專利名稱：紅細胞生成素藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明提供紅細胞生成素的含水藥物制劑，它不含人血清血液產品，以一定量氨基酸和脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基(ethanediyl))衍生物穩(wěn)定。本發(fā)明也提供含水穩(wěn)定、可保藏的紅細胞生成素藥物制劑，它含有抗菌量的甲酚和一定量的氨基酸。
背景技術：
紅細胞生成素(EPO)是腎臟應組織缺氧分泌的一種糖蛋白激素，它刺激骨髓(1)中紅血細胞的生成。EPO的基因已經被克隆和表達在中國倉鼠卵巢細胞(2，3)中。重組的人紅細胞生成素(α型紅細胞生成素，rhEPO)具有與人尿紅細胞生成素相同的氨基酸序列，并且這兩種在功能和免疫學分析上是不能區(qū)別的，盡管在蛋白質糖基化方面存在影響體內功效(4，5)的差異。
迄今在臨床試驗中，rhEPO已經在正常受試者以及具有各種貧血癥狀病人(6，7)中被評價。EPO在正常人類志愿者中誘發(fā)強烈的血液學反應，條件是可獲得足夠的鐵供給，以能夠支持增加的血紅蛋白合成(8)。大量的試驗已經研究了rhEPO在透析維持的慢性腎衰和并非靠透析維持的腎衰的治療上的安全性和有效性。美國證實的其它適應癥包括癌癥化療的繼發(fā)性貧血和與人免疫缺陷病毒感染的齊多夫定治療有關關的貧血。世界范圍內，EPO已經被用于治療與類風濕性關節(jié)炎、早熟、骨髓纖維變性、鐮刀狀細胞性貧血、骨髓移植、燒傷(thermalinjury)、β-地中海貧血有關的貧血，作為手術前自體供血的促進劑，以及用作手術前的輔藥(6，7)。
盡管rhEPO通常能良好耐受，已經觀察到偶然的皮膚疹和蕁麻疹，顯示對這種α型紅細胞生成素制劑的一些成分過敏，有可能為人血清清蛋白。進一步地，盡管血液篩析，當藥劑采用人血液產品配制時仍然存在可傳播劑感染的風險。因此，穩(wěn)定和不含人血液產品如清蛋白的rhEPO藥物制劑是需要的。
美國專利4,992,419介紹了含有5至50g/L尿素、1至50g/L氨基酸、0.05至5g/L表面活性劑并且不含人血清清蛋白的紅細胞生成素凍干制劑。介紹了含水制劑，但是與含有人血清清蛋白的制劑相比顯示有限的穩(wěn)定性，從而商業(yè)上不實際。因此最終的用戶，無論醫(yī)師或病人，在給藥之前必須立即重新配制這樣的制劑。在紅細胞生成素的臨床制劑中凍干制劑不是優(yōu)選的，由于重新配制過程是耗時的，造成這種蛋白質制劑不適當操作的風險，或者可以不適當地配制，并且通常需要某些添加劑例如穩(wěn)定劑以保持藥物的充分活性。因此，通常優(yōu)選紅細胞生成素的含水制劑。
美國專利5,376,632描述了含水、凍干或噴霧干燥的制劑，或者含有β或γ環(huán)糊精并且不含其它的附加穩(wěn)定劑如人血清清蛋白、牛血清清蛋白、卵磷脂、甲基纖維素、聚乙二醇、含硫還原劑、尿素、氨基酸和表面活性劑的紅細胞生成素(4欄，51-54行)。
美國專利5,661,125介紹了含有抗菌防腐劑如苯甲醇、對羥基苯甲酸酯、苯酚類和其混合物的紅細胞生成素含水制劑。制備不含人血清清蛋白的制劑，并檢測有關的相應含人血清清蛋白制劑的穩(wěn)定性。結果表明在不含HSA甲酚(0.5％)和氯甲酚(0.3％)制劑中有明顯紅細胞生成素沉淀，甚至在0℃時(8欄，1-29行)，從而使這些制劑臨床上不能實行。進一步地，作為具有不佳促穩(wěn)定性和更迅速衰退的EPO，介紹了含0.2-0.5％甲酚用量的EPO制劑(6欄，21-25行)。目前商業(yè)上可得到的可保藏的多劑量制劑含有1-％的苯甲醇。
對于靜脈內(iv)和皮下(sc)注射，在1000IU/0.5mL，2000IU/mL，5000IU/mL，和10,000IU/mL(10K)濃度的檸檬酸鹽緩沖劑中制備商業(yè)上可得到的rhEPO制劑。這些制劑是臨床上證明通常引起與檸檬酸鹽-緩沖的制劑(9，10)s.c.給藥有關的病人不適。由于rhEPO主要的臨床使用是由i.v.轉變至s.c.，很明顯，這些制劑的局部耐受性并不是最佳的。在注射之前調節(jié)藥物至室溫，或避免體積超過1ml都不足以防止在注射部位的疼痛。由于發(fā)現(xiàn)疼痛誘發(fā)劑既不是人清蛋白，它在制劑中用作穩(wěn)定劑，也不是低同滲容摩溶液，rhEPO的檸檬酸鹽緩沖劑被提議是候選對象。一種40,000IU/ml.單次劑量、無防腐劑制劑是商業(yè)上可得到的，它含有磷酸鈉，而不是檸檬酸鹽緩沖劑。需要穩(wěn)定、較低劑量的制劑，它含有磷酸鹽緩沖劑而不是欠優(yōu)選的檸檬酸鹽緩沖劑。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了紅細胞生成素的藥物制劑，它包含(a)pH緩沖劑；(b)穩(wěn)定量的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基(ethanediyl))衍生物；(c)穩(wěn)定量的氨基酸；和(d)藥用量的紅細胞生成素；其中這種制劑不含有尿素或人血液產品。優(yōu)選的制劑包含作為穩(wěn)定劑的多山梨醇酯80和甘氨酸的組合。特別優(yōu)選的制劑包含在磷酸鹽緩沖體系內的多山梨醇酯80和甘氨酸的組合作為穩(wěn)定劑。
本發(fā)明也提供了紅細胞生成素的藥物制劑，它包含(a)pH緩沖劑；(b)穩(wěn)定量的人血清清蛋白；(c)穩(wěn)定量的氨基酸；(d)抗菌量的甲酚；和(e)藥用量的紅細胞生成素。優(yōu)選的制劑包含作為穩(wěn)定劑的人清蛋白和甘氨酸的組合。特別優(yōu)選的制劑包含在磷酸鹽緩沖體系內的人血清清蛋白和甘氨酸的組合作為穩(wěn)定劑，并含有濃度大約為0.3％的m-甲酚。
本發(fā)明的制劑顯示類似于目前藥物產品的藥物動力學性質，例如吸收、消化和血清濃度水平類似于目前市售的重組人紅細胞生成素的藥物制劑。進一步地，本發(fā)明的制劑顯示給藥時病人較低的不適，并且在注射部位顯示更短的不適時期。因此，本發(fā)明提供了不含人血清清蛋白或者可保藏的紅細胞生成素藥物制劑，它可以用于紅細胞生成素并且可以被配制以減少病人的不適。
附圖簡要說明

圖1-接受單一150IU/kg s.c.劑量的含和不含0.3％m-甲酚防腐劑的rhEPO的受試者的平均血清紅細胞生成素濃度-時間曲線圖(基線紅細胞生成素水平未修正)。血清紅細胞生成素濃度通過放射免疫分析(RIA)測定。
圖2-接受單一150IU/kg s.c.劑量的含和不含新穩(wěn)定劑的rhEPO(2K)的受試者的平均血清紅細胞生成素濃度-時間曲線圖(基線紅細胞生成素水平未修正)。血清紅細胞生成素濃度通過放射免疫分析(RIA)測定。
圖3-接受單一750IU/kg s.c.劑量的含和不含新穩(wěn)定劑的rhEPO(40K)的受試者的平均血清紅細胞生成素濃度-時間曲線圖(基線紅細胞生成素水平未修正)。血清紅細胞生成素濃度通過RIA測定。
圖4-接受單一150IU/kg s.c.劑量的含檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖劑的rhEPO的受試者的平均血清紅細胞生成素濃度-時間曲線圖(基線紅細胞生成素水平未修正)。血清紅細胞生成素濃度通過放射免疫分析(RIA)測定。
詳細說明本發(fā)明提供了紅細胞生成素穩(wěn)定的含水藥物制劑，這種制劑在緩沖劑中含有氨基酸和脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物穩(wěn)定劑，并且不含人血液產品或尿素。因此，本發(fā)明提供了紅細胞生成素藥物制劑，其包含(a)pH緩沖劑；(b)穩(wěn)定量的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物；(c)穩(wěn)定量的氨基酸；(d)藥用量的紅細胞生成素；和其中該制劑不含有尿素或人血液產品。
本發(fā)明也涉及甲酚防腐的、以人血清清蛋白和氨基酸的組合穩(wěn)定的紅細胞生成素含水制劑。因此，本發(fā)明提供了紅細胞生成素藥物制劑，它包含(a)pH緩沖劑；(b)穩(wěn)定量的人血清清蛋白；(c)穩(wěn)定量的氨基酸；(d)抗菌量的甲酚；和(e)藥用量的紅細胞生成素。
對于這些制劑一項目標是最小化臨床證實的與檸檬酸鹽緩沖的制劑的皮下給藥相關的病人不適。因此，在本發(fā)明的一切制劑中磷酸鹽緩沖體系是特別優(yōu)選的。
本發(fā)明的藥物組合物中的緩沖劑用量主要取決于該制劑使用的具體緩沖劑和希望的pH。對于這種溶液優(yōu)選的pH范圍是大約5-8之間，大約6-7.5是更優(yōu)選的，pH大約6.9是最優(yōu)選的。在這些pH值上，緩沖劑的量通常在大約10mM至大約30mM的范圍。優(yōu)選磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉的緩沖體系。其它適合的保持希望的大約5至大約8的pH范圍的緩沖體系包括但不限于檸檬酸鈉/檸檬酸、醋酸鈉/醋酸，和本領域已知的任何其它的藥學上可接受的pH緩沖劑。
這里可以加入pH-調節(jié)劑例如，但并不局限于鹽酸、檸檬酸、氫氧化鈉，或者其中的任意鹽，檸檬酸鈉尤其可用于此目的用于本發(fā)明制劑的調節(jié)滲透壓劑(tonicity agent)是能夠提供本發(fā)明制劑與人血液等滲的任何試劑。典型適用的調節(jié)滲透壓劑在本領域是公知的，包括但不局限于氯化鈉、甘露糖醇、甘氨酸、葡萄糖和山梨醇。在本發(fā)明制劑中作為調節(jié)滲透壓劑優(yōu)選采用氯化鈉。
脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物，包括但不限于，多山梨醇酯80或多山梨醇酯20是衍生物的例子，它們用作防止紅細胞生成素吸附在盛有含紅細胞生成素制劑的容器表面的穩(wěn)定劑。許多種脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物在本領域是公知的并可用于本發(fā)明的制劑。本發(fā)明制劑中多山梨醇酯20或80的用量范圍，對于每mL含1000-100,000 IU每瓶紅細胞生成素的制劑，大約為0.01至大約1.0mg。本發(fā)明制劑中優(yōu)選使用多山梨醇酯80，更優(yōu)選使用0.3mg/mL用量的多山梨醇酯80。
氨基酸，包括但不局限于甘氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-2-苯基丙氨酸、L-谷氨酸和L-蘇氨酸，用量為0.1g/L至50g/L，優(yōu)選0.25g/L至20g/L。本發(fā)明的制劑中并不優(yōu)選L-丙氨酸和L-精氨酸，由于它們的摻入引起EPO結構的構象變化。甘氨酸是優(yōu)選的氨基酸，優(yōu)選的用量為0.25g/L至20g/L，在含有多山梨醇酯80和無人血清清蛋白的制劑中特別為0.5g/L。甘氨酸是優(yōu)選的氨基酸，優(yōu)選的用量為0.5g/L至50g/L，在含有人血清清蛋白和用甲酚防腐的制劑中特別為2.0g/L。在本發(fā)明的制劑中，或者L-或者D-異構形式的任何氨基酸均適于使用，除了L-精氨酸和L-丙氨酸。
特別優(yōu)選的組合物選自表A或表B列出的那些。
令人驚奇地，發(fā)現(xiàn)采用磷酸鹽緩沖體系、其中含有氨基酸和脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物以及不含尿素或人血液產品的紅細胞生成素含水制劑提供穩(wěn)定的制劑。尤其，含有甘氨酸和多山梨醇酯80的制劑與本領域所述先前的制劑相比提供良好的和未曾預料得到的穩(wěn)定性。
組合物中存在的紅細胞生成素是治療有效量。″紅細胞生成素″應包括那些蛋白質，即具有人紅細胞生成素的生物學活性，以及紅細胞生成素同型物，紅細胞生成素異構體，紅細胞生成素類似物，紅細胞生成素片段，雜種紅細胞生成素蛋白質，上述物質的融合蛋白寡聚物和多聚體、上述物質的同系物，上述物質的糖基化式樣變體，和上述物質的突變型蛋白，不考慮上述的生物學活性，并且更不考慮它們的合成或制備方法，包括但不局限于或由cDNA或者基因組DNA、合成、轉基因和基因激活方法制備的重組物。紅細胞生成素具體例子包括，α型紅細胞生成素(EPREX，ERYPO)，新型紅細胞生成刺激蛋白(NESP)(歐洲專利申請EP640619介紹的一種重組人紅細胞生成素(Epoetin)的超糖基化類似物)，人紅細胞生成素類似物-國際專利申請WO9966054介紹的人血清清蛋白融合蛋白，國際專利申請WO9938890介紹的紅細胞生成素突變體，紅細胞生成素歐米茄，它可以通過美國專利5,688,679介紹的人紅細胞生成素基因的ApaI抑制片段生產，國際專利申請WO9911781介紹的改變了的糖基化人紅細胞生成素，WO9805363或美國專利5,643,575介紹了PEG綴合的紅細胞生成素類似物。國際專利申請WO9905268和WO9412650介紹了為了內源人紅細胞生成素的表達改性的細胞系的具體例子。
紅細胞生成素的作用可通過檢測血細胞比容監(jiān)測，目標血細胞比容范圍是30-33％。通過監(jiān)測血細胞比容可以進行劑量調節(jié)。一次使用小瓶的紅細胞生成素含有2,000，3,000 4,000 10,000，或40,000單位的紅細胞生成素(1IU對應于大約8.4納克重組紅細胞生成素)。由于本發(fā)明的一項實施方案中的制劑可保藏，并且提供多劑量的優(yōu)點，制劑優(yōu)選含有存在于一次使用小瓶中的多個多倍單位數的紅細胞生成素。每瓶含有1,000-100,000個單位或更多的紅細胞生成素的組合物包括在本發(fā)明范圍之內。一般地，預計有效量為大約1至500I.U./kg體重，更優(yōu)選50至300I.U./kg體重，尤其紅細胞生成素sc給藥時。有效量進一步取決于待治療受試者的種類和大小，治療的具體病癥或疾病和其嚴重性，以及給藥途徑。任何情形下使用的劑量應該對宿主無毒。
令人驚奇地發(fā)現(xiàn)紅細胞生成素可配制成含有＜0.5％甲酚和含有人血清清蛋白和氨基酸作為穩(wěn)定劑的可保藏的穩(wěn)定的含水制劑。優(yōu)選的甲酚量為0.2％-0.5％，最優(yōu)選0.3％。甘氨酸是優(yōu)選的氨基酸穩(wěn)定劑。本發(fā)明提供一種甲酚防腐的、磷酸鹽緩沖的制劑，形成的濃度為10,000IU/2.5mL，25,000IU/2.5mL，和40,000IU/2.0mL(40K)。較高單位劑量制劑減小了皮下注射的次數并改善了病人的順應性。
本發(fā)明實施例1的數據表明檸檬酸鹽或磷酸鹽作為緩沖劑的使用和在制劑中m-甲酚的摻入并未引起紅細胞生成素的吸收和消化性能及安全性的降低。因此，可以推斷新型保藏的多劑量紅細胞生成素磷酸鹽-緩沖制劑與目前市售的一次使用的制劑可比擬，并且多劑量紅細胞生成素可以用于當前證實紅細胞生成素可適用的一切適應癥。
藥動學上比得上一次使用的EPREX制劑，這種新制劑因此希望臨床上也是可比擬的。此外，這種磷酸鹽-緩沖的多劑量紅細胞生成素比一次使用的紅細胞生成素小瓶具有潛在的額外的優(yōu)點；一個優(yōu)點是經濟。使用紅細胞生成素治療貧血或自體血液預沉積(predeposit)需要激素重復給藥，每4周一次，每2周一次，每周一次，每周兩次，或每周三次。為一次使用設計，必須棄去任何不用部分的一次使用的紅細胞生成素；然而，通常采用適當大小的可保藏的多劑量紅細胞生成素，棄去的紅細胞生成素量會最小化。此外，本發(fā)明可保藏制劑的殺菌性能使得其更適于潛在的自我給藥，并適于在公共機構治療許多病人，在保健費用上轉化成顯著的節(jié)省。多劑量紅細胞生成素小瓶通過最大限度地減小病人/保健承辦人(provider)必須采用高劑量體積的一次使用的小瓶和安瓿的數量，在藥物給藥上也提供額外的方便。較高濃度(25,000IU/2.5mL和40,000IU/2.0mL)的多劑量紅細胞生成素也可最小化注射體積，尤其對于那些需要較高劑量的適應癥。多劑量紅細胞生成素也可允許單一小瓶用于劑量給藥。例如，對于自體供血方案的建議劑量是600IU/kg，每周(7)兩次。對于70kg病人，建議給藥方案是大約40K，每周兩次。在這樣的情形下，單個40K小瓶可以用于一次藥物給藥。
下列的實施例說明本發(fā)明，然而并未限制它們。
實施例1在實施例1說明的研究中選擇10,000IU濃度的制劑，因為這種濃度提供合理的，又最大建議的大約1mL的sc注射體積。通過最小化注射體積，較高濃度的多劑量紅細胞生成素可能允許減少sc注射部位的數量，它明顯有益于改善病人順應性。
目的為了比較在磷酸鹽緩沖劑中配制的并含有0.3％m-甲酚防腐劑的重組人紅細胞生成素(α型紅細胞生成素，rhEPO)(10,000IU/mL)與商業(yè)上可得到的檸檬酸鹽-緩沖的rhEPO制劑(無防腐劑)皮下給藥的安全性和藥物動力學。
病人和方法病人20-38歲之間(平均年齡26.9歲)、體重在60.8-87.4kg之間(平均體重72.3kg)十八名健康志愿者加入并完成此項研究。組I受試者的平均年齡(28.1歲)比組II受試者的平均年齡(25.8歲)略大，盡管并不希望這種差異影響研究結果。加入本研究的受試者血液學和血清化學上無臨床上顯著異常的檢驗值。它們具有陰性尿毒理學篩選、HIV篩選和乙型肝炎表面抗原。它們不具有以下任何跡象高血壓(例如，心舒壓≥95mmHg)；任何原發(fā)性血液疾病史；明顯的肝臟、腎臟、心血管、胃腸、泌尿生殖器、代謝、神經病學疾病史；貧血或癲癇發(fā)作疾病史；已知對源自哺乳動物產品或人血清清蛋白敏感；習慣和過度飲用含咖啡因飲料；參與任何其它的臨床試驗或在研究登記的30天之內輸血或獻血；在研究登記的3個月之內服用過rhEPO；在研究登記的七天之內患??；并且研究登記的14天之內在研究前的體格檢查或臨床實驗室評估上具有顯著異常。所有受試者適于安全性評價，并且按計劃收集用于藥動學分析的所有血液標本。所有研究在公共機構倫理學委員會的許可和受試者同意下進行。
研究設計在健康男性志愿者中這是階段I，單個中心，開放標簽的，隨機的，兩期交叉研究。十八名受試者隨機分配至兩個治療序列組的一組中(9名受試者/組)。在兩個獨立的給藥期內，如大丸劑在大腿上部s.c.注射給予RhEPO。每個給藥期通過14-天的消除期分開。對于兩個給藥期的每一個，受試者在給藥之前至少12小時和給藥之后72小時限制在研究中心，但是給藥期之間不必。表1總結了給藥方案。
表1.給藥方案和研究設計組 N時期1 消除期 時期2I 9 150IU/kg含m-甲酚防腐劑14天150IU/kg無m-甲酚防腐劑的rhEPO，s.c.一次給藥 的rhEPO，s.c.一次給藥II 9 150IU/kg無m-甲酚防腐劑的 14天150IU/kg含m-甲酚防腐劑rhEPO，s.c.一次給藥 的rhEPO，s.c.一次給藥在這項研究中采用兩種EPO制劑。α型紅細胞生成素(市售為EPREX)，在檸檬酸緩沖劑中含有rhEPO 10,000IU/mL。含防腐劑的rhEPO制劑在含m-甲酚防腐劑的磷酸鹽緩沖劑中含有rhEPO25,000IU/2.5mL。
血液取樣在EPO給藥之前和之后通過直接靜脈穿刺術取得一連串血液。為了檢測血清紅細胞生成素濃度的靜脈血液樣品(5mL)在給藥之前的～30、20和10分鐘(3個基線樣品)和給藥之后大約下列時間取樣30分鐘和1，2，5，8，12，15，18，24，30，36，48，60和72小時。每個血清樣品分成兩個等分試樣。所有血清樣品在-20℃貯存。血清樣品裝在干冰上。在第1天、第4天早上的開始給藥之前，第16天和第19天早上給藥之前，立即進行快速臨床實驗室檢驗(血液學、血清化學和尿分析)。
