專利名稱：來氟米特一種新適應(yīng)癥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫抑制及調(diào)節(jié)劑，更具體地說免疫抑制及調(diào)節(jié)劑來氟米特(Lef)在治療紅斑狼瘡藥物中應(yīng)用。
由于紅斑狼瘡(SLE)的病因目前醫(yī)學(xué)界還眾說不一，據(jù)臨床的大量資料分析認(rèn)為免疫學(xué)觀點來解釋紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)理更為合理，免疫性疾病是由于免疫缺陷、免疫功能和免疫調(diào)節(jié)失常而引起的一系列疾病，這些疾病的發(fā)生和發(fā)展都和免疫反應(yīng)有關(guān)，紅斑狼瘡是一種免疫性疾病，可采用免疫抑制劑、增強、調(diào)節(jié)、補充或重建等方法，使免疫狀態(tài)趨向正常，促使病情緩解、好轉(zhuǎn)、治愈或減少復(fù)發(fā)的療法，傳統(tǒng)的治療方法通常用藥物直接作用于病原體或病灶，例如抗菌素直接抑制或殺滅細(xì)菌，中醫(yī)治療主要從中醫(yī)理論針對發(fā)病的不同類型，例熱盛型、脾腎陽虛型、肝腎陰虛型，再根據(jù)不同類型對針下藥，雖然醫(yī)學(xué)界人士作了大量研究對紅斑狼瘡的治療也有很多藥物和各種的治療方法，但到目前對此病仍未找到一種治療效果好，副作用小的理想治療方法。
本發(fā)明目的尋找出一種新型免疫抑制和調(diào)節(jié)劑，利用它的免疫抑制和調(diào)節(jié)作用在由免疫系統(tǒng)問題而引起的(系統(tǒng))紅斑狼瘡疾病藥物中應(yīng)用。
來氟米特為一種新型免疫抑制及免疫調(diào)節(jié)劑，它的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
分子式C12H9F3N2O2化學(xué)命名為ααα三氟-5-甲基異噁-N-酰基-對甲苯胺，它為白色薄膜衣片。
來氟米特口服吸收后于腸壁和肝臟內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化為活性代謝物，它在體內(nèi)發(fā)揮所有主要的藥理作用，來氟米特在血漿中的濃度非常低，在最初來氟米特藥代動力學(xué)研究中，主要檢測活性代謝物的血漿濃度。它達(dá)峰時間在0.558±0.506天，半衰期8.79±0.77天。多劑量給藥(20mg，pd)連續(xù)30天，其活性代謝物血藥濃度接近穩(wěn)態(tài)。據(jù)文獻(xiàn)報導(dǎo)，在臨床應(yīng)用中使用三天(100mg/天)負(fù)荷劑量可以快速達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度。來氟米特口服的生物利用度80％，高脂飲食對活性代謝物血漿濃度不會產(chǎn)生大的影響。活性代謝物于肝、腎和皮膚組織內(nèi)分布濃度較高，腦組織中含量低。游離濃度較低，并且廣泛和血漿蛋白結(jié)合(99.3％)，結(jié)合蛋白量在治療濃度時呈線性關(guān)系。來氟米特吸收后被代謝為主要活性代謝物及許多微量代謝物，這些微量代謝物中只有三氟甲基苯胺(TFMA)能被檢測，在血漿中很少測到母體化合物。目前不知道來氟米特代謝的確切臟器，但在體內(nèi)和體外試驗中，發(fā)現(xiàn)肝臟和胃腸壁具有代謝作用。來氟米特初始代謝所需的酶也不清楚，但肝細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞的微粒體已經(jīng)被確定為是藥物代謝的部位。活性代謝物，從腎肝排泄以及直接從肝汁排泄。43％從尿中排泄，48％從糞便中排泄，樣品分析顯示最初在尿中的代謝物是葡萄糖苷酸和活性代謝物的苯胺羰酸衍生物，糞便的主要代謝物是活性代謝物。在兩個代謝途徑中，最初96小時主要是腎臟排泄，以后糞便排泄占主導(dǎo)地位。文獻(xiàn)報導(dǎo)，靜脈給藥研究中，清除率大約31ml/h。活性炭或消膽胺可促進(jìn)藥物代謝，使體內(nèi)代謝物的半衰期從大于1周減少到大約1天，腸肝循環(huán)是導(dǎo)致活性代謝物半衰期較長的主要因素。血液透析和腹膜透析研究表明活性代謝物是不可透析的。
