專利名稱：噻吩并吡喃甲酰胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及噻吩并吡喃甲酰胺衍生物，也涉及含有所述衍生物的藥物組合物和這類衍生物和組合物的應用。
背景技術(shù)：
US 5403842和它的部分續(xù)展申請(US 5474994和5605896)提出了雜雙環(huán)衍生物權(quán)利要求，它帶有取代的苯基哌嗪作為基礎(chǔ)部分，通過各種隔離基團與雜環(huán)連接。在所述的衍生物中，化合物A(實施例11，Rec 15/2739)是最受關(guān)注的，因為它具有極高的尿道選擇活性(uroselective activity)。事實上，化合物A對α1A腎上腺素能受體(adrenoceptor)具有良好的親和力，在狗模型中能選擇性地抑制前列腺尿道的收縮性，而對血壓沒有明顯的作用(Leonardi A.等，Pharmacol.Exp.Therap.218，1272-1283(1997)。 文獻迄今尚未報道7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-羧酸和它的N，ω-氨烷基酰胺。本發(fā)明涉及新穎結(jié)構(gòu)類的N-取代的苯基-N’，ω-(5-取代-7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-羰基氨基)-烷基哌嗪。
該類化合物對α1腎上腺素能受體具有增高的選擇性，其體內(nèi)尿道選擇性，與化合物A相比有所改進，對前列腺尿道的松弛有明顯的作用，對降低血壓幾乎沒有活性。該活性特征提示，本發(fā)明的化合物可安全地用于治療下尿道的阻塞綜合征，包括良性前列腺增生(BPH)，治療下尿道綜合征(LUTS)，以及用于治療神經(jīng)性的下尿道功能失調(diào)(NLUTD)，所有的治療沒有與低血壓活性有關(guān)的副作用。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個方面涉及式I化合物 其中R是芳基、環(huán)烷基或多鹵代烷基，R1是烷基、烷氧基、多氟代烷氧基、羥基或三氟代甲烷磺?；趸?，R2和R3的每個獨立地代表氫或鹵原子或烷氧基或多氟代烷氧基，n是0，1或2。
優(yōu)選的芳基R是苯基，優(yōu)選的環(huán)烷基R是環(huán)己基，優(yōu)選的多鹵代烷基R是三氟甲基。優(yōu)選的烷基R1是有1-4個碳原子的低級烷基，特別是甲基，優(yōu)選的烷氧基R1是低級烷氧基，特別是甲氧基；優(yōu)選的多氟代烷氧基R1是三氟甲氧基或2，2，2-三氟乙氧基。R2優(yōu)選的是氫或氟原子，R3優(yōu)選的是氫或氯原子或2，2，2-三氟乙氧基。n優(yōu)選的是1。
本發(fā)明也包括這些化合物的N-氧化物和其藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明進一步提供了含有式I化合物或這類化合物的N-氧化物或藥學上可接受的鹽與藥學上可接受的稀釋劑或載體混合的藥物組合物。這類藥物組合物可任選地進一步包含抗擬膽堿能藥，例如一種或多種選自tolterodine、奧昔布寧(oxybutinin)、darifenacin、alvameline和temiverine的藥劑。
本發(fā)明的另一方面涉及預防尿道和下尿道的收縮(包括去甲腎上腺素介導的收縮)，選擇性地預防所述的收縮(不明顯影響血壓)的方法，所有這些都是對需要這類治療的哺乳動物(包括人)給予特定應用有效量的一種或多種選定的式I化合物。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向所述的受體環(huán)境，如向細胞外介質(zhì)，(或通過對具有所述受體的哺乳動物給予)有效量的本發(fā)明化合物來阻斷α1受體的方法，用該方法可緩解與所述受體過度活性有關(guān)的疾病。
發(fā)明詳述本申請引用的所有專利、專利申請和文獻都全文并入本文供作參考。
本發(fā)明化合物的腎上腺素能拮抗活性使其可用作作用于特別富含α1-腎上腺素能受體的機體組織，如前列腺和尿道的藥物。因此，建立在其受體結(jié)合特性基礎(chǔ)上的本發(fā)明的抗腎上腺素能化合物是有用的治療劑，用于治療，如與下尿道阻塞失調(diào)有關(guān)的排尿問題，包括，但不限于良性前列腺增生(BPH)。
良性前列腺增生是一種進行性疾病，其表征是前列腺組織的小結(jié)增大，導致尿道阻塞。這引起排尿頻率增加、夜尿、尿流不良、尿流開始遲緩。良性前列腺增生的慢性后果包括膀胱平滑肌肥大、膀胱代償機能失調(diào)和尿道感染發(fā)生率增加。前列腺腺瘤引起膀胱出口阻塞的特定生化、組織學和藥理學的性質(zhì)目前尚不了解。但是，良性前列腺增生的形成被認為是老年男性不可避免的現(xiàn)象。在70歲以上的男性的約70％中可以觀察到良性前列腺增生。目前，世界上治療良性前列腺增生的選擇是進行手術(shù)。很顯然，人們很需要代替手術(shù)的醫(yī)學方案。手術(shù)治療良性前列腺增生的局限包括老年男性手術(shù)過程中的發(fā)病率高，阻塞和刺激癥狀持續(xù)或再發(fā)生，以及手術(shù)費用高。
α-腎上腺素能受體(McGrath等，Med.Res.Rev.9，407-533(1989))是位于遍布全身的組織和器官上的外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)里的特定神經(jīng)受體蛋白。這些受體是控制許多生理功能的重要開關(guān)，因此代表了藥物發(fā)展中重要的靶標。事實上，在過去40年里已經(jīng)開發(fā)出許多α-腎上腺素能藥物。其例子包括氯壓定、苯氧芐胺和哌唑嗪、特拉唑嗪、阿夫唑嗪(alfuzosin)、多沙唑嗪、tamsulosin(治療高血壓)，鼻眼凈(鼻子解充血藥)，和安普尼定(治療青光眼)。α-腎上腺素能藥物可分為不同的兩類激動劑(氯壓定和鼻眼凈是激動劑)，它們模擬內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素的受體活化性質(zhì)；拮抗劑(苯氧芐胺和哌唑嗪、特拉唑嗪、阿夫唑嗪、多沙唑嗪、tamsulosin是拮抗劑)，它們可阻斷去甲腎上腺素的效應。這些藥物中的許多藥物是有效的，但會產(chǎn)生不需要的副作用(例如，氯壓定除了有抗高血壓作用外，還會引起口腔干燥和鎮(zhèn)靜)。上述報道的激動劑選擇性地作用于α2腎上腺素能受體，而大多數(shù)拮抗劑則選擇性地作用于α1腎上腺素能受體，但tamsulosin除外，它對5-HT1A受體也有相關(guān)的親和性。許多上面引用的α1拮抗劑目前用于治療良性前列腺增生，但由于其不良的尿選擇性，它們易產(chǎn)生心血管源的副作用。
最近的藥理學、生物化學和放射性配體-結(jié)合研究證明，三種不同的α1-受體亞型，即α1A-(α1a-)、α1B-(α1b-)和α1D-(α1d-)對哌唑嗪有很高的親和性，小寫的下標用于重組受體，大寫的下標用于天然組織里的受體(Hieble等，Pharmacol.Rev.47，267-270，1995)。在功能研究中，與哌唑嗪親和性低的α1-受體也被鑒定并命名為α1L-受體(Flavahan和Vanhoutte，TrendsPharmacol.Sci.7，347-349，1986；Muramatsu等，Pharmacol.Comm.6，23-28，1995)。
一些研究顯示，在下尿道組織里存在這些α1-腎上腺素能受體亞型，K.E.Andersson在1997年7月2-5日巴黎舉行的“第4屆良性前列腺增生(BPH)國際研討會”上對此作了綜述(601-609頁)。
一些研究業(yè)已顯示，人的前列腺接受交感神經(jīng)系統(tǒng)和副交感神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)支配。
腎上腺素能神經(jīng)被認為通過釋放去甲腎上腺素、刺激收縮介導的(mediate)α腎上腺素能受體引起前列腺平滑肌緊張性。良性前列腺增生病人的總尿道壓的50％左右是由α-腎上腺素能受體介導的肌肉緊張引起的。功能研究表明，在前列腺腺瘤組織和囊組織中發(fā)生重要的腎上腺素能受體功能。用典型的腎上腺素能受體-選擇性的拮抗劑(哌唑嗪)進行臨床研究增強了α1-腎上腺素能受體在控制前列腺平滑肌緊張性中的關(guān)鍵作用。這也得到實驗室研究的證實，該研究顯示雖然α1-和α2-腎上腺素能受體部在人前列腺中找到，但收縮性質(zhì)則主要由α1-腎上腺素能受體介導。許多臨床研究證實，阻斷α1-腎上腺素能受體會減輕患有良性前列腺增生，貯存(刺激)型和排空(阻塞)型的病人的下尿道的癥狀(LUTS)。
