專利名稱：含支鏈酯的抗皮脂護膚化妝品組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及含有支鏈酯的化妝品護膚組合物，用于控制人皮膚上的皮脂/油，并改善或防止皮膚老化外觀。
背景技術：
改善皮膚外觀的化妝品日益受到消費者的青睞。消費者常常尋求減輕或延遲老化或光老化皮膚的跡象(例如，細紋或起皺)以及皮膚干燥和下垂的跡象。消費者也在尋找除了抗衰老以外的其它效果。
時常發(fā)生的不利皮膚狀態(tài)是“油性皮膚”。此狀態(tài)通常是由皮膚上過量的皮脂造成的。皮脂是由皮脂腺細胞(皮膚中皮脂腺體的細胞)產生并隨后分泌到皮膚表面的皮膚油類。油性皮膚與發(fā)亮的不利外觀及令人不快的觸覺有關。油性皮膚影響不同的年齡組。人們迫切需要既能提供皮脂控制又能提供抗衰老益處的化妝品。
有若干專利申請公開了在化妝組合物中使用支鏈的醇。例如，見美國專利4496536(Moller等)、美國專利5093112(Birtwistle等)和美國專利5344850(Hata等)。
令人遺憾的是，醇，不論支鏈還是直鏈的，具有明顯的令人不快的氣味，并因此給化妝品化學工作者帶來了配制問題。醇的酯化改變了它們的氣味，但不一定更好。
含支鏈酯的化妝品組合物也是已知的。美國專利5489426(Zabotto等)描述了含支鏈烷基酯的化妝品組合物，其中該支鏈烴鏈含有3至20個碳原子。美國專利5578299(Starch)描述了化妝洗除式組合物，其中含有49-98％的礦物油和可有可無的作為潤膚劑的支鏈醇酯。美國專利5658580(Mausner)描述了含有加以選擇的新戊酸酯來潤滑皮膚的抗皮脂組合物。美國專利5773015(Bajor等)描述了含水楊酸C11-C30酯的抗皮脂組合物。美國專利5849273(Bonda等)描述了含水楊酸烷基酯及可有可無的苯甲酸烷基酯的防曬組合物；兩種酯含有單一支鏈的烷基，該支鏈由丁基或己基或辛酰基烷基基團組成。
本發(fā)明至少一部分涉及具有宜人氣味的支鏈酯作為有效皮脂抑制劑的用途。作為本發(fā)明的一部分，現已發(fā)現直鏈醇的酯是無效的，且不是所有的支鏈醇酯是有效的或者具有宜人的氣味。
發(fā)明概述本發(fā)明提供護膚化妝品組合物，其中含有(i)約0.001％至約50％的支鏈酯RCOOR′，其中R選自甲基、苯基和CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7；而R′是總共含至少6個碳原子的甲基支化烴基，其條件是如果R′共含有6個以上的碳原子，則該支鏈酯含有一個以上的甲基；及(ii)化妝用載體。
本發(fā)明還提供控制或防止油性皮膚狀態(tài)的方法，特別是面部，該方法包括給所述皮膚施用含約0.001％至約100％的上述支鏈酯。
本發(fā)明還提供減少、防止或控制皮脂腺細胞分泌皮脂的美容方法，該方法包括施用含約0.001％至約100％支鏈酯的組合物。
本發(fā)明還提供了刺激皮膚中由成纖維細胞合成膠原和糖胺基聚糖的美容方法，該方法包括施用含約0.001％至約100％支鏈酯的組合物。
本發(fā)明還提供治療或延緩皮膚隨時間老化、光至老化、干燥、有細紋或起皺，為皮膚遮蔽有害UVA和UVB光線(防曬)，增加角質層牢固度和柔韌性，及總體上提高皮膚質量的方法，該方法包括給所述皮膚施用本發(fā)明的組合物。
本發(fā)明的目的包括提供對皮脂腺細胞分泌皮脂的控制、改善對油性的控制和改善膚感、防止發(fā)亮和發(fā)粘，同時也提供抗衰老的益處，導致減少皺紋和老化皮膚出現、改善膚色、治療光至老化皮膚現象、改善皮膚光澤和透明性并更為完美，以及使皮膚總的顯現健康和年輕外觀。
發(fā)明詳述應理解，除了在操作和對比實施例中，或者另行清楚地說明而外，在此說明書中指出反應的物質或條件、物質的物理性質和/或用途等所涉及的量值，均用詞語“約”修飾。除非另行說明，所有的量均為占水包油乳液重量的量。
術語“皮膚”在本文中包括面部、頸部、胸部、背部、手臂、手和頭皮的皮膚。