來氟米特的藥理作用來氟米特通過活性代謝物在體內(nèi)發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用，作用機(jī)制包括以下幾方面抑制酪酸激酶的活性和細(xì)胞粘附來氟米特可抑制酪酸激酶的活性，而酪酸激酶是細(xì)胞生成和分裂中的信息傳導(dǎo)的關(guān)鍵酶。此外，來氟米特可明顯抑制激活的白細(xì)胞粘附到血管內(nèi)皮上，減緩炎細(xì)胞進(jìn)入關(guān)節(jié)，其作用機(jī)制尚不完全清楚，可能與影響粘附分子和細(xì)胞因子的信息傳導(dǎo)有關(guān)。因此，來氟米特可以逆轉(zhuǎn)已經(jīng)發(fā)生的排斥反應(yīng)而環(huán)孢酶素卻無此作用，這點已在動物試驗中證實。
抑制嘧啶的從頭合成途徑來氟米特通過抑制二氫乳清酸脫氫酶(DHODH)的活性，阻斷嘧啶的從頭合成途徑。來氟米特對不同種類的細(xì)胞的抑制作用取決于該細(xì)胞利用補救途徑合成嘧啶的能力，依賴從頭合成途徑的細(xì)胞(增生活躍的細(xì)胞，如活化的淋巴細(xì)胞，骨髓結(jié)構(gòu)、肝細(xì)胞、上皮細(xì)胞等)是來氟米特作用的主要靶細(xì)胞。二氫乳清酸脫氫酶的活性被活性代謝物抑制，防止嘧啶的過度產(chǎn)生，使腫瘤抑制蛋白細(xì)胞翻譯轉(zhuǎn)錄中的一種因子(P53)增加，活化的P53可調(diào)節(jié)P21WAF-1的轉(zhuǎn)錄，抑制細(xì)胞周期依賴蛋白酶(cdk(cyclin-dependent-kinase))的活性，防止成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白(Rb(retinoblastoma protein))的高磷酸化合失活。Rb是轉(zhuǎn)錄因子E2F的負(fù)性調(diào)節(jié)劑，而E2F是S期特異性基因表達(dá)所必需的因子，從而影響DNA和RNA的合成，使活化的細(xì)胞體眠在細(xì)胞周期的DNA合成前期G1S靜止期交界處或S期。活性代謝物對細(xì)胞的抑制作用是可逆的，不會引起細(xì)胞凋亡。抑制作用解除后，休眠的細(xì)胞可以恢復(fù)正常，這種抑制作用可被外源性的嘧啶所逆轉(zhuǎn)。
抑制抗體(免疫球蛋白)的產(chǎn)生，來氟米特抑制嘧啶的合成，可以阻斷活化的B細(xì)胞增殖，從而減少抗體的生成；此外，來氟米特還可直接抑制抗體的分泌。 來氟米特可抑制非特異性免疫、體液免疫、細(xì)胞免疫、淋巴因子分泌、抑制淋巴細(xì)胞再生、局部結(jié)締組織增生、局部炎癥及關(guān)節(jié)炎全身反應(yīng)。來氟米特的活性代謝物對大鼠胸膜炎滲出液細(xì)胞分泌白三烯B4的產(chǎn)生有明顯抑制作用，對非特異性(刀豆蛋白A(Con-A)誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞)T輔助細(xì)胞(Th細(xì)胞)有明顯抑制作用，小鼠熱板法及輻射甩尾法試驗顯示有明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用。利用患先天性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)MRL/lpr小鼠模型，來氟米特可抑制SLE的進(jìn)展，防止腎小球腎炎的發(fā)生，降低抗雙旋DNA抗體及類風(fēng)濕因子(RF)的水平。來氟米特能預(yù)防治療SLE及并發(fā)的腎小球腎炎，停藥后觀察，SLE及腎小球腎炎均無復(fù)發(fā)。在器官移植試驗中來氟米特有效抑制大鼠、狗、猴等動物多種器官的急、慢性排異反應(yīng)，并克服了異種移植排異反應(yīng)，成功地延長了倉鼠至大鼠移植心臟存活時間。
來氟米特的毒理作用來氟米特小鼠單次灌胃或腹腔注射給藥，觀察14天測得LD50分別為258.9mg/kg及166.9mg/kg。SD大鼠6個月口服來氟米特(1.8、3.5、6.6mg/kg)長期毒性試驗顯示高劑量組有厭食、體重減輕現(xiàn)象，雌性大鼠丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)有增高現(xiàn)象，高劑量組中7只(23％)于給藥期死于感染。低、中劑量組無動物死亡。應(yīng)用移植模型，口服高劑量來氟米特20m/kg及30mg/kg治療大鼠112天，顯示其靶器官為再生活躍的器官如骨髓、脾臟、小腸粘膜，以及免疫器官如胸腺及脾臟，與國外資料吻合。Lewis大鼠出現(xiàn)肝功能損害及骨髓抑制。Beagle狗6個月口服來氟米特(2、10、16、20mg/kg)長期毒性試驗顯示，僅高劑量組使紅系細(xì)胞總數(shù)略下降及血球壓積降低。來氟米特的微生物回復(fù)突變試驗，哺乳動物培養(yǎng)細(xì)胞染色體畸變試驗，及嚙齒動物微核試驗結(jié)果均無致突變作用。來氟米特于中、高劑量10、20mg/kg有致畸作用。
