專利名稱：化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化合物、其制備方法和含有它們的藥物組合物，以及它們在治療疾病，特別是炎癥疾病中的應(yīng)用。
MCP-1是原致炎細胞因子的趨化因子家族的成員，所述細胞因子會介導(dǎo)白細胞的趨化作用和激活作用。MCP-1是C-C趨化因子，它是已知最有效的選擇性T-細胞和單核細胞的化學(xué)引誘物和活化劑之一。已知MCP-涉及很多炎癥疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎、肺纖維化、再狹窄(國際專利申請WO 94/09128)、肺泡炎(Jones等人，1992，J.ImmunoL，149，2147)和哮喘的病理生理學(xué)。在其病理學(xué)中MCP-1也在發(fā)揮作用的疾病是動脈粥樣硬化(如Koch等人，1992，1Clin.Invest.，90，772-779)、牛皮癬(Deleuran等人，1996，J.Dermatological Science，13，.228-236)、皮膚的延遲型過敏性反應(yīng)、炎癥性腸疾病(Grimm等人，1996，J.Leukocyte Biol.，59，.804-812)、多發(fā)性硬化癥和腦創(chuàng)傷(Berman等人，1996，J.Immunol.，156，3017-3023)。MCP-1抑制劑對治療中風(fēng)、再灌注損傷、缺血、心肌梗死和移植排異可能是有用的。
MCP-1通過MCP-1受體(亦被認為是CCR2受體)發(fā)揮作用。MCP-2和MCP-3也可能，至少是部分地，通過MCP-1受體發(fā)揮作用。因此，在本發(fā)明說明書中，如果提到“MCP-1的抑制或拮抗作用”或“MCP-I介導(dǎo)的作用”，這也包括MCP-2和/或MCP-3通過MCP-1受體作用時，由MCP-2和/或MCP-3介導(dǎo)所產(chǎn)生的抑制或拮抗作用。
共同未決的國際專利申請PCT/GB98/02340和PCT/GB98/02341描述和要求保護了多組以吲哚環(huán)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的化合物，這些化合物是MCP-I抑制劑并了應(yīng)用于治療。某些作為NMDA拮抗劑的吲哚衍生物在USP5051442，WO9312780，EP-483881中已有描述。其它吲哚化合物和它們作為白三烯生物合成抑制劑的應(yīng)用例如在EP-A-275-667中已有描述。
本申請人發(fā)現(xiàn)了吲哚環(huán)上特定的取代產(chǎn)物在治療上用做MCP-1抑制劑時有良好的效果。
本發(fā)明提供了下式(I)化合物在制備抑制單核細胞化學(xué)吸引蛋白-1和/或RANTES誘導(dǎo)的趨化性的藥物中的應(yīng)用 X是CH2或SO2，R1是任選被取代的芳基或雜芳基環(huán)；R2是羧基、氰基、-C(O)CH2OH、-CONHR8、-SO2NHR9、四唑-5-基、SO3H或下式(VI)基團 其中R8選自氫，烷基，芳基，氰基，羥基，其中R12是烷基、芳基、雜芳基或鹵代烷基的-SO2R12基團，或R8是基團-(CHR13)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)和各個R13基團各自獨立地選自氫或烷基；R9是氫，烷基，任選被取代的芳基如任選被取代的苯基，或任選被取代的雜芳基如任選被取代的5或6元雜芳基，或基團COR14，其中R14是烷基、芳基、雜芳基或鹵代烷基；R10和R11獨立地選自氫或烷基，特別是C1-4烷基；R3是基團OR15，S(O)qR15，NRCOR36，NHSO2R16，(CH2)sGOOH，(CH2)tCONR17R18，NR17R18，SO2NR17R18或任選被取代的鏈烯基，其中q是0、1或2，s是0或1-4的整數(shù)，t是0或1-4的整數(shù)，R15是取代的烷基或環(huán)烷基基團或任選被取代的雜芳基基團，R16是任選被取代的烷基、任選被取代的芳基或任選被取代的雜芳基，和R17和R18獨立地選自氫、任選被取代的烷基、任選被取代的芳基和任選被取代的雜芳基，條件是R17和R18中至少有一個不是氫，或R16和R17與它們所連接的氮原子一起形成任意地含有其它雜原子的任選被取代雜環(huán)；和R4，R5，R6和R7獨立地選自氫、官能基團或任選被取代的烴基或任選被取代的雜環(huán)基。
式(I)化合物的藥用鹽、酯和酰胺也可可以此方式應(yīng)用。
特別是，在上式中，s是1-4的整數(shù)。
適當(dāng)?shù)腞4不是基團OR18’、S(O)mR18’、NR19R20、C(O)NR19R20、NHCOR18、NHSO2R18或OCONR19R20，或被OR18，S(O)mR18、NR19R20取代的烷基基團，其中R18、R19和R20如下文定義，和R18’是取代的含氫烷基基團。
式(I)化合物是單核細胞化學(xué)吸引蛋白-1的抑制劑。此外，它們似乎還可以抑制RANTES誘導(dǎo)的趨化性。RANTES是和MCP-1為同一家族的的趨化因子，具有相同的生物學(xué)分布，但通過CCR1受體作用。其結(jié)果是，這些化合物可用于治療由這些試劑所誘導(dǎo)的疾病，特別是炎性疾病。因此，本發(fā)明還提供了用于制備治療炎癥疾病的藥物的式(I)化合物。
在本說明書中所用的術(shù)語“烷基”，不論其是單獨使用，還是用在詞尾，都包括直鏈或支鏈的結(jié)構(gòu)。這些基團可含有多達10個，優(yōu)選多達6個，更優(yōu)選多達4個碳原子。類似的術(shù)語“鏈烯基”和“炔基”是指含有例如2-10個碳原子，優(yōu)選2-6個碳原子的直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)。環(huán)狀基團例如環(huán)烷基、環(huán)烯基和環(huán)炔基其性質(zhì)類似，但至少有3個碳原子。在本領(lǐng)域可以理解的是，術(shù)語例如“烷氧基”包括烷基。
術(shù)語“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。芳基基團包括芳族碳環(huán)基團如苯基和萘基。術(shù)語“雜環(huán)基”包括芳族或非芳族環(huán)，例如含4-20個環(huán)原子的環(huán)，適當(dāng)?shù)氖?-8個環(huán)原子的環(huán)，其中至少有一個環(huán)原子是如氧、硫或氮的雜原子。這些基團的實例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、咪唑基、三唑基、噻唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、喹啉基、異喹啉基、喹噁啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基。
“雜芳基”是指上述具有芳族特性的基團。術(shù)語“芳烷基”是指芳基取代的烷基基團如芐基。
用于本說明書的其它表達方式包括“烴基”，是指含有碳和氫原子的任何結(jié)構(gòu)。例如可以是烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜環(huán)基、烷氧基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或環(huán)炔基。
術(shù)語“官能基團”是指反應(yīng)活性的取代基。它們可以包括給電子的或吸電子的基團。這些基團的實例包括鹵素、氰基、硝基、C(O)nR18、OR18、S(O)mR18、NR19R20、C(O)NR19R20、OC(O)NR19R20、-NR19C(O)nR18、NR18CONR19R20、-N＝CR18R19、S(O)nNR19R20或-NR19S(O)nR18，其中R18、R19和R20各自獨立地選自氫或任選被取代的烴基，或R19和R20與它們所連接的原子一起形成如上文定義的任選被取代的雜環(huán)，其中還可任選地含有另外的雜原子，如S(O)n、氧和氮，n是1或2的整數(shù)，m是0或1-3的整數(shù)。
烴基基團R18、R19和R20的適宜的任選取代基包括鹵素、全鹵代烷基如三氟甲基、巰基、羥基、羧基、烷氧基、雜芳基、雜芳氧基、烯氧基、炔氧基、烷氧基烷氧基、芳氧基(其中芳基基團可被鹵素、硝基或羥基取代)、氰基、硝基、氨基、一或二烷氨基、肟基或m如上文定義的S(O)m。
其中R19和R20一起所形成的雜環(huán)基團可以任選地被烴基如烷基和上文關(guān)于烴基基團R18、R19和R20所列出的那些取代基取代。