生物分析法采用一種放射免疫分析(RIA)試劑盒法(Diagnostic SystemsLaboratory[DSL]，Webster TX)測量血清紅細胞生成素的濃度。商業(yè)上可得到的RIA是一種雙抗體，競爭性方法采用抗人尿紅細胞生成素的兔多克隆抗血清作為原始抗體，并且一種125I-標記的人尿紅細胞生成素作為示蹤物。α型紅細胞生成素代替DSL試劑盒提供的尿紅細胞生成素，在標準和定性控制樣品中。此分析中采用的標準濃度是7.8，15.6，31.3，50，62.5，100和125mIU/mL。靈敏度，定義為給予可接受精確度的最低標準的平均修合(back-fit)值，是8.6mIU/mL，分析范圍經定性控制稀釋擴展至2000mIU/mL。
安全性檢測在每次給藥(第1天和16天)之前，和每次給藥后的6，24，48，和72小時，立即記錄生命特征。安全性檢測基于不良反應的發(fā)生和種類，以及根據基線的臨床實驗室檢驗的變化。此外，評價研究前的生命特征(包括血壓)測量的變化和體格檢查結果。
數據分析對于給藥前基線紅細胞生成素濃度，通過從每個給藥后值減去平均基線紅細胞生成素濃度來校正給藥后的血清濃度值，其中平均基線紅細胞生成素濃度由平均給藥之前30、20和10分鐘收集的3個樣品的紅細胞生成素水平的平均來測定。給藥前的血清紅細胞生成素濃度并不包括在平均值計算結果之內，如果它們低于分析的量化(quantification)水平。通過由基線紅細胞生成素濃度校正的血清濃度數據，測定藥動學參數。
藥動學參數通過模型獨立的方法基于采用BIOAVL軟件8.0版的Digital Equipment Corporation VAX 8600計算機系統(tǒng)(ScientificComputer Systems，RWJPRI)計算。測定下列動藥學參數峰值血清濃度(Cmax)；到達峰值血清濃度的時間(tmax)；借助于線性梯形法則計算的由時間0至最后取血時間的濃度-時間曲線的面積(AUC)(AUC0- 72)；和由0.693/消除速率常數計算的末端消除半衰期(t1/2)。通過對數-線性濃度-時間圖的末端線性區(qū)的連續(xù)數據點的線性回歸估算消除率常數。計算每次治療的藥動學參數的平均、標準偏差(SD)，和變異系數(CV)。計算參數平均值(可保藏的制劑/不可保藏的制劑)的比例。
結果安全性結果不良結果的發(fā)生率在治療組中是同樣地分布(39％，無防腐劑的rhEPO；33％，含防腐劑的rhEPO)?；€或研究前臨床實驗室檢驗或血壓無臨床上顯著的變化，并且研究前體格檢查結果和生命特征測量上無顯著變化。有趣的是治療后第4天平均總膽紅素下降至基線值的幾乎一半。然而，這值的降低在兩個治療組中相似，并且平均總膽紅素水平保持在正常范圍。其它肝功能(堿性磷酸酶，SGOT，SGPT，LDH)檢測上的類似變化并不明顯。因而，兩組治療組的安全性曲線相似。
藥動學結果在18名受試者中，接受含和不含m-甲酚防腐劑的單一150IU/kgs.c.劑量rhEPO給藥之后，平均血清紅細胞生成素濃度-時間曲線(未校正基線紅細胞生成素水平)在每個檢測時間點是可比擬的(圖1)。所有受試者具有在正常生理學范圍內的給藥前基線紅細胞生成素濃度(＜8.6至22mIU/mL)。
由給藥前平均基線紅細胞生成素濃度校正的血清數據測定藥動學參數(表2)。對于含防腐劑的rhEPO，Cmax范圍在低值85mIU/mL至高值558mIU/mL(平均198±123mIU/mL)之間，對于不含防腐劑的rhEPO，范圍在61mIU/mL至高值601mIU/mL(平均226±138mIU/mL)之間。明顯的，與其它的16名受試者(即，＜400mIU/mL)相比，兩名受試者異乎尋常地具有高的Cmax值(即，對于含防腐劑的rhEPO的受試者111[558mIU/mL]和對于不含防腐劑的rhEPO的受試者118[601mIU/mL])。當計算不包括這兩項值的Cmax時，含和不含防腐劑的rhEPO制劑的平均Cmax值是更相似的(分別為177±89和196±102mIU/mL)。
對于含防腐劑的rhEPO制劑，平均紅細胞生成素AUC(0-72hr)是5,754±2,284mIU.h/mL，范圍從2,973至11,185mIU·h/mL。同樣地，不含防腐劑的rhEPO制劑平均紅細胞生成素AUC(0-72hr)是6,521±2,769mIU.h/mL，范圍從3,096至14,235mIU.h/mL(表2)。顯著的，與其它的16名受試者(即＜10,000mIU/mL)相比，兩名受試者具有異常的高AUC(0-72hr)值(即，含防腐劑的rhEPO的受試者111[11,185mIU.h/mL]，以及不含防腐劑的rhEPO的受試者118[14,235mIU.h/mL])。當計算不包括這兩項值的AUC(0-72hr)時，含和不含防腐劑的rhEPO制劑的平均AUC(0-72hr)值更相似(分別為5,460±1960和6,000±2,100mIU/mL)。
含和不含防腐劑的rhEPO的平均tmax是類似的(分別為12±5和13±5 h)。兩種rhEPO制劑的tmax范圍相似(8-24h)。對于含和不含防腐劑的rhEPO制劑，末端的半衰期值相似(分別為20.2±8.1和19.8±6.6h)。
在此研究的兩部分(-20h)觀測的末端半衰期值類似于文獻(11，12)報道過的sc注射之后的那些。然而，這些半衰期值更長于以前觀測的iv給藥的半衰期(～5h)(11-14)。如果注射部位的吸收速率，而不是消除速率，是限速步驟，這些更長的半衰期不是預料外的。
表2.150IU/kg含和不含0.3％m-甲酚防腐劑的rhEPO s.c.一次給藥之后的平均±SD(％CV)藥動學參數參數含0.3％m-甲酚的 不含0.3％m-甲酚的比率arhEPO rhEPOCmax(MiU/mL)198±123 226±138 0.88(62.1％) (61.1％)tmax(hr)12±5 13±5 0.92(41.1％) (35.7％)AUC(0-72)(IU·h/mL) 5.75±2.28 6.52±2.770.88(39.7％) (42.5％)t％(h) 20.2±8.119.8±6.61.02(40.2％) (33.2％)a參數比率，含m-甲酚的rhEPO/不含m-甲酚的rhEPO盡管本研究在健康男性受試者中進行，在其它病人群體中可預計類似的吸收特征和安全曲線圖；例如具有癌癥或慢性腎衰的男性或女性病人、小兒腎衰病人、自體預沉積方案的病人或者計劃選擇手術的病人。
最后，皮下給予一次劑量的含或不含0.3％m-甲酚防腐劑的rhEPO(150IU/kg)對于健康男性受試者是安全和良好耐受的?；诓涣挤磻谋容^發(fā)生率，臨床實驗室數值、生命特征和體格檢查結果，用和不用防腐劑配制的rhEPO安全曲線是等同價的。對于病人和保健承辦人，建議的多種濃度的新型多劑量EPREX可能提供大量的臨床應用。
實施例2用或不用新穩(wěn)定劑配制的重組人紅細胞生成素的兩種制劑在一次皮下給予健康受試者之后的比較安全性、耐受性和藥動學目的比較兩種濃度(2,000[目前制備的最低的]和40,000IU/mL[目前制備的最高的])的以新穩(wěn)定劑(甘氨酸和多山梨醇酯80)配制的磷酸鹽緩沖的重組人紅細胞生成素(EPREX，α型紅細胞生成素，rhEPO)與商業(yè)上可得到的采用人血清清蛋白(HSA)作為穩(wěn)定劑的EPREX制劑的安全性、耐受性和藥動學。
患者和方法患者年齡在18-35歲(平均年齡21.9歲)之間、體重在57.2-92.3kg(平均體重74.3kg)之間的24名志愿者參加第一項研究。在第一項研究的兩組治療序列組的平均年齡非常接近(21.8和22.0歲)，24名受試者中的23名完成了這項研究。一名受試者完成了第一給藥期的所有評估但是決定不進行第二給藥期。這名僅接受不含新穩(wěn)定劑的rhEPO的受試者的安全性和耐受性數據，包括在安全性數據中。然而，這名受試者的血清EPO濃度數據不包括在藥動學分析中。
又一組年齡在18-40歲(平均年齡23.8歲)之間并且體重在62.2-93.4kg(平均體重73.1kg)之間的24名男性志愿者加入并完成了第二項研究。兩組治療序列組的平均年齡非常接近(24.5和23.1歲)。
所有加入這兩項研究的受試者的研究前的血紅蛋白不超過16.0g/dL；血液學或血清化學不具有臨床上顯著的異常實驗室數據；具有陰性的尿毒理學篩選，HIV篩選，乙型肝炎表面抗原和丙型肝炎抗體。受試者無高血壓癥狀(例如，坐位心舒壓＞95mmHg)；無任何原發(fā)性血液疾病史；無明顯的肝臟、腎臟、心血管、胃腸、泌尿生殖器、代謝、或神經病學疾病史；無貧血或癲癇發(fā)作疾病史；受試者對源自哺乳動物產品或HSA不敏感；不習慣和過度飲用含咖啡因飲料；非嚴重吸煙者(＞10支香煙/天)；未參與任何其它的臨床試驗或在研究登記的90天之內輸血或獻血；在研究登記的3個月之內未服用過rhEPO。所有受試者適于安全性評價，并且按計劃收集用于藥動學分析的所有血液標本。所有研究在公共機構倫理學委員會的許可和患者同意下進行。
研究設計兩項研究在健康男性志愿者中是階段I，單一中心，雙盲，隨機，兩期交叉研究。每一項研究中，24名受試者隨機分配至兩組治療序列組中的一組(12名受試者/組)。在兩個獨立的給藥期內如大丸劑在大腿上部s.c.注射給予EPO。對于兩個給藥期的每一個，受試者在給藥之前12小時和給藥之后至少36小時限制在研究中心。為了必需的評估和取血，在限制期之外受試者返回研究中心。每個給藥期通過28天的消除期隔開。給藥期之間不必限制受試者(3-29天)。表3總結了給藥方案。
表3.給藥方案和研究設計組 N 1期(第1天) 消除期 2期(第30天)I 12 150IU/kg無新穩(wěn)定劑的 28天150IU/kg含新穩(wěn)定劑的rhEPO(2,000IU/mL)s. rhEPO(2,000IU/mL)s.