本發(fā)明的方法和組合物包括支鏈酯RCOOR′，其中R選自(乙酸酯)、苯基(苯甲酸酯)和CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7(亞油酸酯)；而R′是總共含至少6個碳原子，并只含有甲基支鏈的支鏈脂族烴基，條件是如果R′總碳原子數超過6個，則此支鏈酯含有一個以上的甲基。
優(yōu)選R′含有6至20個碳原子，首選10至13個碳原子，以獲得最佳效果。優(yōu)選的酯選自亞油酸酯，這是歸功于它們的上佳性能。
作為所述酯的起始物的醇，可為含有不同鏈長和不同支鏈的醇的混合物。這樣的混合醇適用于本發(fā)明，只要此混合物中占主要地位的醇含有總共至少6個碳原子和甲基支鏈。
本發(fā)明方法中酯的用量為約0.001％至約100％，優(yōu)選約0.1％至20％，首選0.1％至10％。
本發(fā)明范圍內的支鏈酯可商購，例如購自Exxon(商標為Exxate)或者可以按照實施例1的方法合成。
優(yōu)選的本發(fā)明組合物和方法還包括吸油粉末。適宜的吸油粉末的實例包括(但不限于)二氧化硅(優(yōu)選煅制二氧化硅)、滑石和粘土。優(yōu)選的吸油粉是煅制二氧化硅，這歸因于其優(yōu)異的吸油能力。
吸油粉末提供立即生效的皮脂控制作用，但并不能長期緩解皮脂，由于若大量使用會使皮膚發(fā)白。按照本發(fā)明，吸油粉末的存在量可以不大于1％，一般為0.01％至1％，優(yōu)選0.1％至1％，首選0.5％至1％。
本發(fā)明方法和組合物中使用的支鏈酯為液體。因此，即使在不存在載體的情況下本發(fā)明也是有效的。但是，本發(fā)明的組合物一般含有化妝用載體，當該組合物用于皮膚時，所述載體用作支鏈酯的稀釋劑、分散劑或載體，有利于其分布。
此載體可以是含水的、無水的或乳液。優(yōu)選該組合物是含水的或是乳液，特別是油包水或水包油乳液。當存在時，水的含量一般可以為5至99％，優(yōu)選40至90％，最佳為60至90％重量。
除水外，本發(fā)明的組合物中，相對具有揮發(fā)性的溶劑也可以作為載體。最優(yōu)選的揮發(fā)性溶劑為一羥基的C1-C3烷醇。它們包括乙醇、甲醇和異丙醇。一羥基烷醇的量可以為1至70％，優(yōu)選10至50％，最佳為15至40％重量。
潤膚劑物質也可以作為化妝品用載體。它們可以是硅油和合成酯的形式。潤膚劑的量可以為0.1至50％，優(yōu)選1至20％重量。
硅油可以分為揮發(fā)性和非揮發(fā)性兩類。術語“揮發(fā)性”在本文中指在常溫下具有可檢測到的蒸汽壓的那些物質。優(yōu)選揮發(fā)性硅油選自環(huán)狀或線形聚二甲基硅氧烷，其中含有3至9個，優(yōu)選4至5個硅原子。線形揮發(fā)性硅油一般在25℃下粘度小于約5厘沲，而環(huán)狀物質一般粘度小于約10厘沲。用作潤膚物質的非揮發(fā)性硅油包括聚烷基硅氧烷、聚烷基芳基硅氧烷和聚醚硅氧烷共聚物。用于本文中的基本的非揮發(fā)性聚烷基硅氧烷包括，例如聚二甲基硅氧烷，其在25℃下粘度約5至2千5百萬厘沲。用于本發(fā)明組合物中優(yōu)選的非揮發(fā)性潤膚劑為在25℃下粘度為約10至約400厘沲的聚二甲基硅氧烷。
酯潤膚劑為(1)具有10至20個碳原子的脂肪酸的鏈烯基或烷基酯。其實例包括新戊酸異二十烷基酯、異壬酸異壬基酯、肉豆蔻酸油基酯、硬脂酸油基酯和油酸油基酯。
(2)醚-酯，如乙氧基化的脂肪醇的脂肪酸酯。
(3)多元醇酯。乙二醇單和二脂肪酸酯、二甘醇單和二脂肪酸酯、聚乙二醇(200-6000)單和二脂肪酸酯、丙二醇單和二脂肪酸酯、聚丙二醇2000單油酸酯、聚丙二醇2000單硬脂酸酯、乙氧基化的丙二醇單硬脂酸酯、甘油單和二脂肪酸酯、聚甘油聚脂肪酸酯、乙氧基化的甘油單硬脂酸酯、1，3-丁二醇單硬脂酸酯、1，3-丁二醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯、脫水山梨醇脂肪酸酯和聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯是令人滿意的多元醇酯。