下尿道癥狀(LUTS)在女性中也會隨著年齡的增加形成。像男性一樣，女性中的下尿道癥狀包括充盈的癥狀，如尿急、尿失禁和夜尿；和排空的癥狀，如尿流細弱，遲緩，間隔，膀胱不能排空和腹部緊張。男性和女性相似地具有高比例充盈性和排空性下尿道癥狀表明至少部分病因?qū)W可能是相同的。最近的研究報道了用α1-拮抗劑減少女性下尿道癥狀的效果比抗擬膽堿能藥物的好(Serels，S.和Stein，M.，神經(jīng)學和尿動力學1731-36，1998)。作者斷言，α1-拮抗劑在治療女性的下尿道癥狀中似乎有一定的作用?？捎脕斫忉屵@些結(jié)果的可能的機理是a)膀胱頸部和尿道的機能失調(diào)導致功能性的輸出阻塞，類似于良性前列腺引起的出口阻塞，繼發(fā)地使逼肌活性過度；和b)逼肌里α1-腎上腺素能受體活性的增加引起了尿頻和尿急。在此基礎(chǔ)上，α1-拮抗劑在臨床上用于治療婦女的下尿道癥狀(Fitzpatrick，Brit。J.Urol.Intl.85，Supp.21-5，2000；Kakizaki，M.等，Brit.J.Urol.Intl.85，Supp.225-30，2000)。Serels結(jié)果也表明，α1-拮抗劑和抗擬膽堿能藥物合用可改善下尿道癥狀的治療效果(Fitzpatrick，Brit.J.Urol.Intl.85，Supp.21-5，2000中建議)。
α1-拮抗劑另一種可能的應用是治療由于神經(jīng)疾病或創(chuàng)傷引起的神經(jīng)學上的下尿道失調(diào)(NLUTD)。NLUTD會引起衰弱的癥狀和嚴重的并發(fā)癥，包括排尿頻率增加，尿失禁，排空困難，復發(fā)性上尿道感染和上尿道退化。治療NLUTD可保持腎功能，避免泌尿道并發(fā)癥。給予α1-拮抗劑通過緩解膀胱充盈時的高逼肌壓力(其表現(xiàn)為膀胱的依從性差，逼肌反射亢進)而使尿液便于儲存，來有利于患有NLUTD的病人。在患有耐抗擬膽堿藥的脊索損傷的動物模型和病人中，α1-拮抗劑可改善依從性(Kakizaki，M.等，Brit.J.Urol.Intl.85，Supp.225-30，2000；Sundin，T.等，Invest Urol.14322-328，1977；McGuire等，神經(jīng)學和尿動力學4139-142，1985；Swrerzewski，S.J.等，J.Urol.151951，1994)。
已有人提出，在人前列腺中存在兩種截然不同的α1-腎上腺素能受體亞型，一類是對哌唑嗪有高親和性(α1H)，一類對哌唑嗪有低親和性(α1L)。業(yè)已在前列腺基質(zhì)組織中找到了分子克隆研究里發(fā)現(xiàn)的三類高親和性的α1-腎上腺素能受體。α1a亞型占主導，代表α1-腎上腺素能受體群中的約60-85％。最近的發(fā)現(xiàn)提示，正常的和增生的前列腺之間亞型群可能存在差異，良性前列腺增生中亞型α1a∶α1b∶α1d之比為85∶1∶14，而在非良性前列腺增生組織中的亞型α1a∶α1b∶α1d之比為63∶6∶31。
據(jù)報道，α1A-腎上腺素能受體可體外介導人前列腺的收縮反應。Ford等發(fā)現(xiàn)，α1A腎上腺素能受體可能不介導對去甲腎上腺素的收縮反應，提示它是α1L腎上腺素能受體的候選物。Kenny等的發(fā)現(xiàn)(Br.J.Pharmacol.118，871-878(1996))支持這樣的觀點具有α1A腎上腺素能受體的許多特性的α1L腎上腺素能受體介導人前列腺的收縮反應。
在婦女尿道中，α1亞型的mRNA占主導，經(jīng)自動放射照相術(shù)證實了α1A腎上腺素能受體占主導(Andersson，K.E.，Brit.J.Urol.Intl.85，Supp.212-18，2000)。據(jù)報道α1A和α1D亞型在人的逼肌中存在，α1D亞型占主導(Malloy，B.等，J.Urol.160937-943，1998)。因此，α1腎上腺素能受體拮抗劑可用于治療男性和女性前列腺和非前列腺源的下尿道癥狀的證據(jù)可用來支持本發(fā)明化合物在治療這類癥狀中的應用，不管其是或不是阻塞性的，也無需考慮病人的性別。
另一方面，業(yè)已提示，α1A和α1L腎上腺素能受體可代表相同受體的兩個截然不同的藥理學位點。
本發(fā)明化合物對每個受體的親和性可通過如下的受體結(jié)合試驗進行分析1)α1-腎上腺素能受體亞型根據(jù)Testa等，Pharmacol.Comm.6，79-86，1995，用特異性的配體3H-哌唑嗪，2)5HT1A含血清素的受體根據(jù)Fargin等，Nature335，358-360，1988，使用特異性的配體3H-8-OH-DPAT。
α1L腎上腺素能受體尚未被克隆，因此，本發(fā)明化合物對該亞型的功能親和性可根據(jù)Testa等，J.Pharmacol.exp.Ther.281，1284-1293，1997報道的用分離的器官準備進行分析。
實施例8和9揭示了本發(fā)明化合物對上述受體的體外試驗。
目前用于治療良性前列腺增生的具有α1-腎上腺素拮抗活性的藥物對亞型的選擇性差，由于其降壓活性，會引起相關(guān)的副作用。因此，人們很需要選擇性的α1-拮抗劑，它對良性前列腺增生病人進行治療時沒有明顯的心血管類型的副作用。
如實施例10所述，本發(fā)明化合物對尿道的極高選擇性已在狗模型中進行了試驗，其中化合物A與另一種已知的α1-拮抗劑(哌唑嗪)相比，顯示能拮抗前列腺尿道的收縮的效果，對血壓的作用很有限。
因此，本發(fā)明的一個主要目的是提供治療類型前列腺增生，同時避免由于急性低血壓癥產(chǎn)生的任何副作用的方法。
本發(fā)明的另一個方法是提供包含作為選擇性的α1-腎上腺素能受體拮抗劑的7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰氨基衍生物的藥物組合物。該組合物能有效地治療良性前列腺增生和下尿道的其它疾病，如下尿道癥狀和神經(jīng)性的下尿道失調(diào)。
本發(fā)明的另一個目的是提供用選擇性的α1-腎上腺素能受體拮抗劑的7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰氨基衍生物治療良性前列腺增生的方法。
本發(fā)明的另一方面是新穎的化合物在降低眼內(nèi)壓和治療心律失常和勃起和性功能障礙上的應用。本技術(shù)領(lǐng)域的人員可從下列詳細的描述和所附的權(quán)利要求書中看到本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點。
本發(fā)明化合物的合成本發(fā)明化合物一般可如下制備使酸1與ω-氨基烷基氨基衍生物2直接縮合(流程1)，得到本發(fā)明化合物。
流程1 在縮合劑(如二環(huán)己基碳化二亞胺或氰基膦酸二乙酯)的存在下，在促進劑(如N-羥基琥珀酰亞胺、4-二甲基氨基吡啶或N，N’-羰基二咪唑)任選地存在下，在非質(zhì)子性或氯代溶劑(如，N，N-二甲基甲酰胺或氯仿)中，在-10/140℃下進行縮合(Albertson，Org.React.12，205-218(1962)；Doherty等，J.Med.Chem.35，2-14(1992)；Ishihara，Chem.Pharm.Bull.39，3236(1991))。在一些情況下可分離出活性酯或酰胺中間體(如N-羥基琥珀酰亞氨基酯或酰基咪唑)，在非質(zhì)子溶劑或氯代溶劑中、10/100℃下進一步與2反應轉(zhuǎn)化為相應的酰胺(I)。該類濃縮在實施例中作了詳細說明。另一類可使用的活化中間體是1的混合酸酐(使1與氯甲酸烷酯在叔胺(如三乙胺或N-甲基嗎啉)存在下反應得到)在0-80℃與2反應；任選地在加入胺前加入促進劑(如，1-羥基哌啶)(Albertson，Org.React.12，157(1962))。
或者，不用溶劑，在150-220℃下進行縮合，或在高沸點的醚溶劑(如二甘醇二甲醚)中進行縮合(Mitchell等，J.Am.Chem.Soc.53；1879(1931))。
另外，可通過制備和任選地分離1的反應性衍生物，如酰基鹵來進行縮合。這些最后的衍生物的制備和使用在文獻中有很好的報道，是本技術(shù)領(lǐng)域人員公知的。也可使用1的反應性稍差的衍生物，如烷酯，它在縮合劑(如三甲基鋁)存在下，在非質(zhì)子和/或氯代溶劑(如己烷、二氯甲烷)里，在-10/80℃下，或沒有溶劑在80-180℃下轉(zhuǎn)化為1(S.M.Weinreb等，TetrahedronLett.4171(1977)；M.F.Lipton等，Org.Synth.59，49(1979))。
用上述報道的縮合的相同方法，以H2NCH2(CH2)nCH2X(X＝鹵素或OH)作為試劑，1可轉(zhuǎn)化為3。對于X＝OH，然后用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法將醇基團轉(zhuǎn)化為合適的離去基團。化合物3(X＝鹵素或烷基/芳基磺?；趸?接著可與苯基哌嗪8反應。優(yōu)選的(不是必須的)是在20-200℃下，在極性溶劑(如二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇或其它)或沒有任何溶劑，通常在諸如碳酸鉀的堿存在下進行親核取代。也可參見Patai中的Gibson章節(jié)“氨基基團的化學”第45頁和后續(xù)內(nèi)容，Wiley International Science，美國紐約，1968。