c.一次給藥c.一次給藥II 12 150IU/kg含新穩(wěn)定劑的 28天150IU/kg無新穩(wěn)定劑的rhEPO(2,000IU/mL)s. rhEPO(2,000IU/mL)s.
c.一次給藥c.一次給藥III 12 750IU/kg無新穩(wěn)定劑的 28天750IU/kg含新穩(wěn)定劑的rhEPO(40,000IU/mL)s. rhEPO(40,000IU/mL)s.
c.一次給藥c.一次給藥Iv 12 750IU/kg含新穩(wěn)定劑的 28天750IU/kg無新穩(wěn)定劑的rhEPO(40,000IU/mL)s. rhEPO(40,000IU/mL)s.
c.一次給藥c.一次給藥在每項研究中采用兩種EPO制劑。在第一項研究中采用2,000IU/mL(2K)濃度、含HSA作穩(wěn)定劑的EPO和2K濃度的含甘氨酸和多山梨醇酯80作為新穩(wěn)定劑的磷酸鹽緩沖的rhEPO新制劑。在第二項研究中采用40,000IU/mL(40K)濃度、含HSA作為穩(wěn)定劑的EPO和40K濃度的含新穩(wěn)定劑的磷酸鹽緩沖的rhEPO新制劑。
血液取樣通過直接靜脈穿刺術在EPO給藥之前或之后采集一連串血液；不采用肝素固定(lock)。為了檢測血清紅細胞生成素濃度的靜脈血液樣品(5mL)在給藥之前的～30、20和10分鐘(3個基線樣品)和給藥之后大約下列時間取樣0.5，1，2，5，8，12，15，18，24，30，36，48，60和72小時(所有組)。第二項研究的受試者在96，120，144和168小時進行額外的血液樣品取樣。每個血清樣品分成兩個等分試樣。所有血清樣品在-20℃貯存。血清樣品裝在干冰上。在第1天、第4天早上的開始給藥之前，第30天和第33天早上給藥之前，立即進行快速實驗室檢驗(血液學、血清化學和尿分析)。
生物分析法在LabCorp進行血清紅細胞生成素水平樣品分析。采用一種放射免疫分析(RIA)試劑盒法(Diagnostic Systems Laboratory(DSL)，Webster，TX制造)測量血清紅細胞生成素的濃度。商業(yè)上可得到的RIA是一種雙抗體、競爭性方法，它采用抗人尿紅細胞生成素的兔多克隆抗血清作為原始抗體，并且一種125I-標記的人尿紅細胞生成素作為示蹤物。通過在標準和定性控制樣品中α型紅細胞生成素代替尿紅細胞生成素進行DSL試劑盒的改性。此分析中采用的標準濃度是7.8，15.6，31.3，50，62.5，100和125mIU/mL。靈敏度，定義為給予可接受精確度的最低標準的平均修合(back-fit)值，是7.8mIU/mL，分析范圍經定性控制稀釋擴展至5,000mIU/mL。
安全性檢測在每次給藥(第1天和30天)之前，和每次給藥后的6，24，30，36，48，60和72小時，立即記錄生命特征。安全性檢測基于不良反應的發(fā)生和種類，以及根據基線的臨床實驗室檢驗的變化(直至給藥后72小時)。此外，評價研究前的生命特征(包括血壓)測量的變化和體格檢查結果。
耐受性檢測評定注射部位耐受性的試驗在每次注射給藥后45分鐘(第1和30天)給藥。每次給藥分成3，4或5次注射，評定最疼痛的注射部位。有兩種疼痛尺度由10cm未分等級的水平線組成的視覺模擬尺度(VAS)，和口述描述尺度(VDS)；由五個垂直放置的毗連說明的箱子組成。VAS尺度的端點范圍從″不疼″至″我能想像出的最壞的″，VDS尺度的端點范圍從″不疼″至″非常嚴重的疼痛″。然后詢問受試者疼痛的持續(xù)時間。如果疼痛持續(xù)超過45分鐘，耐受性試驗以小時計的間隔進行直至恢復正常。
數據分析對于給藥前基線紅細胞生成素濃度，通過從每個給藥后值減去平均基線紅細胞生成素濃度來校正給藥后的血清濃度值，其中平均基線紅細胞生成素濃度由平均給藥之前大約30、20和10分鐘收集的3個樣品的紅細胞生成素水平測定。給藥前的血清紅細胞生成素濃度并不包括在平均值計算結果之內，如果它們低于分析的量化水平。通過由基線紅細胞生成素濃度校正的血清濃度數據，測定藥動學參數。
藥動學參數通過采用WinNonlin軟件1.1版(ScientificConsulting，Inc.)的模型獨立的方法計算。測定下列藥動學參數峰值血清濃度(Cmax)；到達峰值血清濃度的時間(tmax)；借助于線性梯形法則計算的由時間0至最后取血時間的濃度-時間曲線的面積(AUC)(AUC(0-72)[組I和II]和(AUC(0-168))[組III和IV]；和由0.693/消除速率常數計算的末端消除半衰期(t1/2)。通過對數-線性濃度-時間圖的末端線性區(qū)的連續(xù)數據點的線性回歸估算消除率常數。在回歸中采用最小的三個數據點。對于相關系數小于0.975的那些，相應的t1/2值EPO中并未報道(EPOrted)。計算每次治療的藥動學參數的平均、標準偏差(SD)，和變異系數(CV)。計算藥動學參數平均值(含新穩(wěn)定劑的rhEPO/不含新穩(wěn)定劑的rhEPO)的比例。
對原始和對數-轉換的生物利用度參數、AUC進行統(tǒng)計學分析。方差模型分析擬合到原始AUC數據和對數-轉換的AUC數據作為從屬的變量，而歸因于治療序列組的效果、序列組內嵌套的受試者、治療和周期作為預示變量。治療序列組效果試驗通過采用歸因于序列組內嵌套受試者的作為誤差項的均方在10％水平進行。周期作用采用殘留誤差項在5％水平試驗。采用以上模型的誤差均方以評估受試者內變異性。采用評估過的以上模型的最小二乘方和受試者內變異性，以便對該比例的含新穩(wěn)定劑的EPREX平均值/含HSA的EPREX平均值構建90％置信區(qū)間。以先前研究獲得的40％CV為基準，24名受試者的樣本大小對于評估90％置信度的真值在±20％內的比例是足夠的。分別報道原始和轉換的Cmax、tmax和t1/2。
作為無正交(planned)的統(tǒng)計學分析，三個局部耐受性參數借助于交叉試驗方法(11)分析。在能夠進行統(tǒng)計學試驗之前，VAS值和疼痛持續(xù)時間值轉換至標準化。采用SAS之內的Proc glm對已轉換的VAS和疼痛持續(xù)時間值進行交叉分析。研究方案指定了28-天消除期以消除給藥期之間的轉入(carry-over)的可能性。因此，計算的結果基于標準交叉模型，不具有轉入效應。以VDS評估的疼痛結果借助于Wilcoxon-Mann-Whitney秩和(rank sum)檢驗，按照Koch等人介紹的對交叉試驗的方法分析(12)。簡言之，這種方法包括排列試驗中所有受試者的時期差異，接著對于兩組序列組之間的差異采用Wilcoxon-Mann-Whitney檢驗。
結果安全性結果不良反應的總發(fā)生率均勻地分布在所有治療組中。對于2K濃度發(fā)生率是63％(無新穩(wěn)定劑的rhEPO)和61％(含新穩(wěn)定劑的rhEPO)并且對于40K濃度是54％(無新穩(wěn)定劑的rhEPO)和46％(含新穩(wěn)定劑的rhEPO)。所有不良反應是短暫的并且可無需干預解決，除了對乙酰氨基酚之外，由于溫和的頭痛或溫和的流行性感冒狀綜合癥它被給予五名受試者(三名接受2KrhEPO，兩名接受40KrhEPO)。所有組中報道EPO(EPOrted)最頻繁的不良反應是頭痛。
被分類為可能涉及到接受40K濃度rhEPO受試者的研究藥物的不良反應包括肌膚甲錯(n＝4)，頭痛(n＝2)，肌痛(n＝1)，和疲勞(n＝1)。在接受2K濃度rhEPO的受試者中，可能涉及到研究藥物的不良反應包括頭痛(n＝2)和疲勞(n＝2)。四例報道過的EPO(EPOrts)皮疹均發(fā)生在含新穩(wěn)定劑的rhEPO給藥后三和八天之間；所有反應都是溫和的并且在兩至三天之內得到解決。除了四例報道的皮疹之外，在這種類型和發(fā)生率的不良反應中，以任何一種制劑對于兩種rhEPO濃度，未注意到臨床上顯著的差異。研究藥物給藥后，以任何一種制劑對于兩種rhEPO濃度，頭四天內在臨床實驗室檢驗、血壓、體格檢查結果和生命特征測定方面無臨床上顯著變化。在所有治療組中，與基線相比在第4天觀察到網狀細胞略微升高。伴隨地，在所有組中，與基線相比在第4天觀察到淋巴細胞略微下降。所有治療組從基線至第4天在平均總膽紅素上有顯著降低。在研究的頭四天觀察到血清化學參數上較小的變化；然而，沒有一個被認為是臨床顯著的。因而，所有四個治療組的安全性曲線圖類似。
耐受性結果150IU/kg含和不含新穩(wěn)定劑的rhEPO(2K)s.c.一次給藥之后的平均VAS值不存在顯著差異(p＝0.608)。同樣地，750IU/kg含和不含新穩(wěn)定劑的rhEPO(40K)s.c.一次給藥之后的平均VAS值不存在顯著差異(p＝0.402)。當通過Wilcoxon氏秩和檢驗評估VDS疼痛嚴重性時，兩種制劑之間對于組I和組II的受試者不存在顯著性差異(p＝0.610)，對于組III和IV的受試者也不存在(p＝0.581)。