(4)蠟酯，如蜂蠟、鯨蠟、肉豆蔻酸十四烷基酯、硬脂酸硬脂基酯和二十二烷酸二十烷基酯。
(5)甾醇酯，其中實例為膽固醇脂肪酸酯。
本發(fā)明的組合物中作為化妝品用載體還可以包括具有10至30個碳原子的脂肪酸。此類實例為壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、異硬脂酸、羥基硬脂酸、油酸、亞油酸、蓖麻酸、二十烷酸、二十二烷酸和芥酸。
在本發(fā)明的組合物中，多元醇型的保濕劑也可以用作化妝品用載體。保濕劑有助于加強潤膚劑的作用，減少污垢，刺激所積累污垢的除去并改善膚感。典型的多元醇包括甘油、聚亞烷基二醇并更優(yōu)選亞烷基多元醇及其衍生物，包括丙二醇、二丙二醇、聚丙二醇、聚乙二醇及其衍生物、山梨醇、羥丙基山梨醇、1，6-己二醇、1，3-丁二醇、1，2，6-己三醇、乙氧基化的甘油、丙氧基化的甘油及其混合物。為了得到最佳效果，保溫劑優(yōu)選丙二醇或透明質酸鈉。保濕劑的量可以占此組合物重量的0.5至30％，優(yōu)選1至15％。
增稠劑也可用作本發(fā)明組合物的化妝品用載體的一部分。典型的增稠劑包括交聯的丙烯酸酯(如Carbopol 982)、疏水性修飾的丙烯酸酯(如Carbopol 1382)、纖維素衍生物和天然膠?？衫玫睦w維素衍生物為羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、乙基纖維素和羥甲基纖維素。適用于本發(fā)明的天然膠包括瓜爾膠、黃原膠、菌核葡聚糖、角叉菜膠、果膠及這些膠的混合形式。增稠劑的量可以為0.0001至5％，通常為0.001至1％，首選0.01至0.5％重量。
總地來說，水、溶劑、硅油、酯、脂肪酸、保濕劑和/或增稠劑一般構成此化妝品用載體其重量占1至99.9％，優(yōu)選80至99％。
油或油性物質可以與乳化劑一起存在，來提供油包水乳液或水包油乳液，這很大程度上依賴于所用乳化劑的平均親水親油平衡值(HLB)。
本發(fā)明的化妝品組合物中也可以存在表面活性劑。表面活性劑的總濃度一般占此組合物重量的0.1至40％，優(yōu)選1至20％，首選1至5％。表面活性劑可選自陰離子、非離子、陽離子和兩性離子型。特別優(yōu)選的非離子型表面活性劑為每摩爾疏水物質與2至100摩爾的環(huán)氧乙烷或環(huán)氧丙烷縮聚的C10-C20脂肪醇或酸疏水物質；與2至20摩爾的環(huán)氧烷縮聚的C2-C10烷基酚；乙二醇的單和二脂肪酸酯；脂肪酸甘油單酯；脫水山梨醇單和二C8-C20脂肪酸酯；嵌段共聚物(環(huán)氧乙烷/環(huán)氧丙烷)；及聚氧乙烯脫水山梨醇及其組合形式。烷基聚糖甙和糖脂族酰胺(例如，甲基葡聚糖酰胺)也是適宜的非離子型表面活性劑。
優(yōu)選的陰離子表面活性劑包括皂、烷基醚硫酸化物和磺酸化物、烷基硫酸化物和磺酸化物、烷基苯磺酸化物、烷基和二烷基磺基琥珀酸化物、C8-C20?；u乙基磺酸化物、?；劝彼峄铩8-C20烷基醚磷酸化物及其組合形式。
本發(fā)明的化妝品組合物中可以存在多種類型的其它活性組分。活性組分定義為除了潤膚劑并除了只改善此組合物物理特性的組分以外的有益于皮膚的試劑。但不限于此類，總的實例還包括其它抗皮脂組分和防曬劑。
優(yōu)選的其它抗皮脂組分是類視色素。術語“類視色素”在本文中包括視黃酸、視黃醇、視黃醛和視黃基酯。
術語“視黃醇”包括視黃醇的下列異構體完全反式-視黃醇、13-順式-視黃醇、11-順式-視黃醇、9-順式-視黃醇、3，4-二脫氫-視黃醇。優(yōu)選的異構體是完全反式-視黃醇、13-順式-視黃醇、3，4-二脫氫-視黃醇、9-順式-視黃醇。首選的是完全反式-視黃醇，這是由于其容易購買到。
