專利名稱：不孕癥的治療的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種體外受精(以下稱IVF)的改良方法。
人卵母細胞的IVF已經(jīng)常規(guī)地應用于女性和男性低生育力的治療。標準的IVF治療包括給女性患者長期的激素刺激，如30天，該治療開始時用促性腺激素釋放激素(以下稱GnRH)來抑制患者自己的促卵泡激素(以下稱FSH)和促黃體激素(以下稱LH)，隨后注射外源促性腺激素，如FSH和/或LH，以保證多個排卵前卵泡的發(fā)育和排卵之前多個體內成熟的卵母細胞的吸出。吸出的卵母細胞隨后在體外受精并培養(yǎng)，一般培養(yǎng)3天后，在4-8細胞期轉移回子宮。優(yōu)化和簡化該程序的努力一直不斷。但是應用當前的治療模式，總體懷孕率不能明顯地提高約20％左右。在一次歐洲IVF患者的大調查中發(fā)現(xiàn)，從每個患者吸出的11.5個卵母細胞中有7.2個卵母細胞在受精前即刻經(jīng)歷了減數(shù)分裂的恢復，僅4.3個卵母細胞受精，受精后體外培養(yǎng)時只有2.2個卵母細胞達到8細胞胚期(ESHRE，Edinburgh，1997)。
由于當今人工胚胎質量極不可預測，必須轉移多于一個胚以獲得合理的成功機會。因此，轉移2-3個胚(在某些國家高達5個胚)很常見，這樣帶來很大的多孕副作用，如極大不適和給患者及孩子帶來風險。而且，據(jù)估算，因多生(如雙胎和三胎等)增加的衛(wèi)生保健費用超過整個IVF費用。
因此，目前的治療存在幾個缺點，4個最明顯的是1.注射促性腺激素具有卵巢刺激過度的危險，這是一種潛在的需要住院治療的致命狀況，2.多孕(分別是雙胎和三胎正常頻率的50-1，000倍)，3.存在大量的患者群體由于例如多囊卵巢綜合癥和許多糖尿病而不能承受目前的方法，以及4.潛在的長期癌癥風險。
另外，還有體重增加、腫脹、惡心、嘔吐、情緒易變和其它不適，以及患者不愿給自己注射等缺點。
據(jù)WO 96/00235，某些甾醇類衍生物能用來調節(jié)減數(shù)分裂。其中之一的例子是4，4-二甲基-5α-膽甾-8，14，24-三烯-3β-醇(此后稱FF-MAS)。
本文中，術語MAS化合物指介導卵母細胞減數(shù)分裂的化合物。更具體地，MAS化合物是在下面實施例1試驗中所述的這樣一些化合物，具有一定比例的比對照組明顯高的生發(fā)泡破裂(此后稱GVB)。優(yōu)選的MAS化合物應具有一定比例的GVB，至少是50％，優(yōu)選地至少80％。
MAS化合物的實施例在WO 96/00235、96/27658、97/00884、98/28323、98/54965和98/55498中已提到，更具體地為其中專利權利要求1中所述的那些。
在WO 95/000265中，一些潛在的減數(shù)分裂調節(jié)劑在未成年雌性小鼠上已作試驗。在受試動物斷頸處死前48小時，它們單次注射包含F(xiàn)SH(20IU)和LH(20IU)的人絕經(jīng)促性腺激素。移出卵巢，置于次黃嘌呤培養(yǎng)基且使之不含(freed)外源組織。然后，從卵泡中穿刺取出卵母細胞，從丘細胞游離，培養(yǎng)于包含減數(shù)分裂調節(jié)性衍生物的培養(yǎng)基中。
當前，盡管有巨大興趣和臨床努力，體外成熟在人類中已證明很不成功。
本發(fā)明的一個目標是治療人類不孕癥。
本發(fā)明的另一個目標是改善人卵母細胞的成熟。
本發(fā)明的另一個目標是改善核、胞漿和/或膜卵母細胞成熟的同步。
本發(fā)明的另一個目標是改善卵母細胞的受精。
本發(fā)明的另一個目標是通過人體外成熟及受精來提高卵母細胞的植入率。
本發(fā)明的另一個目標是減少人前成胚(preembryo)染色體異常(非整倍體)的發(fā)生率。
本發(fā)明的另一個目標是提高人前成胚的分裂速率。
本發(fā)明的另一個目標是提高人前成胚的質量。
簡言之，本發(fā)明涉及一種人類體外受精的方法。其中，婦女在連續(xù)的30天期間內用下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物進行例如少于約7天、優(yōu)選地少于4天的治療，其后使用體外卵母細胞成熟法，其中從該婦女取出未成熟的單卵或多卵，利用本文所述MAS化合物以同步化方式體外成熟。本發(fā)明的優(yōu)選實施方案見下文權利要求中所述。發(fā)明詳述參照女性月經(jīng)周期，實施本發(fā)明IVF治療的一個方法如下在周期中第6-9天左右用FSH以例如，每天75-600IU，優(yōu)選地每天150-225IU刺激，例如3天。
第9天前后用超聲引導的吸引術從小到中等大小卵泡中取出直徑約6-12mm，優(yōu)選地8-10mm的卵細胞。