烴基或雜環(huán)基團R5、R6和R7的適當(dāng)取代基包括上文對R18、R19和R20所列出的取代基。
適當(dāng)?shù)腞1是任選被取代的苯基、吡啶基、萘基、呋喃基或噻吩基環(huán)，特別是取代的苯基或吡啶基環(huán)。
式(I)中R1的適當(dāng)?shù)娜芜x取代基包括烷基、鏈烯基、炔基、鹵素、鹵代烷基包括全鹵代烷基如三氟甲基、巰基、烷氧基、鹵代烷氧基、烯氧基、炔氧基、羥基烷氧基、烷氧基烷氧基、?；?、酰氧基、氰基、硝基、氨基、一或二烷氨基、肟基、氨磺酰基(sulphonamido)、氨基甲?；?、一或二烷基氨基甲?；騍(O)mR21，其中m如上文定義和R21是烴基。
適當(dāng)?shù)腞4選自氫、羥基、鹵素、烷氧基、芳氧基或任選被取代的烴基基團，或是任選被取代的雜環(huán)基團。
取代基R4的特別實例包括氫，羥基，鹵素，任選被取代的烷基如芳烷基，羧基烷基或其酰胺衍生物，烷氧基或芳氧基。
最優(yōu)選的R4是氫。
取代基R5、R6和R7的特別實例包括氫，羥基，鹵素，任選被取代的烷基如芳烷基、羧基烷基或其酰胺衍生物；烷氧基；芳氧基；芳烷氧基；或被烷基、芳基或芳烷基任選取代的氨基。適合于R5、R6和/或R7的具體官能基團是子式(IV)的基團 基團R5、R6和R7的特別實例是氫，羥基，鹵素或烷氧基。特別是R6和R7是氫，R5可以是氫，但還適宜是小的基團如羥基、鹵素或甲氧基。
R1的特別取代基包括三氟甲基、C1-4烷基、鹵素、三氟甲氧基、C1-4烷氧基、C1-4烷?；1-4烷酰氧基、硝基、氨基甲酰基、C1-4烷氧羰基、C1-4烷硫基(alkylsulphanyl)、C1-4烷基亞磺?；?、C1-4烷基磺?；被酋；?、氨基甲?；鵆1-4烷基、N-(C1-4烷基)氨基甲?；鵆1-4烷基、N-(C1-4烷基)2氨基甲?；鵆1-4烷基、羥基C1-4烷基或C1-4烷氧基C1-4烷基。
另外的或可替代的是，可使兩個此類取代基結(jié)合在一起形成式-O(CH2)1-4O-的二價基團連接于R1環(huán)的相鄰的碳原子上。
R1的優(yōu)選取代基是一個或多個非極性的取代基如鹵素。
特別是，R1被一個或多個鹵素基團，特別是氯取代。R1的特別的實例是3，4-二氯苯基，3-氟-4-氯苯基，3-氯-4-氟苯基或2，3-二氯吡啶-5-基。
基團R2的實例包括羧基；氰基；四唑-5-基；SO3H；-CONHR8；其中R8選自氰基，羥基，其中R12是烷基如C1-4烷基、芳基如苯基、雜芳基或三氟甲基的基團-SO2R12，或R8是基團-(CHR10)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)和各個R10基團各自獨立地選自氫或烷基如C1-4烷基；或R2是-SO2NHR9基團，其中R9是任選被取代的苯基或任選被取代的5或6元雜芳基，或基團COR14，其中R14是烷基如C1-4烷基、芳基如苯基、雜芳基或三氟甲基，或R2是下式(VI)基團 其中R10和R11獨立地選自氫或烷基，特別是C1-4烷基。
優(yōu)選的R2是羧基或其藥用鹽或酯。
特別的R3基團包括OR15、S(O)qR15、NHCOR16、NHSO2R16、SO2NR17R18，其中q、R15、R16、R17和R18如上文定義。
對如R3中所定義的R15、R16、R17和R18或是上文定義的鏈烯基基團R3而言適宜的任選取代基包括上文定義的官能基團，以及芳基或雜芳基基團，它們本身均可被一個或多個官能基團取代。
R15、R16、R17和R18的取代基的特別實例包括一個或多個選自下述的基團鹵素例如氯、羥基、氰基、氨基、一或二烷基氨基、C1-4烷氧基、羧基、氨磺?；ONH2、嗎啉代基、吡啶基、嘧啶基、被下述基團任選取代的苯基鹵素如氯、羧基、羥基、烷氧基如甲氧基、氨基甲酰基、?；缫阴；⒒蛄u基烷基，其中的烷基宜含有至少二個碳原子，如羥乙基。
當(dāng)R15、R16、R17和R18是雜芳基，或R17和R18一起形成任選被取代的雜環(huán)時，它們可被官能基團取代，或被烷基如甲基或乙基、或鏈烯基或炔基取代，其中的任意一個基團都可以是被取代的，例如被羥基取代的。
優(yōu)選的R3是基團OR15，至少有一個羥基，如2個羥基的直鏈或支鏈烷基基團。如上文定義的其它取代基可取代于該烷基鏈上。
優(yōu)選的R3是式-O(CH2)a[(CHOH)(CH2)b]dCH2OH，其中a是0或1-4的整數(shù)，b是0或1-3的整數(shù)，d是0或1。
這樣的R3的實例包括OCH2CHOHCH2OH和OCH2CH2OH。
X是CH2或SO2，優(yōu)選CH2。
適當(dāng)?shù)氖?I)化合物的藥用鹽包括酸加成鹽如甲磺酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽和與磷酸和硫酸形成的鹽。另一方面，適當(dāng)?shù)柠}可以是堿鹽如堿金屬如鈉的鹽，堿土金屬如鈣或鎂的鹽，有機胺如三乙胺、嗎啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、普魯卡因、二芐基胺、N，N-二芐基乙基胺或氨基酸如賴氨酸的鹽。根據(jù)帶有電荷的官能團的數(shù)目和陽離子或陰離子的化合價的不同，可以有一個以上的陽離子或陰離子。優(yōu)選的藥用鹽是鈉鹽。
含有羧基或羥基的式(I)化合物的體內(nèi)可水解酯是例如在人或動物體內(nèi)可水解產(chǎn)生母體酸或醇的藥用酯。
對羧基來說，適當(dāng)?shù)乃幱悯グㄔ诒景l(fā)明化合物的任意羧基上可形成的烷基酯，如C1-6烷基酯如乙酯，C1-6烷氧基甲基酯如甲氧基甲基酯，C1-6烷酰氧基甲基酯如新戊酰氧基甲基酯，2-苯并[c]呋喃酮基酯，C3-8環(huán)烷氧基-羰氧基C1-6烷基酯如1-環(huán)己基羰氧基乙基酯；1，3-二氧雜環(huán)戊烯-2-酮基(onyl)甲基酯如5-甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-2-酮基甲基酯；和C1-6烷氧基羰氧基乙基酯如1-甲氧基羰氧基乙基酯。
適當(dāng)?shù)谋景l(fā)明式(I)化合物的藥用酯是含有羥基的式(I)化合物的體內(nèi)可水解的酯，包括無機酯如磷酸酯和α-酰氧基烷基醚，以及有關(guān)的化合物，該化合物在體內(nèi)進行酯水解斷裂的結(jié)果可得到母體的羥基化合物。α-酰氧基烷基醚的實例包括乙酰氧基甲氧基和2，2-二甲基丙酰氧基甲氧基。對羥基來說，形成體內(nèi)可水解酯基團的選擇包括烷?；郊柞；揭阴；腿〈谋郊柞；捅揭阴；?，烷氧羰基(可得到烷基碳酸酯)，二烷基氨基甲?；蚇-(二烷氨基乙基)-N-烷基氨基甲?；?可得到氨基甲酸酯)，二烷基氨基乙?；汪然阴；?。
不能在體內(nèi)水解的酯可用作制備式(I)化合物的中間體，因此這些形成了本發(fā)明的另一方面。
因此，式(I)化合物的實例包括如下的化合物表1 其中的*表示該基團連接于吲哚環(huán)的位置。
迄今為止，某些式(I)化合物還沒有被建議用作藥物。因此，本發(fā)明的另一方面是提供了用于治療的化合物，所述的化合物包括式(1A)化合物，該化合物是上文定義的式(I)化合物，但有下述條件限制(i)當(dāng)R2是羧基或其鹽或酰胺時，R4，R5，R6和R7中至少有三個是氫，R3是S(O)qR15，R15不是被羧基或其酯或酰胺衍生物取代的C1-4烷基；(ii)當(dāng)R3是基團NHCOR16或NHSO2R16時，R16是任選被取代的烷基；和(iii)當(dāng)R3是R14是2-喹啉基甲基的基團SR14時，R2是COOH或其乙基酯，各個R4，R5和R7是氫，R1是4-氯苯基，R6不是2-喹啉基甲基。
本發(fā)明的另一方面提供了藥物組合物，該組合物含有上文定義的式(1A)化合物。
某些式(I)化合物是新的，這些形成了本發(fā)明的另一方面。本發(fā)明還進一步提供了式(1B)化合物，該化合物是上文定義的式(1A)化合物，但有下述條件限制(iv)其中R3是基團CH2COOH，R2是COOH，和各個R4，R5，R6和R7是氫，R1不是未取代的苯基；和(v)其中R3是基團CH2COOH，R2是COOH，和各個R4，R5和R7是氫，R1是4-氯苯基，R6不是甲氧基；和(vi)當(dāng)R3是OR15或S(O)qR15時，R15不是C1-6鹵代烷基。
適宜施加于式(1B)化合物的另一限制條件是(vii)當(dāng)R2是COOCH2CH3時，各個R4，R5，R6和R7是氫，R1是4-氯苯基，和R3不是CH＝CH(CN)2基團。
適宜施加于式(1A)化合物的另一限制條件(iv’)是其中R3是基團COOH，R2是COOH，和各個R4，R5，R6和R7是氫，R1不是未取代的苯基。
式(1A)和式(1B)化合物上特別優(yōu)選的取代基和基團是上述關(guān)于式(I)化合物所描述的那些。