適用于本發(fā)明的視黃基酯為視黃醇的C1-C30酯，優(yōu)選C2-C20酯，首選C2、C3和C16酯，這是因為它們更常見。視黃基酯的實例包括(但不限于)棕櫚酸視黃基酯、甲酸視黃基酯、乙酸視黃基酯、丙酸視黃基酯、丁酸視黃基酯、戊酸視黃基酯、異戊酸視黃基酯、己酸視黃基酯、庚酸視黃基酯、辛酸視黃基酯、壬酸視黃基酯、癸酸視黃基酯、十一烷酸視黃基酯、月桂酸視黃基酯、十三烷酸視黃基酯、肉豆蔻酸視黃基酯、十五烷酸視黃基酯、十七烷酸視黃基酯、硬脂酸視黃基酯、異硬脂酸視黃基酯、十九烷酸視黃基酯、二十烷酸視黃基酯、二十二烷酸視黃基酯、亞油酸視黃基酯、油酸視黃基酯、乳酸視黃基酯、羥乙酸視黃基酯、羥基辛酸視黃基酯、羥基月桂酸視黃基酯、酒石酸視黃基酯。
視黃醛衍生物在本發(fā)明組合物中的含量為每克組合物33至330000 IU，優(yōu)選330至16500 IU，首選1650至6600 IU。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選基本上不含礦物油，這是由于本發(fā)明組合物控制皮脂產生的能力在礦物油的存在下會被降低或被消除。
防曬劑包括常用來阻斷紫外線的物質。示例性化合物為PABA衍生物、肉桂酸酯和水楊酸酯。例如，可以使用阿瓦苯酮[avobenzophenone(Parsol 1789)]甲氧基肉桂酸辛基酯和2-羥基-4-甲氧基苯酮(也稱為羥苯甲酮)。甲氧基肉桂酸辛基酯和2-羥基-4-甲氧基苯酮分別以Parsol MCX和Benzophenone-3的商標商購。此組合物中使用的防曬劑的準確量可以根據所需的陽光紫外輻射防護程度而變化。
很多化妝品組合物，特別是含水的，必須防止可能造成危害的微生物的生長。因此，常常需要防腐劑。適宜的防腐劑包括對羥基苯甲酸的烷基酯、乙內酰脲的衍生物、丙酸鹽以及多種季銨化合物。特別優(yōu)選用于本發(fā)明的防腐劑是對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯氧基乙醇和芐醇。防腐劑的用量占此組合物重量的約0.1％至2％。
本發(fā)明的組合物主要作為給人皮膚局部施用的產品，特別是作為控制或防止皮脂分泌過度的試劑。
在使用時，將一定量的此組合物，例如1至100ml涂于皮膚的暴露區(qū)域，且如果需要，再用手掌或手指或者適宜的器具敷開和/或按摩到皮膚中。產品形式和包裝本發(fā)明的美膚組合物可以是任何形式，例如配制為化妝水、凝膠、洗劑、流質乳膏或乳霜。例如，根據組合物的粘度和用戶將來的用法，該組合物可以包裝在適宜的容器中。例如，洗劑或流質乳膏可以裝在瓶中或走珠涂敷器或拋射劑驅動的氣霧劑裝置，或者裝有適于手指操作的泵的容器中。當此組合物是乳霜時，其可以簡單地保存在不變形的瓶或壓擠容器中，例如有蓋子的瓶或管。因此，本發(fā)明還提供了裝有本文中定義的化妝品組合物的密閉容器。
該組合物也可以裝在膠囊中，例如，美國專利5063057描述的那些，將該文獻引入本文作為參考。
下列特定的實施例進一步舉例說明本發(fā)明，但是本發(fā)明不限于此。
實施例1該實施例描述下列異十三烷基酯的合成丁酸酯、壬酸酯、癸酸酯、苯甲酸酯和亞油酸酯。
通過相應酰氯(例如，丁酰氯)和異十三醇(Exxal13)的醇解反應，合成這些酯。
亞油酰氯購自Nu-Chek-Prep，Inc。下列酰氯購自Aldrich苯甲酰氯和丁酰氯。下列酰氯是合成的水楊酰氯、壬酰氯、癸酰氯。
向潔凈的、干燥的250ml圓底燒瓶中，加入1.0當量的酸、100ml的無水二氯甲烷和幾滴吡啶。該燒瓶裝備有攪棒、加液漏斗和氮氣導管。向此加液漏斗中加入溶解于約20ml二氯甲烷的1.05當量的亞硫酰氯。室溫下向此反應混合物中滴加亞硫酰氯溶液。加畢，將此反應混合物加熱至45-50℃，并保持2小時，然后移除熱源，并將此反應冷卻至室溫。減壓除去大部分二氯甲烷和過量的亞硫酰氯。異十三烷基酯的合成向潔凈的、干燥的250ml圓底燒瓶中，加入1.0當量的Exxal13(得自Exxon Chemical Co.)、100ml的無水二氯甲烷和1.0當量的無水吡啶。該燒瓶裝備有攪棒、加液漏斗和氮氣導管。將上步中的酰氯溶液加入到加液漏斗中。室溫下向此反應混合物中滴加亞硫酰氯溶液。加畢，將此反應混合物加熱至45-50℃，并保持2小時，然后移除熱源，并將此反應冷卻至室溫。再將粗品通過柱色譜純化。
