織學(xué)切片的Fontana-Mason色素沉著法，證明在劑量相關(guān)方式下用增加濃度之BBI處理可降低色素沉積在這些同等物中。
圖4是BBI處理后，定量抑制色素沉積之百分比圖。
圖5顯示豬皮用BBI及STI處理后之F&M染色組織切片，用BBI及STI處理后，豬皮內(nèi)的黑色素沉積明顯地降低。
圖6是例如圖5顯示的皮膚切片之電腦影像分析圖，此圖將用BBI或STI處理后豬皮的抑制色素沉積百分比定量化。
我們發(fā)現(xiàn)在哺乳動(dòng)物皮膚中，胰蛋白酶、類胰蛋白酶及PAR-2刺激劑可用于增加色素沉著且胰蛋白酶抑制劑及／或類胰蛋白酶抑制劑及／或凝血酶抑制劑及PAR-2拮抗劑可作為減低色素沉著，我們認(rèn)為揭示在并于本文供參考之美國(guó)專利5，523，308號(hào)并作為凝血酶及／或胰蛋白酶及／或類胰蛋白酶抑制劑的部份化合物，將可在本發(fā)明方法中使用，部份這些化合物也揭示在Costanzo等，“探測(cè)S1’亞部位的潛在凝血酶基于雜環(huán)激活的羰基的三肽過(guò)渡狀態(tài)類似物”J．Med．Chem．，1996，Vol 39，pp．3039-3043且具有下列結(jié)構(gòu)式 其中A選自C1-8烷基、羧基C1-8烷基、C1-4烷酯基C1-4烷基、苯基C1-4烷基、經(jīng)取代之苯基C1-4烷基(其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、甲?；1-4烷酯基、C1-2烷基羰基、苯基C1-4烷酯基、C3-7環(huán)烷基羰基、苯基羰基、經(jīng)取代之苯基羰基(其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、 C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、C1-4烷基磺?；1-4烷氧基磺?；?、全氟C1-4烷基磺?；?、苯基磺?；⒔?jīng)取代之苯基磺?；?其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、10-樟腦基磺酰基、苯基C1-4烷基磺?；⒔?jīng)取代之苯基C1-4烷基磺?；1-4烷基亞磺?；?、全氟C1-4烷基亞磺?；⒈交鶃喕酋；?、經(jīng)取代之苯基亞磺?；?其中苯基之取代基獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、苯基C1-4烷基亞磺酰基、經(jīng)取代之苯基C1-4烷基亞磺酰基、1-萘基磺?；?、2-萘基磺?；蚪?jīng)取代之萘基磺酰基(其中萘基之取代基獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、1-萘基亞磺酰基、2-萘基亞磺酰基或經(jīng)取代之萘基亞磺?；?其中萘基之取代基獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)；D或L氨基酸在其羧基末端偶合至式Ⅰ所示之氮且系選自丙氨酸、天冬酰胺、2-鈴蘭氨酸、甘氨酸、N-C18烷基甘氨酸、脯氨酸、1-氨基-1-環(huán)C3-8烷基羧酸、噻唑烷-4-羧酸、5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸、唑烷-4-羧酸、六氫吡啶羧酸、纈氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、正亮氨酸、亮氨酸、第三亮氨酸、異亮氨酸、苯基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-噻吩基丙氨酸、3-噻吩基丙氨酸、[1，2，3，4]-四氫異喹啉-1-羧酸及[1，2，3，4]-四氫異喹啉-2-羧酸，其中該氨基酸之氨基末端連接至如下基團(tuán)之一C1-4烷基、四唑-5-基C1-2烷基、羧基C1-4烷基、C1-4烷酯基C1-4烷基、苯基C1-4烷基、經(jīng)取代之苯基C1-4烷基(其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、1，1-二甲基C1-4烷基、3-苯基-2-羥基丙?；?