文獻中揭示了化合物2的制備，是本技術(shù)領(lǐng)域中公知的，包括用上述文獻揭示的使化合物3和8縮合方法，使苯基哌嗪8在N-(ω-鹵代烷基)鄰苯二甲酰亞胺或合適的ω-鹵代烷基腈或鹵代烷基酰胺上進行親核取代或通過α，β-不飽和烷基腈或烷基酰胺在合適的溶劑中(如乙腈，N，N-二甲基甲酰胺，氯代溶劑或其它非質(zhì)子極性溶劑)在0℃和溶劑的回流溫度之間的加成。對鄰苯二甲酰亞氨基進行標準的去保護或?qū)︴０被蚯杌M行還原得到化合物2。
可以2-乙酰基-3-羥基噻吩-4-羧酸甲酯為起始物(根據(jù)J.Chem.Soc.Perkin Trans I，507(1986)所述制備)合成本發(fā)明的酸1，其中R代表烷基、環(huán)烷基或苯基(流程2)，然后可用本技術(shù)領(lǐng)域熟知的方法，用合適的烷酰氯或芳酰氯進行酯化。替換的方法包括用上述相同的方法使1酰胺化，它也可用于酯化步驟，得到4。
流程2 使4的甲基酮基團進行單溴化，得到5，5再與三苯基膦用普通過程(乙腈或甲苯或其它非質(zhì)子溶劑，回流)反應得到鏻鹽6。接著對該底物進行分子內(nèi)的酯-Wittig反應，得到噻吩并[3，2-b]吡喃7。通過用本技術(shù)領(lǐng)域公知的酸或堿催化方法來水解7的酯官能團，得到化合物1。
公知的水解方法包括在40-75℃下，使用在含水醇中的氫氧化鈉或氫氧化鉀，或在40-100℃下，使用在含水二甲基甲酰胺或二噁烷或四氫呋喃中的氫氧化鋰。
可以2-乙酰基-3-羥基噻吩-4-羧酸酯為起始物，根據(jù)Riva，C.等，Synthesis，195-201(1997)揭示的環(huán)化方法，在由1，8-二氮雜雙環(huán)十一-7-烯催化，在無水多氟代烷?；嬖谙轮苯迎h(huán)化可制備化合物1，其中R是多氟代烷基。
可這樣合成R1是三氟甲烷磺?；趸幕衔?以R1是羥基的化合物1為起始物，通過已知的方法，包括使用三氟甲烷磺酸酐或N-苯基三氟甲烷-磺酰胺，在非質(zhì)子溶劑(如1，2-二氯乙烷或其它氯代溶劑或甲苯)中，在20℃到溶劑的回流溫度下進行反應(Hendickson J.B.等，Tetrahedron Letters，4607-4510(1973))。可通過本技術(shù)領(lǐng)域已知的簡單氧化方法來合成化合物1的N-氧化物。P.Brougham在Synthesis，1015-1017(1987)里所述的氧化方法使哌嗪環(huán)的兩個氮原子可被區(qū)分，得到了N-氧化物和N，N’-二氧化物。
文獻尚未知的苯基哌嗪8的制備在實驗部分有記載，所用合成過程是本技術(shù)領(lǐng)域公知的，包括通過標準反應合成合適的苯胺，然后根據(jù)Prelog方法(Collect.Czech.Chem.Comm.5，497-502(1933))或其變體(Elworthy T.R.，J.Med.Chem.40，2674-2687(1997)用雙-(2-氯乙基)胺環(huán)化得到哌嗪。
本發(fā)明化合物合成詳述實施例1N-{3-[4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺a)1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-4-[3-(N-鄰苯二甲酰氨基)-丙基]-哌嗪(化合物1A)使28.64克1-(5-氯-2-甲氧基苯基)-哌嗪、44.6克無水碳酸鉀和33.65克N-(3-溴丙基)-鄰苯二甲酰亞胺在250毫升乙腈中的混合物回流攪拌8小時。冷卻到20-25℃后，攪拌下加入800毫升水，通過抽濾懸浮液得到黃色固體，用300毫升水洗滌該固體，再用甲醇結(jié)晶，得到46.5克標題化合物，熔點131-133℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)7.78-7.82，m，2H，鄰苯二甲酰亞胺H3和H6；7.64-7.78，m，2H，鄰苯二甲酰亞胺H4和H5；6.92，dd，1H，甲氧基苯基H4；6.65-6.78，m，2H，甲氧基苯基H3和H6；3.81，s，3H，CH3O；3.71-3.89，m，2H，CH2N(CO)2；2.78-3.00，m，4H，3和5哌嗪CH2s；2.40-2.65，m，6H，2和6哌嗪CH2s，CH2CH2CH2N(CO)2；1.80-2.03，m，2H，CH2CH2CH2。
b)三鹽酸1-(3-氨基丙基)-4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-哌嗪2.15H2O(化合物1B)使20.7克化合物1A和8.6毫升85％水合肼在300毫升乙醇中的溶液回流3.5小時。此后，將反應混合物冷卻到20-25℃，用400毫升水稀釋，用37％鹽酸酸化(pH＝1)，并攪拌30分鐘。通過過濾收集沉淀下來的固體，用1N鹽酸，然后用水洗滌。通過真空蒸發(fā)濃縮濾液，過濾，在0-5℃下加入35％氫氧化納使其成堿性，用乙醚萃取。有機層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)至干，得到13.6克(96％)標題化合物的堿。用多于三當量的3N氯化氫乙醇溶液酸化在氯仿中的堿溶液，然后真空蒸發(fā)至干，用乙醇∶乙醚10∶3使殘留物結(jié)晶，得到標題化合物，熔點200-202℃。
1H-NMR(200MHz，DMSO-d6，δ)11.20-11.50，br，1H，NH+；8.10-8.40，br，3H，NH3-；6.85-7.10，m，3H，苯基H3，H4和H6；5.10，br，5.3H，NH+，2.15H2O；3.79，s，3H，CH3O；3.35-3.65，m，4H，2哌嗪CH2s；3.03-3.35，m，6H，2哌嗪CH2s，CH2CH2CH2NH3+；2.80-3.03，m.2H，CH2CH2CH2NH3+；1.95-2.22，m，2H，CH2CH2CH2NH3+。
c)2-乙?；?3-苯甲?；趸绶?4-羧酸甲酯(化合物1C)在20-25℃下將3.48毫升苯甲酰氯滴加入5.0克2-乙?；?3-羥基噻吩-4-羧酸甲酯(如J.Chem.Soc.Perkin Trans 1，1986，507)和3.66克4-二甲氨基吡啶在100毫升二氯甲烷中的溶液里，使混合物攪拌2小時；此后用0.5N鹽酸、水(2×20毫升)、2.5％碳酸氫鈉水溶液(2×40毫升)和水(2×20毫升)洗滌。干燥有機層(硫酸鈉)，真空蒸發(fā)至干，用快速層析純化(氯仿∶乙酸乙酯100∶1)，得到7.08克化合物1C的黃色容易潮解的固體，直接用于下個步驟，無需進一步純化。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.36，s，1H，噻吩H5；8.20-8.42，m，2H，苯基H2，H6；7.52-7.78，m，3H，苯基H3，H4，H5；3.73，2，3H，CH3O；2.50，s，3H，CH3CO。
d)2-(2-溴乙?；?-3-苯甲?；趸绶?4-羧酸甲酯(化合物1D)在10分鐘里將1.28毫升溴在24毫升四氯甲烷中的溶液滴加入回流下攪拌的7.23克化合物1C在72毫升四氯甲烷中的溶液。再回流5分鐘后，使混合物冷卻到20-25℃。濾得沉淀的固體，用冷四氯甲烷洗滌，得到7克(77％)化合物1D，熔點115-118℃。該化合物被雜質(zhì)1C和2-(2，2-二溴乙?；?-3-苯甲?；趸绶?4-羧酸甲酯污染(各自是2％和6％摩爾，用1H-NMR光譜測定)，但可直接用于下個反應步驟，無需進一步純化。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.43，s，1H，噻吩H5；8.20，m，2H，苯基H2，H6；7.52-7.80，m，3H，苯基H3，H4，H5；6.70，s，0.06H，CHBr2；4.30，s，1.84H，CH2Br；3.73，s，3H，CH3O；2.50，s，0.06H，CH3CO。
e)2-[(3-苯甲酰氧基-4-甲氧基羰基)-2-噻吩基]-2-氧代乙基三苯基鏻溴化物半水合物(化合物1E)使6.9克化合物1D和5.19克三苯基膦在45毫升乙腈中的溶液回流攪拌4小時，然后冷卻到20-25℃。濾得沉淀物，得到10.27克(88％)化合物1E，熔點150-152℃，純度足以用于下個反應。用異丙醇使0.27克粗制品結(jié)晶，得到0.24克分析的樣品。熔點(124)128-132℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.38-8.50，m，3H，PhCO H2，H6和噻吩基H5；7.41-7,87，m，18H，(C6H5)3P和PhCO H3，H4，H5；6.35，d，2H，CH2P；3.71，s，3H，CH3O。