適當(dāng)?shù)氖?1B)化合物的實例是其中的R3是基團OR15直鏈或支鏈烷基基團，在該烷基上至少有一個羥基，例如1-4個羥基，如1或2個羥基。如上文定義的其它取代基可取代于該烷基鏈上。
優(yōu)選的R3是式-O(CH2)a[(CHOH)(CH2)b]dCH2OH，其中a是0或1-4的整數(shù)，b是0或1-3的整數(shù)，和d是0或1。
這樣的R3的實例包括OCH2CHOHCH2OH和OCH2CH2OH。
式(I)化合物適于用在國際專利申請Nos.PCT/GB98/02340和PCT/GB98/02341中描述的方法制備。
特別是，式(I)化合物可通過使式(VII)化合物 其中R4，R5，R6和R7如式(I)定義，R2’是式(I)中定義的基團R2或其保護基團，R3’是式(I)中定義的基團R3或其前體；與下式(VIII)化合物反應(yīng)來制備R1-X-Z1(VIII)其中R1和X如式(I)定義，和Z1是離去基團；然后，如果希望或需要，進行下述的一個或多個步驟(i)將前體基團R3’轉(zhuǎn)換為基團R3，或?qū)3轉(zhuǎn)換為不同的這樣的基團；(ii)除去R2’中的任意保護基團。
Z適宜的離去基團包括鹵素，如氯、溴或碘，以及甲磺酸基或甲苯磺酸基。該反應(yīng)適宜在堿，如氫化鈉、氫氧化鈉、碳酸鉀存在下，在有機溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)、四氫呋喃(THF)或DCM中進行。該反應(yīng)任選地在適宜的相轉(zhuǎn)化催化劑存在下進行。堿和溶劑的選擇在某種程度上是相互關(guān)聯(lián)的，即某些溶劑只適用于某些堿，這是在本領(lǐng)域內(nèi)所能理解的。例如，氫化鈉優(yōu)選同二甲基甲酰胺或四氫呋喃一起使用，氫氧化鈉優(yōu)選同二氯甲烷和相轉(zhuǎn)化催化劑一起使用。
該反應(yīng)可在中等溫度下進行，如0-50℃，而通常是在大約環(huán)境溫度進行。
在式(VII)化合物中，R2’優(yōu)選是酯基，它可由通常的方法后續(xù)轉(zhuǎn)化為酸或另外的酯或鹽。例如，當(dāng)X是SO2，R2是羧酸甲酯時，它可通過在干燥吡啶或DMF中同碘化鋰反應(yīng)轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的羧酸。
上述選擇性步驟(i)或(ii)可用普通的方法進行。這取決于不同情況下基團R3、R3’、R2或R2’的準確性質(zhì)。適宜的反應(yīng)的實例在后面說明。
另外，式(I)化合物可通過使式(IX)化合物 其中X，R1，R4，R5，R6和R7如式(I)定義，R2’是式(I)中定義的基團R2或其保護基團；與下式(X)化合物反應(yīng)來制備R3’-Z1(X)其中R3’是式(I)中定義的基團R3或其前體；然后，如果希望或需要，進行上述(i)和/或(ii)的步驟。
該反應(yīng)適宜在有機溶劑中進行，所選溶劑取決于式(IX)化合物的性質(zhì)。適宜的離去基團Z1包括上述Z所列出的那些基團。
式(IX)化合物適宜通過與上述式(VII)和式(VIII)化合物類似的方法制備，在這種情況下將使用式(VIIA)化合物 在此化合物中，R2’，R4，R5，R6和R7定義如上。
式(VII)和式(VIIA)化合物可通過式(XI)的環(huán)化作用來制備 其中R4，R5，R6和R7定義如上，R42和R43代表可環(huán)化形成適宜取代吡咯環(huán)的結(jié)合部分。例如，R42可是-CH＝C(R44)N3基，其中R44是上面定義的R2，或其保護形式，R43可以是氫。環(huán)化形成式(XII)化合物可以通過在有機溶劑特別是高沸點的非質(zhì)子溶劑，如二甲苯或甲苯中例如回流加熱來實現(xiàn)。
另外，R43可以是硝基，R42可以是-CH2C(O)R2’，其中R2’定義如式(VII)。這些化合物在氫存在下在催化劑如碳-鈀的存在下進行環(huán)化。該反應(yīng)可在適度的溫度下進行，例如0-80℃，通常在大約環(huán)境溫度進行。
式(XI)化合物的實例包括式(XII)和式(XIII)化合物 其中R2’，R4，R5，R6和R7定義如上，R3”是基團R3’或是氫，以后可轉(zhuǎn)化為R3基或R3’。
R3’是氫的式(XIII)化合物可通過由式(XV)化合物 同式(XVI)化合物反應(yīng)來制備N3CH2R2’(XVI)其中R4，R5，R6，R7和R2’定義如上。該反應(yīng)可在有機溶劑如乙醇中，在-20-0℃的低溫下進行，適宜的溫度在大約0℃。該反應(yīng)適宜在堿如烷醇化物，特別是乙醇化物，如乙醇鉀存在下進行。
式(XVI)化合物適宜通過式(XVII)化合物R47CH2R2’(XVII)其中R3和R2’定義同上，R47是離去基團，如鹵素，特別是溴，同氮化物鹽，如堿金屬的氮化物鹽，特別是氮化鈉反應(yīng)來制備。
式(XIV)化合物可通過由式(XVIII)化合物 其中R5，R6，R7，R3，R4，和R2’定義如上，同式(XIX)化合物反應(yīng)來制備 其中R2’定義如上，R48是離去基團，如羥基。式(XVI)化合物實例是草酸酯，如草酸二乙酯。該反應(yīng)適宜在堿如氫化鈉存在下在有機溶劑如THF中進行。采用溫和的反應(yīng)溫度0-40℃，一般為環(huán)境溫度。
本發(fā)明的另一方面是提供本文所定義的式(I)化合物、或其藥用鹽或體內(nèi)可水解的酯、以及它們在治療人或動物疾病的方法中的應(yīng)用。特別是，這些化合物被用于治療炎癥疾病的方法中。
本發(fā)明的另一方面是提供拮抗溫血動物如人的MCP-1中介作用的方法，該方法包括給所說的動物施用有效量的式(I)化合物，或其藥用鹽或其體內(nèi)可水解的酯。
本發(fā)明還提供了作為藥物使用的本文定義的式(I)化合物，或其藥用鹽，或其體內(nèi)可水解的酯。
本發(fā)明組合物可以是適于口服的形式(如片劑、錠劑、硬的或軟的膠囊、水性或油性懸浮液、乳劑、分散性粉末或顆粒、糖漿或酏劑)，適于局部使用的形式(如乳霜、軟膏、凝膠、水性或油性溶液或懸浮液)，適于吸入使用的形式(如細碎的粉末或液體氣霧劑)，適于吹入使用的形式(如細碎的粉末)，適于不經(jīng)腸道使用的形式(如用于靜脈、皮下、肌內(nèi)給藥的水性或油性溶液或直腸用的栓劑)。
本發(fā)明組合物可利用本領(lǐng)域內(nèi)人員熟知的常規(guī)藥用賦形劑由常規(guī)方法來制備。例如，旨在口服的組合物可包含一種或多種著色劑、甜味劑、調(diào)味劑和/或防腐劑。
適于片劑的藥用可接受的賦形劑包括惰性稀釋劑，如乳糖、碳酸鈉、磷酸鈣或碳酸鈣、成粒劑和崩解劑，如玉米淀粉或藻酸；粘合劑，如淀粉；潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石；防腐劑，如對位羥基苯甲酸乙酯或丙酯和抗氧化劑，如抗壞血酸。片劑可以包衣或不包衣，以改善其在胃腸道內(nèi)的崩解性和對活性組分的吸收，或利用本領(lǐng)域內(nèi)人員熟知的普通包衣劑和方法改善兩種情況下的穩(wěn)定性和外觀。
口服組合物可以是硬質(zhì)明膠膠囊，其中活性組分同惰性固體稀釋劑如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或軟質(zhì)明膠膠囊，其中活性組分同水或油如花生油、液體石臘或橄欖油混合。
水性懸浮液一般包含細碎粉末狀的活性組分和一種或多種懸浮劑，如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和金合歡膠；分散劑或潤濕劑，如卵磷脂，或烯化氧和脂肪酸的縮合產(chǎn)物(如聚氧化乙烯硬脂酸酯)，或環(huán)氧乙烷和同長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物如十六碳基氧化乙烯基十六醇，或環(huán)氧乙烷和衍生于脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物如聚氧化乙烯山梨糖醇一油酸酯，或環(huán)氧乙烷和衍生于脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物如聚乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。水性懸浮液還可包含一種或多種防腐劑(如對羥基苯甲酸乙酯或丙酯)、抗氧化劑(如抗壞血酸)、著色劑、調(diào)味劑和/或甜味劑(如蔗糖、糖精或天冬甜素)。