第9-11天前后為刺激減數(shù)分裂用MAS化合物使卵細胞成熟。在成熟這一步中，MAS化合物的濃度在約0.1-100μmol/L的范圍內，如10-20μmol/L該培養(yǎng)基可以含有人血清白蛋白(此后稱HSA)，例如0.8％，另外還可含一些乙醇，例如0.4％，它常用來溶解MAS。成熟這步所需時間在15-60小時左右的范圍，例如22-40小時左右，更具體在30-36小時左右。
第11-13天前后卵細胞在體外進行受精。
第12-16天前后卵細胞在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中進行體外培養(yǎng)。
從吸出前一天起，婦女應接受雌激素，例如戊酸雌激素(每天2×10mg)。兩天后，她還要每天接受孕激素，例如Progestane vagetoria，它將使子宮內膜更容易接受未來的胚胎。治療的持續(xù)時間將根據(jù)每個患者進行個體化設計。醫(yī)生能在各種雌激素和孕激素之中挑選。
第15-16天前后轉移一個或多個胚至婦女子宮。
因此，整個治療加起來需要10-15天左右。
依據(jù)女性月經(jīng)周期，按本發(fā)明實施IVF治療的另一個方法如下在周期的第2-8天每天用FSH以例如75-600IU，優(yōu)選地150-225IU刺激，例如3天，最終可延長至6天多。
第7-9天前后用超聲引導的吸引術從小到中等大小卵泡中取出直徑約6-15mm優(yōu)選地8-12mm的卵細胞。
第7-11天前后為了刺激減數(shù)分裂用MAS化合物使卵細胞成熟。在成熟這一步，MAS化合物的濃度可以在約0.01-100μmol/L，例如5-20μmol/L該培養(yǎng)基可以含有人血清白蛋白(此后稱HSA)，例如0.8％，另外還可含一些乙醇，例如0.1-0.4％，它用來溶解MAS。成熟這步所需時間在15-60小時左右的范圍，例如22-40小時左右，更具體地30-36小時左右。
第9-13天前后卵細胞在體外進行受精。
第10-16天前后卵細胞在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中進行體外培養(yǎng)。
從吸出前一天起，婦女應接受雌激素，例如戊酸雌激素(每天2×10mg)。兩天后，她還要每天接受孕激素，例如Progestane vagetoria，它將使子宮內膜更容易接受未來的胚胎。治療的持續(xù)時間將據(jù)每個患者進行個體化設計。醫(yī)生能在大量的雌激素和孕激素之中挑選。
第13-16天前后轉移一個或多個胚至婦女子宮。
因此，整個治療加起來需要10-15天左右。
以上治療和程序的多數(shù)步驟均按已知方法實施，余下的步驟以本身已知的方式實施。有關從卵巢的卵泡中取出卵母細胞、分離的卵母細胞的培養(yǎng)、需要用的培養(yǎng)基、用精子受精及轉移胚至輸卵管的更多細節(jié)可在文獻中找到，例如美國專利說明書第5,693,534號，此處列入作為參考。
依據(jù)本發(fā)明，所用培養(yǎng)基中要加入MAS化合物。該培養(yǎng)基中MAS化合物的量在約0.01-100μmol的范圍，優(yōu)選在大約0.1-100μmol的范圍。
負作用風險的降低使本發(fā)明的方法有望替代當前所用方法。后者在卵細胞取出前，要使用GnRH約22天，要使用FSH約9天，其后孕激素要使用數(shù)周。因此，應用本發(fā)明的治療，用下丘腦激素和/或垂體激素治療女性患者所用時間減少了約80-90％。當前方法治療總時間約為4周，而按本發(fā)明治療，治療總時間減少了約50-60％。
下丘腦激素是存在于人下丘腦中的一類激素。垂體激素是存在于人垂體中的一類激素。促性腺激素是脊椎動物垂體前葉和哺乳動物胎盤所分泌的控制性腺活動的一類激素。化學本質上它們都是糖蛋白。促性腺激素的例子有FSH、LH和絨毛膜促性腺激素，例如人絨毛膜促性腺激素(此后稱hCG)。FSH刺激卵巢卵泡及其中卵母細胞的生長以及睪丸中精子的形成。例如，F(xiàn)SH可以是絕經(jīng)的FSH或者重組FSH。在女性體內，LH激活卵巢的雌激素產(chǎn)生組織產(chǎn)生孕激素，很可能促進卵巢卵泡的終末期發(fā)育、啟動卵母細胞的最后成熟(包括排卵)以及在哺乳動物中啟動黃體發(fā)育。這些激素是已知的。本領域技術人員顯然知曉可以替代性使用這些激素的激動劑或拮抗劑。本領域技術人員也顯然知曉可以替代性使用這些激素的活性類似物。某些這類激動劑、拮抗劑和類似物是已知的，而其它的可通過本身已知的方法制備。有關這些已知方法的實例是化學合成與遺傳工程。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中使用下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物治療婦女的時間為零天。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中用以治療婦女不孕癥、和/或改善其卵母細胞的成熟、和/或改善核、胞漿和/或膜卵母細胞成熟的同步化、和/或改善卵母細胞的受精、和/或通過人體外成熟和受精來提高卵母細胞的植入率。