f)7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-羧酸甲酯(化合物1F)將150毫升1M碳酸鈉水溶液加到10.07克化合物1E在200毫升1，2-二氯乙烷中的溶液里，使混合物在85℃下攪拌11小時。冷卻后，分離有機層，用水洗滌到中性，用無水硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)至干，得到8.67克粗制品。粗制品經(jīng)快速層析純化(石油醚/乙酸乙酯6∶4)得到4.1克(92％)化合物1F，熔點169-171℃。用甲醇結(jié)晶，得到分析樣品。熔點169-171℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.50，s，1H，H2；7.95-8.05，m，2H，苯基2H，H6；7.50-7.60，m，3H，苯基H3，H4，H5；6.88，s，1H，H6；4.00，s，3H，CH3O。
g)7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-羧酸(化合物1G)在50℃下將26毫升0.6N氫氧化鈉加到3.82克化合物1F在174毫升甲醇和87毫升二噁烷中的攪拌著的溶液中。然后使混合物在相同的溫度下攪拌20分鐘，冷卻到20-25℃，用280毫升水稀釋，過濾，用1N鹽酸酸化到pH＝1。沉淀凝膠的懸浮液在60℃下攪拌2小時，得到可過濾的固體。過濾該固體，干燥得到3.4克標題化合物，直接用于下個步驟，無需進一步的純化。用乙醇結(jié)晶得到分析純的樣品，熔點282-283℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)13.39，bs，1H，COOH；8.50，s，1H，H2；8.00-8.05，m，2H，苯基H2，H6；7.52-7.60，m，3H，苯基H3，H4，H5；7.13，s，1H，H6。
h)N-{3-[4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺在0℃下，將0.54毫升93％氰基膦酸二乙酯和0.46毫升三乙胺加到0.82克化合物1G和0.94克化合物1B堿在15毫升無水甲基甲酰胺中的攪拌著的溶液中。在20-25C下攪拌22小時后，將反應混合物倒入150毫升水中，傾倒出母液，沉淀的糊狀固體溶于60毫升氯仿，用水洗滌，用硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)至干。粗制品經(jīng)快速層析(乙酸乙酯/甲醇9∶1)。蒸發(fā)得到純的標題化合物(1.2克；74％)，用乙酸乙酯結(jié)晶。熔點165-166.5℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.45，s，1H，H2；7.90-8.02，m，2H，苯基H2，H6；7.55-7.62，m，3H，苯基H3，H4，H5；7.45，t，1H，CONH；6.95，dd，1H，氯苯基H4；6.83，s，1H，H6；6.65-6.75，m，2H，氯苯基H3，H6；3.81，s，3H，CH3O；3.66，dt，2H，CONHCH2；2.74-2.92，m，4H，2 哌嗪CH2s；2.48-2.54，m，6H，CH2N和2哌嗪CH2s；1.80-2.00，m，CH2CH2CH2。
實施例2N-{3-[4-(2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]丙基}-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺用1-(3-氨基丙基)-4-(2-甲氧基苯基)-哌嗪(如GB2161807所述制備)代替化合物1B，如實施例1h所述制備標題化合物。將反應混合物倒入水后，用乙酸乙酯萃取，合并的有機層用水洗滌(3×80毫升)，干燥(硫酸鈉)，真空蒸發(fā)至干。粗制品經(jīng)快速層析(乙酸乙酯/甲醇8.5∶1.5)。通過蒸發(fā)收集的組分得到的含有純標題混合物的殘留物經(jīng)乙酸乙酯結(jié)晶，得到標題化合物，熔點161-162℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.41，s，1H，H2；7.90-8.02，m，2H，苯基H2，H6；7.50-7.65，m，4H，NHCO和苯基H3，H4，H5；6.80，s，1H，H6；6.70-7.05，m，4H，甲氧基苯環(huán)的CHs；3.83，s，3H，CH3O；3.66，dt，2H，CONHCH2；2.80-3.00，m，4H，2哌嗪CH2s；2.48-2.62，m，6H，CH2N和2哌嗪CH2s；1.80-2.00，m，2H，CH2CH2CH2。
實施例35-環(huán)己基-N-{3-[4-(2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺a)2-乙酰基-3-環(huán)己烷羰基氧基噻吩-4-羧酸甲酯(化合物3A)用環(huán)己烷碳酰氯代替苯甲酰氯，如實施例1中制備化合物1C的方法制備該化合物。粗制品經(jīng)快速層析純化(石油醚∶乙酸乙酯梯度洗脫，從9∶1到7∶3)，得到化合物3A(80％)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.30，s，1H，噻吩H5；3.80，s，3H，CH3O；2.50，s，3H，CH3CO；1.00-3.00，m，11H，環(huán)己烷CHs。
b)2-(2-溴乙?；?-3-環(huán)己烷羰基氧基噻吩-4-羧酸甲酯(化合物3B)在60分鐘里將0.70毫升溴在3.45毫升乙酸中的溶液滴加入20-25℃下攪拌的3.56克化合物3A在34.5毫升乙酸中的溶液中。在20-25℃下再攪拌2.5小時后，將混合物倒入冰水中，用乙醚(2×80毫升)萃取。合并的有機層用水(2×80毫升)、10％碳酸鈉水溶液(100毫升)和水(3×80毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)至干。粗制品經(jīng)快速層析(正己烷∶氯仿6∶4)純化，得到1.31克(29％)化合物3B。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.36，s，1H，噻吩H5；4.29，s，2H，CH2Br；3.83，s，3H，CH3O；2.65-2.80，m，1H，環(huán)己烷CH；2.15-2.25，m，2H，2，6環(huán)己烷CH3s。
c)2-[(3-環(huán)己烷羰基氧基-4-甲氧基羰基)-2-噻吩基]-2-氧代乙基三苯基鏻溴化物(化合物3C)使0.20克化合物3B和0.13克三苯基膦在1.25毫升乙腈中的溶液回流攪拌2.5小時，然后冷卻到0-5℃。濾得沉淀物，先用2∶1乙酸乙酯∶乙腈混合物，然后用乙酸乙酯洗滌沉淀，得到0.19克(59％)化合物3C，熔點165-167℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.31，s，1H，噻吩H5；7.55-8.00，m，15H，(C6H5)3P；6.35，d，2H，CH2P；3.79，s，3H，CH3O；2.60-2.75，m，1H，環(huán)己烷CH；1.95-2.05，m，2H，2，6環(huán)己烷CHs(eq.)；1.10-1.70，m，8H，其它環(huán)己烷CHs。
d)5-環(huán)己基-7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-羧酸甲酯(化合物3D)0.16克化合物3C、2毫升1，2-二氯乙烷和2毫升1M碳酸鈉水溶液的混合物在45℃下加熱36小時。冷卻到20-25℃后，加入5毫升氯仿，有機層用水洗滌(2×10毫升)，用無水硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)至干。粗制品經(jīng)快速層析純化(石油醚∶乙酸乙酯1∶1)，得到0.05克(68％)化合物3D的白色固體，熔點114-119℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.43，s，1H，H2；6.20，s，1H，H6；3.94，s，3H，COOCH3；2.55-2.70，m，1H，環(huán)己烷CH；1.15-2.15，m，10H，環(huán)己烷CH2s。