，2-二苯基-1-羥基乙基羰基、[1，2，3，4]-四氫異喹啉-1-羰基、[1，2，3，4]-四氫異喹啉-3-羰基、1-甲基氨基-1-環(huán)己羰基、1-羥基-1-環(huán)己羰基、1-羥基-1-苯基乙?；?-環(huán)己基-1-羥基乙?；?-苯基-2-羥基丙?；?、3，3-二苯基-2-羥基丙?；?、3-環(huán)己基-2-羥基丙?；⒓柞；?、C1-4烷酯基、C1-12烷基羰基、全氟C1-4烷基、C1-4烷基羰基、苯基C1-4烷酯基、經(jīng)取代之苯基C1-4烷基羰基(其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、1，1-二苯基C1-4烷基羰基、經(jīng)取代之1，1-二苯基C1-4烷基羰基(其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、全氟C1-4烷基磺?；?、C1-4烷基磺?；1-4烷氧基磺?；?、苯基磺?；⒔?jīng)取代之苯基磺?；?其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、10-樟腦基磺?；⒈交鵆1-4烷基磺?；⒔?jīng)取代之苯基C1-4烷基磺?；⑷鶦1-4烷基亞磺?；?、C1-4烷基亞磺?；⒈交鶃喕酋；?、經(jīng)取代之苯基亞磺?；?其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、1-萘基磺酰基、2-萘基磺酰基、經(jīng)取代之萘基磺?；?其中萘基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、1-萘基亞磺?；?-萘基亞磺?；敖?jīng)取代之萘基亞磺?；?其中萘基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)；或是含兩個(gè)氨基酸之多肽，其中第一個(gè)氨基酸是D或L氨基酸，經(jīng)由其羧基末端鍵結(jié)至式Ⅰ所示之氮且系選自包括甘氨酸、N-C18烷基甘氨酸、丙氨酸、2-鈴蘭氨酸、脯氨酸、噻唑烷-4-羧酸、5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸、唑烷-4-羧酸、1-氨基-1-環(huán)C3-8烷基羧酸、3-羥基脯氨酸、4-羥基脯氨酸、3-(C1-4烷氧基)脯氨酸、4-(C1-4烷氧基)脯氨酸、3，4-去氫脯氨酸、2，2-二甲基-4-噻唑烷羧酸、2，2-二甲基-4-唑烷羧酸、六氫吡啶羧酸、纈氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、第三亮氨酸、異亮氨酸、苯基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-噻吩基丙氨酸、3-噻吩基丙氨酸、[1，2，3，4]-四氫異喹啉-2-羧酸、天冬氨酸-4-C1-4烷酯及谷氨酸-5-C1-4烷酯，且第二個(gè)D或L氨基酸是連接至該第一個(gè)氨基酸之氨基末端且系選自包括苯基丙氨酸、4-苯甲?；交彼?、4-羧基苯基丙氨酸、4-(羧基C1-2烷基)苯基丙氨酸、經(jīng)取代之苯基丙氨酸(其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、3-苯并噻吩基丙氨酸、4-聯(lián)苯基丙氨酸、高苯基丙氨酸、八氫吲哚-2-羧酸、2-吡啶基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、4-噻唑基丙氨酸、2-噻吩基丙氨酸、3-(3-苯并噻吩基)丙氨酸、3-噻吩基丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、3-三C1-4烷基矽烷基丙氨酸、環(huán)己基甘氨酸、二苯基甘氨酸、苯基甘氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸砜、2，2-二環(huán)己基丙氨酸、2-(1-萘基丙氨酸)、2-(2-萘基丙氨酸)、苯基經(jīng)取代之苯基丙氨酸(其中取代基是選自C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、天冬氨酸、天冬氨酸-4-C1-4烷基、谷氨酸、谷氨酸-5-C1-4烷酯、環(huán)C3-8烷基丙氨酸、經(jīng)取代之環(huán)C3-8烷基丙氨酸(其中環(huán)取代基是羧基、C1-4烷基羧基、C1-4烷酯基或氨基羰基)、2，2-二苯基丙氨基及全部α-C1-5烷基之其全部氨基酸衍生物，其中該第二個(gè)氨基酸之氨基末端是未經(jīng)取代或經(jīng)選自包括甲?