油性懸浮液可通過將活性組分懸浮在植物油(如花生油、橄欖油、芝麻油、或椰子油)或礦物油(如液體石臘)中來配制。油性懸浮液還可包含增稠劑，如峰臘、固體石臘或十六醇。還可加入上面列舉的甜味劑和調(diào)味劑，以提供可口的口服制劑。這些組合物還可通過加入抗氧化劑如抗壞血酸進行防腐。
通過加入水適于制備水性懸浮液的分散性粉末和顆粒一般含有活性組分和分散劑或潤濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑。適用的分散劑或潤濕劑和懸浮劑已在前面例舉說明。其它的賦形劑，如甜味劑、調(diào)味劑和著色劑也是可以存在的。
本發(fā)明藥用組合物也可以是水包油乳液的形式。油相可以是植物油，如橄欖油或花生油，或礦物油，如液體石臘，或其任意的混合物。適宜的乳化劑可以是，例如，天然的樹膠，如金合歡膠或黃蓍膠，天然的磷脂，如大豆、卵磷脂、衍生于脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(如脫水山梨糖醇一油酸酯)和所說的偏酯同環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物如聚氧乙烯脫水山梨糖醇一油酸酯。該乳液還可包含甜味劑、調(diào)味劑和防腐劑。
糖漿和酏劑可同甜味劑如甘油、丙二醇、山梨糖醇、天冬甜素或蔗糖一起配制，還可包含潤藥、防腐劑、調(diào)味劑和/或著色劑。
該藥物組合物還可以是無菌可注射的水性或油性懸浮液，可利用一種或多種適宜的分散劑或潤濕劑和懸浮劑按照已有的方法制備，這些已在前文說明。無菌注射制劑還可以是在無毒性非腸道可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射的溶液或懸浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。
栓劑可通過使活性組分同適宜的在常溫是固體而在直腸溫度則是液體因而在直腸熔融并放出藥物的無刺激性賦形劑混合來制備。例如，適宜的賦形劑包括例如可可油和聚乙二醇。
局部用制劑，如乳霜、軟膏、凝膠和水或油溶液或懸浮液，一般可通過將活性組分同通常局部可接受的載體或稀釋劑，利用本領(lǐng)域人員熟悉的常規(guī)方法來配制。
吹入法給藥的組合物可以是包含顆粒平均直徑為例如30μ或更小的細碎的粉末，該粉末本身或僅含活性組分，或含有由一種或多種藥理可接受的載體如乳糖稀釋的活性組分。用于吸入的粉末一般是封裝在包含例如1-50mg活性組分的膠囊中，用增壓吸入器(turbo-inhaler)裝置，例如使用已知用于吸入的試劑cromoglycate sodium的裝置來使用。
吸入法給藥的組合物可以是一般壓封的氣霧劑形式，該氣霧劑用來發(fā)送包含細碎固體或液滴的活性組分?？墒褂贸Ｒ?guī)的氣霧劑推進劑，如揮發(fā)性氟化烴或烴，氣霧劑裝置一般用來發(fā)送計量的活性組分。
為得到制劑的更多信息，讀者請參閱Comprehensive MedicinalChemistry(Corwin Hansch；Chairman of Editorial Board)，Vol.5，第25.2章，Pergamon Press 1990。
為制備單劑量形式，與一種或多種賦形劑結(jié)合的活性組分量，有必要隨治療對象和具體的給藥方式而變化。例如，用于人口服的制劑一般含有例如0.5mg-2g活性化合物和適宜的常規(guī)量的賦形劑，占總組合物重量的大約5％-大約98％。單位劑量形式一般包含大約1-500mg的活性組分。為得到更多有關(guān)給藥方式和劑量規(guī)格的信息，讀者請參閱Comprehensive Medicinal Chemistry(Corwin Hansch；Chairmanof Editorial Board)，Vol.5，第25章25.3，Pergamon Press 1990。
式(I)化合物用于治療或預(yù)防目的的劑量大小，自然隨病情性質(zhì)和嚴重程度、動物或病人的年齡和性別以及給藥方式，隨已知醫(yī)療原則而變化。如上所述，式(I)化合物可用于治療疾病或醫(yī)療癥狀，這些是由于單獨地或部分地影響大鼠的法呢基化作用。
式(I)化合物用于治療或預(yù)防目的時，每天的給藥劑量范圍一般采用例如每kg體重0.5-75mg，需要時分劑量給藥。一般地說，采用非腸胃給藥，劑量較低。例如，靜脈給藥的劑量范圍一般采用例如每kg體重0.5-30mg。類似地，吸入法給藥的劑量范圍，使用例如每公斤體重0.5-25mg的劑量。但優(yōu)選口服。
本發(fā)明將由下述實施例作進一步的舉例說明，但不限于這些實施例，它們均采用下述通用的方法，除非另有說明。制備13-溴吲哚-2-羧酸乙酯將溴(2.72ml)的DMF溶液用10分鐘滴加到吲哚-2-羧酸乙酯的DMF溶液中。使該反應(yīng)物攪拌30分鐘，而后注入到水中，沉淀出淺黃色固體，過濾，并用乙酸乙酯重結(jié)晶，得到所希望的起始原料，為白色針狀體(10.2g，72％)。mp 150-151°；NMR d(CDCl3)1.44(t，3H)，4.45(q，2H)，7.22(m，1H)，7.38(m，2H)，7.66(d，1H)，9.27(brs，1H)；M/z(-)268(M+)，266，196，194.制備23-芐基硫基吲哚-2-羧酸乙酯將碳酸鉀(3.5g)加入到3-溴吲哚-2-羧酸乙酯(5.4g)和芐硫醇(3.05ml)的DMF(100ml)溶液中，使該反應(yīng)在100℃加熱3小時。而后使反應(yīng)物冷卻，注入到水中，用乙酸乙酯萃取。合并的有機萃取物用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮。殘留物用柱色譜法純化，利用異己烷∶5％乙酸乙酯為洗脫液，得到的產(chǎn)品為白色結(jié)晶固體(3.48g，56％)。
NMR d(CDCl3)1.42(t，3H)，4.05(s，2H)，4.40(q，2H)，7.10-7.40(m，8H)，7.78(d，1H)，9.06(brs，1H)；M/z(+)312(MH+)，266，166.制備33-(乙氧羰基甲硫基)吲哚-2-羧酸乙酯向3-溴吲哚-2-羧酸乙酯(1.34g)和2-巰基乙酸乙酯(0.96ml)的丙酮(15ml)溶液加入碳酸鉀(1.38g)，所得混合物在氬氣氛下加熱回流18小時。將冷卻的混合物注入到水中，用乙酸乙酯萃取。將合并的有機萃取物干燥(MgSO4)，并濃縮為膠狀物，用柱色譜法純化，利用異己烷∶乙酸乙酯(1∶4)為洗脫液，得到目的產(chǎn)物(331mg，21％)。
NMR d(CDCl3)1.05(t，3H)，1.45(t，3H)，3.6(s，2H)，4.0(q，2H)，4.5(q，2H)，7.2-7.4(m，3H)，7.9(d，1H)，9.2(brs，1 H)；M/z(+)308.3(MH+).制備4N-(3，4-二氯芐基)-3-(嗎啉基亞磺酰基)吲哚-2-羧酸乙酯將亞硫酰氯(5ml)一次加入到N-(3，4-二氯芐基)吲哚-2-羧酸乙酯(908mg)溶液中，所得混合物攪拌18小時。使該混合物真空濃縮。將所得膠狀物懸浮在二乙醚(12ml)中，并一次加入嗎啉(2.2ml)。使該混合物攪拌3小時。該反應(yīng)用水(10ml)淬火，用二氯甲烷萃取，干燥(MgSO4)，并濃縮為膠狀物，將其用柱色譜法純化，利用異己烷∶乙酸乙酯(1∶1)為洗脫液，得到目的產(chǎn)物(907mg，72％)。NMR d(CDCl3)1.4(t，3H)，3.0-3.1(m，2H)，3.3-3.4(m，2H)，3.7-3.8(m，4H)，4.4(q，2H)，5.7(q，2H)，6.8(d，1H)，7.1(d，1H)，7.25-7.4(m，4H)，8.6(d，1H)；M/z(-)480(M+).制備5利用適當(dāng)?shù)陌分貜?fù)上面制備4所述方法。得到下述化合物。N-(3，4-二氯芐基)-3-(1，1-二氧硫代嗎啉基)亞磺酰基吲哚-2-羧酸乙酯產(chǎn)率52％；NMR d(CDCl3)1.4(t，3H)，3.1-3.3(m，4H)，3.7-4.0(4H，m)，4.4(q，2H)，5.7(q，2H)，6.8(d，1H)，7.1(s，1H)，7.3-7.5(m，4H)，8.6(d，1H)；M/z(-)529.1(M+)，527.1.制備6N-(3，4-二氯芐基)-2-乙氧羰基吲哚-3-亞磺酸將在亞硫酰氯(4.0ml)中的N-(3，4-二氯芐基)吲哚-2-羧酸乙酯(1.11g)攪拌16小時，而后真空濃縮。將殘留物溶解在THF(10ml)和水(2ml)中，再攪拌2小時。反應(yīng)物被分配在醚和水之間。干燥(MgSO4)合并的有機萃取物，真空濃縮，殘留物用乙醚研磨，得到白色固體產(chǎn)品(0.67g，51％)。NMR d(CD3SOCD3)1.27(t，3H)，4.35(q，2H)，5.80(s，2H)，6.83(d，1H)，7.23(t，1H)，7.40(m，2H).