e)5-環(huán)己基-7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-羧酸(化合物3E)在20-25℃下將0.3毫升1N氫氧化鈉加到0.040克化合物3D在1.8毫升甲醇和0.9毫升1，4-二噁烷中的攪拌著的溶液。然后使混合物在50℃下攪拌3.5小時。冷卻到20-25℃后，用水稀釋混合物，用3N鹽酸酸化到pH＝1。通過過濾收集沉淀的固體，用水洗滌，得到0.028克(73.5％)標題化合物，熔點269-275℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)13.30，bs，1H，COOH；8.78，s，1H，H2；6.23，s，1H，H6；2.55-2.70，m，1H，環(huán)己烷CH；1.10-2.05，m，10H，環(huán)己烷CH2s。
f)5-環(huán)己基-N-{3-[4-(2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺用化合物3E代替化合物1G，如實施例2所述制備標題化合物。粗制品經(jīng)快速層析純化(乙酸乙酯∶2.7N氨甲醇溶液95∶5)。從含有純標題化合物的收集組分中蒸發(fā)溶劑，得到殘留物，將殘留物溶于5毫升甲醇，用活性炭使乳白色的溶液澄清。蒸發(fā)溶劑得到黃色糊狀固體的標題化合物(67％)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.41，s，1H，H2；7.15，t，1H，NH；6.85-7.10，m，4H，甲氧基苯基CHs；6.21，s，1H，H6；3.86，s，3H，OCH3；3.60，1，2H，NHCH2；2.55-2.80，m，7H，2哌嗪CH2s，環(huán)己烷CH和CH2CH2CH2N；2.05，dt，2H，CH2CH2CH2；1.20-1.95，m，10H，環(huán)己烷CH2s。
實施例4N-{3-[4-(2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-三氟甲基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺a)7-氧代-5-三氟甲基-7H噻吩并[3，2-b]吡喃-3-羧酸甲酯在0-5℃下將3.95毫升三氟乙酸酐和9.2毫升1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)加到4.10克2-乙?；?3-羥基噻吩-4-羧酸甲酯和14ml吡啶的混合物中。使混合物在80℃下加熱27小時。此時再加入三批三氟乙酸酐(總共9.9毫升)和DBU(9.2毫升)。冷卻到20-25℃后，將混合物倒入冰(250克)和37％鹽酸(50毫升)的混合物里，用乙酸乙酯(2×80毫升)萃取。合并的有機層用水洗滌，用硫酸鈉干燥，真空蒸干。殘留物溶于石油醚∶乙酸乙酯7∶3，過濾。濾液經(jīng)快速層析純化(石油醚∶乙酸乙酯梯度7∶3到0∶1)。殘留物溶于乙醚，用5％碳酸鈉水溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)至干，得到標題產(chǎn)物(22％)，熔點148-158℃，它可直接用于下個步驟，無需進一步純化。用乙醇結(jié)晶得到分析純樣品。熔點163-164℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.58，s，1H，H2；6.80，s，1H，H6；3.96，s，3H，COOCH3。
b)7-氧代-5-三氟甲基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-羧酸(化合物4B)使0.70克化合物4A、5.6毫升二噁烷和8.4毫升9N鹽酸混合物回流攪拌75分鐘。冷卻到20-25℃，濾得沉淀的固體，用二噁烷∶水1∶1.5和水洗滌，得到0.46克標題化合物，灰色固體，熔點249-251℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)13.50，bs，1H，COOH；8.25，s，1H，H2；7.19，s，1H，H6。
c)N-{3-[4-(2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-三氟甲基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺用化合物4B代替化合物1G，如實施例2所述制備標題化合物。粗制品經(jīng)快速層析純化(乙酸乙酯∶2.7N氨甲醇溶液95∶5)得到淡褐色固體，熔點170-177℃(33％)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.55，s，1H，H2；7.10，t，1H，NH；6.85-7.10，m，4H，甲氧基苯基CHs；6.80，s，1H，H6；3.88，s，3H，OCH3；3.60，q，2H，NHCH2；2.90-3，15，m，4H，2哌嗪CH2s；2.45-2.80，m，6H，2哌嗪CH2s，CH2CH2CH2N；1.88，dt，2H，CH2CH2CH2。
實施例57-氧代-5-苯基-N-{3-[4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)-苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺a)N-(3-氯丙基)-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺(化合物5A)用3-氯丙胺鹽酸鹽代替化合物1B，三乙胺的用量加倍，用實施例1所述的方法制備該化合物。用水稀釋后，過濾沉淀出的固體，在濾器上用冰水∶二甲基甲酰胺2∶1洗滌。然后將固體懸浮在10％碳酸鈉水溶液中，攪拌，過濾，用水洗滌到中性。70℃下真空干燥得到標題化合物(95％)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.52，s，1H，H2；7.75-7.85，m，2H，苯基H2，H6；7.50-7.60，m，3H，苯基H3，H4，H5；7.00，s，1H，NH；6.80，s，1H，H6；3.65-3.80，m，4H，CH2CH2CH2；2.15，dt，2H，CH2CH2CH2。
b)7-氧代-5-苯基-N-[3-[4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)苯基]-1-哌嗪基]丙基}-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺將0.17克化合物5A、0.13克1-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)苯基]-哌嗪(如EP 0748800所述制備)和0.07克碳酸鉀的混合物在200℃下加熱20分鐘。冷卻到20-25℃后，粗制品經(jīng)快速層析純化(乙酸乙酯∶甲醇，95∶5到9∶1梯度)，得到0.193克(70％)標題化合物，熔點152-158℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.45，s，1H，H2；7.80-7.95，m，2H，苯基H2，H6；7.50-7.65，m，4H，CONH，苯基H3，H4，H5；6.80，s，1H，H6；6.75-7.10，m，4H，三氟乙氧基苯基CHs；4.44，q，2H，CH2O；3.66，dt，2H，CONHCH2；2.90-3.05，m，4H，2哌嗪CH2s；2.50-2.70，m，6H，CH2N和2哌嗪CH2s；1.80-2.00，m，2H，CH2CH2CH2。
實施例6N-{3-[4-[2-甲氧基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)苯基]-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺a)1-叔丁氧基羰基-4-(5-羥基-2-甲氧基苯基)哌嗪(化合物6A)將8克二氫溴酸1-(5-羥基-2-甲氧基苯基)-哌嗪和3.17克無水碳酸鉀在30毫升水中的溶液真空蒸發(fā)至干。向殘留物里加入100毫升無水四氫呋喃和5.18克97％二碳酸二叔丁酯，使混合物在20-25℃下攪拌2小時，然后加入100毫升無水四氫呋喃。過濾懸浮液，真空蒸發(fā)除去溶劑。殘留物溶于200毫升氯仿。溶液用3×50毫升5％碳酸氫鈉洗滌，用2×50毫升水洗滌，用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑，殘留物經(jīng)快速層析純化(石油醚∶乙酸乙酯75∶25)得到1.91克(28.7％)化合物6A和1.58克(35.7％)1-叔丁氧基羰基-4-(5-叔丁氧基羰基氧基-2-甲氧基苯基)-哌嗪。將該副產(chǎn)物在40毫升甲醇和6毫升1N氫氧化鈉中的溶液在20-25℃下放置過夜。用乙酸中和混合物；減壓除去溶劑，殘留物溶于40毫升氯仿中。用3×10毫升水洗滌后，有機層用硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)溶劑，再得到1.15克(17.2％)化合物6A的稠厚油(總得率45.9％)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)6.70，d，1H，苯環(huán)的H3；6.45-6.53，m，2H，苯環(huán)的H4和H6；5.77，s，1H，OH；3.78，s，3H，CH3O；3.48-3.68，m，4H，2哌嗪CH2s；2.82-3.05，m，4H，2哌嗪CH2s；1.48，s，9H，(CH3)3C。