；?、C1-12烷基、四唑-5-基C1-2烷基、羧基C1-8烷基、C1-4烷酯基C1-4烷基、苯基C1-4烷基、經(jīng)取代之苯基C1-4烷基(其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、1，1-二苯基C1-4烷基、C1-6烷酯基、苯基C1-6烷酯基、C1-2烷基羰基、全氟C1-4烷基C0-4烷基羰基、苯基C1-4烷基羰基、經(jīng)取代之苯基C1-4烷基羰基(其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、1，1-二苯基C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷酯基、10-樟腦基磺?；?、苯基C1-4烷基磺酰基、經(jīng)取代之苯基C1-4烷基磺?；?、C1-4烷基亞磺?；⑷鶦1-4烷基亞磺?；⒈交鶃喕酋；?、經(jīng)取代之苯基亞磺?；?其中苯基之取代基是獨(dú)立地選自-或多個(gè)C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、苯基C1-4烷基亞磺?；⒔?jīng)取代之苯基C1-4烷基亞磺?；?、1-萘基磺酰基、2-萘基磺?；⒔?jīng)取代之萘基磺?；?其中萘基之取代基是選自C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)、1-萘基亞磺?；?、2-萘基亞磺酰基及經(jīng)取代之萘基亞磺?；?其中萘基之取代基是選自C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基或C1-4烷酯基)；R1是選自包括氫及烷基；R2是選自包括氨基C2-5烷基、胍基C2-5烷基、C1-4烷基胍基C2-5烷基、二C1-4烷基胍基C2-5烷基、脒基C2-5烷基、C1-4烷基脒基C2-5烷基、二C1-4烷基脒基C2-5烷基、C1-3烷氧基C2-5烷基、苯基、經(jīng)取代之苯基(其中取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)氨基、脒基、胍基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、芐基、苯基經(jīng)取代之芐基(其中取代基是獨(dú)立地選自一或多個(gè)氨基、脒基、胍基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基)、羥基C2-5烷基、C1-5烷基氨基C2-5烷基、C1-5二烷基氨基C2-5烷基、4-氨基環(huán)己基C0-2烷基及C1-5烷基；p是0或1；B是 其中n是0-3，R3是H或C1-5烷基且B之羰基部份鍵結(jié)至E；E是雜環(huán)基且系選自包括唑啉-2-基、唑-2-基、噻唑-2-基、噻唑-5-基、噻唑-4-基、噻唑啉-2-基、咪唑-2-基、4-氧代-2-喹 啉-2-基、2-吡啶基、3-吡啶基、苯并[b]噻吩-2-基、三唑-4-基、三唑-6-基、吡唑-2-基、4，5，6，7-四氫苯并噻唑-2-基、萘并[2，1-d]噻唑-2-基、萘并[1，2-d]噻唑-2-基、喹啉-2-基、異喹啉-1-基、異喹啉-3-基、苯并[b]呋喃-2-基、吡嗪-2-基、喹唑啉-2-基、異噻唑-5-基、異噻唑-3-基、嘌呤-8-基及經(jīng)取代之雜環(huán)基其中取代基是選自包括C1-4烷基、全氟C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、鹵素、酰氨基、硝基、氨基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、羧基、C1-4烷酯基、羥基或苯基C1-4烷基氨基羰基；或其藥學(xué)上可接受之鹽類。