7.57(d，1H)，7.68(d，1H)，8.42(d，1H)；M/z(-)412(M+)，410，348，346.制備7N-(3，4-二氯芐基)-2-乙氧羰基吲哚-3-磺酰氨將N-(3，4-二氯芐基)-2-乙氧基羰基吲哚-3-亞磺酸(0.48g)、N-氯代琥珀酰亞胺(0.16g)和三乙胺(0.16ml)在二氯甲烷中攪拌4小時。真空濃縮反應(yīng)物。將殘留物用柱色譜法純化，利用異己烷∶10％乙酸乙酯為洗脫液，得到白色結(jié)晶固體產(chǎn)品(0.27g，52％)。
NMR d(CD3SOCD3)1.43(t，3H)，4.48(q，2H)，5.53(s，2H)，6.98(m，1H)，7.30-7.50(m，5H)，8.22(m，1H)；M/z(-)444(M-H+)，426，410.制備83-重氮基吲哚-2-羧酸乙酯將乙酸(77ml)滴加到亞硝酸鈉(82g)和吲哚-2-羧酸乙酯(25g)在二氯甲烷(1000ml)的懸浮液中，在環(huán)境溫度和惰性氣氛下攪拌。兩天后，加入另外的亞硝酸鈉(20g)，并滴加乙酸(19ml)，再攪拌1天。將反應(yīng)物注入水(300ml)中，用二氯甲烷(2×200ml)萃取，用飽和碳酸氫鈉溶液(300ml)中和。干燥(MgSO4)，合并的有機萃取物，真空濃縮，得到黃色固體產(chǎn)品(26.96g，95％)。NMR d(CD3SOCD3)1.34(t，3H)，4.37(q，2H)，7.38(m，2H)，7.84(m，2H)；M/z(+)216.2(MH+).制備93-重氮基-5-甲氧基吲哚-2-羧酸乙酯(化合物83、84的前體)向5-甲氧基吲哚-2-羧酸乙酯(8,0g)的丙酮(300ml)溶液加入亞硝酸鈉(39g)的水(100ml)溶液，使該反應(yīng)物激烈攪拌，同時在20-25℃用1小時滴加HCl(2M，98ml)。使該混合物在一個塞好的燒瓶中在20℃攪拌過夜，過濾所得黃色沉淀物，得到目的產(chǎn)物(6.0g，67％)。NMR d(CDCl3)1.45(t，3H)，3.87(s，3H)，4.50(q，2H)，6.98(m，2H)，7.85(d，1H)；M/z(+)246(MH+).制備103-溴-N-(3，4-二氯芐基)吲哚-2-羧酸叔丁酯將N，N-二甲基甲酰胺二叔丁基縮醛(19.90ml)滴加到3-溴-N-(3，4-二氯芐基)吲哚-2-羧酸(8.31g)的甲苯(150ml)懸浮液中，在氬氣氛下于環(huán)境溫度攪拌2小時。反應(yīng)物冷卻，過濾，用鹽水(100ml)、飽和NaHCO3水溶液(100ml)和鹽水(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到透明油狀產(chǎn)品，靜置后結(jié)晶(7.65g，81％)。NMR d(CD3SOCD3)1.49(s，9H)，5.76(s，2H)，6.86(m，1H)，7.24(t，1H)，7.35-7.68(m，5H)；M/z(+)456(MH-)，400.制備112-甲氧基羰基-3-吲哚乙酸甲酯將苯肼(5.7ml)、2-氧代戊二酸二甲酯(10g)和乙酸(1.0ml)的甲醇(100ml)液加熱回流1小時，而后真空濃縮。將粗產(chǎn)品腙(13g)溶解在飽和的甲醇鹽酸(350ml)中，并加熱到75℃，繼續(xù)攪拌16小時。該反應(yīng)物用水(200ml)稀釋，用二氯甲烷萃取。合并的有機萃取物用飽和碳酸氫鈉水溶液、水和飽和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(MgSO4)。真空排除溶劑，得到黃色結(jié)晶固體(7.0g)。NMR d(CD3SOCD3)3.59(s，3H)，3.83(s，3H)，4.12(s，2H)，7.06(t，1H)，7.26(t，1H)，7.41(d，1H)，7.63(d，1H)，11.76(brs，1H)；M/z(-)246(M-H+).制備12N-(3，4-二氯芐基)-2-甲氧基羰基-3-吲哚乙酸甲酯在氬氣氛下將3，4-二氯芐基氯(8.2g)加入到2-甲氧基羰基-3-吲哚乙酸甲酯(6.5g)和碳酸鉀(8.36g)的乙腈(200ml)的攪拌溶液。將該反應(yīng)加熱到80℃24小時。反應(yīng)物真空濃縮，并分配在乙酸乙酯和水之間。合并的有機萃取物用飽和氯化鈉水溶液洗滌，干燥(MgSO4)。真空濃縮。殘留物用柱色譜法純化，利用25％乙酸乙酯∶異己烷為洗脫液，得到白色固體產(chǎn)品(6.95g，65％)。NMRd(CD3SOCD3)3.60(s，3H)，3.77(s，3H)，4.13(s，2H)，5.89(s，2H)，6.89(dd，1H)，7.16(t，1H)，7.27(d，1H)，7.34(t，1H)，7.52(d，1H)，7.57(d，1H)，7.78(d，1H)；M/z(+)406(MH+).制備133-氨基吲哚-2-羧酸甲酯將甲醇鈉(6.5g)加入到3-氨基吲哚-2-羧酸乙酯[按照P.Unangst，J.Het.Chem.，1983，20，495的方法制備](5.0g)的甲醇(50ml)溶液中。所得到的混合物攪拌4小時，而后用飽和氯化銨溶液淬火。所得到的混合物用二氯甲烷萃取，干燥(MgSO4)和蒸發(fā)，得到膠狀物，用柱色譜法純化，利用異己烷∶乙酸乙酯(1∶4)為洗脫液，得到目的產(chǎn)物(1.95g，42％)。NMR d(CD3SOCD3)，3.8(s，3H)，5.7(s，2H)，6.8-6.9(m，1H)，7.2(m，2H)，7.7(d，1H)；M/z(+)191.1(MH+).制備143-甲?；胚?2-羧酸乙酯將N-甲基-N-甲酰苯胺(2.25ml)和磷酰氯(1.70ml)的混合物在環(huán)境溫度下攪拌15分鐘，而后加入1，2-二氯乙烷(30ml)，接著加入吲哚-2-羧酸乙酯(3g)，將該反應(yīng)物加熱回流90分鐘。反應(yīng)混合物注入到冰/水(200ml)和乙酸鈉(10g)的混合物中，用乙酸乙酯(2×200ml)萃取。蒸發(fā)合并的有機相，粗殘留物用柱色譜法純化，用二氯甲烷為洗脫液，得到白色固體產(chǎn)品(2.27g，66％)。NMR d(CD3SOCD3)1.40(t，3H)，4.42(q，2H)，7.25(m，1H)，7.40(m，1H)，7.55(m，1H)，8.20(m，1H)，12.77(s，1H)；M/z(+)218.3(MH+).制備153-甲?；?N-(3，4-二氯芐基)吲哚-2-羧酸乙酯在氬氣氛下將氫化鈉(488mg，60％在礦物油中)加入到3-甲?；胚?2-羧酸乙酯(2.21g)的DMF(100ml)的攪拌溶液，使該反應(yīng)物在環(huán)境溫度下攪拌25分鐘，而后加入3，4-二氯芐基氯(1.71ml)，并使該反應(yīng)物攪拌過夜。使該反應(yīng)混合物真空濃縮，殘留物溶解在乙酸乙酯(80ml)中，用水(2×80ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到粗殘留物用柱色譜法純化，用乙酸乙酯∶異己烷為洗脫液(梯度5/95-100/0)，得到黃色固體產(chǎn)品(2.17g，57％)。
NMR d(CD3SOCD3)1.25(t，3H)，4.40(q，2H)，5.80(s，2H)，7.00(m，1H)，7.30-7.50(m，3H)，7.55(m，1H)，7.65(m，1H)，8.35(m，1H)，10.48(s，1H)；M/z(+)376.4(MH+).制備16N-(3，4-二氯芐基)-2-乙氧羰基吲哚-3-羧酸乙酯在環(huán)境溫度下將氯化鈉(3.39g)和磷酸二氫鈉(4.54g)在水(50ml)中的混合物滴加到3-甲?；?N-(3，4-二氯芐基)吲哚-2-羧酸乙酯(1.56g)和2-甲基丁-2-烯(50ml)在叔丁醇(100ml)中的攪拌溶液，并使該反應(yīng)物激烈攪拌過夜。使該反應(yīng)混合物真空濃縮，殘留物溶解在二氯甲烷(100ml)中，用水(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮，得到黃色固體產(chǎn)品(1.50g，92％)。NMR d(CD3SOCD3)1.20(t，3H)，4.30(q，2H)，5.50(s，2H)，7.00(m，1H)，7.25(m，2H)，7.42(m，1H)，7.58(m，2H)，8.00(m，1H)，12.68(s，1H)；M/z(-)390.4(M-H+).