b)1-叔丁氧基羰基-4-[2-甲氧基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)苯基]哌嗪(化合物6B)使2.83克化合物6A、6.05克碳酸銫和2.95克對-甲苯磺酸2，2，2-三氟乙酯在60毫升乙腈中的混合物回流攪拌16小時。減壓蒸去溶劑；將90毫升鹽水加到殘留物中，混合物用3×40毫升乙酸乙酯萃取。有機層用3×20毫升水和20毫升鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑，殘留物經(jīng)快速層析(石油醚∶乙酸乙酯95∶5到80∶20梯度)純化。真空除去溶劑，得到1.86克(52％)化合物6B的白色固體。熔點(98)102-105℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)6.77，d，1H，苯環(huán)的H3；6.45-6.63，m，2H，苯環(huán)的H4和H6；4.28，q，2H，CF3CH2O；3.84，s，3H，CH3O；3.53-3.68，m，4H，2哌嗪CH2s；2.90-3.06，m，4H，2哌嗪CH2s；1.48，s，9H，(CH3)3C。
c)1.9鹽酸1-[2-甲氧基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-苯基]哌嗪·1.9氫氯化物(化合物6C)在3-5℃下將2.42毫升三氟乙酸在30毫升無水二氯甲烷中的溶液滴加入1.17克化合物6B在40毫升無水二氯甲烷中的攪拌著的溶液里。使混合物在20-25℃下保持過夜，用2×30毫升2N氫氧化鈉洗滌，用3×15毫升2N鹽酸萃取。在5-10℃下酸性水層用2×20毫升乙醚洗滌，用37％氫氧化鈉堿化，用3×30毫升乙醚萃取。有機層用硫酸鈉干燥，真空除去溶劑，得到0.78克(89％)化合物6C堿的稠厚油。該堿在乙醚中的溶液用碳處理，過濾，通過加入3.6N HCl乙醚溶液酸化，得到鹽酸鹽，通過過濾回收，用乙腈和乙醇結(jié)晶得到分析純的樣品。熔點(188)202-208℃(分解)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)9.18，bs，2.9H，NH2+和NH+；6.90，d，1H，苯基H3；6.67，dd，1H，苯基H4；6.59，d，1H，苯基H6；4.66，q，2H，CF3CH2O；3.74，s，3H，CH3O；3.18，bs，8H，哌嗪CH2s。
d)N-{3-[4-[2-甲氧基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)-苯基]-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺除了用化合物6C代替1-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)-苯基]哌嗪外，用實施例5b揭示的方法來制備該化合物。冷卻到20-25℃，粗制品經(jīng)快速層析純化(乙酸乙酯∶2N氨的甲醇溶液98∶2)，得到標題化合物(60％)。熔點156-158℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.50，s，1H，H2；7.80-7.95，m，2H，苯基2H，H6；7.40-7.80，m，4H，CONH，苯基H3，H4，H5；6.85，s，1H，H6；6.75，d，1H，三氟乙氧基苯基H3；6.40-6.55，m，2H，三氟乙氧基苯基H4，H6；4.30，q，2H，CH2O；3.80，s，3H，CH3O；3.65，dt，2H，CONHCH2；2.50-3.10，m，10H，哌嗪CH2s和CH2O；3.80，s，3H，CH3O；3.65，dt，2H，CONHCH2；2.50-3.10，m，10H，哌嗪CH2s和CH2N；1.85-2.10，m，2H，CH2CH2CH2。
實施例7N-{3-[4-[4-氟-2-(2，2，2-三氟乙氧基)-苯基]-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧基-5-苯代-7H-噻吩[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺除了用1-[4-氟-2-(2，2，2-三氟乙氧基)-苯基]哌嗪(如EP 0748800所述制備)代替1-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)-苯基]-哌嗪，其它按實施例5b所述制備該化合物。冷卻到20-25℃，粗制品經(jīng)快速層析純化(乙酸乙酯∶2N氨的甲醇溶液95∶5)，得到標題化合物(74％)。熔點189-191℃。
1H-NMR(200MHz，CDCl3，δ)8.45，s，1H，H2；7.80-7.95，m，2H，苯基H2，H6；7.45-7.65，m，4H，CONH，苯基H3，H4，H5；6.80，s，1H，H6；6.65-6.75，m，2H，三氟乙氧基苯基CHs；6.60，dd，1H，三氟乙氧基苯基CH；4.35，q，2H，CH2O；3.65，dt，2H，CONHCH2；2.80-3.00，m，4H，2哌嗪CH2s；2.50-2.70，m，6H，CH2N和2哌嗪CH2s；1.90-2.00，m，2H，CH2CH2CH2。
實施例8測定克隆的α1腎上腺素能受體和5-HT1A血清素激活的受體結(jié)合親和力在來自CHO細胞(中國倉鼠卵巢細胞)的膜上測定克隆的人α1-腎上腺素能受體亞型的親和力，所述的CHO細胞通過電穿孔用表達編碼每一個α1-腎上腺素能受體亞型的基因的DNA轉(zhuǎn)染。如前所述進行α1-腎上腺素能受體基因的克隆和穩(wěn)定表達(Testa等，Pharmacol.Comm.6，79-86(1995))。使CHO-細胞膜在50nM Tris，pH7.4中用0.2nM[3H]哌唑嗪(最終體積為1.02毫升)在25℃下，在有或沒有競爭性藥物存在(1pM-10μM)下培養(yǎng)30分鐘。在10μM酚妥拉明存在下測定非特異性結(jié)合。通過加入冰冷的Tris緩沖液來停止培養(yǎng)，通過0.2％-聚乙烯亞胺預處理的Schleicher & Schuell GF52濾器進行快速過濾。
對于人5-HT1A血清素激活的受體的克隆-G-21基因組在人細胞系(HeLa)里穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(Fargin等，J.Biol.Chem.284，14848-14852(1989))。HeLa細胞在Dulbecco修飾的Eagle介質(zhì)(DMEM)中，補充10％胎牛血清和慶大霉素(100g/ml)，5％CO2，37℃下生長成單層。用細胞刮刀從生長的燒瓶中剝離下細胞，匯集率為95％，將所述的細胞溶于冰冷的Tris-5-mM和EDTA-5-mM緩沖液中(pH7.4)。勻漿物離心40000×g×20分鐘，將膜再懸浮于少量冰冷的Tris-5-mM和EDTA-5-mM緩沖液(pH7.4)，馬上冷凍，貯存在-70℃到使用。
在實驗那天，將膜再懸浮于50mM Tris(pH7.4)、2.5mM MgCl2，10μM優(yōu)降寧的結(jié)合緩沖液中(Fargin等，Nature 335，358-360(1988))。膜用最終體積為1毫升的1.2nM[3H]8-OH-DPAT，在有或沒有競爭性藥物的存在下，于30℃下培養(yǎng)；在10μM 5-HT存在下測定非特異性結(jié)合。通過加入冰冷的Tris緩沖液來停止反應，通過0.2％聚乙烯亞胺-預處理的Schleicher & SchuellGF52濾器中快速過濾。
分析由試驗的藥物對放射性配體特異性結(jié)合的抑制，通過使用非線性曲線-擬合程序Allfit(De Lean等，Am.J.Physiol.235，E97-E102(1978))來評估IC50。用Cheng & Prusoff方程式(Biochem.Pharmacol.22，3099-3108(1973))將IC50值轉(zhuǎn)化為親和常數(shù)(Ki)。數(shù)據(jù)表示為Ki的平均值。