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中連續(xù)的期間為一個月經(jīng)周期。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中所用激素是促性腺釋放激素或其激動劑或拮抗劑或其類似物，或促性腺激素或其激動劑或拮抗劑或其類似物。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中促性腺激素是FSH或其激動劑或拮抗劑或其類似物。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中在取出卵細胞之前，女性患者用FSH或其激動劑或拮抗劑或其類似物治療的時間少于7天，優(yōu)選地少于4天，但至少1天。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中女性患者用FSH或其激動劑或拮抗劑或其類似物治療的時間是2，3或4天。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中沒有使用絨毛膜促性腺激素，例如人絨毛膜促性腺激素或其激動劑或其拮抗劑或其類似物。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中沒有使用促性腺激素釋放激素，例如GnRH或其激動劑或其拮抗劑或其類似物。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中MAS化合物的劑量在約0.01-100μM/L的范圍內，優(yōu)選地在大約0.1-100μM/L的范圍內。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中MAS化合物是WO 96/00235、96/27658、97/00884、98/28323、98/54965和98/55498中提到的化合物之一，更具體地是所述專利中請的權利要求1中所述化合物。
在又一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及一種方法或用途，其中MAS化合物是FF-MAS。
另外，本發(fā)明涉及下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物在生產(chǎn)待使用于婦女的激素產(chǎn)品中的用途，其中在連續(xù)30天期間內，用下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物治療婦女少于約7天，優(yōu)選地少于約4天，所述期間后立即從該婦女吸出一個或多個卵細胞，卵母細胞在含有本處所述的MAS化合物的適當培養(yǎng)基中培養(yǎng)之后，該卵母細胞用人精子受精然后所得胚轉移至婦女。
另外，本發(fā)明涉及下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物以及MAS化合物在生產(chǎn)用于人體外受精處理的藥物中的用途，其中在連續(xù)30天的期間內，下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物用于治療婦女少于約7天，優(yōu)選地少于約4天，其后MAS化合物用于從該婦女取出的一個或多個卵細胞的體外成熟。
另外，本發(fā)明涉及一種呈單位劑量形式用于體外受精的藥物試劑盒，其包含1-8個單獨的單位劑量，所述試劑盒包含少于7個、優(yōu)選地少于4個、但至少1個單獨劑量單位用于連續(xù)每日施用的下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物，用于連續(xù)每天施用以及1個劑量單位的MAS化合物。該試劑盒可以具有以上所述的優(yōu)選特征。
本發(fā)明進一步用下面的實施例詳細說明，不過，它們不限于這些說明。前面說明中所公開的特征在以下的實施例和權利要求中可以其單獨或組合形式用作以不同形式等現(xiàn)本發(fā)明的材料。
與現(xiàn)有方法相比，上面的方法可以獲得更好的結果。
與現(xiàn)有方法相比，可以獲得相似的臨床效果。然而，與現(xiàn)有方法相比，該實施例中所用接觸激素的時間縮短，因而負作用減少了。
權利要求
1.一種人體外受精方法，其中，婦女在連續(xù)30天的期間內用下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物治療少于約7天時間，優(yōu)選地少于約4天，其后利用卵母細胞體外成熟法，其中從將婦女中取出一個或多個卵細胞并用此處所述MAS化合物使之成熟。