NMR d(CDCl3)0.82-2.15(m，10H)，1.36(t，3H)，3.50(d，2H)，4.07(d，2H)，4.35(q，2H)，5.64(s，2H)，6.81(d，2H)，7.12(m，2H)，7.27(m，3H)，7.75(d，2H)；M/z(+)490.5(MH+).N-(3，4-二氯芐基)-3-(4-氯苯乙氧基)吲哚-2-羧酸乙酯(化合物80的乙酯)產(chǎn)率87％；NMR d(CD3SOCD3)1.21(t，3H)，3.07(t，2H)，4.21(q，2H)，4.37(t，2H)，5.70(s，2H)，6.84(d，1H)，7.07(t，1H)，7.31(m，6H)，7.51(t，3H)；M/z(+)504.5(MH+).化合物23的乙酯產(chǎn)率29％；NMR d(CDCl3)1.35(t，3H)，3.4(t，1H)，3.9-4.0(m，2H)，4.3-4.5(m，4H)，5.6(s，2H)，6.8(d，1H)，7.1-7.4(m，5H)，7.8(d，1H)；M/z(+)410.3(MH+)，408.2.化合物26的乙酯產(chǎn)率45％；NMR d(CDCl3)1.35(t，3H)，3.2(t，2H)，4.3(q，2H)，4.45(t，2H)，5.65(s，2H)，6.8(dd，1H)，7.05-7.4(m，10H)，7.5(d，1H)；M/z(+)470.3(MH+)，468.4.化合物27的2-乙酯和甲酯產(chǎn)率66％；M/z(+)438.3(MH+)，436.2.化合物66的乙酯產(chǎn)率62％；NMR d(CDCl3)1.4(t，3H)，3.5(s，3H)，4.3-4.4(m，4H)，5.65(s，2H)，6.85(dd，1H)，7.1-7.4(m，5H)，7.8(d，1H)；M/z(+)424(MH+)，422.化合物67的乙酯產(chǎn)率73％；
NMR d(CDCl3)1.4(t，3H)，1.5(s，9H)，3.7(q，2H)，4.4(q，2H)，5.65(s，2H)，6.8(dd，1H)，7.1-7.4(m，5H)，7.9(d，1H)；M/z(+)507.3(MH+).3-氨基-N-(3，4-二氯芐基)吲哚-2-羧酸甲酯(化合物1，2的前體)產(chǎn)率64％；NMR d(CD3SOCD3)3.75(s，3H)，5.6(s，2H)，6.0(s，2H)，6.8-7.0(m，2H)，7.1-7.5(m，4H)，7.85(d，1H)；M/z(+)351.2(MH+)，349.2.化合物24的二乙酯產(chǎn)率38％；NMR d(CDCl3)1.05(t，3H)，1.4(t，3H)，3.6(s，2H)，3.95(q，2H)，4.4(q，2H)，5.7(s，2H)，6.85(dd，1H)，7.2-7.4(m，5H)，7.9(d，1H)；M/z(+)468.3(MH+)，466.3.3-氨基-N-(3，4-二氯芐基)吲哚-2-羧酸乙酯(化合物8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，22的前體)產(chǎn)率44％；NMR d(CD3SOCD3)1.21(t，3H)，4.21(q，2H)，5.56(s，2H)，6.00(s，2H)，6.86(d，1H)，6.98(t，1H)，7.22(d，1H)，7.30(t，1H)，7.40(d，1H)，7.48(d，1H)，7.86(d，1H)；M/z(+)363(MH+).
NMR d(CDCl3)1.25(t，3H)，1.38(t，3H)，3.62(q，2H)，3.80(t，2H)，3.86(s，3H)，4.3-4.4(m，4H)，5.62(s，2H)，6.80(dd，1H)，6.96(dd，1H)，7.12(s，1H)，7.14(d，1H)，7.20(d，1H)，7.26(d，1H).實施例6利用適宜的吲哚和芐基鹵重復(fù)上面實施例5描述的方法。則得到下述化合物。N-(3.4-二氯芐基)-3-(2-羥基乙氧基)-5-甲氧基吲哚-2-羧酸乙酯(化合物83的乙酯)產(chǎn)率38％；NMR d(CDCl3)1.32(t，3H)，3.42(t，1H)，3.87(s，3H)，3.92(m，2H)，4.3-4.4(m，4H)，5.60(s，2H)，6.80(dd，1H)，7.02(dd，1H)，7.1-7.2(m，3H)，7.32(d，1H)；M/z(+)440(MH+)，438.
NMR d(CD3SOCD3)3.51(brs，2H)，3.60(M，4H)，3.71(brs，2H)，4.23(s，2H)，5.88(s，2H)，6.99(d，1H)，7.19(t，1H)，7.32-7.40(m，2H)，7.56-7.63(m，2H)，7.78(d，1H)；M/z(-)445(M-H+).
結(jié)合緩沖溶液是50mM HEPES，1mM CaCl2，5mM MgCl2，0.5％胎牛血清，用1M NaOH調(diào)節(jié)至pH7.2。
非-必需氨基酸(100X濃縮物)是L-丙氨酸，890mg/l；L-天冬酰胺，1320mg/l；L-天冬氨酸，1330mg/l；L-谷氨酸，1470mg/l；甘氨酸，750mg/l；L-脯氨酸，1150mg/l；和L-絲氨酸，1050mg/l。
次黃嘌呤和胸苷補充物(50X濃縮物)是次黃嘌呤，680mg/l和胸苷，194mg/l。
青霉素-鏈霉素是青霉素G(鈉鹽)；5000單位/ml；硫酸鏈霉素，5000μg/ml。
人單核細胞系THP-1細胞購自ATCC，編號ATCC TIB-202。
Hank平衡鹽溶液(HBSS)由Gibco獲得，參見Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，1949，71，196。
合成的細胞培養(yǎng)介質(zhì) RPMI 1640由Gibco得到；它包括無機鹽[Ca(NO3)2.4H2O 100mg/l；KCl 400mg/l；MgSO4.7H2O 100mg/l；NaCl 6000mg/l；NaHCO32000mg/l & Na2HPO4(無水)800mg/l]，D-葡萄糖2000mg/l，還原的谷光甘肽1mg/l，氨基酸和維生素。
FURA-2/AM是1-[2-(5-羧基噁唑-2-基)-6-氨基苯并呋喃-5-氧基]-2-(2’-氨基-5’-甲基苯氧基)-乙烷-N，N，N’，N’-四乙酸五乙酰氧基甲基酯，由Molecular Probes，Eugene，Oregon，USA獲得。
血液沉降緩沖液包括8.5g/l NaCl和10g/l羥乙基纖維素。
細胞溶解緩沖液是0.15M NH4Cl、10mM KHCO3、1mM EDTA。
全細胞結(jié)合緩沖液(Whole Cell Binding Buffer)是50mMHEPES、1mM CaCl2、5MM MgCl2、0.5％BSA、0.01％NaN3，用1M NaOH調(diào)節(jié)至pH7.2。
洗滌用緩沖液是50mM HEPES、1mM CaCl2、5mM MgCl2、0.5％熱減活的FCS、0.5M NaCl，用1M NaOH調(diào)節(jié)至pH7.2。
通常分子生物學(xué)方法可以按照“Molecular Cloning-ALaboratory Manual”，第二版，Sambrook.Fritsch and Maniatis(Cold Spring Harbor Laboratory，1989)中所述的任一方法進行。i)hMCP-1受體的克隆和表達用適當(dāng)?shù)牡途酆塑账嵋?，以公開的MCP-1受體序列為基礎(chǔ)，MCP-1受體B(CCR2B)cDNA被THP-1細胞RNA的PCR克隆(Charo等人，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，91，2752)。所得到的PCR產(chǎn)物被克隆為載體PCR-IITM(InVitrogen，San Diego，CA.)。無誤差CCR2B cDNA如Hind 111-Not I碎片次級克隆為真核生物表達載體pCDNA3(In Vitrogen)，以分別生成pCDNA3/CC-CKR2A和pCDNA3/CCR2B。