如表1所示，本發(fā)明化合物對α1-腎上腺素能受體顯示出所需的效力和選擇性。
表1對重組α1-腎上腺素能受體亞型和5-HT1A受體試驗的不同化合物的親和力(Ki，nM)
實施例9對α1L-腎上腺素能受體的功能親和力根據(jù)Testa等的方法(J.Pharmacol.Exp.Ther.281，1284-1293(1997))來評價試驗化合物對去甲腎上腺素-(NA-)誘導的用氯乙基氯壓定(chloroethylclonidine)(α1L受體)預處理的兔子動脈收縮的功能性α1-拮抗活性。使成年雄性新西蘭兔頸部脫臼使其死亡。拿出大動脈，放在Krebs-Henseleit緩沖液中，去除粘附的組織。每個動脈制成環(huán)(每個大動脈8個環(huán)，約4-5毫米寬)，懸浮在20毫升含有下列組分(mM)的Krebs碳酸氫鹽的緩沖液器官浴中NaCl 112.0，KCl 5.0，CaCl22.5，KH2PO41.0，MgSO41.2，NaHCO312.0和葡萄糖11.1，在37℃下用95％O2∶5％CO2平衡。向緩沖液加入去甲丙咪嗪(0.1μM)和皮質(zhì)甾類(1μM)阻斷神經(jīng)元和外神經(jīng)元對NA的攝入，(±)-心得安(1μM)阻斷β腎上腺素能受體，育亨賓(0.1μM)阻斷α2-腎上腺素能受體。使組織接受2克的負載，用等容的傳導器(Basile 7003)測定形成的張力。
讓制品平衡60分鐘，然后每30分鐘用10μM NA灌注三次。動脈環(huán)然后用烷化劑氯乙基氯壓定(5×10-5)培養(yǎng)30分鐘，然后在構(gòu)建NA-濃度/反應曲線前徹底地洗3次(在0.5小時里)。在洗去NA，使組織再平衡(45分鐘)后，加入被試驗的藥物，30分鐘后，構(gòu)建第二個NA-積聚的濃度/反應曲線。每個拮抗劑濃度用來自不同兔子的2-3個動脈環(huán)試驗。
在化合物的每個濃度計算劑量比(即在有或沒有試驗的拮抗劑存在下產(chǎn)生半最大反應所需的去甲腎上腺素的濃度之比)。將這些劑量比-1的對數(shù)對化合物濃度的對數(shù)作圖(Schild圖)以評價親和常數(shù)Kb。當只用一個或兩個試驗化合物濃度時，用式Kb＝[B]/(劑量比-1)計算表觀Kb值，其中B是拮抗劑濃度。
結(jié)果試驗化合物顯示出對α1L腎上腺素能受體亞型良好的親和力。表2中的數(shù)據(jù)表達為pKb。
表2試驗化合物對α1L-腎上腺素能受體亞型的功能親和力
實施例10在對狗靜注去甲腎上腺素后引起的對尿道收縮的作用和對血壓的作用根據(jù)Imagawa等的方法(J.Pharmacol.Mehods 22，103-111(1989))進行試驗，其明顯的改變?nèi)缦掠梦彀捅韧租c(30毫克/kg靜注，和2mg/kg/小時靜注)來麻醉體重8-10kg的成年雄性小獵犬，插入管子，自發(fā)地用室內(nèi)空氣通訊。為了檢測全身血壓(BP)，將聚乙烯(PE)插管通過左股骨動脈插入大動脈。左側(cè)股骨靜脈插管供輸入麻醉劑，右側(cè)股骨靜脈的插管供給予化合物。對于動脈內(nèi)(i.a.)注射去甲腎上腺素(NA)，PE插管通過右側(cè)外股骨動脈被引入腹部大動脈的下端部分。通過這樣的過程，NA被選擇性地分布到下尿道。從骨盆基部到中腹部區(qū)域、恥骨上方、靠近中央處作一垂直切口，露出膀胱和前列腺。膀胱用注射器進行手工排空。前列腺尿壓力用通過外界導尿管引入膀胱的Mikro-tip插管(5F)檢測，在壓力傳感器放入尿道的前列腺區(qū)域后取出該插管。將繃帶繞在膀胱頸和尿道之間以使尿道的反應被分離出來，避免膀胱的任何干擾。另一個繃帶繞在在外部導管處的Midro-tip插管上以固定插管本身。
在手術(shù)后穩(wěn)定一段時間(30分鐘)后，動脈和前列腺壓連續(xù)地處于基礎(chǔ)值時，以20分鐘的間隔動脈注射NA。
所選定的NA劑量使尿道壓力增加至少100％的增加。通過注射之間15-20分鐘間隔的積聚方式，靜脈注射給予試驗化合物。在試驗化合物的每個劑量以約10分鐘的間隔給予后5分鐘，重復動脈注射NA。為了比較給藥化合物的效應，通過計算機構(gòu)建出劑量/反應曲線(對數(shù)劑量轉(zhuǎn)換)。得到其峰值效應、舒張壓減少的百分數(shù)和由NA誘導的尿道壓的增加抑制百分數(shù)。然后使用線形回歸等式來計算出理論效果，即ED25(舒張壓減少25％時的有效劑量)和ID50(尿道壓增加被抑制50％時的劑量)。
結(jié)果靜脈給予實施例1、2和5化合物后得到的效果列于表3。涉及注射了哌唑嗪和Rec 15/2739后得到的效果也列于表3。
表3
*數(shù)據(jù)來自Leonardi等，J.Pharmacol.Exp.Ther.281，1272-1283(1997)藥理結(jié)構(gòu)證實，本發(fā)明化合物，特別與5-HT1A受體相比，是α1-腎上腺素能受體拮抗劑，對α1腎上腺素能受體有良好的選擇性，如體外數(shù)據(jù)顯示，對α1L亞型也有良好的親和力。
體內(nèi)藥理試驗結(jié)果證實，本發(fā)明的化合物對尿道的選擇性很高，表明他們可能用于治療下尿道的阻塞疾病，包括良性前列腺增生。
有效量下列是對用于下尿道阻塞疾病的口服、非胃腸道給藥或靜脈內(nèi)給藥的劑量范圍，表示為每天mg/kg體重一般0.001-20優(yōu)選0.05-3最佳0.5-2最優(yōu)選的值指口服劑量。靜脈內(nèi)給藥劑量應當?shù)?0到100倍。選擇性使用的劑量，即在下尿道有活性，對血壓沒有明顯影響的劑量根據(jù)所用特定化合物而定。一般來說，對于選擇地抑制尿道收縮的化合物，可使用最高達ED50四倍的量來抑制尿道收縮，而不會對血壓有明顯的作用。只用常規(guī)的實驗可確定進一步的精細劑量和優(yōu)化劑量、本發(fā)明的化合物可口服，如與惰性賦形劑或與可食載體一起，或它們被封入明膠膠囊，或它們被壓成片劑。對于口服給藥，本發(fā)明的活性化合物可摻入賦形劑，以片劑、錠劑、膠囊劑、酏劑、懸浮劑、糖漿劑、包藥干糊片、咀嚼膠等形式給予。這些之際應當含至少0.5％活性化合物，但活性化合物的量應當根據(jù)特定形式而定，常規(guī)地占劑型重量的5％到約70％。這類組合物中活性化合物的用量應當是這樣的，雖然通過多劑給藥也可得到所需的劑量。這樣制備本發(fā)明優(yōu)選的組合物和制劑，使口服劑型含有1.0-300毫克活性化合物。片劑、丸劑、膠囊劑、錠劑等也可含有，如，下列組分諸如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠的粘合劑；諸如淀粉或乳糖的的賦形劑；諸如藻酸、淀粉乙醇酸鈉、玉米淀粉之類的崩解劑；諸如硬脂酸鎂或氫化蓖麻油的潤滑劑，諸如膠體二氧化硅的滑移劑；諸如蔗糖或糖精的甜味劑，或諸如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑的甜味劑。當劑型單位是膠囊時，除了上述類型外，它可含有諸如脂肪油的液體載體。其它劑型單位可含有可修飾劑型物理性質(zhì)的其它各種材料，如包衣。因此，片劑或丸劑可用糖、蟲膠或其它腸包衣劑。糖漿除了活性化合物外還含有蔗糖作為甜味劑和特定的防腐劑、染料、著色劑和調(diào)味劑。用于制備這些各種組合物的材料應當是藥物純的，其用量是無毒的。為了非胃腸道給藥，本發(fā)明活性化合物可摻入溶液或懸浮液。這些制劑應當含有至少0.1％活性化合物，可在占制劑0.5％到30％重量范圍內(nèi)變化。這類組合物的活性化合物用量是這樣的，以便得到合適的劑型。這樣制備本發(fā)明優(yōu)選的組合物和制劑，使非胃腸道劑型含有0.2-100毫克活性化合物。溶液或懸浮液也可包含下列組分諸如注射用水、鹽水溶液、調(diào)和油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑的無菌稀釋劑；諸如芐基醇或?qū)αu苯甲酸甲酯的抗菌劑；諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉的抗氧劑；諸如乙二胺四乙酸的螯合劑；諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽的緩沖劑，和諸如氯化鈉或右旋糖的用于調(diào)節(jié)張力的試劑。非胃腸道多劑小瓶可為玻璃或塑料。通過各種途徑給藥的并含有本發(fā)明化合物的其它組合物也在本發(fā)明的范圍里。
本文預見的劑型、其它的組分和給藥途徑在美國專利US 4089969和US5091182中有所揭示。
權(quán)利要求