更確定地說(shuō)，我們認(rèn)為部份上式化合物含d-苯基丙氨酸-脯氨酸-精氨酸組成要素可以影響抑制PAR-2途徑且造成去除色素，作為凝血酶及胰蛋白酶抑制劑且可有效使哺乳動(dòng)物皮膚去除色素之一種特別較佳的化合物是(S)-N-甲基-D-苯基丙氨酸基-N-[4-[(氨基亞氨基甲基)氨基]-1-(2-苯并噻唑基羰基)丁基]-L-脯氨酸酰胺(化學(xué)文摘名稱)(以下稱為″化合物I″)，我們建議同系物或功能類似于化合物I且陳述在美國(guó)專利5，523，308號(hào)之其他化合物可在本發(fā)明方法及組合物中具有活性。
抑制胰蛋白酶的其他化合物，例如絲氨酸蛋白酶抑制劑，且尤其是大豆胰蛋白酶抑制劑(STI)也可在本發(fā)明方法中使用，大豆、青豆及黑豆萃取物、以及從這些豆類制成的天然產(chǎn)物例如但不限于豆奶、豆?jié){、日本豆?jié){等，也可經(jīng)由此機(jī)制減少色素沉著。
絲氨酸蛋白酶抑制劑的其他來(lái)源可從屬于下列植物族之物種萃取茄科(例如馬鈴薯、番茄、粘果酸漿等)；禾本科(例如稻米、蕎麥、高粱、小麥、大麥、燕麥等)；葫蘆科(例如黃瓜、南瓜、葫蘆、絲瓜等)；及較宜是豆科(例如豆類、豌豆、濱豆、花生等)。
雖然不局限在下列理論，我們的理論是該化合物可經(jīng)由直接或間接與角質(zhì)形成細(xì)胞PAR-2或與其活化蛋白酶作用，因而直接或間接影響黑色素生成而影響皮膚色素沉著，本發(fā)明化合物可能在增加色素沉著之情形下引發(fā)或在減低色素沉著之情形下減少訊號(hào)經(jīng)由黑色素細(xì)胞至輸送色素顆粒，或經(jīng)由皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞接受色素顆粒。
最近我們證實(shí)不同種類得自莢果類蛋白質(zhì)的Bowman-Birk抑制劑(″BBI″)也可作為著色劑。
雖然STI是一種具有主要胰蛋白酶抑制活性的21KD蛋白質(zhì)，從大豆衍生的BBI是一種較小的8KD蛋白質(zhì)，其可抑制胰凝乳蛋白酶及胰蛋白酶，不同于STI，BBI不含Kunitz型部份，此建議與絲氨酸蛋白酶有不同的相互作用，已知BBI在多種活體內(nèi)及試管內(nèi)模型中具有防癌癥能力，在部份癌癥動(dòng)物模型中，發(fā)現(xiàn)BBI具有強(qiáng)烈的抗炎效應(yīng)，BBI對(duì)熱變性的抵抗性高于STI，對(duì)于BBI的回顧文獻(xiàn)，可參見(jiàn)Kennedy AR，化學(xué)防護(hù)劑蛋白酶抑制劑，Pharmacol Ther 783，167-209，Jun，1998。
在本發(fā)明組合物及方法中具有活性的化合物可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法局部輸送，如果局部活性醫(yī)藥或化妝劑之輸送參數(shù)需要，本發(fā)明的局部活性組合物較宜再含醫(yī)藥或化妝上可需要之載體，其可作為輸送系統(tǒng)以促進(jìn)局部活性劑穿透至皮膚內(nèi)。
供局部輸送部份本發(fā)明組合物特別是蛋白質(zhì)例如胰蛋白酶及STI的一種可接受的載體可含脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體更宜是非離子型且含a)二月桂酸甘油酯(含量較宜是介于約5％及約70％重量)；b)具有見(jiàn)于膽固醇的類固醇骨架的化合物(含量較宜是介于約5％及約45％重量)；及c)一或多種含從約12至約18個(gè)碳原子的脂肪酸醚類(總含量較宜是介于約5％及約70％重量)，其中脂質(zhì)體各成份化合物之比率較宜是約37．5∶12．5∶33．3∶16．7，最宜是由二月桂酸甘油酯／膽固醇／聚氧乙烯-10-硬脂酰基醚／聚氧乙烯-9-月桂基醚組成的脂質(zhì)體(GDL脂質(zhì)體)，以組合物的總體積為基準(zhǔn)，脂質(zhì)體的較佳存在量是從約10毫克／毫升至約100毫克／毫升，更宜從約20毫克／毫升至約500毫克／毫升，約37．5∶12．5∶33．3∶16．7之比率為最佳，合適的脂質(zhì)體較宜按實(shí)例1所述方法進(jìn)行制備，雖然本領(lǐng)域中慣用的其他方法也可接受。