將線性化的pCDNA3/CCR2B DNA用磷酸鈣沉淀轉(zhuǎn)染為CHO-K 1細胞(Wigler等人，1979，Cell，16，777)。在細胞轉(zhuǎn)染后24小時，通過加入1mg/ml硫酸遺傳霉素(Geneticin)(G418，Gibco BRL)選擇轉(zhuǎn)染的細胞。如前文所述(Needham等人，1995，Prot.Express.Purific.，6，134)進行RNA和RNA印跡(Northern blotting)的制備。經(jīng)鑒定，CHO-K1克隆體7(CHO-CCR2B)為最高的MCP-1受體B表達子。ii)膜碎片的制備CHO-CCR2B細胞在補充有10％胎牛血清、2mM谷酰胺、1x非必需氨基酸、1x次黃嘌呤和胸苷補充物和青霉素-鏈霉素(50μg鏈霉素/ml，Gibco BRL)的DMEM介質(zhì)中生長。膜碎片用前文所述(Siciliano等人，1990，J.Biol.Chem.，265，19658)的細胞溶解/差速離心方法制備。按照生產(chǎn)者的說明書，蛋白質(zhì)的濃度由BCA蛋白質(zhì)測定確定(Pierce，Rockford，Illinois)。iii)試驗125I MCP-l用Bolton和Hunter結(jié)合反應(yīng)方法(conjugation)制備(Bolton等人，1973。Biochem.J，133，529；AmershamInternational plc]。平衡結(jié)合試驗用Ernst等人，1994，JImmunol.，152，3541所述的方法進行。簡言之，將各種不同量的125I-標記的MCP-1加入于100μl結(jié)合緩沖液中的7μg純化的CHO-CCR2B細胞膜中，于室溫孵化1小時后，過濾結(jié)合反應(yīng)混合物，通過平板洗滌器(Brandel MLR-96T Cell Harvester)，用冰冷卻的結(jié)合緩沖液洗滌5次。濾墊(Brandel GF/B)在使用前需在0.3％聚氮丙啶中預(yù)浸60分鐘。接著將各個過濾器的濾液分別注入到3.5ml管中(SarstedtNo.55.484)并測定結(jié)合的125I-標記MCP-1(LKB 1277Gammamaster)。冷競爭研究用如上所述100pM125I-標記的MCP-1，在不同濃度未標記MCP-1存在下進行。通過在該反應(yīng)中加入200-倍摩爾過量的未標記MCP-1來測定非特異性結(jié)合。
用從CHO-CCR2B細胞制備的膜碎片進行的配體結(jié)合研究指出CCR2B受體以0.2pmol/mg濃度的膜蛋白質(zhì)和選擇結(jié)合的MCP-1存在，并具有高親和力(IC50＝110pM，Kd＝120pM)。與這些膜的結(jié)合是完全可逆的，在45分鐘后于室溫下達到平衡，并且在使用濃度為100pM至500pM的MCP-1時，MCP-1結(jié)合和CHO-CCR2B細胞膜濃度之間有線性關(guān)系。
將溶解于DMSO(5μl)的試驗化合物用于和100pM標記的MCP-1的競爭試驗，濃度范圍0.01-50μM，一式二份，使用8點劑量-響應(yīng)曲線和計算出IC50濃度。
在本文的hMCP-1受體結(jié)合試驗中，本發(fā)明試驗化合物的IC50值為50μM或更少，例如化合物81的IC50為6.86μM。b)MCP-1介導(dǎo)的THP-1細胞中的鈣流量人的單核細胞系THP-1在補充了10％胎牛血清、6mM谷氨酰胺和青霉素-鏈霉素(濃度為50μg鏈霉素/ml，Gibco BRL)的合成細胞培養(yǎng)介質(zhì)RPMI 1640中生長。THP-1細胞用HBSS(沒有Ca2+和Mg2+)+1mg/ml BSA洗滌，并再懸浮于同樣的緩沖液中，密度為3×106細胞/ml。然后，在37℃將細胞載于1mM FURA-2/AM 30分鐘，在HBSS中洗滌二次，再以1×106細胞/ml的濃度懸浮。將THP-1細胞懸浮液(0.9ml)加入5ml一次性使用的樣品池，其中含有磁力攪拌棒和2.1ml預(yù)熱的(37℃)HBSS，其中含有1mg/ml BSA，1mM MgCl2和2mM CaCl2。將樣品池放入熒光分光光度計(Perkin Elmer Norwalk，CT)，并于37℃預(yù)孵化4分鐘，同時攪拌。記錄70秒的熒光值，10秒鐘后在樣品池中加入hMCP-1刺激細胞。通過在340nm和380nm擇一激發(fā)，接著測定在510nm的熒光發(fā)射密度來測定[Ca2+]i。受到激發(fā)后于340nm和380nm計算產(chǎn)生的熒光強度的比率(R)，并按照下述公式得到和評估細胞質(zhì)的[Ca2+][Ca2+]i=Kd(R-Rmin)(Rmax-R)(Sf2/Sb2)]]>其中37℃時對于FURA-2 Ca2+復(fù)合物，Kd在224nm。Rmax是在加入10mM離子霉素后測定的最大的熒光比，Rmin是通過隨后加入含有5mM EGTA的無Ca2+溶液測得的最小比值，和Sf2/Sb2是在380nm激發(fā)后測定的Rmin和Rmax各自的熒光值之比。
用hMCP-1刺激THP-1細胞可快速誘導(dǎo)，從而以特異性、劑量依賴性地短暫提高[Ca2+]i。劑量響應(yīng)曲線指出EC50值為2nm左右。溶解于DMSO(10μl)的試驗化合物用于鈣釋放抑制的試驗，在配體加入10秒之前，在細胞懸浮液中加入上述試驗化合物，測定[Ca2+]i短暫提高的減少。試驗化合物也被檢驗代替hMCP-1加入后拮抗活性的缺失。c)hMCP-1和RANTES介導(dǎo)的趨化作用體外趨化作用試驗用人的單核細胞系THP-1進行。測定通過聚碳酸酯膜的細胞遷移，經(jīng)用Coulter計數(shù)器直接或用比色生存能力試驗間接通過的數(shù)目計數(shù)，通過線粒體的呼吸鏈測定四唑鎓鹽的分裂(Scudiero D.A.等人，1988，Cancer Res.，48，4827-4833)。
將化學(xué)引誘物引入96-穴微量滴定板，該滴定板按照制造者的說明書，以無PVP的5μm孔徑的聚碳酸酯粘合的板框式過濾器膜(NeuroProbe MB系列，Cabin John，MD 20818.USA)固定形成了趨化作用室的下穴。將化學(xué)引誘物稀釋于適當(dāng)?shù)暮铣杉毎囵B(yǎng)介質(zhì)RPMI 1640(Gibco)，或者在其中補充了2mM谷酰胺和0.5％BSA，或者補充有含Ca2+和Mg2+，而沒有Phenol Red(Gibco)加上0.1％BSA的HBSS。每一稀釋液在真空下脫氣30分鐘，把400μl放入該室的下穴中，將THP-1細胞(5×105，在100μl RPMI 1640+0.5％BSA之中)在上室的各穴孵化。為抑制趨化作用，化學(xué)引誘物被保持在次于最大濃度的常量(所述的最大濃度是先測定的(1nM MCP-1))并與各種不同濃度的、溶于DMSO的試驗化合物(最后DMSO濃度＜0.05％v/v)一起加入下穴。將該室于37℃和在5％CO2中孵化2小時，從上穴中除去介質(zhì)，然后在打開所述室之前用200μl生理鹽水洗滌，擦干膜的表面，以600g的速度離心96-穴板5分鐘以收集細胞。吸出上清液(150μl)，將10μl細胞增殖試劑、WST-1、{4-[3-(4-碘代苯基)-2-(4-硝基苯基)-2H-5-四唑鎓基]-1，3-苯基硫酸氫鹽}和電子偶合劑(Boehringer Mannheim.Cat.no.1644 807)一起加回到穴中。滴定板在37℃孵化3小時，于450nm，在微量滴定板讀數(shù)器上讀出可溶性甲_產(chǎn)物的吸收值。將數(shù)據(jù)輸入空白表格程序(spreadsheet)，在沒有化學(xué)引誘物時進行任何隨機移動的校正，計算出平均吸收值、平均值的標準偏差和顯著性檢驗。hMCP-1誘導(dǎo)濃度依賴于伴隨特征性雙相響應(yīng)最大為0.5-1.0nm的細胞移動。
上述試驗的另一形式中，為了有助于終點的檢測，可使用熒光標記的細胞。在此情況下，所用的THP-1細胞通過在5mM Calcein AM(甘氨酸，N，N’-[[3’，6’-雙(乙酰氧基)-3-氧代螺[異苯并呋喃-1(3H)，9’-[9H]呫噸]-2’，7’-二基]二(亞甲基)]二[N-[2-[(乙酰氧基)甲氧基]-2-氧乙基]]-雙[(乙酰氧基)甲基]酯；分子引物MolecularProbes)中，于黑暗中孵化45分鐘進行熒光標記。離心收獲細胞，再與Ca2+、Mg2+和0.1％BSA一起懸浮于HBSS(沒有Phenol Red)。將50μl(2×105細胞)細胞懸浮液放入每穴之上的過濾器，如上所述，在5％CO2中，于37℃孵化2小時。孵化結(jié)束時用磷酸鹽緩沖鹽水洗出過濾器上面的細胞，由板上移去過濾器，被吸附于過濾器下面或下穴中的細胞的數(shù)目通過讀出在485nm激發(fā)波長、538nm發(fā)射波長的熒光(fmax，Molecular Devices)來評估。將數(shù)據(jù)輸入空白表格程序，在沒有化學(xué)引誘物時進行隨機的移動的校正，計算出平均熒光值、平均值的標準誤差、百分抑制率和試驗中化合物的IC50值，以及顯著性檢驗。除了MCP-1誘導(dǎo)的趨化作用以外，本試驗的另外形式也用來測定RANTES(2nM)誘導(dǎo)的趨化作用的抑制作用。d).與人體外周血單核細胞(PBMCs)的結(jié)合i)人體PBMCs細胞的制備由志愿供血者得到新鮮血液(200ml)，收集于檸檬素鈉抗凝劑中，得到的最后濃度是0.38％。將血液和沉降緩沖液混合，并在37℃孵化20分鐘。收集上清液，在1700rpm離心5分鐘(SorvallRT6000D)。將得到的血小板再懸浮于20ml RPMI/BSA(1mg/ml)，于15ml離心管中小心地將4×5ml的細胞在4×5ml Lymphoprep_(Nycomed)中成層。所述的管在1700rpm離心30分鐘(SorvallRT6000D)，移出得到的細胞層，并轉(zhuǎn)移至50ml Falcon管。