對于所有研究藥物給藥的總的平均疼痛持續(xù)期間，組I和II受試者是1.01分鐘，組III和IV受試者是3.03分鐘。對于組I和II受試者，一般報道疼痛持續(xù)期間持續(xù)3分鐘或更少，對于組III和IV受試者是2分鐘或更少。疼痛持續(xù)期間的結果與對其它耐受性參數已獲得的一致。注射后接受含和不含新穩(wěn)定劑的EPREX的組I和II(p＝0.159)和組III和IV(p＝0.951)受試者之間，未觀察到在疼痛持久性上有統(tǒng)計學上的顯著性差異。
接受兩種不同濃度的α型紅細胞生成法之間的疼痛對照啟示在組I和II中研究藥物(2K rhEPO)所有給藥之后報道有疼痛。相反地，報道在組III和組IV受試者(40K rhEPO)s.c.給藥(50％)48名中24名根本無疼痛。此外，一次150IU/kg給藥劑量的rhEPO(2K)之后的平均疼痛值(VAS，VDS)大于一次750IU/kg給藥劑量的rhEPO(40K)后的值。然而，報道一次150IU/kg給藥劑量的rhEPO(2K)之后比一次750IU/kg給藥劑量的rhEPO(40K)之后的疼痛發(fā)生率更高以及有更高的平均疼痛值。這可能是因為在組I和II中為了獲得需要的劑量，每次研究藥物給藥時多次注射是必需的，這歸因于與組III和IV中使用的制劑(40K)相比，此處為弱制劑(2K)。還應注意的是，組I和II受試者給藥使用的針比組III和IV受試者使用的更狹窄和更易曲，這使得s.c.注射給藥更困難。最后，組III和IV(40K)的平均疼痛持續(xù)期間比組I和II(2K)的更長，但是這可能歸因于接受40K強度rhEPO的兩名個體在兩種治療之后，與所有治療組中的所有受試者相比具有更長的持久疼痛。
藥動學結果接受含和不含新穩(wěn)定劑的、接受或者150IU/kg rhEPO(組I和II)s.c.一次給藥或者750IU/kg rhEPO(組III和IV)s.c.一次給藥之后，所有受試者的平均血清紅細胞生成素濃度-時間曲線如分別圖2和3所示(未校正基線紅細胞生成素濃度)。所有受試者(n＝48)具有在正常生理學范圍內(＜7.8至32mIU/mL)的給藥前基線紅細胞生成素濃度。在含和不含新穩(wěn)定劑的150IU/kg rhEPO(2K)s.c.一次給藥之后，第4天的平均血清紅細胞生成素水平(分別為36±11和33±11mIU/mL)接近給藥前內源性紅細胞生成素的平均水平(分別為16±6和16±7mIU/mL)。類似地，在含和不含新穩(wěn)定劑的750IU/kgrhEPO(40K)s.c.一次給藥之后，第7天的平均血清紅細胞生成素水平(分別為26±9和23±7)也接近給藥前內源性紅細胞生成素的平均水平。
對給藥前平均基線紅細胞生成素濃度校正的血清數據測定藥動學參數。在組I和II中，對于含新穩(wěn)定劑的、150IU/kg rhEPO(2K)s.c.一次給藥之后，Cmax范圍在低值86.6mIU/mL至高值681mIU/mL(平均222±128mIU/mL)之間，而對于不含新穩(wěn)定劑的rhEPO為119mIU/mL至高值377mIU/mL(平均226±79mIU/mL)(表4)。一名接受含新穩(wěn)定劑的150IU/kg rhEPO(2k)一次給藥劑量的受試者具有異常高的Cmax值，一名在同樣組內的受試者具有異常低的Cmax值。并不知曉這些異常的Cmax值的原因。在組III和IV中，含新穩(wěn)定劑的rhEPO(40K)，750IU/kg s.c.一次給藥之后，Cmax值范圍在低值1194mIU/mL至高值4334mIU/mL(平均2978±808mIU/mL，而對于不含新穩(wěn)定劑的rhEPO為1892mIU/mL至高值3997mIU/mL(平勻3065±705mIU/mL)(表5)。對于2K和40K濃度的、含和不含新穩(wěn)定劑的rhEPO制劑，Cmax之間無統(tǒng)計學上顯著性差異(p＜0.05)。
在組I和II，150IU/kg含新穩(wěn)定劑的rhEPO(2K)s.c.一次給藥之后，AUC(0-72)從低值3238至高值11,318(平均6647±2488mIU.h/mL)。類似地，150IU/kg不含新穩(wěn)定劑的rhEPO(2K)s.c.一次給藥之后，AUC(0-72)從低值4234至高值10,968(平均6983±1855mIU.h/mL)(表4)。組III和IV中，750IU/kg含新穩(wěn)定劑的rhEPO(40K)s.c.一次給藥之后，AUC(0-168)從低值48,347至高值136,290(平均102,768±21,500mIU.h/mL)。類似地，750IU/kg不含新穩(wěn)定劑的rhEPO(40K)s.c.一次給藥之后，AUC(0-168)從低值69,537至高值136,689(平均104,897±15,781mIU.h/mL)(表5)。對于2K和40K濃度的、含和不含新穩(wěn)定劑的rhEPO制劑，Cmax之間無統(tǒng)計學上顯著性差異(p＜0.05)。明顯的，含新穩(wěn)定劑的rhEPO(40K)與不含新穩(wěn)定劑的rhEPO(40K)之間，治療序列作用統(tǒng)計學上是顯著的。
含和不含新穩(wěn)定劑的150IU/kg rhEPO(2K)s.c.一次給藥之后，平均tmax相似(分別為17.4±7.3和15.4±7.5hr)(表4)。同樣地，含和不含新穩(wěn)定劑的750IU/kg rhEPO(40K)s.c.一次給藥之后，平均tmax分別為16.7±6.8和16.6±4.8hr(表5)。對于兩種2KrhEPO制劑的tmax范圍是8-30小時。對于40,000IU/mL rhEPO濃度，含新穩(wěn)定劑的制劑的tmax范圍為8-36小時，不含新穩(wěn)定劑的制劑tmax范圍為12-30小時。
盡管組I和II中僅僅小百分比的受試者報道了末端半衰期值，含和不含防腐劑的150IU/kg rhEPO(2K)s.c.一次給藥之后所得的值是類似的(分別為19.7±12.8和20.1±10.4hr)。750IU/kg rhEPO(40K)s.c.一次給藥之后，組III和IV的受試者中含和不含防腐劑的末端半衰期值類似(分別為25.7±14.9和23.8±11.8hr)。
表4.150IU/kg含和不含新穩(wěn)定劑的rhEPO(2,000IU/mL)s.c.一次給藥之后平均±SD(％CV)藥動學參數組I和II不含新穩(wěn)定劑的含新穩(wěn)定劑的 90％置信區(qū)間參數 rhEPO rhEPO 比例aCmax(mIU/mL)226±79222±128 0.98 NDb(34.5％)(57.4％)tmax(hr)15.4±7.5 17.4±7.3 1.13 ND(49.0％) (41.8％)AUC(0-72)6983±1859 6642±2488 0.95 83.5-107c(mIU·h/mL) (26.6％) (37.4％)81.1-105da參數比例，含新穩(wěn)定劑的rhEPO/不含新穩(wěn)定劑的rhEPOb未測定c原始數據d對數-轉換數據表5.750IU/kg含和不含新穩(wěn)定劑的rhEPO(40,000IU/mL)s.c.一次給藥之后平均±SD(％CV)藥動學參數組III和IV不含新穩(wěn)定劑的 含新穩(wěn)定劑的90％置信區(qū)間參數 rhEPO rhEPO 比例aCmax(IU/mL) 3065±705 2978±808 0.97 NDb(23.0％) (27.1％)tmax(hr) 16.6±4.8 16.7±6.8 1.00 ND(29.1％) (40.7％)AUC(0-165)104,897±15,781102,768±21,500 0.98 91.6-104c(mIU·h/mL) (15.0％) (20.8％)89.8-104da參數比例，含新穩(wěn)定劑的rhEPO/不含新穩(wěn)定劑的rhEPOb未測定c原始數據d對數-轉換數據含甘氨酸和多山梨醇酯80作為新蛋白質穩(wěn)定劑的EPREX制劑提供了適于病人和保健承辦人的目前已證實的EPREX適用的所有適應癥的選擇性制劑。各種濃度的(即，2K，4K，10K，和40K)含新穩(wěn)定劑的EPO與所有各種濃度的(即，2K，4K，10K，和40K)含HSA的EPO可互換地使用。
實施例3兩種制劑一次皮下給予健康受試者重組人紅細胞生成素之后藥動學、安全性和耐受性研究目的比較以磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖的重組人紅細胞生成素(α型紅細胞生成素，rhEPO)兩種制劑皮下單次給藥劑量的藥動學、耐受性和安全性并評估緩沖成分誘導疼痛的顯著性。