2.下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物用于制備待施用于婦女的激素產(chǎn)品的用途，所述婦女在連續(xù)30天的期間內用下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物治療少于約7天，優(yōu)選地少于約4天，在所述期間后立即從婦女中吸出一個或多個卵母細胞，所取卵母細胞在含有此處所述的MAS化合物的適宜培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，所述卵母細胞用人精子受精，其后所得胚轉移至婦女。
3.下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物以及MAS化合物用于制備人體外受精的治療藥物的用途，其中下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物在連續(xù)30天的期間內用于治療婦女少于約7天的時間，優(yōu)選地少于約4天，其后，MAS化合物用于對取自該婦女的一個或多個卵細胞的體外卵母細胞成熟。
4.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中治療所述婦女的不孕癥，和/或改善其卵母細胞成熟，和/或改善核、胞漿和/或膜卵母細胞成熟的同步化，和/或改善其卵母細胞的受精，和/或通過人體外成熟和受精來提高其卵母細胞的植入率。
5.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中婦女用下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物來治療的時間是0天。
6.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中連續(xù)的期間為一個月經(jīng)周期。
7.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中激素是促性腺激素釋放激素或其激動劑或拮抗劑或其類似物或者促性腺激素或其激動劑或拮抗劑或其類似物。
8.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中促性腺激素是FSH或其激動劑或拮抗劑或其類似物。
9.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中在取出卵細胞之前，女性患者用FSH或其激動劑或拮抗劑或其類似物治療的期間少于7天，優(yōu)選地4天，但至少1天。
10.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中婦女患者用FSH或其激動劑或拮抗劑或其類似物治療的期間為2、3或4天。
11.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中不使用絨毛膜促性腺激素，例如人絨毛膜促性腺激素或其激動劑或拮抗劑或其類似物。
12.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中不使用促性腺激素釋放激素，例如GnRH或其激動劑或拮抗劑或其類似物。
13.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中MAS化合物的劑量范圍為約0.01-約100μM，優(yōu)選地在約0.1-約100μM范圍內。
14.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中MAS化合物是WO 96/00235、96/27658、97/00884、98/28323、98/54965和98/55498中提到的化合物之一，更具體地是所述專利申請的權利要求1中所提及的化合物。
15.根據(jù)前述任何一項權利要求的方法或用途，其中MAS化合物是FF-MAS。
16.一種呈單位劑量形式用于體外受精的藥物試劑盒，其包含1-8個分開的單位劑量，所述試劑盒包含少于7個、最好少于4個、但至少1個分開的劑量單位用于連續(xù)每天施用的下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或拮抗劑或其活性衍生物，用于連續(xù)每天施用，和1個劑量單位的MAS化合物。
17.根據(jù)前述權利要求的試劑盒，其具有任一上述從屬權利要求中所述優(yōu)選的特征。
18.在此所述的任何新穎特征或這些特征的組合。
全文摘要
在一種體外受精方法中，婦女用下丘腦激素和/或垂體激素或其激動劑或其拮抗劑或其活性衍生物治療一段較短時期，然后利用體外卵母細胞成熟法，將取自婦女的一個卵細胞或多個卵細胞用減數(shù)分裂激活化合物使之成熟。
文檔編號A61KGK1414860SQ00802894
公開日2003年4月30日 申請日期2000年2月23日 優(yōu)先權日1999年2月24日
發(fā)明者C·戈羅恩戴爾 申請人:諾沃挪第克公司