異十三烷基苯甲酸酯該產品是苯甲酰氯和異十三烷醇(Exxal13)的醇解反應的結果。將粗品通過柱色譜純化。通過氣相色譜分析純度98％。
異十三烷基丁酸酯該產品是丁酰氯和異十三烷醇(Exxal13)的醇解反應的結果。將粗品通過柱色譜純化。此脂族鏈是很多支鏈異構體的混合物。通過氣相色譜分析純度99％。
異十三烷基亞油酸酯該產品是亞油酰氯和異十三烷醇(Exxal13)的醇解反應的結果。將粗品通過柱色譜純化。通過氣相色譜分析純度98％。
十三烷基壬酸酯該產品是壬酰氯和異十三烷醇(Exxal13)的醇解反應的結果。將粗品通過柱色譜純化。此脂族鏈是很多支鏈異構體的混合物。通過氣相色譜分析純度99％。
實施例2此實施例檢測不同乙酸支鏈酯在體外對皮脂的抑制。
用于這些實施例中的Exxate酯得自Exxon并給出如下商品名 支鏈Exxate600甲基支鏈的1-戊醇的乙酸酯Exxate700Exxal7的乙酸酯，Exxal7是支鏈和直鏈異構體的混合物，約含40％的二甲基戊醇Exxate800Exxal8的乙酸酯，Exxal8是二甲基己醇Exxate900 Exxal9的乙酸酯，Exxal9是二甲基庚醇Exxate1000Exxal10的乙酸酯，Exxal10是三甲基庚醇和二甲基辛醇Exxate1200Exxal12的乙酸酯，Exxal12是三甲基壬醇Exxate1300Exxal13的乙酸酯，Exxal13是四甲基壬醇和三甲基癸醇皮脂腺細胞檢測方法得自成人男性的皮脂腺細胞的次級培養(yǎng)物在48孔或96孔組織培養(yǎng)板(Costar Corp.；Cambridge，Mass)中生長直到融合后三天。皮脂腺細胞生長培養(yǎng)基由添加了14μg/ml牛垂體提取物、0.4μg/ml氫化可的松、5μg/ml胰島素、10ng/ml表皮生長因子、1.2×10-10M霍亂毒素、100單位/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的克隆角質細胞基礎培養(yǎng)基(KBM)組成。所有的培養(yǎng)物在7.5％二氧化碳的存在下，在37℃下培養(yǎng)。每周將培養(yǎng)基更換3次。
在實驗的當天，除去生長培養(yǎng)基并用滅菌的Dulbecco′s改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM；沒有酚紅)將皮脂腺細胞洗滌3次。新鮮DMEM加入到每個樣本(一式三份)中，同時加入1-5微升的溶解于乙醇中的被測試劑。對照中只加入乙醇。將每個板放回到孵育器中，保持20小時，接著加入14C-乙酸緩沖液(最終濃度5mM，56mCi/mmol特異性活性)，將皮脂腺細胞放回到此孵育器中，保持4小時，此后將每個培養(yǎng)物用磷酸緩沖鹽水清洗3次以除去未結合的標記物。收集皮脂腺細胞中保留的放射性標記并用Beckman閃爍計數器計數。用學生t檢驗計算統(tǒng)計學顯著性(p值)。所得結果見表1和2。用已知的皮脂抑制劑酚紅作為陽性對照。表120小時孵育，48孔板
Exxate12中的反應較差是出乎意料的，因為其它Exxate是有活性的；這可能由于由貯存液制備稀釋液時Exxate的稀釋度不對，并提醒再次評價Exxate9、10、12、13。表220小時孵育，48孔板
表1和2的結果顯示甲基支鏈的乙酸酯(全部在本發(fā)明的范圍內)是有效的皮脂抑制劑。除了Exxate600外，所有的酯具有一個以上的甲基支鏈。
對比實施例3用其它支鏈的酯重復實施例2中描述的皮脂檢測方法。肉豆蔻酸異丙基酯得自Sigma Chemical Co.。壬酸異十三烷基酯、丁酸異十三烷基酯和癸酸異十三烷基酯按照實施例1所述合成。所得結果見表3A-3C。酚紅用作陽性對照。表3A20小時孵育，96孔板
表3A結果顯示了用于化妝品組合物中的普通潤膚劑酯(肉豆蔻酸異丙基酯)不是有效的皮脂抑制劑。表3B20小時孵育，48孔板
表3C20小時孵育，48孔板
表3B和3C的結果顯示了壬酸異十三烷基酯、癸酸異十三烷基酯和丁酸異十三烷基酯不是有效的皮脂抑制劑。