患者和方法患者18-40歲之間(平均年齡27歲)、體重62.6-82.2kg(平均體重70.1kg)的十八名健康志愿者加入并完成此項研究。加入此項研究的受試者血液學或血清化學上無臨床顯著的異常檢驗值；具有陰性的尿毒理學篩選、HIV篩選和乙型肝炎表面抗原。受試者無高血壓跡象(例如，心舒壓＞95mmHg)；無任何原發(fā)性血液疾病史；明顯的肝臟、腎臟、心血管、胃腸、泌尿生殖器、代謝、或神經病學疾病史；有貧血或癲癇發(fā)作疾病史；已知對源自哺乳動物產品或人血清清蛋白敏感；在過去兩年期間具有酒精或藥物濫用史；受試者不習慣和過度飲用含咖啡因飲料；受試者未參與任何其它的臨床試驗或在研究登記的30天之內輸血或獻血；受試者在研究登記的3個月之內未服用過rhEPO；受試者在研究登記七天之內無疾??；并且受試者在研究登記的14天之內在研究前體格檢查或臨床實驗室評估上無明顯異常。所有受試者適于安全性評價，并且按計劃收集用于藥動學分析的所有血液標本。所有研究在公共機構倫理學委員會的許可和患者同意下進行。
研究設計在健康男性志愿者中這是階段I，單個中心，開放標簽的，隨機的，兩期交叉研究。十八名受試者隨機分配至兩個治療序列組的一組(9名受試者/組)。在兩個獨立的給藥期內，如大丸劑在大腿上部s.c.注射給予RhEPO。每個給藥期通過14-天的消除期分開。對于兩個給藥期的每一個，受試者在給藥之前至少12小時和給藥之后72小時限制在研究中心。表6總結了給藥方案。
表6.給藥方案和研究設計組 N 1期 消除期 2期I 9 150IU/kg含磷酸鹽緩沖劑的 14天 150IU/kg含檸檬酸鹽緩沖劑rhEPO，s.c.一次給藥 的rhEPO，s.c.一次給藥II 9 150IU/kg含檸檬酸鹽緩沖劑 14天 150IU/kg含磷酸鹽緩沖劑的的rhEPO，s.c.一次給藥 rhEPO，s.c.一次給藥此項研究采用兩種EPO制劑。在檸檬酸鹽緩沖劑中制備的α型紅細胞生成素(市售為EPREX，10,000IU/mL)和在磷酸鹽緩沖劑中制備的rhEPO新制劑(10,000IU/mL)。兩種制劑都是由Ortho McNeilJanssen藥物有限公司Ortho生物制劑部制備(Manati，PuertoRico)。
血液取樣通過直接靜脈穿刺術在EPO給藥之前和之后采集一連串的血液；不采用肝素固定。為了檢測血清紅細胞生成素濃度的靜脈血液樣品(5mL)，在給藥之前的～30、20和10分鐘(3個基線樣品)和給藥之后大約下列時間取樣30分鐘和1，2，5，8，12，15，18，24，48，和72小時。每個血清樣品分成兩個等分試樣。所有血清樣品在-20℃貯存。
血清樣品裝在干冰上。在第1天、第2天早上開始給藥之前，第16天和第17天早上給藥之前，立即進行快速臨床實驗室檢驗(血液學、血清化學和尿分析)。
生物分析法在RWJPRI進行對血清紅細胞生成素水平的樣本分析。采用一種放射免疫分析(RIA)試劑盒法(Diagnostic SystemsLaboratory(DSL)，Webster，TX制造)測量血清紅細胞生成素的濃度。商業(yè)上可得到的RIA是一種雙抗體、競爭性方法，它采用抗人尿紅細胞生成素的兔多克隆抗血清作為原始抗體，并且一種125I-標記的人尿紅細胞生成素作為示蹤物。通過在標準和定性控制樣品中用α型紅細胞生成素代替尿紅細胞生成素，將DSL試劑盒改性。此分析中采用的標準濃度是7.8，15.6，31.25，50，62.5，100和125mIU/mL。靈敏度，定義為給予可接受精確度的最低標準的平均修合值，是8.6mIU/mL，分析范圍經定性控制稀釋擴展至2,000mIU/mL。
安全性檢測在每次給藥(第1天和16天)之前，和每次給藥后的6，24，48，和72小時，立即記錄生命特征。安全性檢測基于不良反應的發(fā)生和種類，以及根據基線的臨床實驗室檢驗變化。此外，評價研究前的生命特征(包括血壓)測量的變化和體格檢查結果。
耐受性檢測評定注射部位耐受性的試驗在給藥日每次注射后45分鐘進行。有兩種疼痛尺度由10cm未分等級的水平線組成的視覺模擬尺度(VAS)，和由五個垂直放置的毗連說明的箱子組成的口述描述尺度(VDS)。VAS尺度的端點范圍從″不疼″至″我能想像出的最壞的″，VDS尺度的端點范圍從″不疼″至″非常嚴重的疼痛″。此外，詢問受試者疼痛的持續(xù)時間。
數據分析對于給藥前基線紅細胞生成素濃度，通過從每個給藥后值減去平均基線紅細胞生成素濃度來校正給藥后的血清濃度值，其中平均基線紅細胞生成素濃度由平均給藥之前30、20和10分鐘收集的3個樣品的紅細胞生成素水平測定。給藥前的血清紅細胞生成素濃度并不包括在平均值計算結果之內，如果它們低于分析的量化水平。通過由基線紅細胞生成素濃度校正的血清濃度數據，測定藥動學參數。
藥動學參數通過模型獨立的方法基于采用BIOAVL軟件8.0版的Digital Equipment Corporation VAX 8600計算機系統(tǒng)(ScientificComputer Systems，RWJPRI)計算。測定下列藥動學參數峰值血清濃度(Cmax)；到達峰值血清濃度的時間(tmax)；借助于線性梯形法則計算的由時間0至最后取血時間濃度-時間曲線的面積(AUC)(AUC0-72)；和由0.693/消除速率常數計算末端消除半衰期(t1/2)。通過對數-線性濃度-時間圖的末端線性區(qū)的連續(xù)數據點的線性回歸估算消除率常數。在回歸中采用最小的三個數據點。對于具有確定系數(r2)＜0.95的那些回歸，相應的t1/2值并未報道。計算每次治療的藥動學參數的平均、標準偏差(SD)，和變異系數。計算藥動學參數平均值(磷酸鹽/檸檬酸鹽)的比例。
對原始和對數-轉換的生物利用度參數進行統(tǒng)計學分析。方差模型分析擬合到具有一種有意義的生物利用度的數據(AUC，原始或對數-轉換的Cmax)作為從屬的變量，而歸因于治療序列組的效果、序列組內嵌套的受試者、治療和周期作為預示變量。治療序列組效果檢驗通過采用歸因于序列組內嵌套受試者的作為誤差項的均方在10％顯著性水平進行。周期和治療作用采用殘留誤差項在5％顯著性水平試驗。采用以上模型的誤差均方以評估受試者內變異性。采用評估過的受試者內變異性，以便對含磷酸鹽緩沖劑的rhEPO與含檸檬酸鹽緩沖劑的rhEPO的平均生物利用度參數的比例構建90％置信區(qū)間。
對于三個耐受性參數進行統(tǒng)計學分析。進行統(tǒng)計學檢驗之前，VAS值和疼痛持續(xù)時間值轉換至標準化。所有三個參數通過交叉檢驗法分析。采用SAS之內Proc glm對已轉換的VAS和疼痛持續(xù)時間值進行交叉分析。研究方案指定了14-天消除期以消除兩個給藥期之間的轉入的可能性。因此，計算的結果基于標準交叉模型，不具有轉入效應。以VDS評估的疼痛結果借助于Wilcoxon-Mann-Whitney秩和檢驗，按照Koch等人介紹的對交叉試驗的方法分析。簡言之，這種方法包括排列試驗中所有受試者的時期差異，接著對于兩組序列組之間的差異采用Wilcoxon-Mann-Whitney檢驗。
結果安全性結果兩個給藥期內報道了六名受試者的六例臨床不良反應(AEs)接受檸檬酸鹽緩沖的制劑后報道了兩名受試者的兩例AEs(11％)，接受磷酸鹽緩沖的藥物制劑后報道了四名受試者的四例AEs(22％)。檸檬酸鹽緩沖的制劑注射之后兩例報道過的AEs均在呼吸系統(tǒng)內(即，咽炎和竇炎)。磷酸鹽緩沖的制劑注射之后四例報道過的AEs包括肌肉痙攣、頭痛、腿疼和皮炎。兩組的所有AEs分類為溫和的并本質上是短暫的。
在所有受體中在兩次注射兩種制劑日之后觀測到總血清膽紅素濃度的下降。兩個觀察日內，平均總膽紅素降至給藥前基線值的幾乎一半。然而，這種下降的尺度在兩個治療組中相似，并且平均總膽紅素水平保持在正常范圍之內。這種下降顯示是短暫的，由于兩個給藥前基線值(16天分隔)非常相似。并未觀察到其它肝功能(堿性磷酸酶，SGOT，SGPT，LDH)檢測上的類似變化。
除了在總血清膽紅素上有未曾預期的降低之外，給藥后頭兩天在體格檢查、臨床實驗室檢驗、血壓和生命特征測量上無臨床上顯著變化。從而，這兩個治療組的安全性曲線圖類似。
耐受性結果在每期期間的一組，兩名接受檸檬酸鹽緩沖制劑的患者具有失去疼痛記錄。與所有16名檸檬酸鹽注射的34.3±28.6mm相比，所有18名磷酸鹽注射的平均VAS值是21.5±27.5mm(p＝0.0692)。而磷酸鹽溶液之后的疼痛感覺不須依賴于注射時期，檸檬酸鹽制劑之后的疼痛，在I期比在II期感覺更嚴重(39.3±31.7mm對29.4±26.3mm)。
這兩種制劑VDS嚴重性之間的差異統(tǒng)計學上顯著(p＝0.0339)。磷酸鹽緩沖制劑給藥之后，十三名受試者(72％)沒有任何或僅有溫和的疼痛，五名受試者(28％)在磷酸鹽緩沖制劑給藥之后具有中等的/嚴重的非常嚴重的疼痛。檸檬酸鹽緩沖制劑給藥之后相應的記錄分別是8(44％)和10(56％)名受試者。此外，當序列是檸檬酸鹽/磷酸鹽時感覺到VDS疼痛感覺略微更嚴重。
檸檬酸鹽緩沖制劑給藥之后的疼痛持續(xù)時間(1.5±2.0分鐘)顯著(p＝0.0057)長于磷酸鹽緩沖過的制劑給藥后的疼痛持續(xù)時間(0.4±0.5分鐘)。而I期期間的差異已是明顯的(平均0.8對0.3分鐘)，II期期間的差異變得相當明顯(平均2.2對0.5分鐘)，即，正接受檸檬酸鹽的受試者已經接受過磷酸鹽溶液時。明顯地，I期期間兩種藥物制劑有一個失去記錄。本項研究證明，標準EPREX制劑(含檸檬酸鹽)在注射部位產生比使用磷酸鹽作為緩沖劑的制劑更顯著的疼痛。當試驗序列是與磷酸鹽/檸檬酸鹽相對的檸檬酸鹽/磷酸鹽時，檸檬酸鹽誘導的疼痛的感覺更強烈，表明基準體驗會修正疼痛知覺。至于疼痛持續(xù)時間，兩種制劑之間存在極顯著的差異(p＝0.0057)，然而，當序列是磷酸鹽/檸檬酸鹽時，此背景下感覺到檸檬酸鹽誘導的疼痛較長。