實施例1來氟米特對MRL小鼠自發(fā)系統(tǒng)紅斑狼瘡的抑制作用采用MRL/lpr小鼠(由美國Jackson實驗室提供)體重25-30g/只，鼠齡10-20周雌性鼠各組動物數(shù)為8只，給含量大于99％的來氟米特細(xì)顆粒粉末混懸于1％羧甲基纖維素中，給藥劑量為20、35、65mk/kg；環(huán)孢素50mg/kg組，給藥周期63天，給藥63天后采集血分離血清0.3ml，然后檢測抗雙鏈DNA(ds DNA)抗體，從檢測出的數(shù)據(jù)說明來氟米特可有效地控制非T細(xì)胞依賴型B細(xì)胞功能，降低MRL/lpr小鼠自發(fā)性產(chǎn)生的高水平抗ds DNA抗體并有效地控制了IgG介導(dǎo)的免疫復(fù)合物于腎小球中的沉積，進(jìn)一步驗證來氟米特有效的抗B細(xì)胞功能作用，因此來氟米特對MRL/lpr小鼠自發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡有較明顯緩介作用，對抗ds DNA抗體的產(chǎn)生有較強的抑制作用，能緩介并發(fā)的淋巴結(jié)腫大，能明顯減輕腎小球腎炎的病理表現(xiàn)，減少lgG免疫復(fù)合物于腎小球內(nèi)的沉積。
應(yīng)用酶聯(lián)反應(yīng)法檢測抗雙鏈DNA抗體、酰聯(lián)反應(yīng)法平板以10μg/ml多聚左旋谷氨酸為陰性對照。與小牛胸腺ds DNA 10μg/ml于4℃培養(yǎng)20小時。檢測血清自1∶1000稀釋度開始，雙倍稀釋置入酶聯(lián)反應(yīng)法平板內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)合的抗體以聯(lián)有辣根氧化酶的抗小鼠lgG或lgM經(jīng)酶聯(lián)反應(yīng)法檢測儀檢測，見表1A表1B。
表1A、MRL/lpr小鼠ds DNA lgM水平
*與對照組比較，有顯著差異。
表1B、MRL/lpr小鼠dsDNA lgG水平
*與對照組比較，有顯著差異。
給藥63天后，將動物于麻醉下處死，取所有直視下可發(fā)現(xiàn)的淋巴結(jié)以電子秤秤出重量、未治療組及環(huán)孢素治療組均可見大量腫大淋巴結(jié)，分布于背部、頸部及腹腔內(nèi)、淋巴結(jié)總重量比較見表2表2、來氟米特抑制MRL/lpr小鼠淋巴結(jié)增生作用
*與對照組比較P＜0.05。
病理檢查結(jié)果來氟米特35及65mg/kg劑量對MRL/lpr小鼠治療9周后明顯減少受累腎小球的數(shù)量，明顯逆轉(zhuǎn)受累腎小球的炎癥損害。LgG免疫復(fù)合物腎小球中的沉積明顯減輕，而環(huán)孢素50mg/kg及來氟米特20mg/kg未能明顯減緩腎小球炎癥損害及1gG沉積。在各組中l(wèi)gM沉積無明顯變化。
Lef(35mg/kg/天)對MRL/lpr小鼠自身免疫性腎疾病的作用、組織學(xué)及免疫組織化學(xué)。
A)未治療組顯示增生性腎小球腎炎腎小球增大、高細(xì)胞性(有大量淋巴細(xì)胞、中性白細(xì)胞浸潤)B)CsA(50mg/kg/天)治療并未明顯減輕腎炎病變；C)Lef治療(明顯減少受累腎小球數(shù)量、明顯逆轉(zhuǎn)受累腎小球損害)組絕大多數(shù)腎小球組織學(xué)正常；D)未治療組顯著的lgG沉積于受累腎小球；
權(quán)利要求
1.來氟米特一種新適應(yīng)癥，其特征在于在治療紅斑狼瘡藥物中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供來氟米特新適應(yīng)癥,來氟米特是一種新型免疫抑制、調(diào)節(jié)劑、利用它的免疫抑制、調(diào)節(jié)作用對由免疫系統(tǒng)故障問題引起的紅斑狼瘡疾病有治療作用,來氟米特在制備治療紅斑狼瘡藥物中應(yīng)用。
文檔編號A61P37/02GK1286086SQ00125108
公開日2001年3月7日 申請日期2000年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月8日
發(fā)明者肖飛 申請人:欣凱醫(yī)藥化工中間體(上海)有限公司