對比實施例4用其它酯重復實施例2描述的皮脂檢測方法。所得結果見表4。水楊酸異十三烷基酯(三甲基和四甲基十三烷醇的混合物Exxal13的水楊酸酯)得自Alzo Inc，650 Jernee Mill Road Sayreville，NewJersey 08872并作為內部陽性對照物。直鏈TDS(不帶支鏈的水楊酸十三烷基酯)、甲基TDS(有一個甲基支鏈的十三烷醇的水楊酸酯)和乙基TDS(有一個乙基支鏈的十三烷醇的水楊酸酯)按照如下步驟合成合成水楊酸烷基酯的總方法所用醇如下水楊酸異十三烷基酯(支鏈)Exxal13直鏈TDS1-十三烷醇(Aldrich)乙基TDS3-羥基十三烷醇(Lancaster)甲基TDS2-羥基十三烷醇(Lancaster)步驟1合成水楊酰氯向潔凈的、干燥的三頸圓底燒瓶中加入一當量的水楊酸、50ml干燥的甲苯和幾滴吡啶催化劑。該燒瓶裝備有攪棒、量熱計和加液漏斗。另一加液漏斗中加入存在于幾毫升甲苯中的一當量的亞硫酰氯。在氮氣氛下將反應燒瓶加熱至40℃，然后緩慢加入亞硫酰氯溶液。加畢，立即使反應在40-45℃下進行幾小時或者直到反應混合物均勻。反應完成時，真空除去任何未反應的亞硫酰氯。步驟2合成酯向潔凈的、干燥的三頸圓底燒瓶中加入一當量的醇、一當量的吡啶和50ml干燥的甲苯。該燒瓶裝備有攪棒、量熱計和加液漏斗。另一加液漏斗中加入步驟1所得水楊酰氯溶液。室溫下將此酰氯緩慢加入到此反應瓶中，然后將反應溫度升至50℃并在此溫度下保持6小時。然后，將此混合物冷卻后真空過濾除去吡啶鹽。將此濾液真空濃縮，之后加入到幾毫升的飽和碳酸氫鈉溶液中并攪拌。然后，用乙醚萃取此多相溶液。分離有機層，丙用水萃取3次，之后用硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮得到粗品。
先將此粗品真空蒸餾，之后再通過硅膠色譜純化。產物的性質用氣相色譜、氣相色譜/質譜、200MHz質子NMR和FT-IR證實。表430分鐘孵育，48孔板
表4結果顯示水楊酸酯中只有含多個甲基側鏈的水楊酸異十三烷基酯才能有效地抑制皮脂。
實施例5用其它支鏈酯重復實施例2中描述的皮脂腺細胞檢測方法。所得結果見表5。按照實施例1的方法用Exxal13異十三烷醇作為起始物合成亞油酸異十三烷基酯和苯甲酸異十三烷基酯。所得結果見表5。酚紅用作陽性對照。表520小時孵育，48孔板
從表5中結果可以看出支鏈的苯甲酸酯和亞油酸酯是有效的皮脂抑制劑。當比較表5中結果和表1及2中結果時，可以看出亞油酸酯和苯甲酸酯優(yōu)于乙酸酯，而亞油酸酯是最有效的。
實施例6此實施例檢測作為對不同試驗化合物處理后的反響，由成纖維細胞所產生的前膠原I。
膠原是主要的皮膚蛋白質。隨著年齡增長或光損傷其合成能力降低。膠原的降解或破壞增加了皮膚的拉伸強度，引起皺紋和松馳。以人為實驗對象進行的很多研究已表明，I型膠原隨著光致損傷嚴重性的升高而減少(見Kligman，A.，JAMA，(1969)，210，pp.2377-2380；Lavker，R.，J.Inv Derm.，(1979)，73，79-66；Smith J.等，J.Inv.Derm.，(1962)，39，pp.347-350；及Shuster，S.等，Br.J.Dermatol.，(1975)，93，pp.639-643)；而且已報道了暴曬皮膚中皺紋組織學和膠原水平降低之間的一些聯系。見Chen，S.；Kiss，I.，J.Inv.Derm.，(1992)，98，pp.248-254。通過維A酸局部治療光致損傷的人皮膚顯示I型膠原的恢復，Voorhees及其同事支持了這些發(fā)現。見Christopher，E.等，The New Eng.Jou.of Medicine(1993)，329，pp.530-535。前膠原I是膠原的前體。作為對被測化合物施用的反應，前膠原I產生的增加是膠原水平升高的標志。狹線印跡前膠原I染色法新生人皮膚成纖維細胞購自Clonetics Corp.，San Diego，CA。細胞培養(yǎng)的所有物質購自Life Technologies，NY并用于傳代5-10代。