藥動學結果在18名受試者中，接受檸檬酸鹽或磷酸鹽緩沖過的150IU/kgrhEPO s.c.一次給藥之后，平均血清紅細胞生成素濃度-時間曲線(未校正基線紅細胞生成素水平)是相似的(圖4)。所有受試者具有在正常生理學范圍內的給藥前基線紅細胞生成素濃度(＜8.6至18mIU/mL)。
由校正了給藥前平均基線紅細胞生成素濃度的血清數據測定藥動學參數(表7)。對于含檸檬酸鹽緩沖劑的rhEPO，Cmax范圍在低值74mIU/mL至高值583mIU/mL(平均260±169mIU/mL)之間，對于有磷酸鹽緩沖劑的rhEPO，Cmax值為64mIU/mL至高值642mIU/mL(平均245±167mIU/mL)。每組中少數受試者具有異常的高Cmax值。在兩種制劑的Cmax之間無統(tǒng)計學上顯著性差異(p＞0.05)。對于含檸檬酸鹽的rhEPO制劑，平均紅細胞生成素AUC(0-72h)是7,992±3,319mIU.h/mL，范圍從3,215至13,077mIU.h/mL。類似地，含磷酸鹽緩沖劑的rhEPO制劑具有的平均紅細胞生成素AUC(0-72h)是8,059±4,021mIU.h/mL，范圍從3,445至17,996mIU.h/mL.(表7)。在兩種制劑之間的AUC(0-72h)上不存在統(tǒng)計學上顯著性差異(p＞0.05)。對于含檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖劑的rhEPO，平均tmax類似(分別為14±5和17±10hr)。對于兩種rhEPO制劑，tmax范圍相似(8-24hr)。對于含檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖劑的rhEPO，平均末端半衰期值類似(分別為13.4±10.8和19.7±14.9hr)。
表7.150IU/kg含檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖劑的rhEPO s.c.一次給藥之后平均±SD(％CV)藥動學參數參數 不含新穩(wěn)定劑的 含新穩(wěn)定劑的 比例a90％置信區(qū)間rhEPO rhEPOCmax(mIU/mL) 245±167 260±159 0.9473.3-115.2b(68.1％) (61.0％) 77.1-111.0ctmax(hr) 17±1014±5 1.21NDd(57.7％) (39.4％)AUC(0-72)8.06±4.027.99±3.32 1.0184.3-117.3c(mIU·h/mL) (49.9％) (41.5％) 87.0-112.4dt％(hr) 19.7±14.913.4±10.81.47 ND(75.7％) (80.5％)a參數比例，含磷酸鹽緩沖劑的rhEPO/含檸檬酸鹽緩沖劑的rhEPOb原始數據c對數-轉換數據d未測定參考文獻1.Koury ST.Bondurat MC.Koury MJ.(1988)Localization oferythropoietin synthesizing cells in murine kidneys by in situhybridization.Blood 71524-527.2.Jacobs K，Shoemaker C，Rudersdorf R，Neill SD，Kaufman RJ，MufsonA，et al.(1985)Isolation and characterization of genomic and cDNAclones of human erythropoietin.Nature 313806-810.3.Lin FK，Suggs S，Lin Ck，Browne JK，Smalling R，Egrie JC，et al.(1985)Cloning and expression of the human erythropoietin gene.ProcNatl Acad Sci USA 827580-7584.4.Jelkmann W.(1992)Erythropoietinstructure，control of production，and function.Physiol Rev 72449-489.5.Egrie JC，Browne JK，Lai P，Lin FK.(1986)Characterization andbiological effects of recombinant human erythropoietin.Immunobiology 172213-224.6.Faulds D，Sorkin EM.(1989)Epoetin(Recombinant HumanErythropoietin)A review of its pharmacodynamic andpharmacokinetic properties and therapeutic potential in anemia and thestimulation of erythropoiesis Drugs 38863-899.7.Markham A，B，Bryson HM.(1995)Epoetin alfaA review of itspharmacodynamic and pharmacokinetic properties and therapeutic usein nonrenal applications Drugs 49232-254.8.Breymann C，Bauer C，Major A，et al.(1996)Optimal timing ofrepeated rh-erythropoietin administration improves its effectiveness instimulating erythropoiesis in healthy volunteers.Brit J Heamatol92295-301.9.Granolleras C，Leskopf W，Shaldon S，F(xiàn)ourcade J.(1991)Experienceof pain after subcutaneous administration of different preparations ofrecombinant human erythropoietina randomized，double-blindcrossover study.Clin Nephrol 36294-298.10.Frenken LA，Van Lier HJ，Jordans JG，et al.(1993)Identification ofthe component part in an epoetin alfa preparation that causes pain aftersubcutaneous inject.Am J Kidney Dis 22553-556.11.Halstenson CE，Macres M，Katz SA，et al.(1991)ComparativePharmacokinetics and pharmacodynamics of epoetin alfa and epoetinbeta.Clin Pharmacol Ther 50702-712.12.Ateshkadi A，Johnson CA，Oxton LL，Hammond TG，Bohenek WS，Zimmerman SW.(1993)Pharmacokinetics of intraperitoneal，intravenous，and subcutaneous recombinant human erythropoietin inpatients on continuous ambulatory peritoneal dialysis.Am J KidneyDis 21635-642.13.McMahon FG，Vargas R，Ryan M，et al.(1990).Pharmacokinetics andeffects of recombinant human erythropoietin after intravenous andsubcutaneous injections in healthy volunteers.Blood 761718-1722.14.Salmonson T，Danielson BG，Wikstrom B.(1990)Thepharmacokinetics of recombinant human erythropoietin afterintravenous and subcutaneous administration to healthy subjects.Brit Jclin Pharmacol 29709-713.