制備上述組合物可經(jīng)由在合適的容器內(nèi)摻合所需成份，并在環(huán)境情形下在非離子脂質(zhì)體制備領(lǐng)域所熟知的任何慣用高剪力混合裝置中將其混合，例如揭示在Niemiec等“非離子脂質(zhì)體組合物對(duì)肽類藥物給毛囊皮脂腺單元局部給藥的影響用Hamster耳模型進(jìn)行體內(nèi)研究”，12 Pharm．Res．1184-88(1995)(″Niemiec″)，其全文并于本文供參考，我們發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明組合物中存在這些脂質(zhì)體可促進(jìn)部份本發(fā)明組合物的色素沉著能力。
其他較佳的調(diào)制物可含例如豆?jié){或直接得自莢果類或其他合適植物的其他液體調(diào)制物，例如此種調(diào)制物可含大量比率的豆?jié){、維持豆?jié){的物理穩(wěn)定性的乳化劑、及視需要選用的螯合劑、防腐劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑及／或稠化劑或膠凝劑。
本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的油／水乳化劑、水／油乳化劑、溶劑基質(zhì)之調(diào)制物及水凝膠也可作為載體使用供輸送本發(fā)明的組合物。
需要調(diào)制的活性化合物來(lái)源一般決定于化合物的特定形式，小的有機(jī)分子及肽基片斷可化學(xué)合成，并以合適用于醫(yī)藥／化妝用途的純品形式供應(yīng)，天然萃取物可用本領(lǐng)域已知的技術(shù)純化，本領(lǐng)域技術(shù)人員也可采用重組體來(lái)源的化合物。
在另一個(gè)具體實(shí)施例中，局部用活性醫(yī)藥或化妝組合物可視需要結(jié)合其他成份例如增濕劑、化妝輔劑、抗氧化劑、漂白劑、胰蛋白酶抑制劑及其他已知的去色素劑、表面活性劑、發(fā)泡劑、調(diào)適劑、濕潤(rùn)劑、香料、粘合劑、緩沖劑、防腐劑、防曬劑等，本發(fā)明組合物也可含活性量的視黃醛(例如結(jié)合至任何視黃醛受體的化合物)，包括例如全反視黃醛、視黃醇、全反視黃醛及／或視黃醇之酯類等。
局部用活性醫(yī)藥或化妝組合物必須施加有效量，以影響哺乳動(dòng)物皮膚色素沉著之變化，在本文中使用的″有效量″系指足夠覆蓋需要改變色素沉著的皮膚表面區(qū)域之量，當(dāng)需要色素沉著變化時(shí)，較宜將組合物充分施加至皮膚表面，以平方公分皮膚表面為基準(zhǔn)，存在從約2微升／平方公分至約200微升／平方公分的局部用活性劑，當(dāng)使用凝血酶及胰蛋白酶抑制劑例如化合物I或其同系物時(shí)，不論是合成或得自天然調(diào)制物中，此活性化合物必須存在的量是從約0．0001％至約15％重量／體積組合物，更宜其存在量是從約0．0005％至約5％重量／體積組合物，最宜其存在量是從組合物的約0．001至約1％，當(dāng)然這些范圍是建議用于前述成份，較低的范圍值是用于具有高治療指數(shù)且不需要明顯較大量濃度或劑量就可有效進(jìn)行本發(fā)明方法之PAR-2途徑刺激劑／拮抗劑及／或抑制劑，此種化合物可以合成或天然衍生。
直接從植物或植物來(lái)源制成的液體衍生物及天然萃取物可以從約1至約99％濃度(重量／體積)下用于本發(fā)明組合物，天然萃取物及天然來(lái)源的蛋白酶抑制劑例如STI可有不同的從約0．01％至約20％的較佳范圍，更宜為組合物的約1％至約10％，當(dāng)然，本發(fā)明活性劑的混合物可以摻混且同時(shí)用在同一調(diào)制物中，或依序使用不同的調(diào)制物。
我們意外地發(fā)現(xiàn)當(dāng)局部用的活性劑例如PAR-2刺激劑及／或抑制劑及胰蛋白酶及／或凝血酶及／或類胰蛋白酶及／或其抑制劑局部用于動(dòng)物皮膚時(shí)，可以達(dá)到色素沉著的明顯變化，去色素劑(以及本發(fā)明的其他色素沉著影響劑)較宜在相當(dāng)高濃度及劑量(具有高治療指數(shù)的化合物例如化合物I及相關(guān)的化合物是從約0．005％至約1％；植物的液體衍生物及萃取物是從約20％至約99％；天然萃取物及天然來(lái)源的蛋白酶抑制劑例如STI或其混合物部份是從約1％至約20％)下每天一或二次施加于哺乳動(dòng)物皮膚直到皮膚色素沉著明顯變化，此需要進(jìn)行從約四至約十周或更久，隨后一但達(dá)到色素沉著變化后，較低濃度及劑量(具有高治療指數(shù)的化合物例如化合物I及相關(guān)的化合物是從約0．00001％至約0．005％；植物液體衍生物及萃取物是從約10％至約90％；天然萃取物及天然來(lái)源的蛋白酶抑制劑例如STI或其混合物部份是從約0．01％至約5％)的活形成份可在較不常用的時(shí)間表例如每天一次至約每周兩次下使用，本發(fā)明活性劑之效應(yīng)為可逆性，因此為了維持這些效應(yīng)，必須進(jìn)行持續(xù)使用或用藥。