在96孔板的內部48個孔中以密度約7500/孔接種細胞，培養(yǎng)基中含DMEM(Dulbecco′s改良的Eagle培養(yǎng)基，添加了2mM L-谷酰胺、10％胎牛血清和抗生素及抗真菌溶液的高濃度葡萄糖)。然后，細胞生長2天至鋪滿。鋪滿時，除去培養(yǎng)基并用無血清的DMEM洗滌細胞，并向每個孔中加入200μl存在于無血清DMEM中的被測化合物溶液。每個劑量在共6個孔中一式兩份。被測化合物的使用濃度見表1。對照樣中不含被測化合物。24小時后，除去被測化合物溶液或對照溶液，并將存在于無血清DMEM中的被測化合物的100μl溶液再次加入到細胞中。被測化合物的使用濃度見表1。24小時后，除去被測化合物溶液或對照溶液并在4℃下在蛋白酶抑制劑(Sigma的Aprotinin)存在下保存一周，其中抑蛋白酶肽與水的比例1∶200。然后，被測化合物在DMEM中稀釋(約20μl樣本稀釋在200μl DMEM中)。
將一片硝酸纖維素膜和三張濾紙浸在Tris緩沖鹽水(TBS，pH7.3)中。調節(jié)BioRad狹縫印跡儀(BioRad Labs，CA)，將濾紙固定在底部，膜固定在頂部并繃緊。向每個孔中加入100ml TBS。用真空通過膜抽吸這些孔。旋轉被稀釋的被測化合物溶液或對照樣，然后以每孔100μl的量加入并甩干。在此方法中此時被測溶液中的前膠原與膜結合。從此儀器上移出此膜，切掉多余的部分，并將底部右角刻凹痕以便取向。在4℃將此膜置于封閉溶液(在Dulbecco′磷酸緩沖鹽水中含5％奶粉)，放置搖動過夜。然后，再將膜用大鼠抗人前膠原氨基末端的Ab(Chemicon MAB1912)在TBS中的1.5ml溶液室溫下在密閉的袋子中搖動下孵育1.5小時，其中含0.1％BSA(抗體與緩沖液/BSA的比例1∶100)。然后，除去此膜，在5分鐘內，在TBS/0.1％Tween中洗滌3次。然后，再將膜在TBS中的2ml生物素化的抗大鼠過氧化酶軛合Ab(Vector Labs)中，室溫下在密閉袋子中搖動下孵育1.5小時，其中含0.1％BSA(抗體與緩沖液/BSA的比例1∶1000)。
將膜在5分鐘內在TBS/0.1％吐溫中洗滌3次。將3ml PBS與得自Vectastain試劑盒的溶液A和溶液B各自孵育30分鐘。將該膜置于密封袋中的所得溶液中，搖動并保持30分鐘。然后除去該膜并在5分鐘內在TBS/0.1％吐溫中洗滌兩次。然后，用下列溶液給此膜染色
12.5mg 3-氨基9-乙基咔唑(Sigma)3.125(大約)ml DMF(N，N-二甲基甲酰胺，得自Sigma)21.5ml 0.2M NaOAc緩沖液，pH5.212.5μl水將此膜染色到顯色并在10分鐘內用自來水洗滌兩次停止反應。用彩色復印機制備該印跡的透明樣。以Bio-Rad GS-700成像分析光密度計掃描此印跡，并用分子分析軟件確定著色量(OD*mm2)/狹線。以被測化合物處理的細胞與對照細胞光密度計讀數的比例來計算增加的倍數。所得結果見表6A和6B。表6A
TGF-b作為陽性對照從表6A的結果中可以看出本發(fā)明范圍內的、基于較短鏈醇(即少于9個碳原子有甲基側鏈的乙酸酯，在提高成纖維細胞產生膠原能力方面是有效的。表6B
從表6B的結果中看出本發(fā)明范圍內的苯甲酸和亞油酸酯提高了成纖維細胞的膠原產生作用。
實施例7實施例7顯示了新的異醇酯提高糖胺基聚糖合成的效果。
在12孔板中以密度約50000/孔接種新生人皮膚成纖維細胞，培養(yǎng)基中含DMEM(添加了2mM L-谷酰胺、10％胎牛血清和抗生素及抗真菌溶液的高濃度葡萄糖)。然后，細胞生長2天至鋪滿。鋪滿時，用無血清的DMEM漂洗每個孔，且孔中加入存在于750μl無血清DMEM中的被測化合物(一式三份)。24小時后，抽吸出培養(yǎng)基并重復處理步驟。第二個24小時后，收集含溶解的GAGs的培養(yǎng)基，并冷凍以備分析用。