細胞在溶胞緩沖液中洗滌二次，以除去殘余的紅細胞，再在RPMI/BSA中洗滌二次。將細胞再懸浮于5ml結(jié)合緩沖液。用Coulter計數(shù)器測定細胞的數(shù)目，加入結(jié)合緩沖液，得到的最后濃度為1.25×107PBMCs/ml。ii)試驗按照Bolton和Hunter結(jié)合反應(yīng)(Bolton等人，1973，Biochem.J，133，529；Amersham International plc]制備[125I]MCP-1。用Ernst等人，1994，J Immunol，152，3541所述的方法進行平衡結(jié)合試驗。簡言之，在96穴板上，將50μl的125I-標記MCP-1(最后濃度100pM)加入40μl(5×105細胞)細胞懸浮液。以全細胞結(jié)合緩沖液稀釋DMSO儲備液濃度為10mM的化合物，將上述化合物加入其中，使最體積為5μl，在試驗中保持DMSO的濃度為恒定的5％。在沒有化合物的情況下測定總結(jié)合。非特異性結(jié)合通過加入5μl冷的MCP-1進行測定，得到的最終試驗濃度為100nM。用全細胞結(jié)合緩沖液將試驗的各穴制成最后體積為100μl，將板密封。然后在37℃孵化60分鐘，過濾結(jié)合反應(yīng)的混合物，在平板洗滌器(Brandel MLR-96T CellHarvester)中用冰冷的洗滌緩沖液洗滌10秒鐘。濾墊(Brandel GF/B)在使用前需在加有0.2％BSA的0.3％聚氮丙啶中預(yù)浸60分鐘。接著將各個過濾器的濾液分別注入到3.5ml管中(Sarstedt No.55.484)并測定結(jié)合的125I-標記MCP-1(LKB 1277 Gammamaster)。
通過重復(fù)試驗，用六點劑量響應(yīng)曲線確定試驗化合物的效價，并測定IC50值。
例如，用此方法，表1的化合物14在hMCP-1的趨化作用試驗中，其IC50值為11.4μM，表1的化合物23在RANTES的趨化作用試驗中，其IC50值為2.95μM。
對本發(fā)明試驗化合物而言，在有效劑量沒有發(fā)現(xiàn)生理上不可接受的毒性。
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)
(j)
(k)
(l)
注在上述制劑中化合物X可以包括上述實施例中所述的化合物。上述制劑可用藥學(xué)領(lǐng)域公知的常規(guī)方法得到。片劑(a)-(c)可以是常規(guī)的腸溶包衣片劑，例如包衣為纖維素乙酸酯鄰苯二甲酸酯。氣霧劑(h)-(k)可與標準的、可測劑量的氣霧分散劑結(jié)合使用，懸浮劑脫水山梨糖醇三油酸酯和大豆卵磷脂可被另外的懸浮劑如脫水山梨糖醇單油酸酯、脫水山梨糖醇倍半油酸酯、多乙氧基醚80、聚甘油油酸酯或油酸替換。
權(quán)利要求
1.下式(I)化合物或其藥用鹽、酰胺或酯在制備抑制單核細胞化學(xué)吸引蛋白-1和/或RANTES誘導(dǎo)的趨化性的藥物中的應(yīng)用 X是CH2或SO2，R1是任選被取代的芳基或雜芳基環(huán)；R2是羧基、氰基、-C(O)CH2OH、-CONHR8、-SO2NHR9、四唑-5-基、SO3H或下式(VI)基團 其中R8選自氫，烷基，芳基，氰基，羥基，其中R12是烷基、芳基、雜芳基或鹵代烷基的-SO2R12，或R8是基團-(CHR13)r-COOH，其中r是1-3的整數(shù)和各個R13基團各自獨立地選自氫或烷基；R9是氫，烷基，任選被取代的芳基如任選被取代的苯基，或任選被取代的雜芳基如任選被取代的5或6元雜芳基，或基團COR14，其中R14是烷基、芳基、雜芳基或鹵代烷基；R10和R11獨立地選自氫或烷基，特別是C1-4烷基；R3是基團OR15，S(O)qR15，NHCOR16，NHSO2R16，(CH2)sCOOH，(CH2)tCONR17R18，NR17R18，SO2NR17R18或任選被取代的鏈烯基，其中q是0、1或2，s是0或1-4的整數(shù)，t是0或1-4的整數(shù)，R15是取代的烷基或環(huán)烷基基團或任選被取代的雜芳基基團，R16是任選被取代的烷基、任選被取代的芳基或任選被取代的雜芳基，和R17和R18獨立地選自氫、任選被取代的烷基、任選被取代的芳基和任選被取代的雜芳基，條件是R17和R18中至少有一個不是氫，或R16和R17與它們所連接的氮原子一起形成任選地含有其它雜原子的任選被取代的雜環(huán)基；和R4，R5，R6和R7獨立地選自氫、官能基團或任選被取代的烴基或任選被取代的雜環(huán)基，條件是R4不是基團OR18’、S(O)mR18’、NR19R20、C(O)NR19R20、NHCOR18、NHSO2R18或OCONR19R20，或被OR18，S(O)mR18、NR19R20取代的烷基，其中R18、R19和R20獨立地選自氫或任選被取代的烴基，或R19和R20與它們所連接的原子一起形成如上文定義的、可任選含有其它雜原子如S(O)n、氧和氮的任選被取代的雜環(huán)基，m是0或是1-3的整數(shù)，和R18’是取代的含氫烷基基團。
2.按照權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中式(1)化合物中的R4是氫、羥基、鹵素、烷氧基、芳氧基或任選被取代的烴基基團，或是任選被取代的雜環(huán)基基團。
3.按照前述任意一項權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中特定的R3包括OR15、S(O)qR15、NHCOR16、NHSO2R16、SO2NR17R18，其中q、R15、R16、R17和R18如權(quán)利要求1定義。
4.按照前述任意一項權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中R3是式-O(CH2)a[(CHOH)(CH2)b]dCH2OH，其中a是0或1-4的整數(shù)，b是0或1-3的整數(shù)，d是0或1。
5.按照前述任意一項權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中R1是3，4-二氯苯基，3-氟-4-氯苯基，3-氯-4-氟苯基或2，3-二氯吡啶-5-基。
6.按照前述任意一項權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其中X是CH2。
7.用于治療的化合物，所述的化合物包括式(1A)化合物，該化合物是權(quán)利要求1定義的式(I)化合物，但有下述條件限制(i)當(dāng)R2是羧基或其鹽或酰胺時，R4，R5，R6和R7中至少有三個是氫，R3是S(O)qR15，R15不是被羧基或其酯或酰胺衍生物取代的C1-4烷基；(ii)當(dāng)R3是基團NHCOR16或NHSO2R16時，其中R16是任選被取代的烷基；和(iii)其中R3是R14是2-喹啉基甲基的基團SR14，R2是COOH或是其乙基酯，各個R4，R5和R7是氫，R1是4-氯苯基，R6不是2-喹啉基甲基。
8.藥物組合物，該組合物含有與藥用載體結(jié)合的權(quán)利要求7定義的式(1A)化合物。
9.式(1B)化合物，該化合物是權(quán)利要求7定義的式(1A)化合物，但有下述條件限制(iv)其中R3是基團COOH或CH2COOH，R2是COOH，和各個R4，R5，R6和R7是氫，R1不是未取代的苯基；和(v)其中R3是基團CH2COOH，R2是COOH，和各個R4，R5和R7是氫，R1是4-氯苯基，R6不是甲氧基；和(vi)當(dāng)R3是OR15或S(O)qR15時，R15不是C1-6鹵代烷基；和(vii)當(dāng)R2是COOCH2CH3，各個R4，R5，R6和R7是氫，R1是4-氯苯基時，R3不是CH＝CH(CN)2基團。
10.權(quán)利要求1中定義的式(I)化合物的制備方法，該方法包括使下式(VII)化合物 其中R4，R5，R6和R7如式(I)定義，R2’是式(I)中定義的基團R2或其保護基團，R3’是式(I)中定義的基團R3或其前體；與下式(VIII)化合物反應(yīng)R1-X-Z1(VIII)其中R1和X如式(I)定義，和Z1是離去基團；然后，如果需要，進行下述的一步或多步(i)將前體基團R3’轉(zhuǎn)換為基團R3，或?qū)3轉(zhuǎn)換為不同的基團；(ii)除去R2’中的任何保護基團。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的3－取代吲哚化合物或其藥用鹽、酰胺或酯在制備抑制單核細胞化學(xué)吸引蛋白－1和/或RANTES誘導(dǎo)的趨化性的藥物中的應(yīng)用,其中X是CH
文檔編號A61K31/423GK1351590SQ0080346
公開日2002年5月29日 申請日期2000年1月31日 優(yōu)先權(quán)日1999年2月5日
發(fā)明者A·W·福爾, J·凱特爾 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司