在此舉例說(shuō)明的本發(fā)明可在缺乏本文具體公開(kāi)的任何成份、組份或步驟下進(jìn)行，以下陳述數(shù)個(gè)實(shí)施例以進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的本質(zhì)及其實(shí)施方法，但是不能作為本發(fā)明方法及組合物的范圍限制。
實(shí)施例1BBI影響色素沉著為了研究BBI在色素沉著上的可能作用，使用含黑色素細(xì)胞的試管內(nèi)表皮同等物系統(tǒng)，在此研究中使用的表皮同等物系統(tǒng)可購(gòu)自MatTek Co．of Ashland，MA的MelanoDerm mel-300系統(tǒng)，此系統(tǒng)含人類正常的黑色素細(xì)胞，以及得自非洲人-美洲人包皮的正常人的表皮角質(zhì)形成細(xì)胞，這些細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)而形成多層高度分化模式的人類表皮，在下列實(shí)例中，同等物用BBI(0．1％)處理三天并在開(kāi)始處理后第四天收取樣品，收取的同等物先與沒(méi)有色素沉著的樣品比較顏色，然后使用本領(lǐng)域已知的Fontana-Mason(F&M)色素沉著法進(jìn)行組織檢視，F(xiàn)&M色素沉著法是一種銀色素沉著技術(shù)，其清楚且乾凈地標(biāo)示具有高硝酸銀還原活性的黑色素，也捕捉色素沉著切片的影像進(jìn)行影像分析，至少每個(gè)實(shí)驗(yàn)有三個(gè)同等物，每個(gè)同等物進(jìn)行三個(gè)切片，在Gateway 2000 P5-100電腦上使用Empire Images database 1．1(Media Cybernetics，Silver Springs，MD)捕捉影像，使用Image Pro Plus 3．0版分析影像，測(cè)量的參數(shù)是黑色素細(xì)胞內(nèi)銀沉積物表面積及各畫(huà)素之密度發(fā)光度，″色素沉著因子″定義為銀沉積物表面積除以總表皮面積，以1(100％)的值定為未經(jīng)處理之對(duì)照組，且處理群的值對(duì)其相關(guān)的對(duì)照組標(biāo)準(zhǔn)化。
如圖1所示，未經(jīng)處理的mel-300同等物在沒(méi)有任何色素沉著下可看出較黑暗，BBI處理的同等物之顏色比這些對(duì)照組淡，證明BBI在視覺(jué)上有減少色素沉著之能力，圖2顯示這些同等物在F&M色素沉著后的組織切片，在此圖中，黑色區(qū)域代表在黑色素細(xì)胞及角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)的黑色素沉積物，如圖2所示，BBI處理導(dǎo)致減少黑色素沉積在處理后的同等物的黑色素細(xì)胞及角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)，影像分析顯現(xiàn)經(jīng)BBI處理的同等物相對(duì)于對(duì)照組只有50．6％的黑色素沉積物。
實(shí)施例2BBI去除色素沉著的效應(yīng)是劑量-反應(yīng)性的如圖1所示將含黑色素細(xì)胞的表皮同等物用從0．001％至0．1％之增加濃度的BBI處理，相同于實(shí)例1敘述的實(shí)驗(yàn)步驟后，發(fā)現(xiàn)BBI的去除色素效應(yīng)是與劑量相關(guān)的，圖3顯示經(jīng)處理的同等物的F&M色素沉著切片，證明劑量-反應(yīng)及去除色素沉著效應(yīng)可低至0．001％BBI，圖4所示之電腦化影像分析將此效應(yīng)定量化，進(jìn)一步證明其劑量-反應(yīng)性本質(zhì)。