權利要求
1.一種紅細胞生成素藥物制劑，它包含(a)pH緩沖劑；(b)穩(wěn)定量的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物；(c)穩(wěn)定量的氨基酸；(d)藥用量的紅細胞生成素；和其中該制劑不含尿素或人血液產品。
2.權利要求1的制劑，其中的制劑是含水的。
3.權利要求1的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
4.權利要求1的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
5.權利要求3的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6至大約7.5的pH。
6.權利要求5的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6.9的pH。
7.權利要求1的制劑，其中的pH緩沖劑選自磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉、檸檬酸鈉/檸檬酸和醋酸鈉/醋酸。
8.權利要求7的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
9.權利要求8的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
10.權利要求9的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6至大約7.5的pH。
11.權利要求10的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6.9的pH。
12.權利要求1的制劑，其中的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物選自多山梨醇酯80和多山梨醇酯20。
13.權利要求1的制劑，其中的氨基酸是甘氨酸。
14.權利要求1的制劑，其進一步含有調節(jié)滲透壓劑(tonicityagent)，其中該調節(jié)滲透壓劑選自氯化鈉、甘露糖醇、甘氨酸、葡萄糖和山梨醇。
15.權利要求1的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供每次給藥量為大約1000IU至大約100,000IU的紅細胞生成素。
16.權利要求15的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供選自如下的每次給藥量大約2,000IU、大約3,000IU、大約4,000IU、大約10,000IU、大約20,000IU、大約25,000IU或大約40,000IU。
17.權利要求16的制劑，其中的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物是多山梨醇酯80，氨基酸是甘氨酸。
18.權利要求17的制劑，其中的多山梨醇酯范圍是大約0.01至大約1.0g/L，甘氨酸范圍是大約1g/L至大約50g/L。
19.權利要求18的制劑，其進一步含有調節(jié)滲透壓劑，其中的調節(jié)滲透壓劑選自氯化鈉、甘露糖醇、甘氨酸、葡萄糖和山梨醇。
20.權利要求19的制劑，其中的pH緩沖劑選自磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉、檸檬酸鈉/檸檬酸和醋酸鈉/醋酸。
21.權利要求20的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約pH5至大約pH8的pH。
22.一種紅細胞生成素藥物制劑，它包含(a)pH緩沖劑；(b)穩(wěn)定量的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物；(c)穩(wěn)定量的氨基酸；(d)藥用量的紅細胞生成素；(e)調節(jié)滲透壓劑；和其中該制劑不含尿素或人血液產品。
23.權利要求22的制劑，其中的制劑是含水的。
24.權利要求22的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
25.權利要求22的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
26.權利要求24的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6至大約7.5的pH。
27.權利要求26的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6.9的pH。
28.權利要求22的制劑，其中的pH緩沖劑選自磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉、檸檬酸鈉/檸檬酸和醋酸鈉/醋酸。
29.權利要求28的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
30.權利要求29的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
31.權利要求30的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6至大約7.5的pH。
32.權利要求31的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6.9的pH。
33.權利要求22的制劑，其中的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物選自多山梨醇酯80和多山梨醇酯20。
34.權利要求22的制劑，其中的氨基酸是甘氨酸。
35.權利要求22的制劑，其中的調節(jié)滲透壓劑選自氯化鈉、甘露糖醇、甘氨酸、葡萄糖和山梨醇。
36.權利要求22的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供每次給藥量大約1000IU至大約100,000IU的紅細胞生成素。
37.權利要求36的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供選自如下的每次給藥量大約2,000IU、大約3,000IU、大約4,000IU、大約10,000IU、大約20,000IU、大約25,000IU或大約40,000IU。
38.權利要求37的制劑，其中的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸酯聚(氧-1，2-乙二基)衍生物是多山梨醇酯80，氨基酸是甘氨酸。
39.權利要求38的制劑，其中的多山梨醇酯的范圍是大約0.01至大約1.0g/L，甘氨酸范圍是大約1g/L至大約50g/L。
40.權利要求39的制劑，其進一步包含調節(jié)滲透壓劑，其中的調節(jié)滲透壓劑選自氯化鈉、甘露糖醇、甘氨酸、葡萄糖和山梨醇。
41.權利要求40的制劑，其中的pH緩沖劑選自磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉、檸檬酸鈉/檸檬酸和醋酸鈉/醋酸。
42.權利要求41的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約pH5至大約pH8的pH。
43.一種紅細胞生成素藥物制劑，其選自由下列組成的組(a)大約2000IU紅細胞生成素，大約4.38mg氯化鈉，1.16mg磷酸二氫鈉二水合物，2.23mg磷酸氫二鈉二水合物，大約5.00mg甘氨酸，大約0.30mg多山梨醇酯80，以水調節(jié)至1.0mL；(b)大約4000IU紅細胞生成素，大約4.38mg氯化鈉，1.16mg磷酸二氫鈉二水合物，2.23mg磷酸氫二鈉二水合物，大約5.00mg甘氨酸，大約0.30mg多山梨醇酯80，以水調節(jié)至1.0mL；(c)大約10,000IU紅細胞生成素，大約4.38mg氯化鈉，1.16mg磷酸二氫鈉二水合物，2.23mg磷酸氫二鈉二水合物，大約5.00mg甘氨酸，大約0.30mg多山梨醇酯80，以水調節(jié)至1.0mL；和(d)大約40,000IU紅細胞生成素，大約4.38mg氯化鈉，1.16mg磷酸二氫鈉二水合物，2.23mg磷酸氫二鈉二水合物，大約5.00mg甘氨酸，大約0.30mg多山梨醇酯80，以水調節(jié)至1.0mL。
44.一種紅細胞生成素藥物制劑，它包含(a)pH緩沖劑；(b)穩(wěn)定量的人血清清蛋白；(c)穩(wěn)定量的氨基酸；(d)抗菌量的甲酚；和(e)藥用量的紅細胞生成素。
45.權利要求44的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
46.權利要求45的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
47.權利要求46的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6至大約7.5的pH。
48.權利要求47的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6.9的pH。
49.權利要求44的制劑，其中的pH緩沖劑選自磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉、檸檬酸鈉/檸檬酸和醋酸鈉/醋酸。
50.權利要求49的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
51.權利要求50的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
52.權利要求51的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6至大約7.5的pH。
53.權利要求52的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6.9的pH。
54.權利要求44的制劑，其中的甲酚防腐劑是間-甲酚，并且其中這種m-甲酚的范圍是大約0.2％至大約0.5％。
55.權利要求54的制劑，其中的間-甲酚防腐劑大約是0.3％。
56.權利要求44的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供每次給藥量大約1000IU至大約100,000IU的紅細胞生成素。
57.權利要求56的制劑，其中的pH緩沖劑選自磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉、檸檬酸鈉/檸檬酸和醋酸鈉/醋酸。
58.權利要求57的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
59.權利要求58的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
60.權利要求59的制劑，其中這種制劑以多劑量小瓶提供，其劑量選自大約10,000IU/2.5mL、大約25,000IU/mL或大約40,000IU/2mL。
61.權利要求44的制劑，其中的穩(wěn)定量的清蛋白大約是0.25g/L。
62.權利要求44的制劑，其中的氨基酸是甘氨酸。
63.權利要求62的制劑，其中的穩(wěn)定量的甘氨酸是大約5g/L至大約50g/L。
64.權利要求63的制劑，其中的氨基酸是甘氨酸，用量是大約0.25g/L至大約20g/L。
65.權利要求64的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供每次給藥量為大約1000IU至大約100,000IU。
66.權利要求65的制劑，其中這種制劑以多劑量小瓶提供，其劑量選自10,000IU/2.5mL、25,000IU/mL或40,000IU/2mL。
67.權利要求62的制劑，其中的甘氨酸大約是5g/L，并且其中穩(wěn)定量的清蛋白大約是0.25g/L。
68.權利要求67的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供每次給藥量大約1000IU至大約100,000IU的紅細胞生成素。
69.權利要求44的制劑，其中所述的制劑是含水的。
70.一種紅細胞生成素藥物制劑，它包含(a)pH緩沖劑；(b)穩(wěn)定量的人血清清蛋白；(c)穩(wěn)定量的氨基酸；(d)抗菌量的甲酚；(e)藥用量的紅細胞生成素；和(f)調節(jié)滲透壓劑。
71.權利要求70的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
72.權利要求71的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
73.權利要求72的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6至大約7.5的pH。
74.權利要求73的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6.9的pH。
75.權利要求70的制劑，其中的pH緩沖劑選自磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉、檸檬酸鈉/檸檬酸和醋酸鈉/醋酸。
76.權利要求75的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
77.權利要求76的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
78.權利要求77的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6至大約7.5的pH。
79.權利要求78的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約6.9的pH。
80.權利要求70的制劑，其中的甲酚防腐劑是間-甲酚，并且其中這種m-甲酚的范圍是大約0.2％至大約0.5％。
81.權利要求80的制劑，其中的間-甲酚防腐劑是0.3％。
82.權利要求70的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供每次給藥量大約1000IU至大約100,000IU的紅細胞生成素。
83.權利要求82的制劑，其中的pH緩沖劑選自磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉、檸檬酸鈉/檸檬酸和醋酸鈉/醋酸。
84.權利要求83的制劑，其中的pH緩沖劑的范圍是大約10mM至大約30mM。
85.權利要求84的制劑，其中的pH緩沖劑提供大約5至大約8的pH。
86.權利要求85的制劑，其中這種制劑以多劑量小瓶提供，其劑量選自大約10,000IU/2.5mL、大約25,000IU/mL或大約40,000IU/2mL。
87.權利要求70的制劑，其中穩(wěn)定量的清蛋白大約是0.25g/L。
88.權利要求70的制劑，其中的氨基酸是甘氨酸。
89.權利要求88的制劑，其中的穩(wěn)定量的甘氨酸是大約5g/L至大約50g/L。
90.權利要求89的制劑，其中的氨基酸是甘氨酸，并且以用量大約0.25g/L至大約20g/L提供的。
91.權利要求90的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供每次給藥量為大約1000IU至大約100,000IU。
92.權利要求91的制劑，其中這種制劑以多劑量小瓶提供，其劑量選自大約10,000IU/2.5mL、大約25,000IU/mL或大約40,000IU/2mL。
93.權利要求70的制劑，其中的調節(jié)滲透壓劑選自氯化鈉、甘露糖醇、甘氨酸、葡萄糖和山梨醇。
94.權利要求88的制劑，其中的甘氨酸大約是5g/L，并且其中穩(wěn)定量的清蛋白大約是0.25g/L。
95.權利要求94的制劑，其中配制藥用量的紅細胞生成素，以便提供每次給藥量大約1000IU至大約100,000IU的紅細胞生成素。
96.權利要求70的制劑，其中所述的制劑是含水的。
97.一種紅細胞生成素藥物制劑，其選自由下列組成的組(a)大約10,000IU紅細胞生成素，大約6.25mg人血清清蛋白，2.91mg磷酸二氫鈉二水合物，11.19mg磷酸氫二鈉十二水合物，大約50.00mg甘氨酸，大約7.50mg m-甲酚，以水調節(jié)至2.5mL；(b)大約25,000IU紅細胞生成素，大約6.25mg人血清清蛋白，2.91mg磷酸二氫鈉二水合物，11.19mg磷酸氫二鈉十二水合物，大約50.00mg甘氨酸，大約7.50mg m-甲酚，以水調節(jié)至2.5mL；和(c)大約40,000IU紅細胞生成素，大約5.00mg人血清清蛋白，2.33mg磷酸二氫鈉二水合物，8.95mg磷酸氫二鈉十二水合物，大約40.00mg甘氨酸，大約6.00mg m-甲酚，以水調節(jié)至2.0mL。
全文摘要
本發(fā)明提供紅細胞生成素的含水藥物制劑,它不含人血清血液產品,以一定量氨基酸和脫水山梨醇單－9－十八碳烯酸酯聚(氧－1,2－乙二基)衍生物穩(wěn)定。本發(fā)明也提供含水穩(wěn)定、可保藏的紅細胞生成素藥物制劑,它含有抗菌量的甲酚和一定量的氨基酸。
文檔編號A61K47/26GK1354669SQ00808504
公開日2002年6月19日 申請日期2000年4月7日 優(yōu)先權日1999年4月9日
發(fā)明者W·K·張, J·納塔拉彥, M·桑德斯, E·維卡門, B·沙馬, S·貝袞 申請人:奧索-麥克尼爾藥品公司