1.一種通式I化合物 其中R是芳基、環(huán)烷基或多鹵代烷基，R1是烷基、烷氧基、多氟代烷氧基、羥基或三氟代甲烷磺酰基氧基，R2和R3的每個獨立地代表氫或鹵原子或烷氧基或多氟代烷氧基，n是0，1或2，或這類化合物的N-氧化物，或其藥學上可接受的鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R代表苯基、環(huán)己基或三氟甲基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R1代表甲基、甲氧基或2，2，2-三氟乙氧基。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的化合物，其中R2代表氫或氟原子。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的化合物，其中R3代表氫或氯原子或2，2，2-三氟乙氧基。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求任一所述的化合物，其中n是1。
7.下列化合物中的任一N-{3-[4-(5-氯-2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺，N-{3-[4-(2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]丙基}-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺，5-環(huán)己基-N-{3-[4-(2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺，N-{3-[4-(2-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-三氟甲基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺，7-氧代-5-苯基-N-{3-[4-[2-(2，2，2-三氟乙氧基)-苯基)-1-哌嗪基]-丙基}-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺，N-{3-[4-[2-甲氧基-5-(2，2，2-三氟乙氧基)苯基]-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺，和N-{3-[4-[4-氟-2-(2，2，2-三氟乙氧基)-苯基]-1-哌嗪基]-丙基}-7-氧代-5-苯基-7H-噻吩[3，2-b]吡喃-3-甲酰胺。
8.一種藥物組合物，包括如前述權(quán)利要求任一所述的化合物或這類化合物的N-氧化物或其藥學上可接受的鹽與藥學上可接受的稀釋劑或載體。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，它進一步包含抗擬膽堿能藥劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其中抗擬膽堿能藥劑是一種或多種選自tolterodine、奧昔布寧、darifenacin、alvameline和temiverine的藥劑。
11.一種制備通式I化合物的方法 其中R是芳基、環(huán)烷基或多鹵代烷基，R1是烷基、烷氧基、多氟代烷氧基、羥基或三氟代甲烷磺酰基氧基，R2和R3的每個獨立地代表氫或鹵原子或烷氧基或多氟代烷氧基，n是0，1或2，該方法包括使通式I的7-氧代-7H-噻吩并[3，2-b]吡喃-3-羧酸衍生物或這類化合物的酯、鹵化物或酸酐 其中，R的定義同上，與通式2的N-(ω-氨烷基)-N’-苯基哌嗪衍生物進行縮合反應 其中n，R1，R2和R3的定義同上。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中在縮合劑，如二環(huán)己基碳化二亞胺或氰基膦酸二乙酯的縮合劑存在下，任選地在有諸如N-羥基琥珀酰亞胺或4-二甲氨基吡啶或N，N’-羰基二咪唑的促進劑存在下，在非質(zhì)子溶劑或氯代溶劑里，在10-140℃溫度下進行所述縮合反應。
13.一種制備下列通式I的化合物 其中R是芳基、環(huán)烷基或多鹵代烷基，R1是烷基、烷氧基、多氟代烷氧基、羥基或三氟代甲烷磺?；趸?，R2和R3的每個獨立地代表氫或鹵原子或烷氧基或多氟代烷氧基，n是0，1或2，該方法包括使通式I的7-氧代-7H-噻吩[3，2-b]吡喃-3-羧酸衍生物 其中R的定義同上，與通式H2NCH2(CH2)nCH2X的胺進行縮合反應，其中X代表離去基團或容易地轉(zhuǎn)化為離去基團的基團，n的定義同上，需要時，使得到的通式3化合物的基團X從OH轉(zhuǎn)化為離去基團 并使通式3化合物與苯基哌嗪衍生物8反應 其中R1，R2和R3的定義同上。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中7-氧代-7H-噻吩[3，2-b]吡喃-3-羧酸1與胺H2NCH2(CH2)nCH2X的縮合反應在諸如如二環(huán)己基碳化二亞胺或氰基膦酸二乙酯的縮合劑存在下，任選地在諸如N-羥基琥珀酰亞胺或4-二甲氨基吡啶或N，N’-羰基二咪唑的促進劑存在下，在非質(zhì)子溶劑或氯代溶劑里，在10-140℃溫度下進行。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的方法，其中化合物3與苯基哌嗪8的反應沒有溶劑存在下進行，或在諸如二甲基甲酰胺、乙腈或甲醇的極性溶劑中，在20-200℃溫度下，優(yōu)選地在諸如碳酸鉀的堿存在下進行。
16.一種預防尿道和下尿道收縮(包括去甲腎上腺素相關(guān)的收縮)或選擇性地預防所述收縮的方法，該方法包括對需要這類治療的哺乳動物(包括人)給予特定使用有效量的權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或權(quán)利要求8所述的組合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，它的實施基本上不影響所述哺乳動物的血壓。
18.一種阻斷α1腎上腺素能受體的方法，該方法包括對哺乳動物(包括人)的所述受體環(huán)境釋放有效地緩解與所述受體過度活化相關(guān)疾病量的如權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或如權(quán)利要求8所述的組合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中通過將所述化合物或所述組合物給予具有所述受體的哺乳動物(包括人)而將化合物或組合物釋放到所述受體的環(huán)境。
20.一種治療患有良性前列腺增生(BPH)的病人的方法，所述的方法包括對病人給予有效量的如權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或權(quán)利要求8所述的組合物。
21.一種治療患有眼內(nèi)壓過高的病人的方法，該方法包括對病人給予有效量的如權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或權(quán)利要求8所述的組合物。
22.一種治療患有心律失常病人的方法，該方法包括對病人給予有效量的如權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或權(quán)利要求8所述的組合物。
23.一種治療患有勃起功能障礙的病人的方法，該方法包括對病人給予有效量的如權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或權(quán)利要求8所述的組合物。
24.一種治療患有下尿道癥狀(LUTS)的病人的方法，該方法包括對病人給予有效量的如權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或權(quán)利要求8-10所述的組合物。
25.一種治療患有神經(jīng)性下尿道功能失調(diào)(NLUTD)的病人的方法，該方法包括對病人給予有效量的如權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或權(quán)利要求8-10所述的組合物。
26.一種治療患有性功能障礙的男性或女性病人的方法，該方法包括對病人給予有效量的如權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或權(quán)利要求8所述的組合物。
全文摘要
化合物I和它們的N－氧化物或其藥學上可接受的鹽,其中R=芳基、環(huán)烷基或多鹵代烷基,R
文檔編號A61P9/06GK1365363SQ00810978
公開日2002年8月21日 申請日期2000年7月28日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月30日
發(fā)明者A·倫納德, G·莫塔, C·里瓦, R·泰斯塔 申請人:瑞蔻達蒂化學制藥公司