實(shí)施例3活體內(nèi)證明BBI的去除色素沉著效應(yīng)使用含20毫克／毫升脂質(zhì)體的BBI或STI的1％PBS溶液處理深色皮膚的Yucatan豬，非離子性脂質(zhì)體制劑例如揭示在Niemiec等，“非離子脂質(zhì)體組合物對(duì)肽類藥物給毛囊皮脂腺單元局部給藥的影響用Hamster耳膜型進(jìn)行體內(nèi)研究”，12 Pharm．Res．1184-88(1995)(″Niemiec″)，其全文并于本文供參考，這是本領(lǐng)域中熟知的，在JBP-430中有揭示，我們發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明組合物中存在這些脂質(zhì)體時(shí)，可促進(jìn)某些本發(fā)明組合物的去除色素沉著能力，GDL脂質(zhì)體的制備在上述Niemiec等的文章中有描述，例外的是有下列變化非離子性脂質(zhì)體調(diào)制物含二月桂酸甘油酯(Emulsynt GDL，ISP Van Dyk)／膽固醇(Croda)／聚氧乙烯-10-硬脂酰基醚(Brij76，ICI)／聚氧乙烯-9-月桂基醚的比率是37．5∶12．5∶33．3∶16．7，在制備脂質(zhì)體時(shí)使用Hepes緩沖劑0．05M，pH7．4(Gibco-BRLof Gaithersburg，MD)作為水相。
將BBI、STI及脂質(zhì)體載體制劑各施加至豬肋腹的兩個(gè)部位上，每天兩次，一星期五天共進(jìn)行八周，經(jīng)處理八周后，使用BBI或STI導(dǎo)致視覺(jué)上的淺色化效應(yīng)，從未經(jīng)處理及處理部位的F&M色素沉著皮膚切片組織分析證實(shí)此觀察，圖5顯示經(jīng)處理的豬的F&M色素沉著皮膚切片，證明用BBI或STI處理的部位大幅減少顏色沉積，圖6顯示電腦化影像分析將此效應(yīng)定量化，進(jìn)一步證明BBI的去除色素沉著效應(yīng)。
權(quán)利要求
1．一種可有效改變哺乳動(dòng)物皮膚色素沉著的方法，其包括將色素沉著變化有效量的Bowman-Birk抑制劑或含Bowman-Birk抑制劑之天然萃取物對(duì)哺乳動(dòng)物用藥。
2．一種去除哺乳動(dòng)物皮膚色素沉著的方法，其包括將色素沉著淡化有效量的Bowman-Birk抑制劑或含Bowman-Birk抑制劑的天然萃取物對(duì)哺乳動(dòng)物用藥。
3．如權(quán)利要求2所述的方法，其中該Bowman-Birk抑制劑得自一或多種豆科、茄科、禾本科及葫蘆科植物。
4．如權(quán)利要求3所述的方法，其中該化合物得自莢果類。
5．如權(quán)利要求4所述的方法，其中該化合物得自未經(jīng)變性的大豆萃取物。
6．如權(quán)利要求5所述的方法，其中該化合物得自未經(jīng)變性的大豆萃取物之部份。
7．一種可有效改變哺乳動(dòng)物皮膚色素沉著的組合物，其中含色素沉著變化有效量的Bowman-Birk抑制劑或含Bowman-Birk抑制劑之天然萃取物。
8．一種去除哺乳動(dòng)物皮膚色素沉著的組合物，其中含色素沉著淡化有效量的Bowman-Birk抑制劑或含Bowman-Birk抑制劑之天然萃取物。
9．如權(quán)利要求8所述的組合物，其中該Bowman-Birk抑制劑得自一或多種豆科、茄科、禾本科及葫蘆科植物。
10．如權(quán)利要求9所述的組合物，其中該化合物得自未經(jīng)變性的大豆萃取物。
全文摘要
本發(fā)明涉及改變皮膚色素沉著的方法及組合物,更確定地說(shuō),本發(fā)明涉及一種化合物其可影響黑色素生成且可利用PAR－2途徑作為去色素劑或作為使皮膚變黑的藥劑使用。
文檔編號(hào)A61K8/00GK1283507SQ0012228
公開(kāi)日2001年2月14日 申請(qǐng)日期2000年7月27日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月27日
發(fā)明者M·塞伯格, S·S·夏皮羅 申請(qǐng)人:強(qiáng)生消費(fèi)者公司