將帶正電荷的Zeta Probe膜浸在滅菌的水中，并置于Dot-Blot儀器(都購自Bio-Rad Labs，Hercules，CA)。向每個孔中加入100μl的水并真空抽吸。解凍后，給此膜施用100μl被測溶液樣本或標準物(得自牛氣管的透明質酸或硫酸軟骨素，Sigma，St.Louis，MO)，并將其以重力式過濾(約1.5-2小時)?，F在GAGs結合到了膜上。將此膜在水中的3％w/v無脂肪酸牛血清白蛋白(Sigma)封閉1小時。制備在3％乙酸中的0.5％w/v阿爾新藍8GX(ICN Biochemicals，Cleveland OH)的染料溶液，pH約2.3。將此膜用蒸餾水洗滌兩次，然后在染料溶液中染色，在旋轉振搖器上處理15分鐘。倒掉染料并將該膜在3％乙酸溶液中脫色兩次，每次15分鐘。將此膜在水中清洗并放置干燥過夜。將此印跡在Bio-Rad GS-700成像分析光密度計上掃描，并用分子分析軟件確定著色量(OD*mm2)/狹線。以被測化合物處理的細胞與對照細胞光密度計讀數的比例來計算與對照樣相比增加的倍數。表7
從表7的結果可以看出苯甲酸酯和亞油酸酯在提高成纖維細胞的糖胺聚糖合成方面是有效的。
實施例8實施例8舉例說明本發(fā)明的外用組合物。這些組合物可以以常規(guī)方式制備。它們適于化妝美容用。特別是這些組合物適于施用于油性、有皺紋的、粗糙的、老化和/或UV致損傷的皮膚，以改善其外觀和膚感，也適用于給健康皮膚施用以防止或延緩其衰老。水包油乳膏
水包油乳膏
油包水乳液
水包油乳液
油包水乳液
應明確，本文中舉例說明和描述的本發(fā)明特定形式僅僅是代表性的。在不背離本說明書公開內容的前提下，在具體實施方案中可以作出包括(但不限于)本說明書中的變化形式。因此，應參照如下的權利要求書確定本發(fā)明的整個范圍。
權利要求
1.護膚化妝品組合物，其中含有(i)約0.001％至約50％的支鏈酯RCOOR′，其中R選自甲基、苯基和CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)；而R′是總共含至少6個碳原子的甲基支化烴基，其條件是如果R′共含有6個以上的碳原子，則該支鏈酯含有一個以上的甲基；及(ii)化妝品用載體。
2.權利要求1所述的組合物，其中還含有吸油粉末。
3.權利要求2的組合物，其中吸油粉末選自二氧化硅、滑石和粘土。
4.前述任一項權利要求所述的組合物，其中還含有類視色素。
5.減輕或防止油性皮膚狀態(tài)的方法，該方法包括給所述皮膚施用前述任一項權利要求所述的組合物。
6.減少或防止皮脂腺細胞分泌皮脂的美容方法，該方法包括施用權利要求1至4任一項所述的組合物。
7.刺激皮膚中成纖維細胞合成膠原和糖胺基聚糖的方法，該方法包括施用含約0.001％至約100％的支鏈酯RCOOR′的組合物，其中R選自苯基和CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7；而R′是總共含至少6個碳原子的甲基支化烴基，其條件是如果R′共含6個以上的碳原子，則所述支鏈酯含有一個以上的甲基。
8.治療或延緩皮膚隨時間老化、光至老化、干燥、有細紋或起皺的方法，該方法包括施用含約0.001％至約100％支鏈酯RCOOR′的組合物，其中R選自苯基和CH3(CH2)4CH＝CHCH2CH＝CH(CH2)7；而R′是共含至少6個碳原子的甲基支化烴基，其條件是如果R′共含6個以上的碳原子，則所述支鏈酯含有一個以上的甲基。
9.刺激皮膚中成纖維細胞合成膠原和糖胺基聚糖的方法，該方法包括施用含約0.001％至約100％支鏈酯RCOOR′的組合物，其中R是甲基，而R′是共含6至8個碳原子的甲基支化烴基。
10.治療或延緩皮膚隨時間老化、光至老化、干燥、有細紋或起皺的方法，該方法包括施用含約0.001％至約100％支鏈酯RCOOR′的組合物，其中R是甲基、而R′是共含6或7個碳原子的甲基支化烴基。
全文摘要
本發(fā)明提供了美容護膚方法和含有甲基支化酯的組合物。這些組合物含有支鏈酯RCOOR′,其中R選自甲基、苯基和CH
文檔編號A61K8/19GK1353599SQ00808221
公開日2002年6月12日 申請日期2000年5月23日 優(yōu)先權日1999年6月3日
發(fā)明者J·S·巴約爾, S·S·哈比夫, L·R·帕蘭克 申請人:荷蘭聯合利華有限公司